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年轻与衰老2BS细胞中差异表达基因片段的筛选及特征分析 被引量:3
1
作者 杨东丽 刘新文 +1 位作者 童坦君 张宗玉 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期456-460,共5页
为探索人衰老机制 ,采用差异显示法分别从年轻和衰老 2BS细胞中筛选出特异的cDNA片段 .衰老相关细胞cDNA片段长 2 86bp ,命名为orc ,GenBank登录号为AI35 30 6 5 ;年轻相关的cDNA片段长 2 35bp ,命名为yrc ,GenBank登录号为AI35 30 6 4.... 为探索人衰老机制 ,采用差异显示法分别从年轻和衰老 2BS细胞中筛选出特异的cDNA片段 .衰老相关细胞cDNA片段长 2 86bp ,命名为orc ,GenBank登录号为AI35 30 6 5 ;年轻相关的cDNA片段长 2 35bp ,命名为yrc ,GenBank登录号为AI35 30 6 4.Southernblot分析表明 ,yrc在衰老和年轻2BS细胞、BGC 82 3细胞中的BamHⅠ酶切图谱均出现约 3 0kb杂交带 .Northern印迹分析显示 ,yrc在年轻和衰老 2BS细胞中均有 1 0kb和 0 5kb杂交带 ,其中 1 0kb带在两种细胞间差异不大 ,而0 5kb带则在年轻细胞中明显高于衰老细胞 .在胎儿心、肺、肝中也可见 0 5kb和 1 0kb两条杂交带 ;而在胎盘及胎儿肌肉、肾、脑、皮肤中 ,则只可见 0 5kb杂交带 ,无 1 0kb带 .orc基因转录本长约 2 0kb ,在衰老 2BS细胞中的表达高于年轻细胞 .结果表明 ,orc和yrc分别与细胞衰老和年轻相关 ,yrc 0 展开更多
关键词 衰老2bs细胞 差异表达基因片段 筛选 特征分析 年轻细胞
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慢性纤维空洞型肺结核病人血清促2BS细胞增生的研究
2
作者 马忠森 赫国志 +2 位作者 孙立群 成玉华 朱平 《白求恩医科大学学报》 CSCD 1995年第5期517-518,共2页
实验采用一组慢性纤维空洞型肺结核(简称慢纤洞肺结核)病人血清,观察了其对2BS细胞促增生的影响。结果证明,加病人血清2BS细胞培养组的cpm值明显高于对照组,而且随着血清浓度的升高,cpm值亦增高,增殖量从1.74到... 实验采用一组慢性纤维空洞型肺结核(简称慢纤洞肺结核)病人血清,观察了其对2BS细胞促增生的影响。结果证明,加病人血清2BS细胞培养组的cpm值明显高于对照组,而且随着血清浓度的升高,cpm值亦增高,增殖量从1.74到9.99倍。提示了慢纤洞肺结核病人血清中含有多种细胞因子,或以纤维化的形式痊愈,或以纤维化导致气体交换面积减少,最后导致呼吸功能衰竭。 展开更多
关键词 慢性纤维空洞型 肺结核 2bs细胞 细胞因子
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低剂量照射诱导A549和2BS细胞适应性反应的研究 被引量:7
3
作者 张占春 贾廷珍 朱应葆 《中华放射医学与防护杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期107-110,共4页
目的 观察A5 49细胞 (肺癌细胞 )和 2BS细胞 (人胚胎肺成纤维细胞 )低剂量照射后能否诱导适应性反应 ,探讨肿瘤细胞与正常细胞在诱导适应性反应方面存在的差异 ,并结合细胞周期变化 ,进一步阐明适应性反应形成机理。方法  1 应用克隆... 目的 观察A5 49细胞 (肺癌细胞 )和 2BS细胞 (人胚胎肺成纤维细胞 )低剂量照射后能否诱导适应性反应 ,探讨肿瘤细胞与正常细胞在诱导适应性反应方面存在的差异 ,并结合细胞周期变化 ,进一步阐明适应性反应形成机理。方法  1 应用克隆形成法和苔盼蓝细胞染色计数法 ,分别绘制了A5 49细胞和 2BS细胞的剂量 存活曲线。 2 应用流式细胞技术 ,对不同剂量照射后A5 49和2BS细胞周期进行了分析。结果  1.2BS细胞经低剂量照射诱导出适应性反应 (预先给予低剂量照射组的剂量 存活曲线与未预照射组比较 ,P <0 .0 1)。A5 49细胞经低剂量照射未诱导出适应性反应(P >0 0 5 )。2 .2BS细胞经低剂量加高剂量照射组于照后 30min即出现明显的G2 期阻滞 ,且细胞周期于 2 4h内恢复。结论 低剂量照射A5 49细胞未诱导出适应性反应 ,而 2BS细胞可诱导出适应性反应 。 展开更多
关键词 低剂量照射 适应性反应 细胞周期 A549 2bs细胞 辐射损伤 肿瘤
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枸杞子、淫羊藿对衰老-年轻2BS融合细胞DNA合成的影响 被引量:5
4
作者 吴白燕 邹俊华 +1 位作者 孟书聪 郑振 《中国中西医结合杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第12期926-928,共3页
目的 :研究枸杞子、淫羊藿水提液对衰老 -年轻 2BS融合细胞DNA合成的影响。方法 :以人胚肺二倍体成纤维细胞国内标准株 2BS为衰老模型 ,用细胞脱核和细胞融合技术 ,观察枸杞子、淫羊藿对衰老-年轻 2BS融合细胞的DNA合成的影响。结果 :2B... 目的 :研究枸杞子、淫羊藿水提液对衰老 -年轻 2BS融合细胞DNA合成的影响。方法 :以人胚肺二倍体成纤维细胞国内标准株 2BS为衰老模型 ,用细胞脱核和细胞融合技术 ,观察枸杞子、淫羊藿对衰老-年轻 2BS融合细胞的DNA合成的影响。结果 :2BS细胞分别在含 0 0 2 5 (V/V)枸杞子、淫羊藿水提液的DMEM培养液中 ,可连续培养至 6 1 0± 2 9、5 6 0± 2 6代 ,对照组为 4 9 0± 2 6代 (P <0 0 1) ;衰老的 2BS细胞分别用枸杞子、淫羊藿水提液处理 2h后 ,进行细胞脱核并与年轻 2BS细胞融合 ,其〔3H〕TdR掺入百分率明显高于对照组 (P <0 0 1)。结论 :枸杞子、淫羊藿均能促进衰老 -年轻 2BS融合细胞的DNA的合成速率 ,延长 2BS细胞寿命。 展开更多
关键词 枸杞子 淫羊藿 融合细胞 DNA合成 细胞衰老 衰老-年轻2bs融合细胞 人胚肺二倍体成纤维细胞 实验
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两种方法制备的水痘-带状疱疹病毒(Oka株)毒种感染2BS细胞的敏感性 被引量:5
5
作者 梁慧颖 隋波 +5 位作者 赫宝双 梁雪 李生军 张宇 杨晓叶 沈红杰 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2014年第11期1459-1462,共4页
目的用现有方法及新方法分别制备水痘-带状疱疹病毒(varicella-zoster virus,VZV)(Oka株)毒种,比较两种方法制备的毒种对2BS细胞的感染复数及増殖动态差异。方法用现有方法(用含2%小牛血清的病毒维持液于-70℃条件下冻存Oka株毒种... 目的用现有方法及新方法分别制备水痘-带状疱疹病毒(varicella-zoster virus,VZV)(Oka株)毒种,比较两种方法制备的毒种对2BS细胞的感染复数及増殖动态差异。方法用现有方法(用含2%小牛血清的病毒维持液于-70℃条件下冻存Oka株毒种)和新方法(用含90%小牛血清的病毒冻存液于-196℃条件下冻存Oka株毒种)制备第47代Oka株VZV毒种,采用不同的MOI(0.000 5、0.001、0.005、0.01、0.05、0.1)感染第37代2BS细胞,观察细胞病变(CPE)情况,收获不同MOI接种和培养不同时间点病毒制备疫苗,采用噬斑法检测疫苗原液、成品滴度以及37℃稳定性,确定两种方法制备的毒种对2BS细胞感染的最适MOI。结果现有方法制备毒种以0.01~0.1 MOI感染2BS细胞72 h后,病变达到高峰期;新方法制备毒种以0.001~0.01 MOI感染2BS细胞72 h后,病变达到高峰期。两种方法收获的病毒液制备的成品疫苗的病毒滴度为4.4~4.6 lg PFU/ml,37℃放置1周,病毒滴度3.8~4.0 lg PFU/ml;疫苗原液、成品滴度以及37℃稳定性无差异,均达到本公司水痘减毒活疫苗制造与检定规程制定的相关标准。结论现有方法和新方法制备的毒种最适MOI分别为0.01~0.1和0.001~0.01,新方法制备的毒种更适合水痘疫苗的生产。 展开更多
关键词 水痘-带状疱疹病毒 2bs细胞 感染复数 病毒滴度
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带状疱疹疫苗生产中2BS细胞细胞工厂培养工艺的建立 被引量:4
6
作者 梁雪 刘延威 +4 位作者 张宇 石磊 杨晓叶 李生军 沈红杰 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2014年第11期1485-1487,1492,共4页
目的建立带状疱疹疫苗生产中2BS细胞在细胞工厂中的培养工艺。方法将2BS细胞复苏(28代)后,连续传代至35、36代,再分别按1∶4、1∶2比例传至10层细胞工厂中,采用不同的加液量(200、300、400 ml/层)进行培养,显微镜下观察细胞形态,并进行... 目的建立带状疱疹疫苗生产中2BS细胞在细胞工厂中的培养工艺。方法将2BS细胞复苏(28代)后,连续传代至35、36代,再分别按1∶4、1∶2比例传至10层细胞工厂中,采用不同的加液量(200、300、400 ml/层)进行培养,显微镜下观察细胞形态,并进行细胞计数。取细胞工厂,按MOI 0.008接种水痘-带状疱疹病毒,制备成带状疱疹减毒活疫苗,检测疫苗原液及成品的滴度;疫苗成品进行37℃稳定性试验;采用酶联免疫法检测抗生素残留量和牛血清白蛋白残留量;凝胶法检测内毒素含量;水分容量滴定法检测水分含量。结果 2BS细胞按1∶2比例传代,细胞工厂单层加液量为300 ml,可制备单层致密、优质的细胞,细胞工厂收获时细胞病变达80%以上,且病变细胞圆润、典型、广泛,细胞形态保持较好;传代比例为1∶4的细胞制备的疫苗原液及成品的滴度明显低于传代比例为1∶2的细胞制备的疫苗,且1∶4传代的细胞制备的疫苗成品37℃稳定性滴度不符合带状疱疹疫苗放置1周病毒滴度不小于4.6 lg PFU/ml的质量标准;其他各项质量指标均符合要求。结论建立了带状疱疹疫苗生产中2BS细胞在细胞工厂中的培养工艺,利用细胞工厂可制备出质量均一、致密优质的2BS细胞。 展开更多
关键词 带状疱疹疫苗 2bs细胞 细胞工厂
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森林脑炎病毒2BS细胞适应株全基因序列分析
7
作者 王颖 王斌 +4 位作者 陈娜娜 魏辉 徐艳玲 李景良 邹勇 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期539-543,共5页
目的分析“森张”株森林脑炎病毒(tick-borne encephalitis virus,TBEV)适应2BS细胞传代后的全基因序列。方法将“森张”株TBEV感染2BS细胞,经蚀斑克隆纯化,并连续传代培养。提取适应2BS细胞培养后的TBEV RNA,反转录为cDNA,以其为模板进... 目的分析“森张”株森林脑炎病毒(tick-borne encephalitis virus,TBEV)适应2BS细胞传代后的全基因序列。方法将“森张”株TBEV感染2BS细胞,经蚀斑克隆纯化,并连续传代培养。提取适应2BS细胞培养后的TBEV RNA,反转录为cDNA,以其为模板进行PCR扩增,扩增产物进行测序鉴定,并应用DNAMAN和MEGA软件对所获得序列进行分析。结果获得2BS细胞适应株TBEV全基因序列,共10782个碱基,编码3414个氨基酸;与鼠脑适应株TBEV全基因序列比对,2BS细胞适应株TBEV的5'和3'端非编码区(UTR)分别有1个碱基突变;结构蛋白区域有5个碱基突变,导致3个氨基酸变异;非结构蛋白区域有31个碱基突变,导致9个氨基酸变异。与主代鼠脑适应株核苷酸序列同源性为99.63%,氨基酸同源性为99.56%。结论“森张”株TBEV适应2BS细胞传代后,在分子水平方面证明相对于鼠脑适应株TBEV基因稳定,为2BS细胞森林脑炎疫苗的研发奠定了基础。 展开更多
关键词 森林脑炎病毒 2bs细胞 全基因 序列分析
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比较胰酶/EDTA两种消化液对携带水痘-带疱疹病毒的2BS消化效果分析 被引量:5
8
作者 郝鹏博 谢秋红 +1 位作者 杜岩 杨蕾蕾 《中国实用医药》 2011年第21期60-61,共2页
目的比较胰酶和EDTA两种消化液消化感染水痘-带状疱疹病毒的2BS细胞冻融后的病毒滴度(VT)。方法分别配制两种浓度的胰酶和EDTA:0.125%、0.25%的胰酶,0.01%、0.02%的EDTA各1000ml,按比例加入预先培养好的携带水痘-带疱疹病毒的等量2BS细... 目的比较胰酶和EDTA两种消化液消化感染水痘-带状疱疹病毒的2BS细胞冻融后的病毒滴度(VT)。方法分别配制两种浓度的胰酶和EDTA:0.125%、0.25%的胰酶,0.01%、0.02%的EDTA各1000ml,按比例加入预先培养好的携带水痘-带疱疹病毒的等量2BS细胞中,消化后,用显微镜观察细胞形态,消化液离心、浓缩、冻融、检测并比较病毒滴度。结果与0.125%、0.25%的胰酶、0.01%EDTA,0.25%的胰酶与0.02%的EDTA混合消化液相比,用0.02%的EDTA消化液消化感染水痘-带状疱疹病毒的2BS细胞,冻融后的病毒滴度提高了1.3~0.8个log值。结论用0.2%EDTA消化液消化的含有水痘病毒的细胞获得的病毒滴度最好。 展开更多
关键词 胰酶 EDTA 2bs细胞 病毒滴度
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中药山桔颗粒抑制人巨细胞病毒感染的体外实验研究 被引量:2
9
作者 王素霞 杨丽珍 +1 位作者 陈惠铮 王秀霞 《中医药学报》 CAS 2005年第6期20-21,共2页
本研究借助体外细胞培养技术观察不同浓度的山桔颗粒药物在2BS细胞培养内对人巨细胞病毒(HCMV)的抑制作用,实验采用细胞病变效应(CPE)法,计算山桔颗粒药物的半数有效浓度(IC50)和最小有效浓度(MIC)及治疗指数(TI),半数中毒浓度(TD50)和... 本研究借助体外细胞培养技术观察不同浓度的山桔颗粒药物在2BS细胞培养内对人巨细胞病毒(HCMV)的抑制作用,实验采用细胞病变效应(CPE)法,计算山桔颗粒药物的半数有效浓度(IC50)和最小有效浓度(MIC)及治疗指数(TI),半数中毒浓度(TD50)和最大无毒浓度(TD0),结果表明山桔颗粒在体外能够有效地抑制HCMV导致的细胞病变,具有抗HCMV作用。 展开更多
关键词 2bs细胞 山桔颗粒 人巨细胞病毒(HCMV) 体外实验
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低剂量照射对细胞周期和修复基因表达的影响 被引量:2
10
作者 张占春 贾廷珍 朱应葆 《实用肿瘤学杂志》 CAS 2005年第2期81-84,共4页
目的观察低剂量照射对A549(肺癌细胞)和2BS细胞(人胚胎肺成纤维细胞)细胞周期及修复基因表达的影响。探讨肿瘤细胞与正常细胞在诱导修复基因表达方面的差异,并结合细胞周期变化,进一步阐明适应性反应形成机制。方法(1)应用流式细胞技术... 目的观察低剂量照射对A549(肺癌细胞)和2BS细胞(人胚胎肺成纤维细胞)细胞周期及修复基因表达的影响。探讨肿瘤细胞与正常细胞在诱导修复基因表达方面的差异,并结合细胞周期变化,进一步阐明适应性反应形成机制。方法(1)应用流式细胞技术,对不同剂量照射后A549和2BS细胞周期进行分析;(2)应用Northem-blot检测不同照射剂量DNA修复基因hR24L、hRAD6和hRAD52转录水平的变化。结果(1)2BS细胞经75mGyX线照射组,及低剂量加高剂量照射组于照后30分钟即出现明显的G2期阻滞,且细胞周期于24小时内恢复。A549细胞在75mGyX线照射后,细胞周期未发生变化;(2)2BS细胞在75mGyX照射下,b.R24L、hRAD6表达增强,hRAD52无变化。A549细胞低剂量照射修复基因表达未见显著变化。结论低剂量照射后2BS细胞与A549细胞周期改变存在差异,且细胞周期的调控与DNA修复基因的表达有着密切的关系。 展开更多
关键词 低剂量照射 细胞周期 基因表达 DNA修复基因 Northern A549细胞 2bs细胞 75mGy 肺成纤维细胞 流式细胞技术 BLOT检测 X线照射 适应性反应 G2期阻滞 高剂量照射 肺癌细胞 正常细胞 肿瘤细胞 周期变化 形成机制 不同剂量
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衰老细胞中调控胰岛素样生长因子结合蛋白-3的表达
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作者 任文君 王群义 +2 位作者 吕小凤 毛泽斌 蒋晓刚 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期215-218,共4页
目的:研究在衰老细胞中调控胰岛素样生长因子结合蛋白-3(IGFBP-3)表达增加的影响因素。方法:用Northernblot的方法显示IGFBP-3基因的表达在年轻和衰老的2BS细胞中存在差异;PCR扩增出人类IGFBP-3上游包括5′-UTR区的2kb的序列并用酶切得... 目的:研究在衰老细胞中调控胰岛素样生长因子结合蛋白-3(IGFBP-3)表达增加的影响因素。方法:用Northernblot的方法显示IGFBP-3基因的表达在年轻和衰老的2BS细胞中存在差异;PCR扩增出人类IGFBP-3上游包括5′-UTR区的2kb的序列并用酶切得到4组不同长短的IGFBP-3启动子片段;将各片段用Effectene Transfection Reagent试剂盒转染到年轻和衰老细胞中,测出几组构建基因片段的启动活性,确定可调控转录活性的区域;通过重叠寡核苷酸凝胶阻滞实验确定在该活性区域中的增强子元件。结果:与年轻的2BS细胞相比,衰老的2BS细胞中IGFBP-3基因的表达升高;在IG-FBP-3启动子+59到-58序列之间存在着蛋白结合位点;5′-ccagcctgccaagcagcgtgccccggttgc-3′是IGFBP-3的增强子元件。结论:在衰老的2BS细胞中IGFBP-3基因上游-37到-8的30bp序列存在一个新的增强子元件IEE(IGFBP-3enhancerelement),对IGFBP-3的表达起到调控作用。 展开更多
关键词 胰岛素样生长因子结合蛋白-3 IEE(IGFBP-3 enhancerelement) 2bs细胞
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二甲双胍通过IGF-1/PI3K/Akt信号通路对细胞衰老的影响 被引量:1
12
作者 侯玉丽 付静轩 王培昌 《中国医药导报》 CAS 2020年第29期9-12,共4页
目的探讨二甲双胍(Met)通过IGF-1/PI3K/Akt信号通路对细胞衰老的影响。方法选取2BS细胞分成四组,即对照(NC)组、胰岛素样生长因子-1(IGF-1)组、Met组、Met+IGF-1组。加药处理后进行SA-β-Gal染色检测细胞衰老水平、CCK8试验检测细胞增... 目的探讨二甲双胍(Met)通过IGF-1/PI3K/Akt信号通路对细胞衰老的影响。方法选取2BS细胞分成四组,即对照(NC)组、胰岛素样生长因子-1(IGF-1)组、Met组、Met+IGF-1组。加药处理后进行SA-β-Gal染色检测细胞衰老水平、CCK8试验检测细胞增殖能力、EdU试验检测DNA合成能力以及Western blot检测各组PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt蛋白表达。结果各组SA-β-Gal染色阳性率比较,差异有统计学意义(P<0.05)。Met+IGF-1组SA-β-Gal染色阳性率低于IGF-1组,差异有高度统计学意义(P<0.01)。在相同时间点,Met+IGF-1组OD450值高于IGF-1组,差异有统计学意义(P<0.05)。EdU染色后在370 nm处的染色结果显示,各组OD370值比较,差异有统计学意义(P<0.05);Met+IGF-1组OD370值高于IGF-1组,差异有统计学意义(P<0.05)。Met组p-PI3K、p-Akt蛋白表达量低于其他组,差异有统计学意义(P<0.05)。IGF-1组p-PI3K、p-Akt蛋白表达量高于其他组,差异有统计学意义(P<0.05)。Met+IGF-1组p-PI3K、p-Akt蛋白表达量低于IGF-1组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论Met可通过抑制IGF-1/PI3K/Akt信号通路来延缓细胞衰老。 展开更多
关键词 二甲双胍 2bs细胞 胰岛素样生长因子1 PI3K/AKT信号通路 细胞衰老
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化纤方对人胚肺二倍体纤维母细胞的增殖抑制作用 被引量:8
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作者 闫智勇 张天娥 +5 位作者 刘明芳 罗全安 李文军 李戎 蔡永宁 李志刚 《华西医学》 CAS 2005年第2期280-281,共2页
目的:探讨中药化纤方对人胚肺二倍体纤维母细胞(2BS)增殖的抑制作用及其机理,为中医药介入肺纤维化防治提供实验和理论支持。方法:采用中药血清药理学实验方法,观察化纤方含药血清对2BS细胞的细胞增殖、细胞凋亡和细胞周期的影响。结果... 目的:探讨中药化纤方对人胚肺二倍体纤维母细胞(2BS)增殖的抑制作用及其机理,为中医药介入肺纤维化防治提供实验和理论支持。方法:采用中药血清药理学实验方法,观察化纤方含药血清对2BS细胞的细胞增殖、细胞凋亡和细胞周期的影响。结果:经化纤方含药血清作用后,2BS细胞增殖受到显著抑制,并出现明显的细胞凋亡现象;化纤方各组S期细胞数显著增加,而G2/M期细胞数则明显下降,提示该方药可阻抑S期细胞向G2/M期的移行,从而抑制其分裂增殖。结论:化纤方有明显的抗肺纤维化作用,其作用机制可能是阻抑细胞增殖周期并诱导其发生细胞凋亡。 展开更多
关键词 化纤方 人胚肺 二倍体纤维母细胞2bs 中药 药理学 细胞增殖 细胞抑制 细胞凋亡 肺间质纤维化
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人成纤维细胞转录因子Sp1Sp3对p16^(INK4a)基因的调控 被引量:4
14
作者 吴军峰 童坦君 张宗玉 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期88-93,共6页
p16 INK4a是一种细胞周期蛋白依赖激酶 (cdk)的抑制因子 ,它通过抑制cdk4与cdk6的活性 ,使视网膜母细胞瘤抑制蛋白Rb处于低磷酸化状态 ,从而使细胞阻滞于G1期 .对p16 INK4aATG上游 6 2 2bp片段进行序列分析发现 ,该区域富含GC ,其中有 5... p16 INK4a是一种细胞周期蛋白依赖激酶 (cdk)的抑制因子 ,它通过抑制cdk4与cdk6的活性 ,使视网膜母细胞瘤抑制蛋白Rb处于低磷酸化状态 ,从而使细胞阻滞于G1期 .对p16 INK4aATG上游 6 2 2bp片段进行序列分析发现 ,该区域富含GC ,其中有 5个GC盒 (分别命名为GC Ⅰ~GC Ⅴ ) .将上述片段插入到荧光素酶报告载体pGL3 Basic ,分别对 5个GC盒进行点突变后转染人胚肺二倍体成纤维细胞 (2BS)发现 ,Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ位点的突变体显著下调p16 INK4a启动子的活性 ,而Ⅲ、Ⅴ位点突变体无明显作用 .电泳迁移率变动分析 (EMSA)证实 ,GC Ⅰ ,Ⅱ ,Ⅳ能与转录因子Sp1和Sp3结合 ,而且结合条带可被转录因子Sp1和Sp3的抗体所拮抗 .共转染Sp1有助于增加启动子的活性 ,而共转染Sp3则有较弱的抑制作用 ,证明p16 INK4a的转录受到Sp1与Sp3的调控 . 展开更多
关键词 人成纤维细胞转录因子Sp1/Sp3 人胚肺二倍体成纤维细胞(2bs) 电泳迁移率变动分析(EMSA) 细胞周期蛋白依赖激酶(cdk)
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疫苗生产用人二倍体细胞2BS和MRC-5中猪圆环病毒的检测 被引量:3
15
作者 刘欣玉 黄艳秋 李玉华 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2019年第7期732-734,共3页
目的检测疫苗生产用人二倍体细胞2BS和MRC-5是否存在外源因子猪圆环病毒1型(porcine circovirus type 1,PCVl)和猪圆环病毒2型(PCV2)污染。方法对已建立的PCR方法进行灵敏度验证后,检测人二倍体细胞2BS和MRC-5中PCV1和PCV2污染情况。结... 目的检测疫苗生产用人二倍体细胞2BS和MRC-5是否存在外源因子猪圆环病毒1型(porcine circovirus type 1,PCVl)和猪圆环病毒2型(PCV2)污染。方法对已建立的PCR方法进行灵敏度验证后,检测人二倍体细胞2BS和MRC-5中PCV1和PCV2污染情况。结果两种细胞上清中最低均可检出1 pg的PCV1和PCV2 DNA,灵敏度较高;两种细胞中PCV检测结果均为阴性。结论在生产用人二倍体细胞2BS和MRC5中,均未检出PCV1和PCV2污染。 展开更多
关键词 人二倍体细胞 2bs细胞 MRC-5细胞 疫苗 猪圆环病毒 聚合酶链反应
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人二倍体细胞(2BS株)细胞库的建立及生物学特性鉴定 被引量:5
16
作者 梁本 王佳凤 +9 位作者 侯良玉 麻广 李永忠 李立 哈秀杰 李开军 单玉杰 林崇健 刘晔 黄林 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2014年第11期1384-1387,共4页
目的建立人二倍体细胞(2BS株)主细胞库和工作细胞库。方法将人二倍体细胞(2BS株)扩大培养后冻存,建立主细胞库和工作细胞库,采用台盼蓝染色计数细胞,计算细胞活力,并进行染色体、外源病毒因子、微生物污染、致瘤性的检测及鉴别试验... 目的建立人二倍体细胞(2BS株)主细胞库和工作细胞库。方法将人二倍体细胞(2BS株)扩大培养后冻存,建立主细胞库和工作细胞库,采用台盼蓝染色计数细胞,计算细胞活力,并进行染色体、外源病毒因子、微生物污染、致瘤性的检测及鉴别试验。将全面检定合格的工作细胞库细胞分别接种至T75一次性培养瓶、3 L玻璃转瓶和10层细胞工厂,观察细胞形态;将水痘病毒分别按0.010 5、0.012 8、0.018 8 MOI接种至T75一次性培养瓶、3 L玻璃转瓶和10层细胞工厂上的单层细胞,收获病毒原液,检测病毒滴度。结果主细胞库细胞活力为94.1%,工作细胞库细胞活力为94.4%;1 000个处于分裂相时期的细胞的核型分析结果均在《中国药典》三部(2010版)人二倍体细胞染色体分析标准的规定范围内;细胞上清液和裂解液中人外源病毒因子检测结果均为阴性,符合《中国药典》三部(2010版)规程要求;细胞均贴壁,成纤维细胞形态,种属鉴别为人细胞B型;细胞库未被细菌、真菌、病毒及支原体污染,也未出现致瘤性。建立的细胞库在3种培养器皿中均可在工艺要求时间内生长为单层,单位面积活细胞浓度在(2.01~2.59)×105个/cm2之间,收获的病毒滴度在5.0~5.25 lg PFU/ml之间,符合成都生物制品研究所有限责任公司《水痘减毒活疫苗制造及检定规程》要求。结论建立了人二倍体细胞(2BS株)主细胞库和工作细胞库,为2BS细胞应用于水痘减毒活疫苗的研发和生产提供细胞资源和理论依据。 展开更多
关键词 人二倍体细胞(2bs株) 细胞 生物学特性
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新生牛血清的质量控制对SPF鸡胚细胞和人二倍体(2BS)细胞生长的影响 被引量:5
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作者 付永其 金珏艳 +6 位作者 张颖欣 刘辉 陆晨 宋艳梅 杨琦 陆梦溪 王为 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2018年第11期1182-1187,1191,共7页
目的考察新生牛血清质量控制对SPF鸡胚细胞和人二倍体(2BS)细胞生长的影响。方法选择来源可追溯性、工艺质量稳定,且检定合格的新生牛血清样品配制细胞生长液,用于SPF鸡胚细胞和2BS细胞的培养。待细胞生长成致密成纤维单层细胞,记录细... 目的考察新生牛血清质量控制对SPF鸡胚细胞和人二倍体(2BS)细胞生长的影响。方法选择来源可追溯性、工艺质量稳定,且检定合格的新生牛血清样品配制细胞生长液,用于SPF鸡胚细胞和2BS细胞的培养。待细胞生长成致密成纤维单层细胞,记录细胞成单层的时间,用胰酶消化细胞,通过全自动细胞计数仪对细胞悬液进行测定,观察总细胞数、活细胞数,计算细胞存活率。根据活细胞数计算MOI,分别用腮腺炎及风疹病毒接种SPF鸡胚细胞和2BS细胞,检测收获病毒液的滴度。结果SPF鸡胚细胞总细胞数不低于3.5×10~6个/mL,活细胞数不低于2.1×10~6个/mL,细胞存活率不低于60%;2BS细胞总细胞数不低于7.0×10~5个/mL,活细胞数不低于4.2×10~5个/mL,细胞存活率不低于60%。腮腺炎病毒原液滴度在6.1~6.6 lgCCID_(50)/mL之间,平均值为6.28 lgCCID_(50)/mL,SD为0.11,生产过程加工能力指数(process capability index,Cpk)为1.51,批间质量趋于一致;风疹病毒原液滴度均在5.5~6.2 lgCCID_(50)/mL之间,平均值为5.8 lgCCID_(50)/mL,SD为0.17,Cpk值为1.40,批间质量趋于一致。结论新生牛血清的质量良好,用其培养SPF鸡胚细胞和2BS细胞的活细胞比率可控,收获的病毒液滴度较均一,差异性较小。 展开更多
关键词 新生牛血清 质量控制 SPF鸡胚细胞 人二倍体(2bs)细胞 细胞存活率 病毒滴度
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间质性肺纤维化治疗药物的筛选试验及作用机制的研究 被引量:11
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作者 王宇宏 黄志卫 +2 位作者 马忠森 周及红 于晓莉 《中国老年学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期102-104,共3页
目的 环磷酰胺 CTX,甲氨喋呤 MTX,甲基强的松龙 M- pred,秋水仙碱 COLC,刺五加 APS,环孢霉素 A Cs A,观察 6种作用机制不同的免疫抑制剂 ,对人胚肺二倍体纤维母细胞 (2 BS)的影响 ,初步筛选出治疗肺纤维化更有效的药物。方法 采用生... 目的 环磷酰胺 CTX,甲氨喋呤 MTX,甲基强的松龙 M- pred,秋水仙碱 COLC,刺五加 APS,环孢霉素 A Cs A,观察 6种作用机制不同的免疫抑制剂 ,对人胚肺二倍体纤维母细胞 (2 BS)的影响 ,初步筛选出治疗肺纤维化更有效的药物。方法 采用生物活性法观察 6种不同浓度的药物在不同时间对 2 BS细胞的增殖抑制作用 ,利用流式细胞仪检测药物诱导 2 BS细胞凋亡小体形成百分率及其细胞周期的影响。结果  1 6种药物对 2 BS细胞均有增殖抑制作用 ,与无药空白对照组比较均有显著差异 (P<0 .0 1 ) ,Cs A作用明显大于其它 5种药物 (P<0 .0 5)。 2 6种药物均有诱导2 BS细胞凋亡作用 ,各种药物组 2 BS细胞凋亡小体形成百分率与无药空白对照组比较差异显著 (P<0 .0 1 ) ,Cs A的作用最强 ,明显高于其它药物。 36种药物对 2 BS细胞的作用呈现一定的时效和量效关系 ,即细胞增殖抑制率 (CIR% )随着药物浓度的增加和时间的延长而增高 ,Cs A作用最明显。4Cs A对细胞整个增殖期均有作用 ,M- pred和 APS作用于 S期 ,COLC作用于 G2 /M期 ,MTX,CTX作用于 G0 /G1期向 S期过渡阶段 ,使 G0 /G1期细胞发生阻滞。结论 实验中的 6种药物均有抑制 2 BS细胞增殖和诱导其凋亡作用 ,其中 Cs A作用最强 ,可能 Cs A为治疗肺纤维化疗效更好的药物? 展开更多
关键词 2bs细胞 免疫抑制剂 肺纤维化 细胞凋亡 CTX MTX COLC CSA 药物筛选试验 间质性肺纤维化
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病毒感染复数对狂犬病毒PM株增殖的影响 被引量:6
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作者 陈智 孙艳 +4 位作者 牟建超 刘莉娜 刘宇 刘辉 刘杰 《微生物学免疫学进展》 2016年第5期30-33,共4页
目的:探讨不同感染复数(Multiplicity of infection,MOI)的狂犬病毒PM株在人二倍体细胞(2BS株)中增殖的影响,确定感染复数。方法将狂犬病毒PM株按照MOI 0.01、0.02、0.05、0.10、0.15、0.20接种至2BS细胞中,用显微镜观察接种病毒... 目的:探讨不同感染复数(Multiplicity of infection,MOI)的狂犬病毒PM株在人二倍体细胞(2BS株)中增殖的影响,确定感染复数。方法将狂犬病毒PM株按照MOI 0.01、0.02、0.05、0.10、0.15、0.20接种至2BS细胞中,用显微镜观察接种病毒后细胞的形态变化;培养3-5d后,第一次收获病毒液;更换培养液继续培养3-4d后,进行第二次收获。采用小鼠脑内滴定法测定狂犬病毒滴度,通过NIH法测定灭活病毒液的效价。结果当MOI为0.05-0.10时,细胞圆缩30%-40%,细胞能维持较好的生长形态,可收获病毒,病毒收获液的滴度较高(〉5.0 lgLD50/mL),且灭活后病毒液的效价较高(〉4.0IU/mL)。结论确定狂犬病毒PM株在人二倍体2BS细胞增殖的适宜MOI,为人用狂犬病疫苗生产工艺的优化提供了依据。 展开更多
关键词 狂犬病毒(PM株) 2bs细胞 感染复数 病毒滴度 效价
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生晒参多肽的提取分离 被引量:4
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作者 魏俊杰 李平亚 +1 位作者 曾向东 徐景达 《白求恩医科大学学报》 CSCD 1990年第5期436-438,共3页
本文首次从生晒参中用RP_(18)—HPLC法分离出两种人参多肽(Ginseng peptides,GP),分别是分子量1000的11肽和分子量1300的12肽。它们具有降低2BS细胞内多糖的含量和增强2BS细胞内琥珀酸脱氢酶的活力作用。
关键词 人参 多肽 HPLC 2bs细胞
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