谷氨酰胺对结直肠癌HT-29细胞放射敏感性的影响及机制探讨

目的观察不同浓度谷氨酰胺(glutamine,Gln)对结直肠癌HT-29细胞放射敏感性的影响,并探讨其可能机制。方法体外培养HT-29细胞,将对数生长期的HT-29细胞按照Gln不同浓度设置对照组(2 mmol/L,培养基基础浓度)、实验组Ⅰ(4 mmol/L)、实验组Ⅱ(6 mmol/L)、实验组Ⅲ(8 mmol/L),预处理2 h后给予Co 60源放射。通过CCK-8法检测未放射与放射后不同浓度Gln对细胞活力的影响;克隆形成实验检测放射后不同浓度Gln对细胞放射敏感性的影响;活性氧(ROS)试剂盒检测放射后24 h细胞ROS水平;流式细胞仪检测放射后48 h细胞凋亡率;蛋白印迹法测定放射后各组细胞Nrf2、HO-1、cleaved-Caspase3蛋白的表达水平。结果未放射的HT-29细胞在Gln干预24 h后实验组Ⅱ、实验组Ⅲ细胞活力明显高于对照组、实验组Ⅰ(P<0.05)。HT-29细胞放射24 h后,各实验组细胞活力明显高于对照组(P<0.05);放射后14 d,各实验组细胞克隆形成数均高于对照组(P<0.05);放射后24 h,各实验组ROS水平均低于对照组(P<0.05);放射后48 h,各实验组细胞凋亡率均低于对照组(P<0.05)。实验组ⅠNrf2表达高于对照组(P<0.05);实验组Ⅱ、ⅢNrf2、HO-1表达均高于对照组和实验组Ⅰ(P<0.05),cleaved-Caspase3表达均低于对照组和实验组Ⅰ(P<0.05);实验组Ⅲcleaved-Caspase3表达低于实验组Ⅱ(P<0.05)。结论谷氨酰胺能显著降低HT-29细胞的放射敏感性,其机制与减轻氧化应激损伤和减少细胞凋亡有关,这可能不利于结直肠癌患者放疗。

毛兰素通过Hedgehog信号通路调控结直肠癌HT29细胞的上皮间质转化和血管生成

目的:基于Hedgehog信号通路探讨石斛提取物毛兰素(erianin,ER)抑制结直肠癌HT29细胞上皮间质转化(EMT)和血管生成的作用机制。方法:将HT29细胞分为空白对照组、ER-L(25μg/mL)组、ER-M(50μg/mL)组、ER-H(75μg/mL)组、ER-H(75μg/mL)+PM(Hedgehog通路激活剂,1.5μmol/L)组。MTT法检测细胞增殖活力,克隆形成实验检测细胞克隆形成能力,划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移与侵袭能力,血管拟态形成实验检测血管生成能力,WB法检测与EMT进程、Hedgehog信号通路和拟态血管生成相关蛋白质的表达。结果:HT29细胞增殖活性随着ER质量浓度的升高而逐渐降低(P<0.05);与空白对照组比较,ER各组细胞克隆形成率、迁移与侵袭能力、血管形成能力、间质标志蛋白(N-cadherin、vimentin)、血管生成相关蛋白(VEGF、VE-cadherin)及Hedgehog通路相关蛋白(SHH、GLI1、SMO、c-Myc)表达均显著下降(均P<0.05),上皮标志蛋白(Ecadherin)、Hedgehog通路中融合蛋白抑制剂(SUFU)蛋白表达均显著上升(均P<0.05);PM处理在一定程度上逆转了ER对于HT29细胞增殖、EMT和血管生成的抑制作用(均P<0.05)。结论:ER可以抑制结直肠癌HT29细胞的增殖、迁移与侵袭、EMT和血管生成,其机制可能与抑制Hedgehog信号通路激活有关。

基于JAK-STAT信号通路的溃结宁膏对HT-29细胞炎症模型的影响

目的观察溃结宁膏穴位敷贴大鼠血清对人结肠癌HT-29细胞炎症反应和凋亡的影响,基于JAKSTAT信号通路探讨其作用机制。方法将HT-29细胞分为空白组、模型组、空白血清组、溃结宁膏血清组和柳氮磺吡啶(SASP)血清组。采用脂多糖诱导炎症细胞模型,CCK8法检测细胞存活率,TUNEL检测细胞凋亡情况,ELISA检测细胞上清液白细胞介素(IL)-6、IL-10、IL-13含量,RT-PCR检测细胞Janus激酶(JAK)1、JAK2、信号传导及转录激活因子(STAT)3、STAT6基因表达,Western blot检测JAK1、JAK2、STAT3、p-STAT3蛋白表达。结果与空白组比较,模型组和空白血清组细胞存活率明显降低(P<0.05),细胞凋亡率明显升高(P<0.05),细胞上清液IL-6和IL-13含量增加、IL-10含量减少(P<0.05),细胞JAK1、JAK2、STAT3、STAT6基因及JAK1、JAK2、STAT3、p-STAT3蛋白表达明显升高(P<0.05);与模型组及空白血清组比较,溃结宁膏血清组和SASP血清组细胞存活率明显增加(P<0.05),细胞凋亡率明显降低(P<0.05),细胞上清液IL-6和IL-13含量减少、IL-10含量增加(P<0.05),细胞JAK1、JAK2、STAT3、STAT6基因及JAK1、JAK2、STAT3、p-STAT3蛋白表达明显降低(P<0.05)。结论溃结宁膏穴位敷贴大鼠血清可能通过调控JAK-STAT信号通路调节HT-29细胞炎症反应及凋亡。

姜黄素类似物对人结肠癌HT-29细胞增殖与自噬的影响

目的初步探究姜黄素类似物——WH-8对人结肠癌HT-29细胞增殖和自噬的影响。方法选用不同浓度WH-8作用于人结肠癌HT-29细胞,应用四甲基偶氮唑盐还原法观察药物对细胞的生长抑制作用;通过荧光染色技术和细胞成像技术观察WH-8作用下细胞自噬囊泡的变化;四甲基偶氮唑盐还原法检测经自噬特异性抑制剂3-MA预处理后WH-8对细胞生长抑制率的影响;蛋白质印迹法观察WH-8作用下细胞自噬特征性蛋白酵母自噬相关基因1(Beclin 1)和微管相关蛋白1轻链3(LC3)的表达情况。结果WH-8呈时间-剂量依赖性抑制人结肠癌HT-29细胞增殖,48 h平均半数抑制浓度为(12.5±1.3)μmol/L;一定浓度下WH-8可诱导细胞的自噬囊泡增多;3-MA可逆转WH-8对人结肠癌HT-29细胞的生长抑制作用,差异有统计学意义(P<0.05);WH-8可诱导Beclin-1表达上调,且在一定时间内促进LC3Ⅰ向LC3Ⅱ转化。结论WH-8可抑制人结肠癌HT-29细胞增殖并诱导细胞自噬。

基于JAK2/STAT3信号通路探讨对叶百部总生物碱对人结肠癌HT-29细胞增殖、凋亡的影响

目的基于Janus激酶2(JAK2)/信号转导及转录激活因子3(STAT3)信号通路,探讨对叶百部总生物碱对人结肠癌HT-29细胞增殖、凋亡的影响。方法将人结肠癌HT-29细胞分为55μg/mL组、150μg/mL组和250μg/mL组进行实验,另设仅添加培养基的空白组(含细胞)。除空白组外,其他组给予相应浓度的对叶百部总生物碱进行干预。干预24 h、48 h、72 h后,采用四甲基偶氮唑蓝法检测各组细胞增殖抑制率;干预48 h后,采用Hoechst 33258染色法观察各组细胞凋亡情况,采用流式细胞术检测各组细胞凋亡率,采用Western blot检测各组细胞JAK2、磷酸化JAK2(p-JAK2)、STAT3和磷酸化STAT3(p-STAT3)的蛋白表达水平。结果与空白组比较,各浓度组细胞增殖抑制率增加;经Hoechst 33258染色后在各浓度组中可观察到典型的细胞凋亡形态改变,凋亡细胞数及细胞凋亡率均增加(均P<0.05);流式细胞术检测结果显示150μg/mL组和250μg/mL组细胞凋亡率增加(均P<0.05)。与空白组比较,各浓度组的p-JAK2蛋白和p-STAT3蛋白表达水平均下调(均P<0.05)。55μg/mL组、150μg/mL组和250μg/mL组的细胞增殖抑制率、凋亡细胞数及细胞凋亡率依次增加,p-JAK2蛋白和p-STAT3蛋白表达水平依次降低(均P<0.05)。结论对叶百部总生物碱可能通过抑制JAK2/STAT3信号通路相关蛋白的活化,来抑制人结肠癌HT-29细胞增殖并促进其凋亡。

苦参碱对结肠癌HT29细胞增殖及凋亡的临床研究

目的:探讨苦参碱对结肠癌HT29细胞增殖及凋亡的影响,并分析其作用机制。方法:选取2020年1月至2021年3月间于中国医学科学院肿瘤医院山西医院行结肠癌治疗的100例患者的资料进行分析,其中运用mFOLFOX6方案治疗的50例纳入对照组,另50例在mFOLFOX6方案治疗的中后期联合使用苦参碱治疗的纳入观察组。运用Western blot法检测两组患者B细胞淋巴瘤-2抗凋亡蛋白(Bcl-2)、Bcl-2相关蛋白X(Bax)、半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)及表皮生长因子受体(EGFR)水平,以分析苦参碱对HT29细胞增殖、凋亡的影响;并比较两组患者癌胚抗原(CEA)、糖类抗原19-9(CA19-9)及血管内皮生长因子(VEGF)水平在治疗前后的变化,以分析治疗效果。结果:治疗后,观察组患者的Bcl-2、EGFR水平均低于对照组,Bax和Caspase-3水平均高于对照组,差异均具有统计学意义(P<0.05);观察组患者CEA、CA19-9及VEGF水平均低于对照组,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:苦参碱具有一定的抗肿瘤作用,其可以抑制结肠癌HT29细胞的增殖,诱导其凋亡,并通过调节Bcl-2/Bax、EGFR和Caspase-3等相关信号通路来发挥其作用。

苦参碱抑制大肠癌HT-29细胞环氧化酶-2表达的研究

目的从基因和蛋白水平探讨中药成分苦参碱 (matrine)对大肠癌HT-2 9细胞环氧化酶-2(COX-2 )表达的影响。方法分别采用RT-PCR、Western blot、ELISA等方法检测不同浓度苦参碱处理HT-2 9细胞前后COX-2mRNA、蛋白及其产物前列腺素E2 (PGE2 )水平的改变。结果苦参碱可抑制HT-2 9细胞COX-2mRNA、蛋白表达及PGE2 合成水平 ,但对COX 1无影响。当苦参碱 2 .0mg/ml处理时 ,COX 2mRNA表达在处理后 6h和 9h时抑制率均为 10 0 % ;细胞培养液PGE2 合成水平在 9h时抑制率为6 3.9% ;COX-2蛋白表达在 12h和 2 4h时抑制率分别为 4 8%和 10 0 %。结论苦参碱具有选择抑制HT-2 9细胞COX-2的基因转录、蛋白表达和功能活性等作用 ,在一定浓度和时间范围内 。

大黄素对HT-29细胞IL-8分泌及NF-κB活化的影响

目的研究大黄素对IFN-γ和LPS刺激的人结肠癌细胞株HT-29细胞的IL-8分泌及NF-κB活化的作用,为其临床应用提供实验依据。方法用IFN-γ和LPS刺激的人结肠癌细胞株HT-29细胞来建立体外细胞炎症模型,采用ELISA检测HT-29细胞的IL-8分泌;以免疫荧光技术结合激光共聚焦显微镜观察HT-29细胞NF-κB核转位。结果大黄素在10～80mol.L-1能降低IFN-γ+LPS所引起的HT-29细胞IL-8的大量产生,并且呈明显的剂量依赖关系;大黄素不同浓度组可抑制IFN-γ+LPS刺激造成的NF-κB激活,;有剂量依赖关系。结论大黄素能有效抑制IFN-γ+LPS诱导的IL-8分泌和NF-κB激活。

二烯丙基二硫对人结肠癌HT-29细胞G_1期的阻滞作用

目的探讨二烯丙基二硫(DADS)对人结肠癌HT-29细胞G1期的阻滞作用及分子机制。方法采用MTT、细胞计数法、流式细胞术和免疫细胞化学方法分析DADS对体外培养的HT-29细胞增殖抑制作用、细胞周期分布及细胞周期相关蛋白表达的影响。结果MTT法显示,60、120μmol.L-1DADS作用HT-29细胞24 h后,生长抑制率分别达23.1%、45.6%。细胞计数法表明,常规培养HT-29细胞群体倍增时间为22.58 h,60μmol.L-1DADS作用HT-29细胞后,其细胞群体倍增时间延长到31.20 h。流式细胞仪分析结果显示,60μmol.L-1DADS阻滞HT-29细胞在G1期,与对照组相比,可使G1期细胞增加约2倍,而120μmol.L-1DADS显著地将细胞阻滞在G2/M期。免疫细胞化学分析表明在G1期阻滞同时有p21W af1蛋白表达上调,Cyc lin E、C-myc蛋白表达下降。结论低剂量DADS对HT-29细胞的抑制增殖作用可能与G1期阻滞有关,DADS对HT-29细胞G1期阻滞的分子机制可能与调节p21W af1、Cyc lin E、C-myc表达相关。

NGX6基因对人结肠癌细胞HT-29细胞周期的影响

NGX6基因是新克隆的候选抑瘤基因,研究表明NGX6重表达可抑制结肠癌细胞的增殖.为进一步研究NGX6对细胞周期的影响,采用流式细胞仪检测NGX6重表达对结肠癌细胞HT-29细胞周期的影响,发现NGX6重表达可增加HT-29细胞在G0/G1期的分布比例,减少了S,G2,M期细胞数.利用蛋白质印迹和流式细胞术分析NGX6转染前后HT-29细胞周期素(cyclins)和细胞周期素依赖性蛋白激酶抑制物(cyclin-dependentkinaseinhibitor,CKI)的表达变化,发现NGX6可下调HT-29细胞中cyclinE、cyclinD1的表达及上调p27的表达,对cyclinA和cyclinB的表达无明显影响,p16在三组结肠癌细胞中均无表达.研究结果表明,NGX6在HT-29细胞中通过下调cyclinE、cyclinD1和上调p27的表达,阻滞细胞周期于G0/G1期,从而发挥其在结肠癌中的抑瘤作用.

半枝莲醇提物含药血清对人结肠癌HT-29细胞增殖、凋亡和周期的影响

目的:研究半枝莲醇提物(EESB,ethanol extract from Scutellaria barbata)含药血清对人结肠癌HT-29细胞株体外诱导其凋亡和周期的变化。方法:体外常规培养人结肠癌HT-29细胞株,制备含药血清,设置空白血清组、含有不同浓度EESB含药血清组、5-FU组,1应用MTT法评价EESB含药血清对HT-29细胞24 h、48 h、72 h的生长抑制率,2Annexin V-PE/7-AAD双染色分析在流式细胞仪上观察EESB含药血清处理HT-29细胞48 h后的细胞凋亡率,3PI法检测细胞周期变化。结果:1与空白组比较,MTT法显示EESB低、中、高剂量含药血清都能抑制HT-29细胞增殖(P<0.05),抑制率与作用时间及血清含药浓度相关,72 h时其达到39%。2同空白组比较,低、中、高剂量含药血清处理HT-29细胞48 h后凋亡率显著高于对照组(P<0.05),同时低、中、高剂量含药血清处理HT-29细胞48 h后,3与空白组比较,G0/G1期细胞明显较对照组增加(P<0.05),提示半枝莲可促进细胞凋亡,并且将细胞生长周期阻滞于G0/G1期,并且S期减少。结论:半枝莲对人结肠癌HT-29细胞有抑制作用,作用机制可能不光与抑制细胞生长有关,还和阻滞细胞生长周期及诱导细胞凋亡有关。

辽东楤木叶总皂苷对结肠癌HT-29细胞的生长抑制作用及机制研究

目的研究辽东楤木叶总皂苷(ETS)对HT-29细胞生长的抑制作用及作用机制。方法采用MTT法检测ETS对HT-29细胞增殖的抑制作用;流式细胞仪检测ETS对HT-29细胞周期和凋亡的影响;Western blot法检测ETS对HT-29细胞PLK1蛋白表达的影响。结果 ETS对结肠癌HT-29细胞增殖有明显抑制作用,IC50值为39.62 mg·L-1。在10～40 mg·L-1剂量作用下,可剂量依赖性诱导HT-29细胞凋亡。ETS主要将细胞周期阻滞在G0/G1期,从而可剂量依赖性抑制肿瘤细胞增殖。ETS可明显抑制HT-29细胞PLK1蛋白的表达。结论 ETS体外可明显抑制HT-29细胞的生长,其抗肿瘤作用与细胞周期阻滞、细胞凋亡及抑制PLK1蛋白表达有关。

乳酸菌体外粘附人结肠腺癌细胞系HT-29细胞的研究

用实验室保存的24株乳酸菌菌种做了对人结肠腺癌细胞系HT-29细胞的体外粘附性试验。发现双歧杆菌的粘附能力较高,平均在 10.5个/细胞;乳杆菌的粘附能力较低,平均在 3.2个/细胞;球菌的粘附能力很低,平均在 2.3个/细胞。其中双歧杆菌中 Bifidobacterium bifidum 02菌株粘附能力最好,达到(18.4±2.7)个/细胞。乳杆菌中 Lactobacillus acidophilus 99101粘附能力最好,达到(10.2±1.8)个/细胞。同时,同种不同株的乳酸菌粘附能力有差异,而同属中,来自人粪便与来自猪粪便的乳酸菌的粘附能力没有明显差异。

bcl-2和p53在丹皮酚诱导人结直肠癌HT-29细胞凋亡中的作用及其机制

目的探讨bcl-2和p53在丹皮酚(paeonol,Pae)诱导人结直肠癌HT-29细胞凋亡过程中的作用及可能的作用机制。方法应用透射电镜技术和原位末端标记(TUNEL)法观察不同浓度的Pae对HT-29细胞凋亡的诱导作用,应用免疫细胞化学技术检测用药前、后凋亡相关基因bcl-2及p53表达的变化,并与对照组比较。结果透射电镜观察到Pae作用后HT-29细胞出现典型的细胞凋亡形态;Pae在15.63mg/L、62.50mg/L、250.00mg/L3种浓度下作用48h均可诱导HT-29细胞凋亡,TUNEL法显示各组凋亡指数(AI)间差别有显著性意义(P<0.05);免疫细胞化学染色显示Pae作用后HT-29细胞bcl-2及p53蛋白表达显著降低。结论Pae能抑制HT-29细胞增殖并诱导其凋亡,其作用可能与下调bcl-2及p53蛋白的表达有关。

5-AIQ对大肠癌细胞系HT-29细胞PARP活性抑制的生物学作用

背景与目的:聚(腺苷二磷酸核糖)聚合酶[poly(adenosine 5′-diphosphate ribose)polymerase,PARP]抑制剂5-氨基异喹啉酮(5-aminoisoquinolinone,5-AIQ)在炎症中具重要作用,但在肿瘤中的作用尚不清楚。本研究初步探讨5-AIQ对大肠癌PARP活性抑制的生物学作用。方法:链霉生物素-过氧化物酶法(Streptavidin-Peroxidase,SP)免疫组化法和免疫荧光双标法用于检测人大肠癌组织聚(腺苷二磷酸核糖)[poly(adenosine 5′-diphosphate ribose),PAR],及其与P-选择素(P-selectin)、细胞间粘附分子(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)的共表达,大肠癌切缘肠粘膜为对照。通过粘附实验观察5-AIQ对结肠癌HT-29细胞系与人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)粘附的影响;同时采用SP法观察5-AIQ对HT-29细胞PAR、P-selectin和ICAM-1表达的影响。结果:45例大肠癌组织中,PAR阳性率(77.8%,35/45)明显高于对照肠粘膜(10.0%,1/10)(P<0.05);其中伴转移者PAR阳性率(86.7%,26/30)高于不伴转移者(60.0%,9/15)。PAR阳性与P-selectin和ICAM-1表达相关。结肠癌HT-29细胞与HUVEC粘附实验显示,5-AIQ浓度为100、300、500μmol/L时,细胞粘附率分别为56.79%、46.31%和39.77%,明显低于对照组(未加5-AIQ者)(粘附率为100%)。经5-AIQ处理的HT-29细胞PAR、P-selectin和ICAM-1表达HSCOR得分分别为1.41±0.12、1.57±0.13和1.23±0.13,明显低于未经5-AIQ处理的HT-29细胞(HSCOR得分分别为2.61±0.10、2.73±0.16和2.30±0.12)(P<0.05)。结论:大肠癌组织内PARP活性增强。PARP抑制剂5-AIQ可抑制大肠癌HT-29细胞与HUVEC的粘附,并可抑制大肠癌HT-29细胞PAR、P-selectin和ICAM-1表达。

藤黄酸联合肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体诱导人结肠癌HT-29细胞凋亡的效果和机制

背景与目的:肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL)能选择性地杀伤肿瘤细胞,但多种肿瘤对其耐药。该研究旨在探讨藤黄酸(gambognic acid,GA)与TRAIL联合对人结肠癌HT-29细胞裸鼠移植瘤生长的影响及GA联合TRAIL抗结肠癌的作用机制。方法:建立人结肠癌HT-29细胞裸鼠皮下移植瘤模型,测定TRAIL和(或)GA对裸鼠移植瘤的影响,采用H-E染色观察肿瘤组织形态结构改变,TUNEL法检测细胞凋亡状况;HT-29细胞经过siRNA干扰Nrf2表达后,通过AnnexinⅤ-FITC/PI双染检测细胞凋亡情况,流式细胞术检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)含量,RT-PCR法检测Nrf2、Bcl-2、Bax和DR5 mRNA的表达水平。结果:联合应用GA显著促进了TRAIL对裸鼠皮下移植瘤的生长抑制(抑瘤率达67.0%)和诱导凋亡作用,下调了组织中Nrf2、Bcl-2的表达,增强了Bax和DR5的表达;与阴性对照siRNA相比,Nrf2干扰能明显上调TRAIL诱导HT-29细胞的凋亡率,提高ROS含量,下调Nrf2和Bcl-2表达,上调Bax和DR5表达。结论:GA可能是通过下调Nrf2表达,使ROS水平升高而激活线粒体凋亡途径与死亡受体途径,从而逆转人结肠癌HT-29细胞体内外对TRAIL的耐药性。

吴茱萸碱和小檗碱对HT29细胞凋亡及端粒酶催化亚基(hTERT)表达的影响

目的:探讨左金丸的主要成分吴茱萸碱和小檗碱对结肠癌HT29细胞凋亡及端粒酶催化亚基(hTERT)表达的影响,为临床应用左金丸治疗大肠癌提供实验依据。方法:体外培养人结肠癌HT29细胞,加入不同浓度的吴茱萸碱及盐酸小檗碱进行培养,采用活细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞增殖,Annexin Ⅴ-FITC/PI双染色流式细胞术检测细胞凋亡变化,RT-PCR法检测hTERT的表达。结果:吴茱萸碱和盐酸小檗碱作用HT29细胞后,增殖明显受到抑制,呈剂量和时间依赖性;流式细胞仪检测表明吴茱萸碱和盐酸小檗碱能够诱导细胞凋亡,呈剂量依赖性;并且端粒酶hTERT表达降低,具有剂量依赖关系。结论:吴茱萸碱和盐酸小檗碱对结肠癌HT29细胞具有显著生长抑制作用,该抑制作用可能通过下调端粒酶hTERT基因表达,降低端粒酶的活性,从而诱导细胞凋亡。

乙酰肝素酶的外源性表达对大肠癌HT29细胞侵袭性的影响

背景与目的:乙酰肝素酶(heparanase,Hpa)基因表达与恶性肿瘤及肿瘤细胞的侵袭、转移和血管生成能力密切相关。本研究旨在通过增强肿瘤细胞中外源性Hpa基因的表达,探讨该基因对大肠癌细胞HT29转移侵袭能力的影响。方法:Hpa全长基因真核表达载体转染HT29细胞,MTT法检测转化细胞增殖能力,Boyden小室体外侵袭实验比较转染前后细胞侵袭能力的变化,通过转化细胞裸鼠异种接种成瘤和实体瘤回盲部原位种植转移模型建立,观察Hpa基因外源性表达对HT29细胞侵袭性的影响。结果:转染Hpa基因细胞HT29-Hpa较未转染细胞HT29和转染空载细胞HT29-KZ生长速度明显加快;Boyden小室体外侵袭实验显示,HT29-Hpa细胞穿膜数(45.5±0.5)较HT29细胞(29.3±0.1)和HT29-KZ细胞(30.1±0.2)增多,差异具有显著性(P<0.01)。转染细胞裸鼠皮下瘤生长速度明显加快,同期内HT29-Hpa细胞形成的皮下瘤(12mm×9mm×10mm)较HT29细胞皮下瘤(6mm×8mm×6mm)大,HT29-Hpa细胞皮下瘤回盲部原位种植致肝转移率(71.43%)较HT29细胞肝转移率(14.29%)增高,两者间有显著性差异(P<0.01)。结论:Hpa基因外源性的表达能促进肿瘤细胞的生长、侵袭和转移。

吴茱萸碱和盐酸小檗碱对HT29细胞生长抑制及凋亡的影响

目的探讨左金丸的主要成分吴茱萸碱和盐酸小檗碱对大肠癌HT29细胞的生长抑制及其诱导细胞凋亡的作用,为临床应用左金丸治疗大肠癌提供实验依据。方法采用活细胞计数试剂盒(CCK-8),Annexin V- FITC/PI双染色流式细胞术,检测不同浓度的盐酸小檗碱和吴茱萸碱作用后HT29细胞增殖活性和细胞凋亡的变化。结果吴茱萸碱和盐酸小檗碱作用HT29细胞后,增殖明显受到抑制,呈剂量和时间依赖性;流式细胞仪检测表明吴茱萸碱和盐酸小檗碱能够诱导细胞凋亡,呈剂量依赖性。倒置显微镜观察细胞呈现缩小、变圆、皱缩、脱壁等增殖变慢的形态学特征。结论吴茱萸碱和盐酸小檗碱对大肠癌HT29细胞具有显著生长抑制作用,该抑制作用与诱导细胞凋亡相关。

姜黄素与5-氟尿嘧啶联用对人结肠癌HT-29细胞增殖的影响

目的 体外观察 5 氟尿嘧啶与姜黄素联用对人结肠癌HT 2 9细胞增殖的相互作用。方法 采用MTT法观察不同浓度姜黄素、5 氟尿嘧啶单独或联合应用对HT 2 9细胞生长的抑制作用 ,并利用中效原理判定两药合用的效果。结果 两种药物单独应用时 ,对HT 2 9细胞的抑制作用呈明显的剂量效应关系 ;对于HT 2 9细胞 ,姜黄素的中位抑制浓度为(32± 11) μmol·L- 1,5 氟尿嘧啶的中位抑制浓度为(10 4 0± 4 5 6 ) μmol·L- 1。应用中效原理分析显示 ,两药在联合应用时为协同效应 ,并且在不同的药物浓度配比下呈相同的趋势。增大姜黄素的用量可在更宽的效应范围内获得两种药物的协同效应。结论姜黄素与 5 氟尿嘧啶在联合应用时的相互作用为协同效应 ,本结果对于结肠癌的治疗具有一定的临床意义。