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PRMT5和CDKN2B在宫颈癌组织的表达及临床意义
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作者 胡晓菡 周强 +3 位作者 孙武 陈静 沈瀚 李强 《疑难病杂志》 CAS 2024年第4期412-417,共6页
目的研究蛋白精氨酸甲基转移酶5(PRMT5)、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂2B(CDKN2B)在宫颈癌中的表达及临床意义。方法收集2019年3月—2020年3月南京大学医学院附属鼓楼医院妇产科诊治宫颈癌患者88例。免疫组织化学法检测宫颈癌和癌旁组... 目的研究蛋白精氨酸甲基转移酶5(PRMT5)、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂2B(CDKN2B)在宫颈癌中的表达及临床意义。方法收集2019年3月—2020年3月南京大学医学院附属鼓楼医院妇产科诊治宫颈癌患者88例。免疫组织化学法检测宫颈癌和癌旁组织中PRMT5、CDKN2B表达;采用Spearman相关分析PRMT5与CDKN2B表达的相关性;比较不同临床特征宫颈癌癌组织中PRMT5、CDKN2B表达的差异;Kaplan-Meier曲线评估PRMT5、CDKN2B表达对宫颈癌患者无进展生存预后的影响;多因素Cox回归分析宫颈癌患者无进展生存预后的影响因素。结果癌组织中PRMT5蛋白阳性率70.45%(62/88),高于癌旁组织6.82%(6/88)(χ^(2)=75.155,P<0.001)。宫颈癌组织中CDKN2B阳性率22.73%(20/88),低于癌旁组织79.55%(71/88)(χ^(2)=75.336,P<0.001)。宫颈癌中PRMT5与CDKN2B呈负相关(r=-0.734,P<0.001)。FIGOⅠB2~ⅡA期、有淋巴结转移宫颈癌组织中PRMT5阳性率高于FIGOⅠA~ⅠB1期、无淋巴结转移者,而CDKN2B阳性率则降低(χ^(2)/P=6.359/0.012、4.606/0.032、5.205/0.023、3.893/0.048)。PRMT5阳性组3年累积无进展生存率74.19%(46/62),低于PRMT5阴性组92.31%(24/26)(Log-Rankχ^(2)=4.386,P=0.017)。CDKN2B阴性组3年累积无进展生存率75.00%(51/68),低于CDKN2B阳性组95.00%(19/20)(Log-Rankχ^(2)=4.423,P=0.012)。FIGO分期ⅠB2~ⅡA期、合并淋巴结转移、PRMT5阳性、CDKN2B阴性是影响宫颈癌患者无进展生存预后的独立危险因素[OR(95%CI)=1.407(1.159~1.696),1.464(1.201~1.784),1.614(1.189~2.192),1.595(1.191~2.136)]。结论宫颈癌组织中PRMT5表达升高,CDKN2B表达降低,两者与宫颈癌患者的不良临床病理特征有关,是评估宫颈癌预后的标志物。 展开更多
关键词 宫颈癌 蛋白精氨酸甲基转移酶5 细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂2b 预后 肿瘤标志物
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Differential expression and regulation of integral membrane protein 2b in rat male reproductive tissues
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作者 Deivendran Rengaraj Xiao-Huan Liang +3 位作者 Fei Gao Wen-Bo Deng Nathaniel Mills Zeng-Ming Yang 《Asian Journal of Andrology》 SCIE CAS CSCD 2008年第3期503-511,共9页
Aim: To examine the expression and regulation of integral membrane protein 2b (Itm2b) in rat male reproductive tissues during sexual maturation and under different treatments by in situ hybridization. Methods: Tes... Aim: To examine the expression and regulation of integral membrane protein 2b (Itm2b) in rat male reproductive tissues during sexual maturation and under different treatments by in situ hybridization. Methods: Testis, epididymis, and vas deferens were collected on days 1-70 to examine Itm2b expression during sexual maturation. To further examine the regulation of Itm2b, adult rats underwent surgical castration and cryptorchidism. Ethylene dimethane sulfonate and busulfan treatments were carried out to test the regulation of Itm2b after destruction of Leydig cells and germ cells. Results: In testis, Itm2b expression was moderately detected in the adluminal area of seminiferous cords on days 1-10, and detected at a low level in the spermatogonia on days 20 and 30. The Itm2b level was markedly increased in Leydig cells from day 20 to day 70. In epididymis and vas deferens, Itm2b was detected from neonate to adults, and the signal gradually increased in accordance with sexual maturation. Itm2b expression was significantly downregulated in epididymis and vas deferens of castrated rats, and strongly stimulated when castrated rats were treated with testosterone. Cryptorchidism led to a significant decline of Itm2b expression in testis and caput epididymis. Itm2b expression in epididymis and vas deferens was significantly decreased after the Leydig ceils were destroyed by ethylene dimethane sulfonate. Busulfan treatment produced no obvious change in Itm2b expression in epididymis or vas deferens. Conelusion: Our data suggested that Itm2b expression is upregulated by testosterone and might play a role in rat male reproduction. 展开更多
关键词 TESTIS EPIDIDYMIS vas deferens integral membrane protein 2b
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六味安神胶囊联合氨氯地平贝那普利治疗老年原发性高血压伴焦虑抑郁障碍患者的临床疗效及对NR2B蛋白表达的干预作用
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作者 李慧琼 马圣军 +2 位作者 马训平 刘丽 柳丹 《广州中医药大学学报》 CAS 2024年第8期2001-2008,共8页
【目的】分析六味安神胶囊联合氨氯地平贝那普利治疗老年原发性高血压(essential hypertension,EH)伴焦虑抑郁障碍患者的临床疗效及对N-甲基-D-天冬氨酸受体2B亚基(NR2B)蛋白表达的干预作用。【方法】选取该院老年科2020年12月至2022年1... 【目的】分析六味安神胶囊联合氨氯地平贝那普利治疗老年原发性高血压(essential hypertension,EH)伴焦虑抑郁障碍患者的临床疗效及对N-甲基-D-天冬氨酸受体2B亚基(NR2B)蛋白表达的干预作用。【方法】选取该院老年科2020年12月至2022年12月就诊的138例老年原发性高血压伴焦虑抑郁障碍痰热壅盛证患者进行回顾性研究,根据治疗方案的不同将患者分为观察组和对照组,每组各69例。对照组给予氨氯地平贝那普利及常规心理治疗,观察组在对照组的基础上给予六味安神胶囊治疗,疗程为1个月。观察2组患者治疗前后血压指标[收缩压(SBP)、舒张压(DBP)]、汉密尔顿焦虑量表(HAMA)评分、汉密尔顿抑郁量表(HAMD)-17项评分、NR2B蛋白表达量、单胺类神经递质[多巴胺(DA)、肾上腺素(NE)、5-羟色胺(5-HT)]的变化情况,并比较2组患者的临床疗效和不良反应总发生率。【结果】(1)治疗1个月后,观察组的总有效率为95.65%(66/69),对照组为75.36%(52/69),组间比较(χ^(2)检验),观察组的疗效明显优于对照组(P<0.01)。(2)治疗后,2组患者的SBP、DBP均较治疗前明显降低(P<0.05),且观察组对SBP、DBP的降低作用均明显优于对照组(P<0.01)。(3)治疗后,2组患者的HAMA评分和HAMD-17项评分均较治疗前明显降低(P<0.05),且观察组对HAMA评分和HAMD-17项评分的降低作用均明显优于对照组(P<0.01)。(4)治疗后,2组患者的NR2B蛋白表达量均较治疗前明显降低(P<0.05),且观察组对NR2B蛋白表达量的降低作用明显优于对照组(P<0.01)。(5)治疗后,2组患者的血清DA、NE、5-HT水平均较治疗前明显降低(P<0.05),且观察组对血清DA、NE、5-HT水平的降低作用均明显优于对照组(P<0.01)。(6)观察组的不良反应总发生率为2.90%(2/69),对照组为5.80%(4/69),组间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。【结论】六味安神胶囊联合氨氯地平贝那普利可有效减轻老年原发性高血压伴焦虑抑郁障碍痰热壅盛证患者的不良情绪,降低血压,抑制NR2B蛋白过度表达,纠正单胺类神经递质紊乱,且联合治疗未引发严重不良反应,安全有效。 展开更多
关键词 六味安神胶囊 氨氯地平贝那普利 老年原发性高血压 焦虑抑郁障碍 痰热壅盛 N-甲基-D-天冬氨酸受体2b亚基(NR2b)蛋白
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重组人血清白蛋白-干扰素α-2b 融合蛋白体外抗乙型肝炎病毒活性评价 被引量:9
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作者 张伟 代晓朋 +5 位作者 王鲁燕 武福军 祁碧玉 刘志敏 李军锋 周育森 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期550-555,共6页
目的检测重组人血清白蛋白-干扰素α-2b融合蛋白(HSA-IFNα-2b)体外抗乙型肝炎病毒(HBV)的活性。方法构建含1.6倍HBV基因组及绿色荧光蛋白的重组腺病毒(AdGFP-HBV),感染人肝细胞系HepG2细胞,构建HBV复制细胞模型;ELISA法检测HBV乙肝病... 目的检测重组人血清白蛋白-干扰素α-2b融合蛋白(HSA-IFNα-2b)体外抗乙型肝炎病毒(HBV)的活性。方法构建含1.6倍HBV基因组及绿色荧光蛋白的重组腺病毒(AdGFP-HBV),感染人肝细胞系HepG2细胞,构建HBV复制细胞模型;ELISA法检测HBV乙肝病毒表面抗原(HBsAg)和乙肝病毒e抗原(HBeAg)表达;MTT法检测HSA-IFNα-2b对HepG2细胞的毒性作用;定量PCR法检测细胞内HBV RNA的相对表达以及细胞上清中HBV DNA绝对表达水平;双报告基因法检测HSA-IFNα-2b对HBV增强子Ⅰ活性的影响。结果 AdGFP-HBV感染HepG2细胞后可以复制表达HBV。HSA-IFNα-2b 500 kU·L-1加入AdGFP-HBV感染的HepG2细胞,使HBsAg表达降低51.32%(P<0.01),HBeAg降低50.26%(P<0.01),而相同浓度的HSA-IFNα-2b并不抑制细胞的增殖。随HSA-IFNα-2b浓度增加,其对HBsAg表达的抑制作用逐渐升高,HSA-IFNα-2b对HBsAg表达的抑制率(Y)与其浓度(X)的回归方程是Y=21.11 lgX+11.91(r2=0.954),IC50为63.76 kU·L-1。HSA-IFNα-2b 500 kU·L-1使细胞中HBV RNA下降52.83%(P<0.01),培养上清中HBV DNA降低53.07%(P<0.01)。HSA-IFNα-2b 500 kU·L-1使HBV增强子Ⅰ活性下降40.04%(P<0.01)。结论构建了可用于药物评价的HBV复制细胞模型,HSA-IFNα-2b体外具有抗HBV活性。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 血清白蛋白 干扰素Α-2b 融合蛋白 乙型肝炎病毒增强子Ⅰ
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重组人α2b型干扰素的纯化与鉴定 被引量:3
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作者 陈华标 邓小昭 +2 位作者 李光富 刁振宇 张林元 《药物生物技术》 CAS CSCD 1997年第1期9-12,共4页
采用超声波裂解菌体 ,硫酸铵沉淀 ,酸化处理 ,再经离子交换层析和单克隆抗体亲合层析 ,使表达产物纯化了 10 2 9倍 ,比活性达 2 .14× 10 8IU/ mg蛋白 ,SDS- PAGE呈单一条带 ,HPL C纯度 >95% ,回收率达 59.1%。表达产物 N端 2 5... 采用超声波裂解菌体 ,硫酸铵沉淀 ,酸化处理 ,再经离子交换层析和单克隆抗体亲合层析 ,使表达产物纯化了 10 2 9倍 ,比活性达 2 .14× 10 8IU/ mg蛋白 ,SDS- PAGE呈单一条带 ,HPL C纯度 >95% ,回收率达 59.1%。表达产物 N端 2 5个氨基酸序列分析结果与 IFN- α2 b c DNA推导的序列相符合。 展开更多
关键词 干扰素 蛋白质 纯化 N端序列分析
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变色酸2B分光光度法测定蛋白质 被引量:5
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作者 胡庆红 刘绍璞 罗红群 《西南师范大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期594-598,共5页
在pH值为 1 2~ 2 0的Clark Lubs缓冲溶液中 ,变色酸 2B与蛋白质结合形成复合物 ,导致变色酸 2B褪色 ,其最大褪色波长位于 5 3 0nm .不同蛋白质在 0~ 3 0 μg/mL至 0~ 5 0 μg/mL范围内服从Beer定律 ,其表观摩尔吸光系数视蛋白质的... 在pH值为 1 2~ 2 0的Clark Lubs缓冲溶液中 ,变色酸 2B与蛋白质结合形成复合物 ,导致变色酸 2B褪色 ,其最大褪色波长位于 5 3 0nm .不同蛋白质在 0~ 3 0 μg/mL至 0~ 5 0 μg/mL范围内服从Beer定律 ,其表观摩尔吸光系数视蛋白质的不同分别在 1 1× 10 5~ 1 2× 10 6 L·mol-1·cm-1之间 .方法不仅具有高灵敏度 ,而且选择性好、简便快速 .用于人血清样品中总蛋白质量的测定 ,结果满意 . 展开更多
关键词 变色酸2b 蛋白质 分光光度法
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猪繁殖与呼吸综合病毒结构蛋白2b研究进展 被引量:3
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作者 李勇 夏志平 +1 位作者 高英杰 马德慧 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2010年第10期99-101,共3页
猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的母猪繁殖障碍和新生仔猪呼吸道症状并导致高死亡率的传染病,近年来国内外学者对病原进行了更广泛深入的研究。2b蛋白是新发现的小结构蛋白,分子质量约10 ku,能够诱导... 猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的母猪繁殖障碍和新生仔猪呼吸道症状并导致高死亡率的传染病,近年来国内外学者对病原进行了更广泛深入的研究。2b蛋白是新发现的小结构蛋白,分子质量约10 ku,能够诱导产生中和抗体,是ORF2的优势蛋白,研究发现其是一种病毒离子通道蛋白,与病毒感染过程有关,它可以促使PRRSV粒子脱壳,释放RNA到宿主细胞内,但对病毒的装配不起作用,论文就该蛋白的结构和功能进行了综述。 展开更多
关键词 PRRSV 2b蛋白 离子通道
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变色酸2B线性扫描伏安法测定血清白蛋白 被引量:3
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作者 孙伟 韩军英 +1 位作者 焦奎 陆路德 《分析试验室》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期59-62,共4页
用线性扫描伏安法研究了在pH3.0的Britton Robinson(B R)缓冲溶液中变色酸2B与蛋白质反应前后的电化学变化。在酸性溶液中变色酸2B在-0 48V(vs.SCE)处有一个灵敏的伏安还原峰,当在溶液中加入人血清白蛋白后能够发生相互作用形成生物超... 用线性扫描伏安法研究了在pH3.0的Britton Robinson(B R)缓冲溶液中变色酸2B与蛋白质反应前后的电化学变化。在酸性溶液中变色酸2B在-0 48V(vs.SCE)处有一个灵敏的伏安还原峰,当在溶液中加入人血清白蛋白后能够发生相互作用形成生物超分子复合物,使变色酸2B的伏安还原峰峰电流下降而峰电位基本保持不变。优化了结合反应条件和电化学测定条件,考察了常见干扰物质对测定的影响。在最佳条件下,峰电流的下降值同人血清白蛋白(HSA)的浓度在2.0~25.0mg L范围内呈良好的线性关系,线性回归方程为Δip″(nA)=50.56ρ(mg L)-6.72,相关系数r为0.995,检出限为1.84mg L。将该方法应用于实际人血清样品的测定,结果与经典的考马斯亮蓝G 250光度法一致,回收率令人满意。 展开更多
关键词 白蛋白 变色酸2b 线性扫描伏安法
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登革病毒2型非结构蛋白NS2B的原核表达、纯化及其抗体的制备 被引量:1
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作者 刘丽梅 陈宗涛 +5 位作者 田衍平 陈炜 江雯 徐小峰 高娜 安静 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期135-138,共4页
目的原核表达登革病毒(Dengue Virus,DV)NS2B蛋白并纯化,制备NS2B的小鼠多克隆抗体。方法RT-PCR扩增DV2全长的NS2B基因序列,构建表达带有6×His标签的NS2B的原核表达载体,进行表达与纯化,免疫Balb/c小鼠,制备NS2B多克隆抗体。采用EL... 目的原核表达登革病毒(Dengue Virus,DV)NS2B蛋白并纯化,制备NS2B的小鼠多克隆抗体。方法RT-PCR扩增DV2全长的NS2B基因序列,构建表达带有6×His标签的NS2B的原核表达载体,进行表达与纯化,免疫Balb/c小鼠,制备NS2B多克隆抗体。采用ELISA检测抗体效价,Western-blot及免疫荧光染色检测其特异性。结果成功构建原核表达载体pQE-31/NS2B,进一步获得相对分子质量为16000的纯化蛋白及多克隆抗体,ELISA显示抗体效价达1∶25600。Western-blot和免疫荧光染色显示多克隆抗体与NS2B蛋白特异性结合。结论本研究获得了纯化的DV2NS2B蛋白,成功地制备了NS2B多克隆抗体,为进一步研究NS2B的作用机制奠定了基础。 展开更多
关键词 登革病毒 Nonstructural protein 2b(NS2b) 原核表达载体 纯化蛋白 多克隆抗体
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布鲁氏菌Omp2b蛋白抗原表位的生物信息学分析 被引量:3
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作者 李大伟 张峰波 +5 位作者 李智伟 江晓明 沙桐 赵骁 陈志强 丁剑冰 《山东医药》 CAS 2020年第34期6-10,共5页
目的利用生物信息学软件分析布鲁氏菌外膜蛋白2b(Omp2b)蛋白的抗原表位。方法从NCBI数据库中获取羊布鲁氏菌Omp2b蛋白的氨基酸序列。通过ProtParam软件分析Omp2b蛋白的理化性质;利用SOMPA在线软件分析Omp2b蛋白的二级结构;使用SWISS-MO... 目的利用生物信息学软件分析布鲁氏菌外膜蛋白2b(Omp2b)蛋白的抗原表位。方法从NCBI数据库中获取羊布鲁氏菌Omp2b蛋白的氨基酸序列。通过ProtParam软件分析Omp2b蛋白的理化性质;利用SOMPA在线软件分析Omp2b蛋白的二级结构;使用SWISS-MODEL在线分析和构建Omp2b蛋白的三级结构,并使用RasMol2.7.2.1软件分析。利用IEDB、DNAStar软件预测Omp2b蛋白的B细胞抗原表位;利用SYFPEITHI、IEDB软件预测Omp2b蛋白的T细胞抗原表位。结果对Omp2b蛋白的一级结构分析发现,Omp2b蛋白是一种稳定亲水性蛋白质;在Omp2b蛋白的二级结构中,无规卷曲和β转角构成较多;Omp2b蛋白的三级结构是环状的,非常稳定,其表位主要位于三级结构的上部和下部。经DNAStar、IEDB软件预测,Omp2b蛋白具有8个B细胞抗原表位,其位点分别位于66~85、115~131、169~176、184~188、196~212、268~286、306~316、328~352。经SYFPEITHI、IEDB在线软件预测,Omp2b蛋白具有7个CTL优势表位,其位点分别位于76~84、102~110、231~239、241~249、290~298、329~337、335~343;Omp2b蛋白具有3个Th优势表位,其位点分别位于133~147、178~192、202~216。结论布鲁氏菌Omp2b蛋白具有7个CTL优势表位、3个Th优势表位和8个B细胞抗原表位,具有良好的免疫原性。这为布鲁氏菌病诊断和疫苗研发提供了一定理论依据。 展开更多
关键词 布鲁氏菌 外膜蛋白2b 生物信息学 T细胞表位 B细胞表位
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JMJD2B对人皮肤鳞状细胞癌A431细胞株生物学行为的影响 被引量:1
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作者 王月 余南岚 +5 位作者 翟志芳 钟白玉 熊亚 张恋 冯林 杨希川 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第7期697-701,共5页
目的探讨组蛋白去甲基化酶JMJD2B(Jumonji domain-containing protein 2B)小干扰RNA(siRNA)对人皮肤鳞状细胞癌A431细胞株生物学行为的影响。方法采用免疫组化和细胞免疫荧光的方法检测JMJD2B在人皮肤鳞状细胞癌组织和A431细胞中的表达... 目的探讨组蛋白去甲基化酶JMJD2B(Jumonji domain-containing protein 2B)小干扰RNA(siRNA)对人皮肤鳞状细胞癌A431细胞株生物学行为的影响。方法采用免疫组化和细胞免疫荧光的方法检测JMJD2B在人皮肤鳞状细胞癌组织和A431细胞中的表达,转染JMJD2B siRNA至A431细胞株,分别采用CCK-8、克隆形成实验、流式细胞仪、Transwell法检测细胞增殖、克隆、周期分布、凋亡、迁移及侵袭情况。结果 JMJD2B在肿瘤组织中的表达高于正常皮肤。与未转染组和转染对照组比较,JMJD2B siRNA转染组增殖、克隆、迁移及侵袭能力显著受抑,肿瘤细胞发生G1期阻滞,细胞凋亡比例增加(P<0.05)。结论 JMJD2B在人皮肤鳞状细胞癌中呈高表达,JMJD2B siRNA能促进A431细胞的凋亡,同时也抑制了肿瘤细胞的增殖、克隆、迁移以及侵袭的能力。 展开更多
关键词 JMJD2b 鳞状细胞癌 细胞增殖 细胞凋亡
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猕猴体内白蛋白融合干扰素α-2b(HSA-IFNα-2b)的药代动力学研究 被引量:4
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作者 邢文会 杨萍 +1 位作者 汪海霞 杨健良 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第9期1156-1160,共5页
目的研究白蛋白融合干扰素α-2b(HSA-IFNα-2b)在猕猴体内的药代动力学。方法按照50μg.kg-1iv、50μg.kg-1sc和300μg.kg-1sc3种剂量组给猕猴注射HSA-IFNα-2b,分别在14个时间点采血,用ELISA方法测定血药浓度,计算药代动力学参数。结果... 目的研究白蛋白融合干扰素α-2b(HSA-IFNα-2b)在猕猴体内的药代动力学。方法按照50μg.kg-1iv、50μg.kg-1sc和300μg.kg-1sc3种剂量组给猕猴注射HSA-IFNα-2b,分别在14个时间点采血,用ELISA方法测定血药浓度,计算药代动力学参数。结果3组受试猕猴均能在336h以前的各时间点测到HSA-IFNα-2b药物。一房室模型(weight=1/C2)分析药物浓度-时间曲线显示:50μg.kg-1iv、50μg.kg-1sc和300μg.kg-1sc3个剂量组的分布容积分别为67、71和63ml.kg-1。HSA-IFNα-2b皮下注射吸收相对缓慢,单剂量50μg.kg-1sc的吸收半衰期约为19h,消除半衰期为53h,清除率为0.92ml.h-1.kg-1,生物利用度达73%。结论HSA-IFNα-2b猕猴体内研究表明其药代动力学优于非融合干扰素,提示使用HSA-IFNα-2b可以减少用药次数,并有可能提高疗效。 展开更多
关键词 白蛋白融合干扰素α-2b(HSA-IFNα-2b) 药代动力学 ELISA 猕猴
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变色酸2B光度法测定血清蛋白质的研究 被引量:3
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作者 张永花 胡秋娈 《洛阳师范学院学报》 2005年第2期55-58,共4页
在pH1.62的Clark-Lubs(C-L)缓冲介质中,变色酸2B能与血清蛋白质形成有色复合物,其λmax为579nm,比试剂本身红移约65nm,表观摩尔吸光系数为2.09×105L·mol-1·cm-1(HSA),线性范围为0-100mg·L-1.研究了该反应体系的影... 在pH1.62的Clark-Lubs(C-L)缓冲介质中,变色酸2B能与血清蛋白质形成有色复合物,其λmax为579nm,比试剂本身红移约65nm,表观摩尔吸光系数为2.09×105L·mol-1·cm-1(HSA),线性范围为0-100mg·L-1.研究了该反应体系的影响因素,确定了最佳反应条件,应用于人血清样品总蛋白的测定,结果与经典的考马斯亮蓝G-250法一致,而且线性范围宽,基本无干扰,操作与重现性都优于考马斯亮蓝法. 展开更多
关键词 光度法 蛋白质 变色酸2b
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口蹄疫病毒2B基因绿色荧光蛋白融合表达质粒的构建及表达 被引量:1
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作者 崔丽瑾 王兴龙 +6 位作者 梅英武 任林柱 闫广谋 张辉 郎需龙 段小宇 路浩 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2008年第9期756-758,共3页
目的构建口蹄疫病毒(FMDV)2B基因绿色荧光蛋白(GFP)融合表达质粒,并在BHK-21细胞中表达。方法RT-PCR扩增O型口蹄疫病毒WFL株的2B基因,克隆入表达载体pEGFP-C1,并进行双酶切、PCR及测序鉴定。将阳性重组质粒转染BHK-21细胞,检测绿色荧光... 目的构建口蹄疫病毒(FMDV)2B基因绿色荧光蛋白(GFP)融合表达质粒,并在BHK-21细胞中表达。方法RT-PCR扩增O型口蹄疫病毒WFL株的2B基因,克隆入表达载体pEGFP-C1,并进行双酶切、PCR及测序鉴定。将阳性重组质粒转染BHK-21细胞,检测绿色荧光蛋白的表达和2B基因转录水平。结果经双酶切及PCR鉴定,目的基因片段大小与预期相符,测序结果与WFL株相应序列一致。荧光显微镜和流式细胞仪均检测到细胞内绿色荧光蛋白的表达,荧光定量PCR检测到细胞内有2B基因的转录。结论已成功构建了FMDV2B基因GFP融合表达质粒,并在BHK-21细胞中获得了表达。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 2b基因 绿色荧光蛋白 融合表达
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HIV-1gp120通过影响NR2B、PSD-95表达损伤神经元 被引量:2
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作者 熊文碧 谢金燕 +1 位作者 刘嘉诺 熊焕贵 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期139-142,共4页
目的研究HIV-1病毒的表面包膜糖蛋白gp120对大鼠皮质神经元的毒性机制。方法实验用SD胎鼠来源的原代培养的皮层神经元,用免疫细胞化学染色和Western blot法检测gp120对含2B亚基的NMDA受体(NR2B)和突触后致密蛋白95(PSD-95)表达的影响,用... 目的研究HIV-1病毒的表面包膜糖蛋白gp120对大鼠皮质神经元的毒性机制。方法实验用SD胎鼠来源的原代培养的皮层神经元,用免疫细胞化学染色和Western blot法检测gp120对含2B亚基的NMDA受体(NR2B)和突触后致密蛋白95(PSD-95)表达的影响,用MTT法检测gp120对神经元的毒性。结果 gp120对神经元有剂量依赖性的毒性作用,其毒性能被NR2B特异拮抗剂美金刚阻断。gp120能明显增加大鼠皮层神经元总NR2B的表达,而降低PSD-95的表达量。结论 gp120可通过使神经元NR2B表达增加及PSD-95的表达减少来损伤神经元,NR2B特异受体拮抗剂能阻止gp120诱导的神经元损伤。 展开更多
关键词 GP120 皮层神经元 NR2b 突触后致密蛋白95 HIV相关的神经退行性疾病
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SH2B1沉默对乳腺癌细胞增殖和凋亡及PI3K/Akt通路的影响 被引量:3
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作者 来旭 王瑞丰 余东昌 《中国现代普通外科进展》 CAS 2019年第5期354-358,364,共6页
目的:探讨RNA干扰技术(RNAi)沉默Src同源性2B衔接蛋白1(SH2B1)对乳腺癌细胞增殖、凋亡及磷脂酰肌醇-3激酶/丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶(PI3K/Akt)信号通路的影响。方法:体外培养人正常乳腺上皮细胞MCF-10a与乳腺癌细胞MCF-7,采用实时荧光定量... 目的:探讨RNA干扰技术(RNAi)沉默Src同源性2B衔接蛋白1(SH2B1)对乳腺癌细胞增殖、凋亡及磷脂酰肌醇-3激酶/丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶(PI3K/Akt)信号通路的影响。方法:体外培养人正常乳腺上皮细胞MCF-10a与乳腺癌细胞MCF-7,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)与蛋白免疫印迹(WB)法检测细胞中SH2B1mRNA及蛋白表达水平。采用RNAi技术将SH2B1阴性对照质粒、si-SH2B1分别转染至MCF-7细胞,分别命名为si-NC组、si-SH2B1组,未经处理的MCF-7细胞命名为空白对照组。采用RT-PCR法检测各组MCF-7细胞中SH2B1、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关蛋白X(Bax)、天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)mRNA表达水平;CCK8法检测细胞增殖情况;流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞周期情况;Westernblot法检测Bcl-2、Bax、Caspase-3、PI3K及其磷酸化蛋白(p-PI3K)、Akt及其磷酸化蛋白(p-Akt)等蛋白表达情况。结果:与MCF-10a细胞相比,MCF-7细胞中SH2B1mRNA及蛋白表达均显著升高(P<0.05);与空白对照组、si-NC组相比,si-SH2B1组SH2B1mRNA及蛋白表达、S期与G2/M期DNA量、Bcl-2mRNA及蛋白表达均显著降低(P<0.05);MCF-7细胞增殖抑制率、细胞凋亡率、G0/G1期DNA量、Bax、Caspase-3mRNA及蛋白表达均显著升高(P<0.05);WB法显示,si-SH2B1组MCF-7细胞中p-PI3K、p-Akt蛋白表达均显著低于空白对照组、si-NC组(P<0.05)。结论:SH2B1沉默可抑制乳腺癌细胞增殖,诱导细胞周期阻滞及细胞凋亡,其作用机制可能与下调PI3K/Akt信号通路有关。 展开更多
关键词 Src同源性2b衔接蛋白1 乳腺癌 细胞增殖 细胞凋亡 PI3K/AKT
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猪繁殖与呼吸综合征病毒2b基因的克隆和原核表达
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作者 何斌 李勇 +10 位作者 赵建增 高英杰 夏志平 王泽岩 刘雯 张宁 屈雪琪 白雪 梅林 马德慧 张社民 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2011年第12期67-70,共4页
根据GenBank中猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)美洲株2b基因序列,设计合成了1对特异性引物,经RT-PCR从PRRSV中扩增出222bp的片段,并克隆至pMD18-T,连接到pGEX-4T-1表达载体,将阳性重组质粒pGEX-4T-2b转化到BL21(DE3),对诱导后的表达产物... 根据GenBank中猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)美洲株2b基因序列,设计合成了1对特异性引物,经RT-PCR从PRRSV中扩增出222bp的片段,并克隆至pMD18-T,连接到pGEX-4T-1表达载体,将阳性重组质粒pGEX-4T-2b转化到BL21(DE3),对诱导后的表达产物进行SDS-PAGE电泳和Western blotting分析,所得重组蛋白的分子质量大小为35ku,与预期结果相同,且具有良好的免疫学活性。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 2b蛋白 克隆 表达
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出血性大肠杆菌O157 Eae-Stx1/2B融合蛋白的免疫学特性
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作者 陈萍 冯书章 +3 位作者 孙洋 郭学军 周博 尹铁勇 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期838-841,共4页
为了研究重构融合蛋白Eae-Stx1/2B免疫特性及对出血性大肠杆菌感染的免疫保护作用,进行了细胞粘附抑制试验和免疫保护试验。结果证明Eae-Stx1/2B融合蛋白免疫血清在体外能降低出血性大肠杆菌对HEp-2细胞的粘附作用,这一特性在出血性大... 为了研究重构融合蛋白Eae-Stx1/2B免疫特性及对出血性大肠杆菌感染的免疫保护作用,进行了细胞粘附抑制试验和免疫保护试验。结果证明Eae-Stx1/2B融合蛋白免疫血清在体外能降低出血性大肠杆菌对HEp-2细胞的粘附作用,这一特性在出血性大肠杆菌疫苗设计中具有重要价值。以纯化的融合蛋白Eae-Stx1/2B为抗原对小鼠进行腹腔注射免疫和滴鼻免疫,ELISA检测结果显示,2次免疫后7 d,免疫组抗Eae-Stx1/2B融合蛋白和抗出血性大肠杆菌O157血清IgG抗体显著高于未免疫组;用出血性大肠杆菌O157强毒株EDL933攻击免疫小鼠,免疫组小鼠排菌时间显著缩短,免疫组小鼠存活率均高于未免疫组,免疫组小鼠体质量恢复增长较快。上述试验结果表明,Eae-Stx1/2B融合蛋白对出血性大肠杆菌感染有保护作用。 展开更多
关键词 出血性大肠杆菌 Eae—Stx1/2b融合蛋白 免疫学特性
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重组人白蛋白干扰素α-2b融合蛋白的抗HBV机制 被引量:4
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作者 徐丙发 范鲁雁 +2 位作者 范清林 魏伟 宋礼华 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期274-275,共2页
关键词 rHSA—IFNα-2b 乙肝病毒 STAT1 ISGF3 2'-5’-OAS
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血管性痴呆大鼠海马N-甲基-D-天冬氨酸-2B亚基受体水平和钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ活性以及美金刚干预作用的研究 被引量:1
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作者 何雨 赵珩 张昱 《临床神经病学杂志》 CAS 北大核心 2009年第4期285-288,共4页
目的研究血管性痴呆(VD)大鼠海马N-甲基-D-天冬氨酸-2B亚基受体(NR2B)水平和钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)活性的变化以及美金刚的干预作用。方法采用结扎双侧颈总动脉方法制备VD大鼠模型,随机分为VD模型组(VD组)和美金刚治疗组... 目的研究血管性痴呆(VD)大鼠海马N-甲基-D-天冬氨酸-2B亚基受体(NR2B)水平和钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)活性的变化以及美金刚的干预作用。方法采用结扎双侧颈总动脉方法制备VD大鼠模型,随机分为VD模型组(VD组)和美金刚治疗组(美金刚组)。于术后4周、8周、12周、16周用Morris水迷宫试验检测VD组和美金刚组大鼠的学习记忆水平,用RT-PCR法检测大鼠海马NR2B水平,用32P掺入法检测大鼠海马CaMKⅡ的活性;并与假手术组比较。结果与假手术组比较,VD组大鼠术后各时间点的学习记忆能力均显著下降(均P<0.01);海马NR2B的水平术后4周时明显增高(P<0.05),术后8~16周显著降低(均P<0.01);海马总CaMKⅡ活性术后4周时明显增高(P<0.01),术后8周下降,术后12周、16周明显降低(均P<0.01)。美金刚组术后4周时上述3项检测结果与VD组比较,差异均有统计学意义(均P<0.01),而与假手术组比较,差异均无统计学意义;在其他时间点,与假手术组比较,差异有统计学意义(P<0.05~0.01);学习记忆水平和NR2B水平术后8周、12周明显高于VD组(P<0.01~0.05);总CaMKⅡ活性与VD组比较,差异无统计学意义。结论VD大鼠海马NR2B水平和总CaMKⅡ活性降低;美金刚能上调海马NR2B表达及改善VD大鼠的认知功能,但对CaMKⅡ活性的影响有限。 展开更多
关键词 血管性痴呆 N-甲基-D-天冬氨酸-2b亚基受体 钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ 美金刚
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