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基于国际原子能机构277和381报告对直线加速器双模式光子线和电子线输出量校准研究
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作者 景周 陈幼芬 +3 位作者 程杭 蔡佳彬 张磊 康德华 《中国医学装备》 2024年第1期29-33,共5页
目的:基于国际原子能机构(IAEA)TRS 277和TRS 381《高能电子束和光子束中使用平行电离室的国际剂量测定操作规范》报告,校准加速器配置的不同档能量射线水中的吸收剂量,确保临床放疗中直线加速器输出剂量的精确性。方法:采用Elekta Infi... 目的:基于国际原子能机构(IAEA)TRS 277和TRS 381《高能电子束和光子束中使用平行电离室的国际剂量测定操作规范》报告,校准加速器配置的不同档能量射线水中的吸收剂量,确保临床放疗中直线加速器输出剂量的精确性。方法:采用Elekta Infinity直线加速器,光子线能量6 MV分别为均整(FF)模式和非均整(FFF)模式;电子线能量分别为4、6、8、10、12和15 MeV。根据IAEATRS277和TRS381报告,使用PTW剂量仪、PTW30013指型电离室和PTW34001平行板电离室分别进行光子线和电子线水中输出剂量的校准,对各步骤的误差进行分析,对比采用不同标准对直线加速器的输出量水中校准的准确性。结果:6 MV的FF模式和FFF模式光子线在水中最大剂量点处的输出量分别为1.003和1.008 cGy/MU;4、6、8、10、12和15 MeV的电子线每档能量在水中最大剂量点处的输出量分别为1.003、1.002、0.998、0.999、1.000和1.003 cGy/MU。每档能量的射线在水中最大剂量点处的输出量校准为1 MU对应1 cCy,误差<1%。结论:根据IAEA TRS277号和TRS381号报告对直线加速器的输出剂量在水中进行校准,可以保证直线加速器的输出剂量的准确性。 展开更多
关键词 输出量校准 国际原子能机构(IAEA)TRS277和TRS381报告 电子线 光子线 均整模式 非均整模式
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对《刑法》第277条有关问题的认识
2
作者 邓万飞 《贵州警官职业学院学报》 2003年第5期39-40,共2页
新《刑法》第277条的规定及该条规定在适用过程中存在以下问题:1郾两高司法解释对该条确定的罪名不当,应确定为四个罪名,即阻碍国家工作人员执行职务罪,阻碍人大代表执行职务罪、阻碍红十字会工作人员履行职责罪和阻碍执行国家安全工作... 新《刑法》第277条的规定及该条规定在适用过程中存在以下问题:1郾两高司法解释对该条确定的罪名不当,应确定为四个罪名,即阻碍国家工作人员执行职务罪,阻碍人大代表执行职务罪、阻碍红十字会工作人员履行职责罪和阻碍执行国家安全工作任务罪;2郾该条第4款在刑法理论及逻辑上存在矛盾,应将阻碍安全工作任务罪与拒绝履行国家安全义务罪分列。另外,新《刑法》第242条的规定纯属多余,应予删去。 展开更多
关键词 新刑法第277 79刑法第157条 新刑法277条第4款 新刑法第242条 罪名确定
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医用高能光子水吸收剂量测量规范TRS-277与TRS-398比较 被引量:6
3
作者 张园月 杨勇 +2 位作者 黄扬 鄢玲 林滔 《中国测试》 CAS 2009年第2期14-17,共4页
随着吸收剂量测量及其量值溯源理论和技术的发展,国际原子能机构先后发布了TRS-277、TRS-398号报告,规范了高能光子水中吸收剂量的测量,以满足临床应用时不确定5.0%(k=2)的要求。文中依据两个报告,从量值溯源方式、测量方法、参数引用... 随着吸收剂量测量及其量值溯源理论和技术的发展,国际原子能机构先后发布了TRS-277、TRS-398号报告,规范了高能光子水中吸收剂量的测量,以满足临床应用时不确定5.0%(k=2)的要求。文中依据两个报告,从量值溯源方式、测量方法、参数引用、修正因子的来源及其确定等方面,比较了两个报告在高能光子水中吸收剂量测量中的使用差异;同时指出了应用TRS-398号报告能进一步减少测量结果的不确定度,对开展精确放射治疗具有指导意义。 展开更多
关键词 TRS-277 TRS-398 吸收剂量 高能光子
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晚籼杂两优277氮、磷、钾施肥模型的研究与应用 被引量:10
4
作者 杨利 游艾青 +4 位作者 范先鹏 王传雷 李四斌 胡刚 刘凯 《湖北农业科学》 北大核心 2006年第2期171-173,共3页
采用二次回归组合设计试验,研究两优277的施肥技术,建立了产量对氮、磷、钾施肥量的肥料效应函数模型,并提出了优化施肥方案,即获得每公顷7681.3kg以上产量的合理施肥量应为氮(N)180.0~207.0kg,磷(P2O5)91.5~105.0kg,钾(K2O)132.0~15... 采用二次回归组合设计试验,研究两优277的施肥技术,建立了产量对氮、磷、钾施肥量的肥料效应函数模型,并提出了优化施肥方案,即获得每公顷7681.3kg以上产量的合理施肥量应为氮(N)180.0~207.0kg,磷(P2O5)91.5~105.0kg,钾(K2O)132.0~159.0kg。 展开更多
关键词 晚籼杂两优277 肥料效应函数 施肥
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Ras信号通路阻断剂FTI-277抑制HeLa细胞增殖及对cyclin E表达的影响 被引量:3
5
作者 孙迪 沈宜 +3 位作者 汪少华 向自武 谢莹珊 姜歆 《激光杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期84-85,87,共3页
目的:观察Ras信号通路阻断剂(FTI-277)在人类宫颈癌细胞株HeLa细胞中对细胞周期素E(cyclin E)表达及对HeLa增殖、凋亡的影响情况。方法:采用MTT法观察不同浓度的FTI-277对HeLa细胞的生长抑制作用;流式细胞术(FCM)观察Hela细胞的细胞周... 目的:观察Ras信号通路阻断剂(FTI-277)在人类宫颈癌细胞株HeLa细胞中对细胞周期素E(cyclin E)表达及对HeLa增殖、凋亡的影响情况。方法:采用MTT法观察不同浓度的FTI-277对HeLa细胞的生长抑制作用;流式细胞术(FCM)观察Hela细胞的细胞周期变化;RT-PCR、Western blot法检测FTI-277阻断Ras信号通路前后HeLa细胞cyclin E mRNA及蛋白表达。结果:各浓度范围FTI-277均能抑制HeLa细胞的增殖,且具有剂量依赖性和时间依赖性。流式细胞术分析显示,FTI-277作用后的HeLa细胞明显滞留于G1/S期,且具有时间依赖性。RT-PCR及Western blot结果显示,FTI-277作用前后HeLa细胞cyclin E mRNA表达无明显变化,而蛋白表达水平明显降低。结论:FTI-277可以抑制细胞增殖,Ras信号转导通路可能是通过影响HeLa细胞cyclin E转录后的翻译环节减少其表达。 展开更多
关键词 FTI-277 宫颈癌细胞株(HeLa细胞) CYCLINE RAS
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IAEA TRS398与TRS277应用于加速器输出量校准的比较 被引量:11
6
作者 王军良 周振山 +1 位作者 盛洪国 齐伟华 《中国医学物理学杂志》 CSCD 2011年第3期2594-2596,共3页
目的:通过对IAEA TRS398和TRS277号报告推荐方法在加速器输出量校准中的使用比较,分析两者之间的区别和联系,正确指导临床外照射治疗源的校准。方法:用PTW公司UNIDOS E剂量仪和PTW30013指形电离室及NE2570A型剂量仪和2571型电离室,分别... 目的:通过对IAEA TRS398和TRS277号报告推荐方法在加速器输出量校准中的使用比较,分析两者之间的区别和联系,正确指导临床外照射治疗源的校准。方法:用PTW公司UNIDOS E剂量仪和PTW30013指形电离室及NE2570A型剂量仪和2571型电离室,分别按照TRS398和TRS277号报告的要求对Varian 23EX线加速器两档光子线(6 MV,10 MV)吸收剂量进行测量,并对结果进行比较。结果:不同的剂量仪和不同的测量规程得到的结果基本相同。结论:采用TRS277号报告和TRS398号报告所有仪器测量结果偏差均小于1%,结合修正因子的不确定度,认为测量结果是一致的,采用两种规程得到测量结果均是正确的。398号报告应用比277号报告简单,且更接近用户现场测量实际情况。 展开更多
关键词 TRS277 TRS398 比较
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重组HSP65-6P277乳酸乳球菌疫苗对链脲佐菌素诱导的1型糖尿病小鼠的降糖作用 被引量:2
7
作者 吴洁 刘晓锐 +5 位作者 杨雪 侯景 徐茂磊 申丽丽 黄东成 刘坤锋 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期106-110,共5页
探讨表达HSP65-6P277蛋白的乳酸乳球菌活载体疫苗对链脲佐菌素(STZ)诱导的1型糖尿病小鼠的降糖作用及可能的作用机制。采用多次小剂量腹腔注射STZ建立1型糖尿病模型。将诱导型表达菌株Lactococcus lactis NZ9000pCYT∶HSP65-6P277和组... 探讨表达HSP65-6P277蛋白的乳酸乳球菌活载体疫苗对链脲佐菌素(STZ)诱导的1型糖尿病小鼠的降糖作用及可能的作用机制。采用多次小剂量腹腔注射STZ建立1型糖尿病模型。将诱导型表达菌株Lactococcus lactis NZ9000pCYT∶HSP65-6P277和组成型表达菌株L.lactis NZ9000 pHJ∶HSP65-6P277及无关蛋白对照菌株L.lactis NZ9000 pCYT∶Nuc灌胃1型糖尿病小鼠(2×109CFU,200μL),每天灌胃1次,连续7 d,之后每周灌胃1次,持续16周。每月从小鼠眼眶静脉丛取血1次,血糖检测仪检测STZ造模小鼠血糖水平并称体重。4个月后将小鼠处死,取小鼠脾脏做脾细胞增殖实验,采用ELISA试剂盒分别检测脾细胞上清液中的IL-10和IFN-γ细胞因子水平以及血清IgG抗体水平。结果显示,与对照组相比,pCYT∶HSP65-6P277组和pHJ∶HSP65-6P277组可以一定程度上降低STZ造模小鼠血糖水平(P<0.05),并能维持其正常体重稳定,降低脾细胞针对HSP65和P277的增殖(P<0.05),脾细胞上清液中IFN-γ细胞因子水平明显降低(P<0.05),血清IgG抗体水平无明显差异(P>0.05)。 展开更多
关键词 乳酸乳球菌 疫苗 P277 黏膜免疫 1型糖尿病
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P277多肽的表达、纯化及初步药效学分析 被引量:2
8
作者 朱爱华 刘文涛 +3 位作者 鲁勇 金亮 王宇 刘景晶 《扬州大学学报(农业与生命科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期13-17,共5页
通过PCR方法得到P277多肽基因,插入到含门冬酰胺酶C端第199~326氨基酸残基片段的后面,形成融合蛋白,中间预留酸水解位点,并在P277多肽和融合蛋白之间加入一段碱性序列,构建pET28AnsB-C-KR-P277高效表达载体。克隆的基因在大肠杆菌中高... 通过PCR方法得到P277多肽基因,插入到含门冬酰胺酶C端第199~326氨基酸残基片段的后面,形成融合蛋白,中间预留酸水解位点,并在P277多肽和融合蛋白之间加入一段碱性序列,构建pET28AnsB-C-KR-P277高效表达载体。克隆的基因在大肠杆菌中高效表达,通过Triton X-100洗涤、乙醇分级沉淀纯化融合蛋白AnsB-C-KR-P277,酸水解后经等电点沉淀去除杂蛋白,再经阴离子交换柱层析,进一步分子筛脱盐,可得到纯化的目的多肽P277。这种多肽生产平台,为多肽生物合成提供了一个很好的方法。纯化后的P277免疫型糖尿病模型动物NOD(non-obese diabetic)小鼠,可明显降低NOD小鼠自发性糖尿病的产生。 展开更多
关键词 Ⅰ型糖尿病 P277 纯化 血糖浓度
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抗Ⅰ型糖尿病融合基因HSP65-6×P277在烟草中的表达 被引量:1
9
作者 郑卿 郭书巧 +3 位作者 杨洁 吴洁 刘景晶 倪万潮 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2012年第3期477-481,共5页
为了研究抗Ⅰ型糖尿病融合蛋白质基因HSP65-6×P277在植物中的表达,构建了含有融合基因HSP65-6×P277的植物表达载体pCAMBIA2301-HSP65-6×P277,通过农杆菌介导法将重组载体转入烟草,利用卡那霉素作为植物筛选标记,获得含... 为了研究抗Ⅰ型糖尿病融合蛋白质基因HSP65-6×P277在植物中的表达,构建了含有融合基因HSP65-6×P277的植物表达载体pCAMBIA2301-HSP65-6×P277,通过农杆菌介导法将重组载体转入烟草,利用卡那霉素作为植物筛选标记,获得含有抗Ⅰ型糖尿病基因的16株转基因烟草植株。通过PCR、半定量RT-PCR及SDS-PAGE蛋白质电泳等方法检测,初步验证在抗性烟草植株中融合基因HSP65-6×P277在mRNA和蛋白质水平上进行了表达。 展开更多
关键词 Ⅰ型糖尿病 P277 烟草 转化 植物疫苗
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鼻粘膜免疫融合蛋白Hsp65-6×p277预防NOD小鼠1型糖尿病的发生(英文) 被引量:1
10
作者 金亮 王宇 +1 位作者 朱爱华 刘景晶 《中国临床药理学与治疗学》 CAS CSCD 2006年第8期857-862,共6页
目的提高多肽p277的免疫原性,从而提高其对自身免疫性糖尿病的预防作用。方法将p2776次重复与Hsp65融合置于pET28a中构建重组Hsp65-6×p277表达质粒。该重组质粒在大肠杆菌BL21中以高效可溶形式表达。依次通过细胞裂解、硫酸铵沉淀... 目的提高多肽p277的免疫原性,从而提高其对自身免疫性糖尿病的预防作用。方法将p2776次重复与Hsp65融合置于pET28a中构建重组Hsp65-6×p277表达质粒。该重组质粒在大肠杆菌BL21中以高效可溶形式表达。依次通过细胞裂解、硫酸铵沉淀、双蒸水透析、DEAE纤维素52柱层析纯化获得目的蛋白。用纯化后的融合蛋白Hsp65-6×p277通过鼻腔给药方式,在不添加任何佐剂的情况下3次免疫4周龄雌性NOD小鼠。每月眼角取血,检测抗体和血糖浓度。结果初步药效学实验表明融合蛋白Hsp65-6×p277可抑制NOD小鼠中1型糖尿病的发生。结论融合蛋白Hsp65-6×p277有可能发展成为一种具有防治胰岛素依赖性糖尿病作用的疫苗。 展开更多
关键词 热休克蛋白65 p277 胰岛素依赖性糖尿病 免疫
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基于IAEA277号报告对Versa HD直线加速器的剂量校准 被引量:4
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作者 卢小开 张广武 +2 位作者 冯志宇 李云 薛小峰 《医疗装备》 2018年第11期21-23,共3页
目的为了保证吸收剂量的准确,基于IAEA277号报告对Versa HD直线加速器的输出剂量进行标定。方法采用IAEA TRS277号报告推荐的电离室测定方法,对Versa HD直线加速器的6 MV,6 FFF,10 M,10 FFF四档光子线以及五档能量的电子线进行吸收剂量... 目的为了保证吸收剂量的准确,基于IAEA277号报告对Versa HD直线加速器的输出剂量进行标定。方法采用IAEA TRS277号报告推荐的电离室测定方法,对Versa HD直线加速器的6 MV,6 FFF,10 M,10 FFF四档光子线以及五档能量的电子线进行吸收剂量校准,确保在源皮距100 cm,10 cm×10 cm辐射野条件下加速器光子线和电子线出束100 MU,水下最大剂量点处的吸收剂量为100 c Gy。结果光子线吸收剂量在标定前高于标准剂量,电子线在标定前低于标准剂量;光子线在经过均整器后射线质有所增加;经过调整加速器的电位后最大剂量点吸收剂量在(100±1)c Gy范围内。结论吸收剂量标定是放疗的关键环节,也是物理师的职责所在,准确的剂量标定是确保辐射安全的前提。 展开更多
关键词 VERSA HD直线加速器 277号报告 吸收剂量校准 水模体
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两系杂交晚籼两优277的选育与应用
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作者 刘凯 胡刚 +3 位作者 杨国才 游艾青 陈志军 卢兴桂 《湖北农业科学》 北大核心 2006年第4期416-417,共2页
两优277(Y620)是用籼型光敏核不育系YW-2S与恢复系双七配组育成的两系杂交晚籼新品种。具有高产稳产、适应性广、米质优、熟期适宜、抗白叶枯病等特点。适应湖北无稻瘟病的双季稻区作双季晚稻种植。
关键词 两系杂交晚籼 两优277 优质 选育 栽培
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基于SIEMENS EM277的PFOFIBUS通讯 被引量:2
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作者 邵奇峰 《中原工学院学报》 CAS 2008年第3期28-30,共3页
针对SIEMENS S7-200与S7-300间的工业通讯解决方案,论述了基于EM277的PROFIBUS通讯技术,介绍了STEP7中的组态链接,分析了实际的通讯程序,提出了一种高性价比的工业通讯解决方案.
关键词 EM277 PROFIBUS S7—300 S7—200
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L-天冬酰胺酶表面呈现对P277肽免疫原性及抗NOD小鼠糖尿病作用的影响(英文)
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作者 朱爱华 刘文涛 +3 位作者 龙军 吴洁 刘景晶 李泰明 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第9期730-737,共8页
将P277多肽融合在L-天冬酰胺酶的C端,中间引入破伤毒素肽(TTP),重组嵌合酶AnsB-TTP-P277能以可溶性蛋白的形式表达于大肠杆菌周质内,且能保持大约80%的天然酶催化活力.用纯化的嵌合酶腹腔注射非肥胖性(NOD)小鼠,可成功诱导小鼠体内产生... 将P277多肽融合在L-天冬酰胺酶的C端,中间引入破伤毒素肽(TTP),重组嵌合酶AnsB-TTP-P277能以可溶性蛋白的形式表达于大肠杆菌周质内,且能保持大约80%的天然酶催化活力.用纯化的嵌合酶腹腔注射非肥胖性(NOD)小鼠,可成功诱导小鼠体内产生高水平抗P277抗体.研究表明,P277肽可呈现于L-天冬酰胺酶表面,有效地克服单独P277的弱免疫原性,激发机体产生较强烈的免疫反应.小鼠胰腺病理学切片也显示:重组嵌合酶AnsB-TTP-P277和单纯P277肽相比,能更有效地抑制NOD小鼠糖尿病的发生. 展开更多
关键词 L-天冬酰胺酶 P277 胰岛素依赖型糖尿病 抗体 血糖
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两系杂交晚籼两优277制种技术
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作者 胡刚 王清洲 +8 位作者 熊传刚 游艾青 吕维林 刘凯 梁武林 张龚 樊勇 杨国才 方明洋 《湖北农业科学》 北大核心 2006年第3期279-281,共3页
两系杂交晚籼两优277具有高产稳产、抗逆性较强、米质优、熟期适宜等特点,2004年通过湖北省农作物品种审定委员会审定。根据潜江、荆门的制种实践,总结出合理安排父母本播差期、培育适龄多蘖壮秧、合理密植、促进父母本平衡生长和提高... 两系杂交晚籼两优277具有高产稳产、抗逆性较强、米质优、熟期适宜等特点,2004年通过湖北省农作物品种审定委员会审定。根据潜江、荆门的制种实践,总结出合理安排父母本播差期、培育适龄多蘖壮秧、合理密植、促进父母本平衡生长和提高母本异交结实率等高产制种技术。 展开更多
关键词 两系杂交晚稻 两优277 亲本特征特性 制种技术
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X线剂量测量中IAEA TRS398和TRS277号报告的比较 被引量:1
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作者 王小平 胡筱玉 胡海芹 《井冈山大学学报(自然科学版)》 2009年第1期102-103,109,共3页
目的比较按IAEA TRS398和TRS277号报告推荐方法测量医用X线绝对剂量的差异。方法用IBA公司DOSE1剂量仪、FC65-G指形电离室及NE2570型Farmer没量仪和2571型电离室,分别按照TRS398和TRS277号报告的要求,对Elekta公司电子直线加速器三档光... 目的比较按IAEA TRS398和TRS277号报告推荐方法测量医用X线绝对剂量的差异。方法用IBA公司DOSE1剂量仪、FC65-G指形电离室及NE2570型Farmer没量仪和2571型电离室,分别按照TRS398和TRS277号报告的要求,对Elekta公司电子直线加速器三档光子线(6mV,10mV,15mV)进行测量,并对结果进行比较。结果分别采用不同的剂量仪和不同的测量规程得到的结果基本相同。用DOSEl剂量仪两种方法测量相对偏差为2.99%0-7.07%0。结论用TRS398号报告测量得到的结果比TRS277报告测量的结果都偏大,但是两者的误差都小于1%,能够满足国标要求的将测量误差控制在2%以内的要求。 展开更多
关键词 X线剂量测量 1AGA TRS398 TRS277号报告
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融合蛋白HSP65-6×P277在NOD鼠中降糖作用的机制研究(英文)
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作者 金亮 王宇 +1 位作者 朱爱华 刘景晶 《中国临床药理学与治疗学》 CAS CSCD 2009年第10期1142-1150,共9页
目的:探讨融合蛋白HSP65 -6×P277在NOD鼠中的降糖作用机制。方法:融合蛋白HSP65 -6×P277通过鼻腔给药方式,在不添加任何佐剂的情况下3次免疫4周龄雌性NOD小鼠。观察该融合蛋白对NOD小鼠血糖,细胞因子水平,抗体类型和胰腺炎严... 目的:探讨融合蛋白HSP65 -6×P277在NOD鼠中的降糖作用机制。方法:融合蛋白HSP65 -6×P277通过鼻腔给药方式,在不添加任何佐剂的情况下3次免疫4周龄雌性NOD小鼠。观察该融合蛋白对NOD小鼠血糖,细胞因子水平,抗体类型和胰腺炎严重程度的影响。结果:融合蛋白HSP65 -6×P277免疫组动物血清中含有高水平的IL-4和低水平的IL-2 ,P277特异性抗体类型主要为IgGl和IgG2b,IgG2a水平较低;T细胞增殖实验的培养上清中含有较高水平的IL-10和较低水平的IFN-γ;胰腺炎的严重程度和1型糖尿病的发病率显著降低。结论:诱导了Th2免疫反应可能是HSP65-6×P277预防1型糖尿病发生的作用机制之一。 展开更多
关键词 热休克蛋白65 p277 TH1/TH2细胞 细胞因子
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DP从站模块EM277用于控制废纸制浆
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作者 李明辉 王孟效 +1 位作者 李艳 胡南江 《纸和造纸》 北大核心 2005年第3期40-42,共3页
简要介绍了废纸制浆的工艺流程及硬件配置,针对工厂的具体情况和工艺要求,设计了在废纸制浆中使用DP从站EM277模块来实现两个工作现场间数据传输的通讯网络,为解决其他相关问题提供了一种新的通讯方案。
关键词 DP网络 废纸 EM277
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EM277在大型复杂系统中的应用
19
作者 李玲 刘东南 张兰红 《心事》 2014年第20期178-178,174,共2页
本文介绍了S7—200与400CPU模块通过EM277通讯组构大型系统实现复杂工业自动控制功能的方法,并详细分析了用200系列产品与400CPU共同构成大型系统比传统大范围用s7—300或s7—400组态大型复杂系统的优越性.而且给出了应用实例与通讯... 本文介绍了S7—200与400CPU模块通过EM277通讯组构大型系统实现复杂工业自动控制功能的方法,并详细分析了用200系列产品与400CPU共同构成大型系统比传统大范围用s7—300或s7—400组态大型复杂系统的优越性.而且给出了应用实例与通讯实现的方法及设计思想。 展开更多
关键词 DP通讯 EM277 S7-200
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霍乱毒素B亚单位与p277融合基因在大肠杆菌中表达及免疫分析 被引量:6
20
作者 李建平 熊祺琰 +3 位作者 陈庆梅 吴洁 曹荣月 刘景晶 《药物生物技术》 CAS CSCD 2007年第3期157-163,共7页
为了增强多肽表位的免疫原性,构建了霍乱毒素B亚单位(Cholera toxin B subunit,CTB)和p277的融合基因CTB-p277,将该融合基因克隆到pET28a(+)中,获得原核表达载体pET28a-CTB-p277;并将该质粒转入大肠杆菌菌株BL21(DE3)中;重组菌株经2%的... 为了增强多肽表位的免疫原性,构建了霍乱毒素B亚单位(Cholera toxin B subunit,CTB)和p277的融合基因CTB-p277,将该融合基因克隆到pET28a(+)中,获得原核表达载体pET28a-CTB-p277;并将该质粒转入大肠杆菌菌株BL21(DE3)中;重组菌株经2%的乳糖诱导5 h后的表达产物用12%的SDS-PAGE分析表明可以表达融合蛋白,融合蛋白占全菌蛋白约40%,且主要以包含体的形式存在。包含体经洗涤、裂解,用DEAE纤维素离子交换纯化,可以获得99.1%的重组蛋白。重组蛋白的包含体经复性后,在体外可以自组装成五聚体。重组蛋白免疫KK-Ay小鼠后,ELISA的分析表明可以产生抗p277的抗体。血糖和体重的测定结果显示,给药组小鼠的血糖有明显的降低,体重也有相应的减轻。同时GM1-ELISA的检测表明,CTB-p277在体外可以和神经节苷脂GM1(Monosialoganglioside)特异结合,具有生物活性。 展开更多
关键词 霍乱毒素B亚单位 多肽p277 纯化 包含体 免疫分析 神经节苷脂GM1
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