LncRNA PURPL调节miR-342-3p/PIK3R1轴对肝癌细胞恶性生物学行为的影响

目的:探究长链非编码RNA(PURPL)调节微小RNA-342-3p(miR-342-3p)/磷脂酰肌醇-3激酶调节亚基1(PIK3R1)轴对肝癌细胞恶性生物学行为的影响。方法:细胞实验:将si-NC、si-PURPL、si-PURPL+inhibitor NC、si-PURPL+miR-342-3p inhibitor分别转染至肝癌细胞Huh-7细胞并命名为si-NC组、si-PURPL组、si-PURPL+inhibitor NC组、si-PURPL+miR-342-3p inhibitor组,未做任何处理的Huh-7细胞记为NC组。双荧光素酶报告基因实验验证LncRNA PURPL、miR-342-3p、PIK3R1的关系;qRT-PCR检测人正常肝细胞系L02和人肝癌细胞系Huh-7中LncRNA PURPL、miR-342-3p表达;Western blot检测L02细胞、Huh-7细胞PIK3R1蛋白水平;MTT法检测Huh-7细胞增殖情况;流式细胞术检测Huh-7细胞凋亡率;Transwell检测Huh-7细胞侵袭数量;划痕试验测定Huh-7细胞迁移。体内实验:构建裸鼠异种移植模型,分组同细胞实验,检测肿瘤体积和肿瘤重量。结果:细胞实验结果显示:与si-NC组相比,si-PURPL组Huh-7细胞OD490值、划痕愈合率、侵袭细胞数量、LncRNA PURPL、PIK3R1水平显著下降(P<0.05),Huh-7细胞凋亡率、miR-342-3p相对表达量显著升高(P<0.05),而抑制miR-342-3p表达减弱了沉默LncRNA PURPL抑制Huh-7细胞增殖、迁移、侵袭和促进凋亡的效果;LncRNA PURPL负向调控miR-342-3p/PIK3R1轴。体内结果显示:si-PURPL组裸鼠肿瘤体积和质量较si-NC组下降(P<0.05);抑制miR-342-3p表达减弱了沉默LncRNA PURPL对体内肿瘤生长的抑制作用。结论:沉默LncRNA PURPL可抑制Huh-7细胞的恶性生物学行为,其机制可能与调控miR-342-3p/PIK3R1轴有关。

异鼠李素介导miR-454-3p/PIK3R1轴对口腔鳞状细胞癌细胞生物学特性的影响

目的:探讨异鼠李素(ISO)对口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞生物学特性的影响,以及在该过程中对miR-454-3p/PIK3R1轴的调控机制。方法:MTT法检测ISO对TSCC1细胞的毒性,随后将TSCC1细胞分为OSCC组、ISO组、ISO+miR-NC组、ISO+miR-454-3p mimic组。MTT法检测各组细胞的存活率;克隆形成实验检测各组细胞增殖情况;流式细胞术检测各组细胞凋亡;Transwell实验检测各组细胞迁移和侵袭能力;RT-qPCR法检测各组细胞中miR-454-3p和PIK3R1的mRNA水平;Western blotting法检测各组细胞中PIK3R1蛋白的表达;双荧光素酶实验验证miR-454-3p与PIK3R1的靶向关系;建立裸鼠移植瘤模型,将小鼠分为模型组、ISO组、ISO组+agomir-NC组,ISO组+miR-454-3p agomir组,每组5只,干预15 d后检测各组小鼠的肿瘤质量和体积;RT-qPCR法检测肿瘤组织中miR-454-3p和PIK3R1的mRNA水平。结果:体外实验发现,与OSCC组比较,ISO组和ISO+miR-NC组细胞存活率、迁移和侵袭细胞数量、miR-454-3p表达水平均降低(P<0.05),细胞凋亡率、PIK3R1 mRNA和蛋白表达水平均升高(P<0.05);miR-454-3p mimic回补实验逆转了ISO对OSCC的抑癌作用及PIK3R1的表达水平(P<0.05),同时双荧光素酶报告基因实验验证了miR-454-3p与PIK3R1之间存在靶向关系;体内实验发现,与模型组比较,ISO组小鼠移植瘤的质量和体积均减小(P<0.05),miR-454-3p表达水平、PIK3R1 mRNA表达水平以及miR-454-3p agomir的回补实验结果均与体外实验保持一致。结论:ISO能够通过调节miR-454-3p/PIK3R1轴抑制OSCC细胞的增殖、迁移和侵袭,促进细胞凋亡。

(3R,4R)-N,4-二甲基-1-(苯基甲基)-3-哌啶胺盐酸盐的制备

以a-乙酰-γ-丁内酯为起始原料与碘甲烷反应合成化合物II;化合物II与氢溴酸反应水解溴代化合物III;化合物III再与溴素反应得到二溴代产物IV;化合物IV与苄胺关环得到化合物V;化合物V在转氨酶作用下,甲胺作为氨源,得到ee值99.5%以上的化合物I。考察催化剂、酶催化剂、物质的量比、反应温度对反应的影响,考察氢溴酸、溴素的回收利用情况。结果表明:化合物II的最佳工艺条件为碳酸钠为催化剂,碘甲烷为甲基化试剂,化合物III的最佳工艺条件氢溴酸既做反应试剂同时也作为溶剂;化合物IV最佳工艺条件酸性条件下溴素溴代得到二溴产物;化合物V的最佳工艺条件是与苄胺直接反应得到产物;化合物I的最佳工艺条件是常温下酶转化得到手性产品。

手性中间体(R)-4-氰基-3-羟基丁酸乙酯制备工艺改进

开发了一种绿色环保的阿托伐他汀手性中间体(R)-4-氰基-3-羟基丁酸乙酯的制备工艺。该工艺采用双固定化酶法合成,以4-氯乙酰乙酯为起始原料,先用ADH酶还原生成(S)-(-)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯,然后在脱卤酶的催化下与氰化钠反应制得(R)-4-氰基-3-羟基丁酸乙酯。该制备工艺简单反应条件温和,原子经济性高,其总收率可达到85%以上。

基于IGF-1R/PI3K/AKT的益气固表丸对慢性阻塞性肺疾病模型大鼠的影响及作用机制研究

目的:益气固表丸对慢性阻塞性肺疾病(COPD)有明显的治疗作用,但具体作用机制尚不清楚。本研究旨在探讨益气固表丸对脂多糖(LPS)联合烟雾暴露构建慢性阻塞性肺病模型大鼠的治疗作用机制。方法:通过大鼠气管内灌注LPS和吸入香烟烟雾构建慢性阻塞性肺病模型,同时给予模型大鼠低、中、高剂量益气固表丸治疗14 d。观察呼吸参数及肺组织病理变化。采用酶联免疫吸附试验测定支气管肺泡灌洗液(BALF)及血清胰岛素样生长因子1型受体(IGF-1R)、白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-10水平。采用蛋白质印迹法检测大鼠肺组织样品中胰岛素样生长因子1受体(IGF-1R)/PI3K/AKT信号通路组分的磷酸化状态。结果:与对照组和低剂量益气组比较,大剂量益气固表丸治疗可显著改善COPD大鼠呼吸参数,减轻肺损伤和炎症,降低BALF和血清炎症介质水平。此外,高剂量益气固表丸干预的COPD大鼠肺组织标本中磷酸化IGF-1R、p-PI3K、p-AKT、p-GSK3、p-mTOR蛋白水平显著降低。结论:益气固表丸对COPD有明显的治疗作用,可能与靶向IGF-1R/PI3K/AKT信号通路有关。

(R)-3-氨基-3,4-二氢-1-甲氧基喹啉-2(1H)-酮的合成

首先,以D-苯丙氨酸和二碳酸二叔丁酯为起始原料,经过Boc氨基保护合成N-叔丁氧羰基苯丙氨酸;然后N-叔丁氧羰基苯丙氨酸在甲氧氨盐酸盐的作用下生成缩合物2-(N-叔丁氧羰基)-N-甲氧基-3-苯丙酰胺;然后缩合物在催化剂二(三氟乙酸)碘苯的作用下成环生成3-(N-叔丁氧羰基)-3,4-二氢-1-甲氧基喹啉-2(1H)-酮;最后后者经过脱保护合成目标产物。该方法具有操作简单、成本低等优点,四步总收率15.1%,产物经过1H-NMR和MS确认。

miR-129-2靶向PIK3R1通过PI3K/AKT信号通路减轻肺内皮细胞损伤

目的探讨miR-129-2在肺血管内皮细胞损伤中的作用及其机制。方法SPF级小鼠40只随机分为对照组、脂多糖(LPS)组、空载组、过表达组,给予气管滴注LPS诱导急性肺损伤(ALI),尾静脉注射高表达慢病毒来过表达miR-129-2,观察ALI小鼠呼吸频率、体质量等一般情况,检测miR-129-2及炎症因子IL-6、IL-10、TNF-α表达水平和肺损伤程度。人肺微血管内皮细胞(HPMECs)分为Control组、LPS组、NC组和mimic组,LPS处理诱导细胞损伤,转染miR-129-2 mimic来上调miR-129-2的水平,划痕实验及Transwell实验检测细胞迁移能力,检测各组细胞中miR-129-2、IL-6、IL-10、TNF-α及PIK3R1 mRNA的表达水平。双荧光素酶实验验证miR-129-2与PIK3R1的靶向关系,Western blot检测miR-129-2对PIK3R1及PI3K/AKT信号通路蛋白表达的影响。结果在小鼠中,miR-129-2过表达能使小鼠进食增加、呼吸频率减慢、体质量增加、肺组织损伤减轻,IL-6、TNF-α表达降低,IL-10表达升高(P<0.05)。在HPMECs中,mimic转染使miR-129-2表达水平上调,炎症因子表达水平降低,细胞迁移能力增强,PIK3R1表达降低(P<0.05);双荧光素酶报告显示miR-129-2与PIK3R1存在结合位点,miR-129-2下调使PIK3R1表达增加,PI3K/AKT信号通路被激活。结论miR-129-2过表达能够减轻小鼠炎症反应和肺损伤,并能介导PIK3R1通过PI3K/AKT信号通路缓解肺内皮细胞损伤。

IFIT3对鼻咽癌CNE-2R细胞侵袭转移及EMT的影响

目的探讨干扰素诱导的具有四肽重复序列3(interferon induced protein with tetratricopeptide repeats 3,IFIT3)在鼻咽癌CNE-2R细胞中的表达及其对细胞侵袭、转移和上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)能力的影响。方法采用RT-qPCR和Western blot检测IFIT3在鼻咽癌细胞CNE-2R和正常鼻咽上皮细胞NP69中的表达水平。鼻咽癌CNE-2R细胞分别感染IFIT3 shRNA的3个序列LV1、LV2、LV3,并设立阴性对照组(NC组);利用RT-qPCR和Western blot检测上皮表型E-cadherin及间质表型N-cadherin和Vimentin的表达,采用划痕实验及Transwell实验检测细胞的迁移和侵袭能力。结果IFIT3在鼻咽癌CNE-2R细胞中的mRNA和蛋白表达水平均较NP69细胞显著上调(均P<0.001)。IFIT3在LV1组、LV2组和LV3组中的mRNA和蛋白表达水平均低于NC组(均P<0.001),且以LV2组和LV3组的表达水平最低。与NC组相比,LV2组和LV3组的细胞迁移率显著下降,迁移和侵袭细胞数显著减少,E-cadherin蛋白表达水平显著升高,N-cadherin和Vimentin蛋白表达水平显著降低(均P<0.001)。结论IFIT3在鼻咽癌CNE-2R细胞中表达上调,沉默IFIT3后CNE-2R细胞的侵袭、转移能力以及EMT显著被抑制。

IL-33通过miR-19a-3p/MAPK6通路影响心肌缺氧/复氧损伤的机制研究

目的 探讨白细胞介素-33(IL-33)通过miR-19a-3p/MAPK6通路对心肌缺氧/复氧(H/R)损伤的影响及可能的分子机制。方法 建立H/R诱导的新生小鼠心肌细胞体外模型,使用IL-33进行预处理,向心肌细胞中转入miR-19a-3p mimic,以上调miR-19a-3p表达,转入miR-19a-3p inhibitor,以抑制miR-19a-3p表达,转入pc DNA-MAPK6以上调MAPK6表达。通过Caspase-3活性、细胞凋亡ELISA法和原位细胞凋亡染色检测心肌细胞凋亡。Target Scan数据库预测miR-19a-3p的潜在靶点,双荧光素酶检测报告显示miR-19a-3p与MAPK6之间关系;RT-qPCR法检测心肌细胞miR-19a-3p和MAPK6 mRNA表达,Western blot法检测MAPK6蛋白表达。结果 IL-33预处理可以抑制H/R诱导的miR-19a-3p表达下调和细胞凋亡。双荧光素酶测定报告显示,miR-19a-3p靶向调控MAPK6。IL-33抑制了H/R诱导的MAPK6表达上调,过表达MAPK6减弱了IL-33对H/R的抗凋亡作用。过表达miR-19a-3p抑制了H/R诱导的MAPK6表达上调,而敲低miR-19a-3p可以消除IL-33对H/R诱导的MAPK6表达下调。结论 IL-33通过调控miR-19a-3p/MAPK6信号通路,减少H/R诱导的心肌细胞凋亡。

正相高效液相色谱法测定琥珀酸曲格列汀中的(R)-3-氨基哌啶

建立琥珀酸曲格列汀中(R)-3-氨基哌啶测定的正相高效液相色谱分析方法,用于琥珀酸曲格列汀中对起始原料(R)-3-氨基哌啶盐酸盐残留的质量控制。采用CHIRALPAK AD-H(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以正己烷-无水乙醇(80:20)为流动相,等度洗脱,流速为1.0 mL/min;柱温为30℃;检测波长为210 nm。(R)-3-氨基哌啶在0.10~3.03μg/mL范围与峰面积呈良好的线性关系,r=0.9993;检测限为0.03048μg/mL,加标平均回收率100.5%(n=15)。本文建立的方法准确、灵敏、可靠,适用于琥珀酸曲格列汀中杂质(R)-3-氨基哌啶含量的检测。

副产对映体(R)-N-甲基-3-(1-萘氧基)-3-(2-噻吩)-丙胺的消旋工艺研究

研究盐酸度洛西汀关键手性中间体(S)-N-甲基-3-(1-萘氧基)-3-(2-噻吩)-丙胺的副产对映体(R)-N-甲基-3-(1-萘氧基)-3-(2-噻吩)-丙胺消旋工艺。方法:考察溶剂、消旋试剂、反应温度、反应时间对反应结果的影响,得到优化反应条件。结果:通过浓盐酸对手性副产(R)-N-甲基-3-(1-萘氧基)-3-(2-噻吩)-丙胺的消旋得到盐酸度洛西汀前端中间体N-甲基-3-(1-萘氧基)-3-(2-噻吩)-丙胺。结论:最佳反应条件为:采用底物1倍质量的水作溶剂,温度35~40℃,反应时间48 h,37%盐酸用量为底物质量比2倍时,底物的消旋转化率可达97%以上,消旋产物的粗品得率达92.2%。

miR-22-3p靶向调控PLAGL2保护OGD/R诱导的心肌细胞损伤机制研究

目的探讨miR-22-3p在氧-糖剥夺/复氧(OGD/R)心肌细胞铁死亡中的作用及机制。方法大鼠心肌细胞系H9c2采用OGD/R处理以及转染miR-22-3p模拟物(miR-22-3p mimic)。细胞根据是否缺氧及有无转染分为常氧组、OGD/R组、OGD/R+miRNA模拟物阴性对照(miRNA-NC组)和OGD/R+miR-22-3p组。采用细胞计数(CCK-8)法检测细胞活力,酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒检测H9c2细胞中铁死亡指标水平,Western blot检测谷胱甘肽过氧化物酶4(Gpx4)及多形性腺瘤基因样蛋白2(PLAGL2)蛋白表达,双荧光素酶报告实验验证miR-22-3p和PLAGL2靶向关系。结果OGD/R处理H9c2细胞后,第4天的吸光度值低于常氧组,活性氧(ROS)及丙二醛(MDA)水平、Fe^(2+)的积累明显高于常氧组,miR-22-3p水平明显低于常氧组(t分别=3.78、4.24、2.54、4.47、3.53,P均<0.05),H9c2细胞转染miR-22-3p mimic及OGD/R处理后,第3、4天的吸光度值高于miR-NC+OGD/R组(t分别=2.98、1.97、2.57、2.46,P均<0.05),细胞MDA、ROS、Fe^(2+)明显低于OGD/R+miR-NC组(t分别=2.62、5.35、4.11,P均<0.05),Gpx4表达水平高于OGD/R+miR-NC组。Fer-1和OGD/R处理H9c2细胞后,第3、4天的细胞吸光度值明显高于OGD/R组(t分别=3.12、3.36,P均<0.05),细胞MDA、ROS和Fe^(2+)水平显著低于OGD/R组(t分别=3.03、5.33、2.48,P均<0.05)。H9c2细胞转染miR-22-3p组的PLAGL2蛋白表达明显低于miR-NC组,且PLAGL2-WT+miR-22-3p组的荧光素酶活性明显低于PLAGL2-MUT+miR-22-3p组(t=2.69,P<0.05)。H9c2细胞共转染miR-22-3p mimic和PLAGL2过表达质粒后,Gpx4表达低于OGD/R+miR-22-3p组,吸光度值明显低于OGD/R+miR-22-3p组(t分别=3.91、3.12,P均<0.05),MDA、Fe^(2+)、ROS水平高于OGD/R+miR-22-3p组(t分别=3.78、3.87、3.05,P均<0.05)。结论miR-22-3p靶向调控PLAGL2表达抑制铁死亡,进而降低OGD/R诱导的心肌细胞损伤。

20(R)-人参皂甙Rg3对K562/ADM细胞凋亡诱导的研究

目的 :探讨抗癌药物 2 0 (R) -人参皂甙Rg3(2 0 (R) -GinsenosideRg3)对肿瘤细胞凋亡的诱导。方法 :采用人红白血病耐阿霉素 (adriamycin ,ADM)细胞株K5 6 2 /ADM细胞作为实验模型 ,用ADM作阳性对照。结果 :MTT法细胞毒实验显示 ,Rg3对K5 6 2 /ADM细胞的IC 5 0为 10 4 9± 0 30 μg/ml;流式细胞仪法测定该细胞与浓度为 1 0 μg/ml(无毒剂量 )和 5 0 μg/ml(低毒剂量 )的Rg3共同培养 4 8h的细胞凋亡率分别为 3 39± 0 2 5 %和 9 36± 0 6 1% ;电镜下 ,可见凋亡的K5 6 2 /ADM细胞及凋亡小体。结论 :Rg3具有较强的诱导肿瘤细胞凋亡的能力 ,其诱导强度与其浓度呈正相关 ,对作用时间有依赖性。

MicroRNA转录后调控欧美杨R2R3-MYBs抗锈菌表达

[目的]强致病锈菌亲和型树种欧美杨适合做寄主感病分子机理研究。研究表明转录因子及其调控miRNA在杨树抗/感病过程中起重要的信号传导和调控作用,决定杨树与锈菌的亲和性。为深入研究杨树感病性,对欧美杨R2R3-MYB转录因子及其调控miRNA进行研究。[方法]构建锈菌侵染和未侵染miRNA组、降解组文库和基因表达谱文库,进行高通量测序。对基因表达谱结果进行生物信息学分析鉴定R2R3-MYBs,根据miRNA组和降解组数据确定R2R3-MYBs调控miRNA。应用定量PCR技术鉴定候选R2R3-MYBs和其调控miRNA的表达量。[结果]共鉴定到230个欧美杨R2R3-MYBs,其中55个R2R3-MYBs在锈菌侵染和未侵染叶片间表达量差异显著,其余表达量变化不显著。基于降解组,共鉴定到由22个miRNA调控18个R2R3-MYBs的86个转录后调控关系。定量PCR结果表明PC-3p-2521022_1与Pnd MYB173存在转录后负调控关系。预测的R2R3-MYB靶基因涉及水杨酸、茉莉酸、乙烯和脱落酸等多个植物激素抗性路径。[结论]E4强致病锈菌侵染导致亲和型树种欧美杨23.9%的R2R3-MYBs表达量发生变化,锈菌侵染不但可以影响R2R3-MYBs的表达量,还可以启动或关闭R2R3-MYBs的表达。欧美杨在E4强致病锈菌胁迫条件下,R2R3-MYBs转录后主要受miR159和miR858家族的miRNA调控。

miR-324-3p通过调控MC1R基因影响黑色素的形成

旨在证明miR-324-3p可以通过调控其预测的靶基因MC1R及其下游基因的表达从而对羊驼皮肤黑色素的合成产生影响。本研究在体外培养的羊驼皮肤黑色素细胞中转染miR-324-3p过表达载体,应用qRT-PCR与Western blotting分析比较各试验组中MC1R基因与毛色相关基因小眼畸形相关转录因子(Microphthalmia-associtated transcription factor,Mitf)、酪氨酸酶(Tyrosinase,Tyr)、酪氨酸相关蛋白2(Tyrosinase related protein 2,Tyrp2)的表达差异性,利用酶标仪检测黑色素产量的变化。结果显示:(1)miR-324-3p在棕色与白色羊驼皮肤中均有表达,且在棕色羊驼皮肤中极显著表达(P<0.01),其相对表达量是白色的1.64倍;(2)黑色素细胞被转染了miR-324-3p过表达载体后,处理组靶基因MC1R及其下游调控基因Mitf、Tyr和Tyrp2的表达量与黑色素产量较空白对照组均有下调,且以Mitf基因表达量极显著下调(P<0.01)。综上表明,羊驼皮肤中miR-324-3p可能通过调控MC1R基因的表达,顺势下调MC1R基因下游调控基因Mitf、Tyr与Tyrp2的表达,最终对羊驼皮肤黑色素细胞中黑色素的类型及合成量产生影响。

羰基还原酶不对称还原(R)-6-氰基-5-羟基-3-羰基己酸叔丁酯

选择R-羰基还原酶和葡萄糖脱氢酶双酶,协同催化(R)-6-氰基-5-羟基-3-羰基己酸叔丁酯不对称还原制备阿托伐他汀关键手性合成子6-氰基-(3R,5R)-二羟基己酸叔丁酯。转化条件优化结果显示:在不添加外源性辅酶NADP(H)、菌体用量15.0 g/L、147.0 g/L(R)-6-氰基-5-羟基-3-羰基己酸叔丁酯、128.2g/L葡萄糖,30℃、pH 6.5条件下反应6 h后,底物转化率达到100%,产物d.e.值大于99.5%。

R,S及R/S型3-氯-1,2-丙二醇的急性毒性研究

目的探讨R，S和R／S型3-氯-1，2-丙二醇（3-MCPD）对ICR小鼠的急性毒性。方法选用健康性成熟ICR小鼠，对R，S及R／S型3-MCPD染毒剂量依次为176．78、198．43、222．73、250、280．61、314．98和353．55、396．84、445．44和499．99mg／kg，89．09，100，112．25，125．99，141．42，158．74和178．18mg/kg及130．25、150、172．75、198．95、229．13、263.88和303．91mg／kg。经口一次灌胃染毒观察14天，以改良寇式法计算LD50，计算脏体比并进行肝肾病理学检查。结果R，S及R／S型3-MCPD的LD50及95％可信区间（95％CI）分别为290．54mg／kg（280．74～300．68），117．57mg／kg（113．82，121．45），190．73mg／kg（177．76～204．59）。R型异构体在250mg／kg及以上剂量组动物肾体比显著增加（P〈0．05），脑体比在353．55mg／kg、445．44mg／kg及最高剂量组亦显著增大（P〈0．05）；S型3-MCPD染毒组动物各脏体比与对照组比均无显著差异；R／S型3-MCPD，在198．95mg／kg及以上荆量组动物肾体比明显增加，在229．13mg／kg及以上剂量动物脑体比亦明显增加，与对照组比有差异显著（P〈0．05）。在353．55mg/kg及以上剂量R型异构体引起肝细胞肿胀、肝窦扩张和明显充血，在229．13mg/kg及以上荆量（R／S）型3-MCPD也引起肝细胞肿胀和肝窦充血，S型则未引起。R、S及（R，S）型均未引起肾脏明显的病理改变。结论三种3-MCPD急性毒性大小依次为S型〉R／S型〉R型，R、S型异构体均显示出神经毒性。

离子液体中酵母细胞不对称还原合成(R)-3-羟基丁酸乙酯

采用疏水性离子液体1-丁基-3-甲基咪唑六氟磷酸盐([BMIM]PF6)与缓冲液构成的两相体系,在其中进行了膜醭毕赤酵母(Pichia membranaefaciens Hansen)细胞催化乙酰乙酸乙酯(EOB)不对称还原,制备光学活性的(R)-3-羟基丁酸乙酯(R-EHB)。系统地考察了一些因素,如离子液体浓度、缓冲液pH、辅助底物种类和浓度、反应温度、底物浓度、菌体浓度和转化时间等对该反应的影响。结果表明,上述因素对反应的产率和产物光学纯度影响较大。较佳的生物还原反应条件为:[BMIM]PF6体积分数20%,辅助底物为80g·L-1葡萄糖,pH7.8,反应温度30℃,底物乙酰乙酸乙酯浓度0.5mol·L-1,菌体浓度280g·L-1,转化18h。在此优化条件下,反应产率达72.2%,R-EHB对映体过量值为70.3%。与单一水相体系和正己烷-缓冲液两相体系相比较,在[BMIM]PF6-缓冲液两相体系中进行EOB的生物不对称还原可有效减少底物抑制,提高反应效率。

20(R)-人参皂苷Rg3人体药代动力学研究

目的 研究 2 0 (R) 人参皂苷Rg3(GRg3)人体药代动力学。 方法 高效液相色谱 -紫外检测法。结果8名健康志愿者单剂量口服 3 2mg·kg-1GRg3 ,其药时曲线符合口服吸收有滞后时间的二房室模型 ,Tmax为 (0 6 6± 0 10 )h ,Cmax为 (16± 6 )ng·mL-1,T1/ 2α为 (0 46± 0 12 )h ,T1/ 2 β为 (4 9± 1 1)h ,T1/ 2 (Ka) 为 (0 2 8± 0 0 4)h ,AUC0 -∞ 为 (77± 2 6 )ng·mL-1·h ;6名健康志愿者单剂量口服 0 8mg·kg-1GRg3 ,由于血药浓度低 ,可测数据点少 ,未进行模型模拟 ;两组给药剂量与相应Cmax实测值比较 ,二者成正比关系。结论 本品口服吸收快 ,消除也较快 ,但血药浓度很低。在所试剂量范围内 ,GRg3属一级动力学吸收、消除过程。

多粘类芽孢杆菌同步糖化发酵玉米粉生产(R，R)-2，3-丁二醇

【目的】对多粘类芽孢杆菌Paenibacillus polymyxa的玉米粉同步糖化发酵工艺进行优化,以获得低成本、高效的(R,R)-2,3-丁二醇生产技术。【方法】研究玉米粉浓度、氮源种类和氮源浓度对菌体生长、耗糖能力以及(R,R)-2,3-丁二醇产量、产率、得率和转化率的影响,并在此基础上进一步考察培养基中其它成分对(R,R)-2,3-丁二醇发酵的影响。【结果】优化后的培养基组分为玉米干粉140g/L,酵母粉30g/L,Na_2HPO_4 3g/L,KH_2PO_43g/L,(NH_4)2SO_42g/L,MgSO_40.8g/L,微量元素溶液2mL/L。使用优化后的培养基进行同步糖化发酵,发酵50h后(R,R)-2,3-丁二醇产量达到56.28g/L(光学纯度为98.3%),对葡萄糖的得率为0.44g/g,产率为1.13g/(L·h)。【结论】(R,R)-2,3-丁二醇生产技术低价高效,可为其工业化生产提供参考。