糖肾地黄汤通过调控lncRNA-ARAP1/miR-25-3p/SGLT2轴延缓糖尿病肾病进展的机制研究

目的 探究糖肾地黄汤通过调控lncRNA-ARAP1/miR-25-3p/SGLT2轴延缓糖尿病肾病进展的机制。方法 用小鼠单侧肾切除+腹腔注射链脲佐菌素(Streptozotocin, STZ)诱导糖尿病肾病(Diabetic nephropathy, DN)模型,选择糖尿病肾病小鼠模型组共45只小鼠,雌性CBA/J 30只,雄性DBA/2 15只,另选正常健康小鼠10只作为正常对照组。将造模的糖尿病肾病小鼠分为模型组、糖肾地黄汤高剂量组(TSDHDHD组)、糖肾地黄汤中剂量组(TSDHDMD组)、糖肾地黄汤低剂量组(TSDHDLD组),每组10只。HE染色检测小鼠的病理学变化,应用全自动生化分析仪对所获得小鼠血清空腹血糖(Fasting blood glucose, FBG),甘油三酯(Triglyceride, TG),胆固醇(Cholesterol, TC)水平,RT-PCR法分析ARAP1、miR-25-3p、SGLT2、Bax/Bcl-2mRNA的表达,免疫印迹法(Westernblot, Wb)分析ARAP1、miR-25-3p、SGLT2、Bax/Bcl-2的蛋白表达。采用SPSS 23.0统计软件。结果 对照组中细胞排列致密整齐、完整,存在少量脂肪细胞(P>0.05);与对照组比较,模型组细胞结构较为散乱,且由稀疏变细,近端脂肪细胞数目增多,差异存在统计学意义(P<0.05);相比模型组,各剂量组糖肾地黄汤脂肪细胞数目下降,比较存在统计学差异(P<0.05)。与对照组相比,模型组、不同剂量糖肾地黄汤组油红O染色镜下IOD表达明显升高(P<0.05);与模型组相比,不同剂量糖肾地黄汤组油红O染色镜下IOD表达降低(P<0.05);与中、低剂量糖肾地黄汤组相比,高剂量糖肾地黄汤组油红O染色镜下IOD表达降低(P<0.05)。治疗前与对照组相比,模型组、不同剂量糖肾地黄汤组模型组FBG水平升高(P<0.05),模型组与不同剂量糖肾地黄汤组相比无统计学差异(P>0.05);与治疗前相比,治疗12周后不同剂量糖肾地黄汤组模型组FBG水平均降低(P<0.05)。与对照组相比,模型组、不同剂量糖肾地黄汤组TG、TC水平明显升高(P<0.05);与模型组相比,不同剂量糖肾地黄汤组TG、TC水平降低(P<0.05);与中、低剂量糖肾地黄汤组相比,高剂量糖肾地黄汤组TG、TC水平降低(P<0.05)。与对照组相比,模型组、不同剂量糖肾地黄汤组ARAP1、miR-25-3p、SGLT2mRNA水平明显升高,Bax/Bcl-2mRNA水平明显降低(P<0.05);与模型组相比,不同剂量糖肾地黄汤组ARAP1、miR-25-3p、SGLT2mRNA水平降低,Bax/Bcl-2mRNA水平明显升高(P<0.05);与中、低剂量糖肾地黄汤组相比,高剂量糖肾地黄汤组ARAP1、miR-25-3p、SGLT2mRNA水平降低,Bax/Bcl-2mRNA水平明显升高(P<0.05)。与对照组相比,模型组、不同剂量糖肾地黄汤组ARAP1、miR-25-3p、SGLT2蛋白表达明显升高,Bax/Bcl-2蛋白表达明显降低(P<0.05);与模型组相比,不同剂量糖肾地黄汤组ARAP1、miR-25-3p、SGLT2水平降低,Bax/Bcl-2蛋白表达明显升高(P<0.05);与中、低剂量糖肾地黄汤组相比,高剂量糖肾地黄汤组ARAP1、miR-25-3p、SGLT2蛋白表达降低,Bax/Bcl-2蛋白表达明显升高(P<0.05)。结论 糖肾地黄汤可能通过调节lncRNA-ARAP1/miR-25-3p/SGLT2轴,从而达到延缓糖尿病肾病进展的目的。

基于IL-6/JAK2/STAT3信号轴研究阳和平喘颗粒调控哮喘大鼠气道重塑作用机制

目的:研究阳和平喘颗粒对哮喘大鼠气道重塑及白细胞介素-6(IL-6)/Janus蛋白酪氨酸激酶2(JAK2)/信号转导和转录活化因子3(STAT3)信号轴在其中的作用机制。方法:选取健康雄性SD大鼠42只,随机数字法分为正常对照组7只与造模组35只,造模组采用卵清蛋白(OVA)联合氢氧化铝腹腔注射2周的方式进行致敏,正常对照组采用等量的生理盐水;2周后将造模组随机分为模型组、阳和平喘高、中、低剂量组和地塞米松组,每组7只;后4周采用OVA雾化+灌胃的方式进行激发和治疗,阳和平喘高中低组每日分别予以15.48、7.74、3.87 g/kg阳和平喘颗粒灌胃,地塞米松组予以0.0625 mg/kg地塞米松进行灌胃,其余组灌胃等量生理盐水。HE、PAS、Masson染色观察大鼠肺组织病理学变化;ELISA检测大鼠血清中IL-6、IL-23、IL-17A水平;Western blot检测肺组织中JAK-2、P-JAK2、STAT3、P-STAT3蛋白表达量;qRT-PCR检测大鼠肺组织中IL-6、JAK2、STAT3的mRNA水平。结果:与正常对照组比较,模型组大鼠肺组织有大量炎性细胞浸润,杯状细胞增生、上皮下胶原纤维沉积、气道上皮增厚较为明显;血清中IL-6、IL-23、IL-17A水平显著升高(P<0.01),肺组织JAK-2、P-JAK2、STAT3、P-STAT3的蛋白表达量和IL-6、JAK2、STAT3的mRNA表达水平显著升高(P<0.01);与模型组比较,各给药组炎性细胞浸润、杯状细胞增生、上皮下胶原纤维沉积、气道上皮增厚程度明显减轻,血清中IL-6、IL-23、IL-17A水平显著降低(P<0.01),肺组织JAK-2、P-JAK2、STAT3、P-STAT3的蛋白表达量和IL-6、JAK2、STAT3的mRNA水平显著降低(P<0.01)。结论:阳和平喘颗粒可明显缓解哮喘大鼠气道重塑,其机制可能是通过抑制IL-6/JAK2/STAT3信号轴发挥作用。

环状RNA hsa_circ_0003221靶向miR-139-3p/IGF2BP3轴调控口腔鳞癌细胞增殖和凋亡的分子机制

目的:探讨环状RNA hsa_circ_0003221(circPTK2)靶向微小RNA(miR)-139-3p/胰岛素样生长因子2 mRNA结合蛋白3(IGF2BP3)轴调控口腔鳞癌(OSCC)细胞增殖、凋亡。方法:qRT-PCR检测组织及细胞中circPTK2、miR-139-3p、IGF2BP3 mRNA表达水平;将CAL-27细胞分为5组:sh circPTK2、sh NC、sh circPTK2+miR-139-3p inhibitor、sh circPTK2+inhibitor NC、空白组。分别检测细胞增殖率、凋亡率及相关蛋白、IGF2BP3的表达,并验证miR-139-3p与circPTK2、IGF2BP3的靶向关系。结果:miR-139-3p表达在OSCC组织及细胞中降低,circPTK2、IGF2BP3 mRNA表达增加(P<0.05);沉默circPTK2可抑制细胞增殖及circPTK2、IGF2BP3 mRNA及蛋白表达,促进细胞凋亡及miR-139-3p表达(P<0.05);miR-139-3p inhibitor逆转了沉默circPTK2对CAL-27细胞恶性行为的抑制作用(P<0.05)。miR-139-3p分别与circPTK2、IGF 2BP3存在靶向关系。结论:沉默circPTK2可通过miR-139-3p/IGF2BP3轴调控OSCC细胞增殖、凋亡。

LINC00943调节miR-331-3p/KMT2A轴对宫颈癌细胞恶性生物学行为和上皮间质转化的影响

目的探讨LINC00943调节miR-331-3p/KMT2A轴对宫颈癌(CC)细胞恶性生物学行为和上皮间质转化(EMT)的影响。方法检测正常宫颈上皮细胞Ect1/E6E7和人CC细胞系(HeLa、SiHa、C33A、CaSki)中LINC00943表达,筛选HeLa细胞为最佳细胞系。Targetscan检索预测miR-331-3p与LINC00943、KMT2A的结合位点,培养HeLa细胞并分为sh-NC组、sh-LINC00943组、sh-LINC00943+NC inhibitor组、sh-LINC00943+miR-331-3p inhibitor组、miR-NC组、miR-331-3p mimics组、miR-331-3p mimics+pcDNA组、miR-331-3p mimics+KMT2A组,检测各组细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭情况以及EMT相关蛋白的表达水平。结果LINC00943在CC细胞系的HeLa细胞中表达量最高(P<0.05)。双荧光素酶报告实验表明,LINC00943靶向下调miR-331-3p,miR-331-3p靶向下调KMT2A。细胞实验结果显示:沉默LINC00943或过表达miR-331-3p可抑制HeLa细胞增殖、迁移、侵袭和EMT,促进细胞凋亡(P<0.05);抑制miR-331-3p表达或过表达KMT2A可逆转沉默LINC00943或过表达miR-331-3p对HeLa细胞增殖、迁移、侵袭和EMT的抑制作用(P<0.05)。体内肿瘤形成实验证实,沉默LINC00943可显著抑制肿瘤生长和EMT。结论LINC00943在CC细胞中高表达,沉默LINC00943可调节miR-331-3p/KMT2A轴抑制CC细胞增殖、迁移、侵袭和EMT等恶性生物学行为,促进细胞凋亡。

CircACAP2靶向miR-29a-3p/CCNT2轴对缺氧/复氧诱导的心肌细胞损伤的影响

目的:探讨CircACAP2靶向miR-29a-3p/细胞周期蛋白T2(CCNT2)轴对缺氧/复氧(H/R)诱导的心肌细胞损伤的影响。方法:将H9c2细胞分为Control组(正常培养)、si-NC组(转染si-NC)、Model组(建立H/R模型)、si-CircACAP2组(转染si-CircACAP2)、si-CircACAP2+inhibitor-NC组(si-CircACAP2和inhibitor-NC共转染)、si-CircACAP2+miR-29a-3p inhibitor组(si-CircACAP2和miR-29a-3p inhibitor共转染);实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测H9c2细胞中CircACAP2、miR-29a-3p的表达水平;四唑盐(MTT)法检测H9c2细胞活力;流式细胞仪检测H9c2细胞凋亡;单丹磺酰尸胺(MDC)染色法检测H9c2细胞自噬;乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒检测H9c2细胞上清中LDH、MDA、SOD水平,DCFH-DA荧光探针法检测细胞内活性氧(ROS)水平;蛋白质免疫印迹法(Western Blot)检测增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞凋亡蛋白[B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)]、自噬相关蛋白(Beclin-1、P62)及CCNT2的表达;双荧光素酶报告检测CircACAP2对miR-29a-3p的靶向关系和miR-29a-3p对CCNT2的靶向关系。结果:与Control组比较,Model组H9c2细胞中CircACAP2表达、凋亡率、自噬囊泡数、LDH释放率、MDA、ROS水平、Bax、Beclin-1、CCNT2蛋白表达升高,miR-29a-3p表达、OD490值、SOD活性、PCNA、Bcl-2、P62蛋白表达降低(P<0.05);与Model组比较,si-CircACAP2组H9c2细胞中CircACAP2表达、凋亡率、自噬囊泡数、LDH释放率、MDA、ROS水平、Bax、Beclin-1、CCNT2蛋白表达降低,miR-29a-3p表达、OD490值、SOD活性、PCNA、Bcl-2、P62蛋白表达升高(P<0.05);与si-CircACAP2组比较,si-CircACAP2+miR-29a-3p inhibitor组H9c2细胞中CircACAP2表达差异无统计学意义(P>0.05),凋亡率、自噬囊泡数、LDH释放率、MDA、ROS水平、Bax、Beclin-1、CCNT2蛋白表达升高,miR-29a-3p表达、OD490值、SOD活性、PCNA、Bcl-2、P62蛋白表达降低(P<0.05);CircACAP2靶向调控miR-29a-3p的表达,miR-29a-3p靶向负调控CCNT2的表达。结论:敲低CircACAP2可能通过靶向miR-29a-3p来下调CCNT2表达,进而抑制H/R诱导的H9c2细胞凋亡、自噬能力及氧化应激,促进细胞增殖,发挥保护作用。

高迁移率族蛋白B1通过激活JAK2/STAT3轴加重神经性疼痛

目的 探讨高迁移率族蛋白B1(high mobility group protein B1,HMGB1)加重神经性疼痛的作用机制。方法 在脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)激活的BV-2细胞中干扰HMGB1表达,检测细胞凋亡、炎症因子分泌,以及JAK2和STAT3蛋白的磷酸化水平。检测LPS激活的BV-2细胞中JAK2和STAT3蛋白的磷酸化水平,并引入JAK2抑制剂探究JAK2/STAT3轴阻断对细胞的影响。建立HMGB1敲低的脊神经结扎(spinal nerve ligation, SNL)大鼠模型,检测脊髓组织中通路蛋白表达和炎症因子分泌,评估SNL大鼠的机械痛敏阈值和热痛敏阈值。结果 LPS处理的BV-2细胞中HMGB1表达上调,干扰HMGB1表达显著抑制细胞凋亡和炎症反应。LPS处理激活JAK2/STAT3轴,且JAK2/STAT3轴激活是由HMGB1表达上调介导的。在SNL大鼠模型中,脊髓组织中HMGB1和通路蛋白表达增加,炎症反应加重,机械痛敏阈值和热痛敏阈值均降低。通过敲低HMGB1表达,观察到HMGB1和通路蛋白的表达下调,炎症减轻,神经性疼痛缓解。结论 HMGB1通过激活JAK2/STAT3轴加重神经性疼痛。

P2X7受体/NLRP3轴对痛风急性发作的调控作用机制研究

目的 探究P2X7受体/NLRP3轴在痛风急性发作小鼠模型中的调控作用机制。方法 将C57小鼠随机分为5组:对照组(注射生理盐水,8只)、模型组(构建痛风小鼠模型,8只)、C组为NLRP3抑制剂组(模型动物鞘内注射NLRP3抑制剂,8只)、D组为P2X7抑制剂组(模型动物鞘内注射P2X7抑制剂,8只)、E组为P2X7抑制剂+NLRP3激活剂组(模型动物鞘内注射P2X7抑制剂+NLRP3激活剂组,8只)。造模结束称质量后处死小鼠,取各组小鼠的静脉血和肝肾组织。使用ELISA试剂盒检测促炎因子IL-1β、IL-6、TNF-α表达情况;Western blot检测小鼠肠组织中NLRP3、IL-1β、ASC、Caspase-1、P2X7相关蛋白的表达情况。结果 与对照组比较,模型组小鼠IL-1β、IL-6、TNF-α表达提高(P <0.05),NLRP3、ASC、Caspase-1、P2X7蛋白表达水平增加(P <0.05);与模型组比较,抑制NLRP3表达,IL-1β、IL-6、TNF-α表达降低(P <0.05);与模型组比较,抑制P2X7表达,IL-1β、IL-6、TNF-α、P2X7与NLRP3的表达降低(P <0.05);与模型组比较,抑制P2X7表达,同时过表达NLRP3,IL-1β、IL-6、TNF-α表达无统计学意义(P> 0.05);NLRP3、ASC、Caspase-1降低,P2X7表达增加(P <0.05)。结论 P2X7受体/NLRP3轴能够促进痛风急性发作小鼠模型的炎症作用,可作为药物研发的重要靶点,对疾病的治疗具有参考意义。

LncRNA HCP5调节miR-27b-3p/H2AFZ轴对口腔鳞状细胞癌增殖侵袭迁移的机制研究

目的:探讨长链非编码RNA(LncRNA)人类白细胞抗原复合物P5(HCP5)通过调节微小RNA(miR)-27b-3p/H2A组蛋白家族成员Z(H2AFZ)轴对口腔鳞状细胞癌(OSCC)增殖、侵袭、迁移的影响。方法:收集2021年2月至2022年2月在本院行手术治疗的48例OSCC患者癌组织及邻近癌旁组织、OSCC细胞系(Tca-811、SCC-9、SCC-25、HN4)及人正常口腔角质形成细胞(hNOK),检测LncRNA HCP5、miR-27b-3p、H2AFZ mRNA表达水平;取对数生长期Tca-811细胞,分为对照组、小干扰RNA阴性对照(si NC)组、干扰HCP5表达(si HCP5)组、si HCP5+抑制物阴性对照(inhibitor NC)组、si HCP5+miR-27b-3p抑制物(miR-27b-3p inhibitor)组。双荧光素酶验证LncRNA HCP5与miR-27b-3p、miR-27b-3p与H2AFZ的靶向关系;qRT-PCR检测LncRNA HCP5、miR-27b-3p、H2AFZ mRNA表达水平;流式细胞仪及MTT法检测Tca-811细胞凋亡及增殖变化;Transwell实验检测细胞侵袭、迁移变化;Western blot检测细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、活化型半胱天冬酶3(cleaved caspase-3)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、H2AFZ蛋白表达。结果:与hNOK细胞和癌旁组织比较,OSCC细胞和组织中LncRNA HCP5、H2AFZ mRNA表达升高,miR-27b-3p表达下降(P<0.05)。miR-27b-3p与LncRNA HCP5、H2AFZ均存在靶向关系。si HCP5组细胞凋亡率、cleaved caspase-3、miR-27b-3p表达较si NC组、对照组升高(P<0.05),OD570(24h、48h)、侵袭、迁移细胞数及CyclinD1、MMP-2、HCP5、H2AFZ表达下降(P<0.05);抑制miR-27b-3p表达逆转了干扰HCP5对Tca-811细胞恶性行为的抑制作用(P<0.05)。结论:干扰LncRNA HCP5可通过靶向上调miR-27b-3p、抑制H2AFZ表达,进而抑制OSCC的增殖、侵袭、迁移。

参附注射液调控CMPK2/NLRP3轴对心脏骤停后心肌细胞炎症反应的影响

目的:探讨心脏骤停(CA)后CMPK2/NLRP3轴对炎症反应的发生及参附注射液的调节机制。方法:使用随机数字法,随机选取20只大鼠作为空白对照组(BC组),另外将待进行制备模型的大鼠随机分为3组,假手术组(SO组)、正常复苏组(NR组)、参附组(SF组),每组20只。空白对照组不进行任何操作;假手术组不进行心脏骤停,每日注射生理盐水;正常复苏组在心脏骤停及复苏后每日注射生理盐水;参附组在心脏骤停时开始注射参附注射液,并在复苏后每日继续注射参附注射液。观察复苏后24 h及72 h各组心率(HR)、平均动脉压(MAP)、心尖组织HE染色情况,并使用qRT-PCR技术检测各组CMPK2、NLRP3、caspase-1、IL-1β相关mRNA表达情况。结果:24 h时NR组较SO组和SF组的MAP降低(P<0.05)。HE染色可见24 h时NR组及SF组心肌细胞部分破裂,炎性细胞浸润,72 h时,NR组及SF组细胞水肿较24 h明显减轻,细胞间隙仍可见部分炎性细胞存在。qRT-PCR发现,复苏后24 h, NR组、SF组较BC组和SO组的CMPK2、NLRP3、caspase-1、IL-1β相关mRNA表达均明显升高(P<0.05);复苏后72 h, NR组、SF组的NLRP3、caspase-1、IL-1β相关mRNA表达均仍较BC组和SO组高(P<0.05)。结论:CA发生后,CMPK2/NLRP3通路可被激活,并引起一系列炎症反应,使用参附注射液可抑制CMPK2/NLRP3的激活程度,减少炎症反应。

基于3+2轴加工平台激光熔覆的路径生成优化

针对自由曲面零件激光熔覆中路径生成的问题,基于3+2轴的加工平台,借鉴于数控加工中的曲面划分以及刀路生成的方法,通过转化和改善得到了一种生成激光熔覆路径的优化方法。在曲面重建的基础上,首先将自由曲面进行粗分,根据高斯曲率和平均曲率提取自由曲面的局部特征;然后利用两种模糊聚类法将曲面划分成不同的面片,求出其中心点和法向量;在得到的中心点的基础上使用Voronoi图,以确定面片之间的边界;最后在每个面片内生成各自的激光加工路径。利用软件对整个过程做了仿真分析验证,结果表明了这个研究为激光路径规划提供了一个有效的方法,能够在不动用5轴加工的情况下,得到较好的表面质量。

VEGFC/D-VEGFR3/NRP2轴通路相关分子在肿瘤及其淋巴道转移时的变化与意义

本文综述VEGFC/D-VEGFR3/NRP2轴通路相关分子Furin-like酶、CNTN1、Prox1、LYVE-1、Podoplanin、SOX18、SDF1、CXCR4等的结构功能,在不同部位、不同类型、不同发展阶段的肿瘤及其淋巴道转移过程中的变化规律和细胞内外信号系统转导、执行、合成等网络调控特点以及肿瘤细胞-淋巴管内皮细胞相互作用及其生物学行为影响,特别是在肿瘤发生发展和淋巴道转移分子机制中的意义。

基于3轴2联动数控铣床加工曲面的方法

对零件中曲面的数控加工方法进行了阐述,提出利用3轴2联动数控铣床加工曲面的可行性,结合UG软件说明自动编程的方法和注意事项,最后以实例说明了具体方法和步骤,证明了利用3轴2联动数控铣床加工曲面的可行性。

3+2轴数控铣床NC程序后置优化

针对3+2轴数控铣床操作中G21编程和定位五轴编程的不同优点,利用计算机技术优化NC程序后置,使其既能满足编程人员对五轴联动程序编程的工作需求,又能满足3+2轴数控设备使用G21程序的需求,还能满足生产管理者对于计划偏差运行的3+2轴数控设备与五轴联动设备加工零件编码的顺利切换。

基于let-7f-2-3p/SCN1A轴探究加味肾气丸对泻剂结肠大鼠肠动力障碍的影响

目的:探讨加味肾气丸对泻剂结肠大鼠肠动力障碍的影响,并探讨其对let-7f-2-3p/SCN1A轴的调控作用。方法:将40只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、普卢卡必利组、加味肾气丸组;采用生大黄免煎剂混悬液递增灌胃建立泻剂结肠大鼠模型,造模成功后分别给予相应药物。统计大鼠治疗后1 w首粒黑便排出时间;取大鼠结肠标本,HE染色观察大鼠肠黏膜损伤情况;免疫荧光标记观察ICC数量;免疫组化染色检测结肠组织中AChE、NOS表达;采用试剂盒测定大鼠结肠组织SOD、MDA、NO、VIP、SP、Na^(+)-K^(+)-ATPase、Ca^(2+)-ATPase水平;RT-qPCR检测大鼠结肠组织let-7f-2-3p、SCN1A的表达;通过生物信息学在线软件预测let-7f-2-3p与SCN1A互补结合位点,双荧光素酶报告基因实验验证二者靶向关系。结果:与模型组比较,加味肾气丸组首粒黑便排出时间显著缩短(P<0.05),结肠黏膜损伤明显改善,结肠ICC数量显著增加,NO、VIP、MDA水平及NOS表达显著降低,SP、SOD、Na^(+)-K^(+)-ATPase、Ca^(2+)-ATPase水平及AChE表达显著升高,let-7f-2-3p表达显著降低,SCN1A表达显著升高(P<0.05或P<0.01)。双荧光素酶报告实验证实SCN1A是let-7f-2-3p的靶向调控分子。结论:加味肾气丸可能通过let-7f-2-3p/SCN1A轴缓解肠动力障碍,进而对泻剂结肠大鼠产生保护作用。

黄芩素通过miR-410/JAK2/STAT3轴对宫颈癌SiHa细胞增殖、侵袭及上皮间质转化的影响

目的探讨黄芩素对宫颈癌SiHa细胞增殖、侵袭和上皮间质转化(EMT)的影响,以及是否通过miR⁃410/Janus激酶2(JAK2)/信号转导和转录激活子3(STAT3)来实现。方法不同浓度黄芩素处理SiHa细胞,MTT法、流式细胞仪和Transwell法分别检测细胞存活率、凋亡率和侵袭能力,蛋白印迹法检测EMT相关蛋白上皮钙黏蛋白(E⁃cad)、神经钙黏蛋白(N⁃cad)和波形蛋白(Vimentin);SiHa细胞分为对照组、NC组、miR⁃410 inhibitor组和inhibitor+黄芩素组,qRT⁃PCR法检测miR⁃410水平,蛋白印迹法检测p⁃JAK2和p⁃STAT3蛋白相对表达量。结果SiHa细胞存活率、侵袭能力以及N⁃cad和Vimentin蛋白表达随黄芩素浓度升高而降低,细胞凋亡率和E⁃cad蛋白表达随黄芩素浓度升高而升高(P<0.05);inhibitor+黄芩素组p⁃JAK2和p⁃STAT3蛋白表达低于miR⁃410 inhibitor组(P<0.05)。结论黄芩素抑制宫颈癌SiHa细胞增殖、侵袭和EMT,其可能通过调节miR⁃410/JAK2/STAT3信号轴实现。

汽车覆盖件冲压模的3+2轴加工

分析总结了汽车覆盖件冲压模的加工特点,并举实例说明3+2轴加工的详细过程。

MTA2对前列腺癌预后的预测价值及在癌转移过程中的作用

目的探讨转移相关蛋白2(MTA2)对前列腺癌预后的预测价值及在癌转移过程中的作用。方法收集空军军医大学第一附属医院2018年1月~2020年6月收治的50例前列腺癌患者的癌组织及配对癌旁组织样本用于免疫组织化学分析。根据MTA2蛋白的表达水平将样本分为两组,染色评分≥4为高表达组,<4为低表达组。对人前列腺癌细胞系(PC-3)转染shMTA2(MTA2-shRNA-pLKO.1)来沉默MTA2作为shMTA2组,转染Luc-shRNA-pLKO.1的细胞作为阴性对照组(shNC组),未转染的细胞作为空白对照组(control组)。通过MTT法检测细胞活力,Transwells实验进行体外迁移和侵袭分析。通过qRT-PCR或Western Blot检测细胞中MTA2、Eotaxin-1、CCR3、p-ERK1/2、t-ERK1/2和MMP-3的表达。结果前列腺癌组织中MTA2的染色评分显著高于癌旁组织(5.16±0.87 vs 2.34±0.39,t=9.221,P<0.001)。低表达组患者中出现淋巴结转移率为14.29%(2/14),高表达组患者中出现淋巴结转移率为52.78%(19/36),两组比较差异有统计学意义(χ^(2)=6.131,P=0.013)。与低表达组相比,高表达组患者的生存时间更长(χ^(2)=4.756,P=0.029)。与空白对照组相比,shMTA2组的细胞活力降低了56.87%(P<0.001),细胞迁移数量降低了65.80%(P<0.001),细胞侵袭数量降低了56.35%(P<0.001),Eotaxin-1、CCR3、p-ERK1/2和MMP-3的蛋白相对表达量依次降低了76.03%、69.12%、72.32%和54.67%(P<0.001)。结论前列腺癌组织中MTA2的表达水平升高且与患者的预后有关,沉默MTA2可降低前列腺癌细胞的迁移和侵袭能力,并抑制Eotaxin-CCR3-ERK1/2-MMP-3轴。

ATP/P2X4/NLRP3信号轴在脑出血炎症损伤中的作用机制研究

目的探讨三磷酸腺苷(ATP)/腺嘌呤核苷酸受体2X-4受体(P2X4)/NOD样受体蛋白-3(NLRP3)信号轴在脑出血炎症损伤中的作用机制,为寻找可能的干预措施提供实验依据。方法选取48只8周龄,体重18~22 g的C57BL/6雄性小鼠,构建脑出血模型,分为模型组、5-BDBD干预组、5′-CTP组和假手术组、5-BDBD干预组、5′-CTP组分别给予腹腔注射P2X4受体阻断剂5-BDBD和激动剂5′-CPT,模型组和假手术组给予等量生理盐水,每组12只。分别于建模成功后第1、3、5、7天应用小鼠神经功能缺损评分(NDS)评估神经功能,干湿重法测量脑含水量;蛋白免疫印迹(Western blot)和实时荧光定量PCR(qRT-PCR)测定ATP、P2X4和NLRP3的蛋白和mRNA表达水平,ELISA测定各组脑组织中白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-8的水平,应用反相高效液相色谱法检测ATP水平。结果与假手术组比较,模型组第1、3、5、7天时的NDS,病灶侧含水量,IL-1β、TNF-α、IL-8、ATP水平,P2X4和NLRP3的蛋白及mRNA表达水平及建模后第7天均明显增加(P<0.05),而与模型组比较,5-BDBD干预组小鼠的上述指标明显降低(P<0.05),5′-CTP干预组则明显增加(P>0.05)。结论ATP/P2X4/NLRP3信号轴参与脑出血炎症损伤过程,阻滞其通路激活可有效改善炎症反应。

SIRT1/EZH2调控RUNX3介导瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖

目的 探究瘢痕疙瘩成纤维细胞异常增殖的可能机制,为治疗瘢痕疙瘩提供可行机制分析。方法 本研究通过Western blot法对瘢痕疙瘩成纤维细胞中SIRT1/EZH2/RUNX3表达情况检测;使用细胞转染技术过表达RUNX3后采用CCK-8及细胞划痕实验检测其对细胞增殖与细胞周期的调控。使用SIRT1抑制剂及敲减EZH2后对细胞周期及细胞增殖情况进行检测。结果 过表达RUNX3可抑制细胞增殖及细胞G1/S期,抑制SIRT1促进细胞增殖与细胞周期的G1/S期。敲减EZH2后促进RUNX3的表达,抑制细胞增殖使细胞G1转向S期进程缩短,同时转染EZH2及抑制SIRT1可逆转这一现象;抑制SIRT1可增加EZH2表达从而抑制RUNX3并促进细胞增殖。结论 SIRT1/EZH2/RUNX3轴可作为调控瘢痕疙瘩异常增殖的一个重要方向。

基于UG的塑料球形阀工艺设计与加工

整体式三通塑料球形阀具有结构紧凑、密封可靠和启闭顺畅等优点。针对整体式球形阀的结构特点及硬聚氯乙烯(UPVC)材料的切削性能,介绍了球形阀毛坯选取、定位与夹紧、刀具及切削用量的选定、辅助制造等整个加工工艺设计。阀体的主要部位采用了UG软件生成3+2轴定向数控程序,在德玛吉机床上完成加工,确保了关键位置的尺寸精度和形位公差,提高了加工效率,为大尺寸球形阀的加工提供了新思路。