蒙古族结核病患者CYP2E1基因多态性及其启动子区甲基化水平与抗结核药物致肝损伤的关系

目的抗结核药物致肝损伤(ADIH)的发生与CYP2E1基因多态性及甲基化水平是否相关的研究甚少。文中旨在探讨蒙古族结核病患者CYP2E1基因多态性及启动子区甲基化水平与ADIH的关系。方法选取2015年11月至2018年6月于内蒙古通辽市结核病防治所标准化治疗的135例蒙古族结核病患者。根据ADIH判定标准选取发生肝损伤的蒙古族结核病患者为ADIH组(n=45),按照1∶2比例匹配未发生肝损伤的蒙古族结核病患者为对照组(n=90)。进行DNA提取,聚合酶链反应(PCR)扩增CYP2E1基因,确定CYP2E1 rs2031920基因型,分析CYP2E1基因多态性及启动子区甲基化水平与ADIH之间的关系。结果CYP2E1 rs2031920基因型、C1和C2基因频率在ADIH组和对照组中分布差异无统计学意义(P>0.05)。ADIH组CYP2E1基因启动子区总体甲基化水平较对照组明显降低[(0.711±0.085)vs(0.759±0.062)],差异有统计学意义(P<0.05)。Logistic回归显示CYP2E1基因启动子区总体甲基化水平是ADIH发生的影响因素(P<0.005),甲基化水平每升高0.1个单位,ADIH发生风险降低0.388倍,其OR(95%CI)值为0.388(0.204~0.739)。结论蒙古族ADIH患者的CYP2E1基因启动子区总体甲基化水平降低,但CYP2E1基因多态性与ADIH的发生无关,提示CYP2E1基因甲基化可应用于结核病患者ADIH的预防和治疗。

CYP2E1基因多态性和DNA损伤修复酶表达对肺癌易感性的影响

[目的 ]研究CYP2E1基因型与不同肺组织中切除修复鼠缺陷交叉互补基因 2蛋白 (ERCC2 )、尿嘧啶DNA糖基化酶 (UDG)、细胞增殖核抗原 (PCNA)的表达水平的关系 ,探讨CYP2E1基因多态性对DNA稳定性和肺癌易感性的影响。 [方法 ]通过免疫组织化学和原位杂交方法研究 3种生物标志物在不同肺组织中蛋白质和mRNA的表达水平 ,同时采用PCR -RFLP方法进行CYP2E1分型。 [结果 ]在 3种CYP2E1基因型 (ww、mw、mm)中 ,ww和mm基因型对ERCC2的表达有明显影响 ,mw基因型对UDG的表达有明显影响 ,3种基因型均与PCNA的表达有关。交互分析结果显示CYP2E1多态性与UDG的表达存在交互作用。 [结论 ]不同个体CYP2E1遗传多态性与DNA切除修复功能有关 ,并存在CYP2E1与UDG的交互作用 ,两者在肺癌易感性中均具有一定的作用。

稳定高表达CYP2E1基因肝癌HepG2细胞系的构建

目的构建稳定高表达CYP2E1基因的肝癌HepG2细胞系。方法通过NCBI查询CYP2E1的编码序列,设计并构建表达质粒p LV(Exp)-Puro-CMVm-CYP2E1,用载体对应的慢病毒包装质粒(p MDLg/pRRE、pRSVREV和p MD2.G)共同转染293T细胞。利用携带CYP2E1基因的慢病毒(Lenti-CYP2E1-e GFP-Puro)感染HepG2细胞系,采用嘌呤霉素抗性筛选方法构建高表达CYP2E1肝癌HepG2细胞系。增强绿色荧光蛋白检测转染情况,荧光定量PCR及Western blotting检测HepG2、空载及转染CYP2E1基因的HepG2细胞系中CYP2E1 mRNA和蛋白。结果 HepG2细胞系均成功转染CYP2E1基因。HepG2、空载及转染CYP2E1基因的HepG2细胞系中CYP2E1mRNA相对表达量分别为1.02±0.06、1.06±0.05、7.42±0.07,蛋白相对表达量分别为0.26±0.02、0.29±0.01、1.61±0.08,转染CYP2E1基因的HepG2细胞系与前两者比较,P均<0.05。结论通过慢病毒转染成功构建了稳定高表达CYP2E1基因的肝癌HepG2细胞系。

CYP2E1基因多态性与肿瘤易感性研究进展

90％以上的肿瘤是由各种环境因素与职业因素引起,而大部分的外源性致癌物需经过Ⅰ相和Ⅱ相代谢酶的代谢活化才与体内生物大分子作用启动致癌过程。细胞色素P4502E1(cytochromeP450s2E1,CYP2E1)是人体内重要的Ⅰ相代谢酶类,参与N-亚硝胺类化合物等多种前致癌物的代谢活化过程,在体内各组织器官中有不同的表达。CYP2E1活性的表达受多种因素影响,存在多种限制性片段长度多态性,与人类肿瘤易感性间存在密切关系。

脂易消对非酒精性脂肪肝CYP2E1基因表达的调控

目的观察脂易消对非酒精性脂肪肝SD大鼠CYP2E1mRNA的调控效果。方法将60只大鼠随机分为正常组、模型组、易善复对照组、低剂量治疗组、中剂量治疗组、高剂量治疗组。正常组给予标准饲料喂养;低、中、高剂量治疗组均给予高脂饲料喂养,同时分别灌服低、中、高剂量脂易消;易善复对照组给予高脂饲料喂养,灌服易复善。结果从肝组织CYP2E1相对表达量(V值)来看,模型组大鼠肝组织CYP2E1mRNA表达水平较正常组明显增高(P<0.01);脂易消各剂量组和易善复组显著低于模型组(P<0.01),而各剂量组大鼠与易善复组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论脂易消能明显降低NAFL大鼠肝脏中CYP2E1mRNA的表达。

青海地区藏族人群CYP2E1基因多态性与肝癌易感性

目的探讨青海地区藏族人群CYP2E1基因多态性和环境因素的交互作用,以及与原发性肝癌的关系。方法病例对照研究。将青海地区藏族原发性肝癌患者(病例组)、同期健康藏族志愿者(对照组),应用PCR、DHPLC法检测两组人群CYP2E1基因多态性位点。以非条件logistic同归模型分析比较CYP2E1基因型在两组分布频率的差异,以及基因多态性和环境因素的交互作用。结果青海地区藏族人群中CYP2E1基因5'-端位点3种基因型c1/c1、c1/c2、c2/c2在病例组和对照组中分布频率分别为84.2%、15.8%、0.0%和86.6%、13.4%、0.0%,两组差异无统计学意义(P>0.05);携带野生纯合子c1/c1基因型个体罹患PHC的风险是c1/c2基因型的5.33倍(95%CI:0.413～15.517),但差异无统计学意义(P>0.05);经logistic逐步回归分析结果显示,吸烟OR 3.808(95%CI:1.742～8.321);家族肝炎病史OR14.195(95%CI:4.304～46.809);家族肝癌史OR5.851(95%CI:1.972～17.360)。结论 CYP2E1基因与青海地区藏族肝癌发生可能无密切关系;藏族人群CYP2E1基因多态性与吸烟、直系亲属肝癌家族史、直系亲属肝炎病史在肝细胞癌发生中存在交互作用,能增加罹患原发性肝癌的风险。

细胞色素P450 2E1基因多态性与肺癌易感性的研究

目的 :研究与致癌物有关的代谢酶细胞色素P45 0 2E1(CYP 2E1)基因多态性和饮酒与肺癌易感性的关系。方法 :采用聚合酶链反应 (PolymeraseChainReaction ,PCR)和限制性片段长度多态性 (RestrictionFregmentLengthPolymorphisms ,RFLP)方法 ,分析 91例肺癌患者和 138例对照的Rsal认别的CYP 2E1基因型。 结果 :本次研究结果为CYP 2E1基因型频率在肺癌组和对照组的分布差异无显著性意义 (χ2 =1 35 5 ,P >0 0 5 ) ;CYP 2E1C1/C1基因型或饮酒单因素作用的比值比 (OddsRatil,OR)分别为 1 389和 3 33,而两者联合作用的OR为 5 4 1。结论 :CYP 2E1基因多态性与肺癌无明显相关性 ,但与饮酒有联合作用。

Cyp2e1基因在肝硬化和阻塞性黄疸肝组织中的表达

为比较 cyp2 e1基因在肝硬化和阻塞性黄疸及正常肝组织中的表达差异 ,并探讨其麻醉药理学意义 ,取肝炎后肝硬化、阻塞性黄疸肝组织及正常肝组织 (来自肝血管瘤患者 )标本 ,一步法抽提肝组织总 RNA,随机引物标记法制备 cyp2 e1c D-NA探针 ,Northern印迹法检测 cyp2 e1基因在以上 3种肝组织中的表达。结果发现阻塞性黄疸患者肝组织中 cyp2 e1基因表达量仅为正常肝组织的 2 1% ,而肝炎后肝硬化该基因表达量是正常肝的 98%。结果表明阻塞性黄疸肝组织 cyp2 e1基因表达显著降低 ,可能导致其功能蛋白 CYP2 E1同工酶含量减少 ;

CYP2E1基因过表达细胞株的建立及鉴定

目的:应用分子克隆技术,构建CYP2E1基因过表达载体,转染L02肝细胞,建立CYP2E1过表达细胞株并进行鉴定,为深入研究环境和职业毒物的毒作用机制提供模型细胞。方法:根据GenBank提供的CYP2E1基因cDNA序列设计引物,PCR扩增该基因并将其克隆到慢病毒过表达载体pLVX-acGFP1-C1中,将已经构建的慢病毒载体对293FT细胞进行转染,收集病毒上清,感染正常L02肝细胞。用嘌呤霉素进行筛选得到转染CYP2E1基因的L02细胞,通过基因测序、荧光定量PCR和Western blot对细胞株进行鉴定。结果:测序证明重组慢病毒过表达载体CYP2E1基因序列与GenBank提供的CYP2E1序列一致,荧光定量PCR检测转染CYP2E1基因的L02细胞比正常肝细胞CYP2E1 mRNA表达提高273倍,Western blot实验显示转染CYP2E1基因的L02细胞CYP2E1蛋白表达水平比正常肝细胞提高3.2倍。结论:成功构建了CYP2E1基因过表达细胞株,可应用于环境毒物和职业毒物的分子机制研究。

苯并（a）芘对大鼠肺组织内CYP1A2和CYP2E1基因表达的影响

目的观察苯并（a）芘（Benzo（a）pyrene,B[a]P）对SD大鼠肺组织内细胞色素P4501A2（cytochromeP4501A2,CYP1A2）和细胞色素P4502E1（cytochromeP4502E1,CYP2E1）基因表达的影响.方法（1）动物及给药方法：40只健康SD大鼠,♀♂各半,清洁级,200～250g,随机分为B[a]P25mg·kg^-1、B[a]P50mg·kg^-1和B[a]P100mg·kg^-1染毒组和空白对照组,每组10只.各染毒组B[a]P溶于橄榄油成均匀的混悬液,空白对照组给等体积的橄榄油,每日1次,连续灌胃14d（染毒各组在d14一次性腹腔注射各个剂量的B[a]P后）,禁食不禁水24h后断头放尽血液,剖胸迅速取出肺组织放入液氮中速冻,后迅速转移至-80℃冰箱保存备用（用于总RNA提取和基因表达分析）.（2）大鼠肺组织RNA的提取：参照RNA提取试剂盒说明书方法提取大鼠肺总RNA,测定RNA溶液的吸光度（A260）和A260/A280以判断总RNA的浓度和纯度,甲醛变性琼脂糖凝胶电泳以判断RNA的完整性.（3）逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）：用RT-PCR反应试剂盒检测CYP1A2和CYP2E1基因mRNA的表达,以β-actin作为内对照,分析B[a]P对大鼠肺组织中CYP1A2和CYP2E1基因mRNA表达的影响.结果与空白对照组相比,高、中剂量的B[a]P组可显著影响肺组织内CYP1A2和CYP2E1基因的表达,差异具有统计学意义（P〈0.05）,而低剂量的B[a]P组与空白对照组比较差异无显著性（P〉0.05）.结论一定剂量的B[a]P可显著影响肺组织内CYP1A2和CYP2E1基因的表达,提示CYP1A2和CYP2E1基因可能参与B[a]P的代谢过程,催化B[a]P生成有毒的代谢产物,本研究对B[a]P相关的代谢酶的影响及B[a]P致癌机制的探讨具有-定的理论意义,为进一步探索B[a]P的致癌机理及与代谢酶相关基因的相互作用奠定一定的研究基础.

CYP2E1基因rs3813867位点多态性与客家人群胃癌遗传易感性的研究

目的:探讨细胞色素P450(CYP2E1)基因单核苷酸位点rs3813867多态性与客家人群胃癌遗传易感性的相关性。方法:分别对梅州客家人群中52名健康体检者(对照组)和51例胃癌病人(胃癌组)的CYP2E1基因rs3813867位点进行基因分型及等位基因检测,评价该位点与胃癌易感性的关系。结果:CYP2E1基因rs3813867位点在梅州地区客家人群中存在GG、GC、CC多态性,在胃癌组和对照组中基因型分布频率分别为62.75%、33.33%、3.92%和59.62%、34.61%、5.77%,等位基因G、C分布频率分别为79.41%、20.59%和76.92%、23.08%,2组差异均无统计学意义(P>0.05),2组人群性别和年龄<60岁者各基因型分布差异均无统计学意义(P>0.05),而2组人群年龄≥60者各基因型分布差异有统计学意义(P<0.05)。结论:CYP2E1基因单核苷酸rs3813867位点与客家人群胃癌的易感性无明显关系。

CYP2E1基因及其多态性与化学致癌易感性

ＣＹＰ２Ｅ１基因是ＣＹＰ４５０大家族主要成员之一，是致癌物亚硝胺类代谢活化的主要酶类，不同程度地表达于肝脏和许多肝外组织，与亚硝胺类多部位致癌作用密切相关。该基因定位于１０ｑ２４．３－ｑｔｅｒ，其表达调节受多种因素的影响。ＣＹＰ２Ｅ１基因存在多个限制性内切酶长度多态性（ＲＦＬＰ）。

细胞色素P450 2E1基因PstⅠ多态、腌制品与大肠癌关系的病例对照研究

目的 研究代谢酶细胞色素P4 5 0 2E1基因 (CYP2E1)PstⅠ多态性和腌制品与大肠癌易感性的关系。方法 采用人群基础的病例对照分子流行病学研究和PCR RFLP技术 ,对 12 6例大肠癌和 343名健康对照PstⅠ识别的CYP2E1基因型进行检测。结果 健康对照组CYP2E1基因野生型(C1/C1)为 6 1 8% ,杂合子 (C1/C2 )为 35 8% ,突变纯合子 (C2 /C2 )为 2 4 %。调整年龄性别后 ,结肠癌病例中突变基因型频率 5 4 9% (5 2 9%C1/C2和 2 0 %C2 /C2 )高于对照 (OR 1 979,95 %CI 1 0 90～3 5 95 ) ,但直肠癌病例与对照比较 ,无统计学意义。分层分析发现 ,突变基因型、每周 1或 2次和隔天或每天吃腌制品单因素作用的大肠癌OR值分别 1 935、2 12 2和 2 315 ,而每周 1或 2次 +突变型、隔天或每天吃 +突变型联合作用后大肠癌OR值分别为 2 2 72和 3 12 7。分别分析结、直肠癌 ,腌制品对直肠癌的危险性在食用频率为每周 1或 2次时 ,差异有统计学意义 ,野生型和突变型的OR值分别为2 6 4 6和 2 2 97,两者差异无统计学意义 ;而结肠癌危险性只有在PstⅠ突变者隔天或每天吃腌制品时才剧增 ,OR值 4 2 6 2 (1 395～ 13 0 17) ,为野生型的 2 6 9倍 ,差异有统计学意义。结论CYP2E1PstⅠG→C点突变是大肠癌的遗传易感性因素 ,与腌?

新生儿基因CYP2E15′端RsaⅠ和PON2311位点多态性与早产的关系

探讨新生儿基因细胞色素P4 5 0 2E1(CYP2E1) 5′端RsaⅠ多态性和对氧磷酶 2 (二乙基对硝基苯磷酸酯酶 2 )基因 311位点 (PON2 311)多态性对早产的影响。采用横断面调查方法 ,使用统一的调查表 ,由安庆市各县医院对入院分娩孕妇及其单胎、活产、早产和对照新生儿进行调查 ,共得到有效样本 194个母亲 -新生儿对。单因素分析结果显示 :CYP2E1野生纯合子基因型 (cut/cut)与突变纯合子基因型 (uncut/uncut) /杂合子基因型 (cut/uncut)比较 ,对早产的影响不具有统计学意义。而PON2Ser311Ser纯合子基因型与Cys311Cys纯合子基因型 /Cys311Ser杂合子基因型比较 ,对早产的影响具有显著的统计学意义。进一步分析CYP2E15′端RsaⅠ位点多态性和PON2 311位点多态性是否存在交互作用 ,结果显示 :CYP2E1野生纯合子基因型和PON2Ser311Ser纯合子基因型这一组合与参照组比较 ,对早产的影响具有显著的统计学意义。基因CYP2E15′端RsaⅠ位点多态性与新生儿早产不相关 ,但基因PON2 311位点多态性与新生儿早产相关 ,且CYP2E15′端RsaⅠ位点多态性和PON2 311位点多态性之间对早产的影响存在交互作用。

CYP1A1和CYP2E1基因多态性与燃煤型砷中毒发病风险关系

目的探讨CYP1A1基因和CYP2E1基因多态性与燃煤型砷中毒发病风险的关系。方法以130例燃煤型砷中毒患者为病例组,以140名健康居民为对照组,应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCRRFLP)法检测CYP1A1 Msp I、CYP2E1 Dra I和CYP2E1 Pst I位点基因多态性,并进行基因联合作用分析。结果CYP1A1基因Msp I位点m1/m1(纯合野生型)基因型和m1/m2+m2/m2(杂合型+纯合突变型)基因型在病例组和对照组的分布频率分别为34.2%、65.8%和30.9%、69.1%;CYP2E1基因Pst I位点c1/c1(纯合野生型)基因型和c1/c2+c2/c2(杂合型+纯合突变型)基因型在病例组和对照组的分布频率分别为62.6%、37.4%和57.4%、42.6%;CYP2E1基因Dra I位点DD(纯合野生型)和DC+CC(杂合型+纯合突变型)基因型在病例组和对照组的分布频率分别为58.7%、41.3%和61.4%、42.6%;上述3个多态位点各基因型在两组间的分布差异无统计学意义(P=0.341、0.574、0.972)。未发现CYP1A1 Msp I、CYP2E1 Pst I和CYP2E1 Dra I多态位点与燃煤型砷中毒的发病风险存在统计学关联(P校正=0.433、0.219、0.832);上述多态位点各基因型之间未发现存在联合作用。结论CYP1A1和CYP2E1基因多态性与燃煤型砷中毒的发病风险无关。

中国人肺癌易患性与CYP2E1基因多型性相关

目的 研究致癌物代谢酶细胞色素P45 0 2E1基因 (CYP2E1)多型性与肺癌风险的关系。方法 以PCR RFLP方法 ,分析 92例肺癌患者和 137例正常对照者RsaI识别的CYP2E1基因型。结果 c1/c1基因型频率在肺癌病例组为 72 8% ,显著 (P <0 0 1)高于对照组的 5 4 7%。多因素分析表明 ,携带c1/c1的个体发生肺癌的危险性比携带c1/c2和c2 /c2的个体高 2 5倍 (OR 2 5 ,95 %CI 1 8～ 3 8)。分层分析发现 ,c1/c1基因型主要增加肺鳞状细胞癌的危险性 (OR 2 6 ,95 %CI 2 3～ 5 8)。重要的是 ,研究发现CYP2E1c1/c1基因型与吸烟有协同作用。c1/c1基因型或吸烟单因素作用的OR分别为 3 9和 4 1,而二者联合作用的OR为 7 9;当吸烟量 <2 0包 年时 ,c1/c2和c2 /c2基因型的OR为 2 4,而c1/c1基因型的OR为 7 6 ;当吸烟量≥ 2 0包 年时 ,前者的OR为 5 5 ,而后者的OR增加到8 7。结论 CYP2E1c1/c1基因型是中国人肺癌的遗传易患性因素 ,此种基因型与吸烟有协同作用。

转哺乳动物cyp2e1基因烟草植株再生及其分析

哺乳动物肝细胞中cyp2e1基因所编码的蛋白CYP2E1在代谢异型有机物方面起着重要作用,转cyp2e1基因植物可以代谢多种小分子有机污染物;但cyp2e1基因在植物体内的表达调控和代谢机理尚不完全清楚。文中将含有cyp2e1基因的质粒pSLD50-6和对照gus基因的质粒pKH200转入根癌农杆菌GV3101,利用根癌农杆菌转基因技术将cyp2e1基因和对照gus基因成功转入烟草,分别获得了转cyp2e1和gus基因再生植株。选取PCR鉴定的再生植株进行荧光定量PCR(qRT-PCR)分析,结果表明:在转录水平上,转cyp2e1基因烟草中,乙醇处理后cyp2e1基因的表达明显下降,苯和甲苯处理后cyp2e1基因的表达量稍有下降;而丙酮、甲醛处理和缺氧条件下cyp2e1基因的表达有不同程度的升高。此外,苯处理后,转cyp2e1基因烟草中NADPH-P450氧化还原酶和细胞色素b5酶的基因活性显著提高,说明烟草中NADPH-P450氧化还原酶和细胞色素b5酶与CYP2E1酶的解毒过程有关,可能起到哺乳动物体内的NADPH-P450氧化还原酶和细胞色素b5的功能,参与CYP2E1酶催化过程的电子传递链。

儿童急性淋巴细胞白血病e2a-pbx1融合基因的表达水平与临床特点、早期治疗反应的相关性

为了探讨急性淋巴细胞白血病儿童初诊的e2a-pbx1融合基因表达水平与患儿临床特点和早期治疗反应的关系,采用实时定量聚合酶链反应定量检测45例患儿初诊e2a-pbx1表达水平和23例诱导缓解治疗第33天时微小残留病(minimal residual disease,MRD)水平;分析初诊e2a-pbx1表达水平、MRD水平与临床特点和早期治疗反应的相关性;比较MRD阳性与阴性患儿初诊e2a-pbx1表达水平及临床特点的差异。结果表明:初诊时e2a-pbx1表达水平与初诊时外周血幼稚细胞百分比呈正相关。23例诱导缓解治疗第33天MRD水平与初诊时各临床特点及e2a-pbx1表达水平均缺乏相关性。MRD阳性组初诊时e2a-pbx1表达水平高于阴性组,而患儿年龄显著低于阴性组。外周血白细胞数<25×109/L的患儿,初诊时外周血幼稚细胞百分比显著低于≥25×109/L组,血小板计数显著高于≥25×109/L组。结论:初诊时e2a-pbx1表达水平可以提示患儿初诊时的肿瘤负荷。MRD阳性患儿初诊时e2a-pbx1表达水平高,年龄小。初诊肿瘤负荷高的患儿,外周血血小板数低。