截断逆挽方对慢加急性肝衰竭大鼠E2F1信号通路的调节机制

目的观察"截断逆挽方"对慢加急性肝衰竭(acute-on-chronic liver failure,ACLF)大鼠肝细胞周期转录因子E2F1、调控因子Cdc25表达量及其对肝细胞超微结构的影响,探讨该方通过调节肝细胞再生,预防慢加急性肝衰竭的作用机制。方法 SPF级Wistar雄性大鼠150只,随机分为正常组、模型组和截断逆挽方组,模型组与中药组给予人血清白蛋白尾静脉注射8周免疫诱导大鼠形成肝硬化模型,再联合D-氨基半乳糖(D-GalN)与脂多糖急性攻击,构建ACLF大鼠模型。截断逆挽方组在急性攻击前给予截断逆挽方连续灌胃3天。各组大鼠在急性攻击后4、8、12小时平行取材。蛋白质印迹法(Western Blot)检测E2F1蛋白表达量,实时荧光定量qRT(quantitative real-time,qRT)PCR法检测肝组织中Cdc25的表达。结果与正常组相比,模型4小时组E2F1和Cdc25表达量升高(P<0.05);8、12小时随着时间的推移表达量逐渐降低。与对应时间点模型组相比,截断逆挽方4小时、8小时E2F1和Cdc25表达量有升高趋势,12小时组E2F1和Cdc25表达量较模型组明显升高(P<0.01)。电镜观察肝组织超微结构显示:模型组肝细胞超微结构损伤严重,并随时间的推移逐渐加重,各对应时间点截断逆挽方组细胞结构损伤较模型组轻。结论截断逆挽方通过调节转录因子E2F1及细胞调控因子Cdc25的表达量,促进了肝细胞的代偿性增殖,从而改善肝细胞的大面积坏死,抑制肝衰竭的发展。

基于miR-138-5p/E2F3信号通路探讨柠檬苦素对人非小细胞肺癌H1299细胞生物学行为的影响

目的:基于微小RNA-138-5p(miR-138-5p)/E2F转录因子3(E2F3)信号通路探讨柠檬苦素对人非小细胞肺癌H1299细胞生物学行为的影响。方法:设H1299细胞组、氟尿嘧啶组(25μg·ml-1)、柠檬苦素低、高剂量组(40,80μg·ml-1),以上各组每孔设6个平行样,培养72 h。培养结束后,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞活力,结晶紫染色测定单克隆形成数目,Transwell小室测定细胞侵袭迁移水平,流式细胞仪测定细胞凋亡率,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)及蛋白免疫印迹(Westernblot)法测定细胞miR-138-5p、E2F3 mRNA及蛋白水平。结果:与H1299细胞组比较,氟尿嘧啶组、柠檬苦素低、高剂量组光密度(OD)值、细胞存活率、克隆形成数目、穿膜数目、E2F3 mRNA和蛋白表达水平显著降低,凋亡率、miR-138-5p表达水平显著升高(P<0.05)。与氟尿嘧啶组比较,柠檬苦素低剂量组OD值、细胞存活率、克隆形成数目、穿膜数目、E2F3 mRNA和蛋白表达水平显著升高,凋亡率、miR-138-5p表达水平显著降低(P<0.05);柠檬苦素高剂量组OD值、细胞存活率、克隆形成数目、穿膜数目、E2F3 mRNA和蛋白表达显著降低,凋亡率、miR-138-5p表达水平显著升高(P<0.05)。柠檬苦素高、低剂量组间各指标差异有统计学意义(P<0.05)。结论:柠檬苦素能抑制人非小细胞肺癌H1299细胞增殖、侵袭迁移,促进非小细胞肺癌H1299细胞凋亡;其机制可能与柠檬苦素通过促进H1299细胞miR-138-5p表达,抑制E2F3 mRNA和蛋白表达,进而抑制miR-138-5p/E2F3通路的激活有关。

BRD7调控Rb/E2F通路的分子机制研究

BRD7是采用cDNA代表性差异分析法克隆的一个新的Bromodomain基因,过表达BRD7可抑制鼻咽癌细胞的生长和细胞周期进程,同时发现BRD7基因可以调控Rb/E2F通路的活性.该研究旨在进一步探讨BRD7调控Rb/E2F通路的分子机制.通过蛋白质印迹和RT-PCR实验方法发现,BRD7能够降低Rb的磷酸化水平,抑制cyclinD1、cyclinE的蛋白质表达,上调CDK4抑制子P19的mRNA表达,但对CDK4和CDK2的蛋白质表达没有明显影响;通过荧光素酶实验从转录调控水平进一步证实了BRD7能够明显抑制cyclinD1启动子活性;采用反义核酸技术抑制COS7细胞内源性BRD7的表达后,发现cyclinD1、cyclinE、磷酸化Rb的蛋白质表达水平上调,并且可以促进细胞生长.这些结果表明:BRD7参与调控Rb/E2F信号通路中重要靶分子的表达,抑制Rb/E2F通路的活性,从而阻止细胞周期G1-S期进程,抑制鼻咽癌细胞生长.

准连续调制激光吸收谱测量CO气体系统研究

准连续信号是一种重要的调制信号形式,在多个领域有广泛应用。准连续调制激光吸收谱是准连续信号典型应用之一,具有响应迅速、检测精度高、检测限低的特点。在地震、塌方、火灾等灾害环境下,由于堆积形成复杂封闭环境或燃烧不充分有可能产生极易燃爆的CO有毒有害气体。因此,灾害现场破拆机器人进行救援时,需要对现场的气体环境进行监测和分析,避免造成二次爆炸伤害。本系统对CO气体展开研究,采用准连续调制激光吸收谱技术,搭建测量实验系统,实施了改变浓度、压力和温度条件的CO测量实验,得出了准连续调制激光吸收谱2f信号幅值与CO浓度、实际测量时的压力、温度的关系模型。这些关系模型可使破拆机器人在灾害现场根据测量系统实际测得的压力和温度值对CO气体的浓度进行相应的压力以及温度补偿。

截断逆挽方对慢加急性肝衰竭模型大鼠肝细胞增殖途径的影响

目的:观察"截断逆挽方"对慢加急性肝衰竭(Acute-on-Chronic Liver Failure,ACLF)大鼠肝组织中周期蛋白D1(Cyclin D1)、周期蛋白A(Cyclin A)、周期蛋白依赖激酶4(CDK4)、转录因子DP1表达的影响。探讨该方预防性干预ACLF大鼠肝细胞增殖途径的作用机制。方法:SPF级Wistar雄性大鼠150只,随机分为正常对照组、模型组和截断逆挽方组,给予人血清白蛋白免疫诱导大鼠形成肝硬化模型,再联合D-氨基半乳糖(D-Gal N)与脂多糖(LPS)急性攻击,建立ACLF大鼠模型。截断逆挽方组在急性攻击前给予截断逆挽方连续灌胃3天。各组大鼠分别在急性攻击后4、8、12 h取材。蛋白质印迹法(Western Blot)检测DP1蛋白表达量,实时荧光定量qRT(Quantitative Real-Time,qRT)PCR法检测肝组织中CyclinD1、CyclinA、CDK4 mRNA的含量。结果:与正常组相比,模型4 h组CyclinD1、CyclinA、CDK4及DP1表达量升高(P<0.05);8 h、12 h随着时间的推移表达量逐渐降低。与对应时间点模型组相比,截断逆挽方4 h组CyclinD1、CyclinA、CDK4及DP1表达量无明显差异,8h CyclinD1、CyclinA、CDK4及DP1表达量有升高趋势,12 h组CyclinD1、CyclinA、CDK4及DP1表达量较模型组明显升高(P<0.01)。结论:截断逆挽方可能通过调节E2F1信号通路中CyclinD1、CyclinA、CDK4及DP1的表达量,促进了肝细胞的代偿性增殖,从而改善肝细胞的大面积坏死,抑制肝衰竭的发展。

五味子乙素抑制视网膜母细胞瘤细胞生物学行为的分子机制研究

目的:研究五味子乙素对人视网膜母细胞瘤Y79细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭的影响,及其对共济失调毛细血管扩张突变基因(ATM)/转录因子E2F1信号通路的作用。方法:体外培养Y79细胞,ATM inhibitor质粒和ATM mimics质粒转染Y79细胞进行ATM沉默或过表达,细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法测定细胞活力和增殖情况,流式细胞仪分析Y79细胞凋亡及周期分布,划痕实验检测Y79细胞迁移,Transwell实验分析细胞侵袭,Western Blotting实验检测Y79细胞中细胞周期蛋白(cyclin D1、cyclin B1和CDK2)、抑癌基因周期蛋白依赖性激酶抑制4b(INK4b)、INK4a、肿瘤抑制蛋白ARF、人体抑癌基因p53、人视网膜母细胞抑制蛋白pRB、ATM及E2F1蛋白表达。结果:五味子乙素呈浓度依赖性抑制Y79细胞活力、克隆、迁移及侵袭,将Y79细胞阻滞在G0/G1期,诱导其凋亡;另外,五味子乙素显著诱导INK4b、INK4a、ARF、p53、pRB、ATM及E2F1蛋白表达,显著抑制cyclin D1、cyclin B1及CDK2蛋白水平(P<0.05);ATM沉默能部分降低五味子乙素对Y79细胞生物学行为的抑制作用。结论:五味子乙素通过激活ATM/E2F1信号传导,进而抑制视网膜母细胞瘤细胞增殖,提示ATM/E2F1信号通路可能是视网膜母细胞瘤治疗的新靶标。