miR-3077-5P对3T3-L1前脂肪细胞成脂分化能力的影响

目的观察miR-3077-5P对3T3-L1前脂肪细胞成脂分化能力的影响。方法通过细胞转染技术分别上调和下调3T3-L1前脂肪细胞中的miR-3077-5P表达,将其分为对照(control)组、模拟物(mimics)组及抑制物(inhibitor)组;将各组3T3-L1前脂肪细胞成脂诱导10 d,以逆转录聚合酶链式反应(Reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)法检测其相关成脂基因PPAR-γ和LPL mRNA表达水平,用免疫蛋白印迹(Western Blot,WB)法检测其相关成脂基因PPAR-γ和FABP4蛋白水平;采用油红O染色观察脂滴形成情况并作定量分析。结果成脂诱导10 d,miR-3077-5P mimics组成脂基因PPAR-γ和LPL mRNA的表达水平及PPAR-γ和FABP4蛋白水平均升高,而miR-3077-5P inhibitor组则相反(P均<0. 05);成脂诱导10 d,miR-3077-5P mimics组脂滴形成最大,脂滴形成量存在升高现象,miR-3077-5P inhibitor组脂滴较小且形成量较少(P均<0. 05)。结论 miR-3077-5P对3T3-L1前脂肪细胞成脂分化过程具有促进作用。

2′,3′-双脱氢-2′,3′-双脱氧胸苷(d4T)5′-硫代磷酰氨基酸酯的合成和谱学分析

HIV逆转录酶是治疗艾滋病的有效靶点 ,核苷 -磷酰氨基酸酯是HIV逆转录酶的有效抑制剂 ,但是这类化合物容易在体内被核酸酶水解 .本研究设计合成了对核酸酶具有抵抗作用的 2′ ,3′ 双脱氢 2′ ,3′ 双脱氧胸苷 5′ 硫代磷酰氨基酸酯化合物 ,这类化合物可以有效地透过细胞膜经过细胞激酶的作用 ,进入HIV逆转录酶的作用位点 ,病毒实验表明该类化合物对MT 4细胞具有较好的抗HIV病毒活性 .报道了 2′ ,3′ 双脱氢 2′,3′ 双脱氧胸苷 5′ 硫代磷酰氨基酸酯化合物的合成 ,及利用NMR ,IR和ESI

miR-140-5p对前脂肪细胞3T3-L1成脂分化的机制研究

【目的】研究miR-140-5p在前脂肪细胞(3T3-L1)成脂分化过程中的功能及其作用机制。【方法】待3T3-L1细胞汇合度达100%时诱导其成脂分化,收集分化第―1(诱导分化前1 d)、0、1、2、3、5、7天的细胞,用实时荧光定量PCR检测miR-140-5p相对表达量;将miR-140-5p mimics、NC转染3T3-L1细胞并诱导成脂分化,油红O染色观察脂滴形成情况,实时荧光定量PCR检测成脂标志基因CAAT增强子结合蛋白β(C/EBPβ)、CAAT增强子结合蛋白δ(C/EBPδ)与过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)相对表达量;利用miRandn和TargetScan在线网站预测miR-140-5p的靶基因;通过对比序列差异分析P300/CBP相关因子(PCAF)的3′-UTR序列中与miR-140-5p的结合位点序列在小鼠、人等不同物种间的序列保守性。将miR-140-5p mimics、inhibitor、NC转染3T3-L1细胞并诱导成脂分化,实时荧光定量PCR检测miR-140-5p、PCAF相对表达量,Western blotting检测PCAF蛋白水平;将PEGFP-N1-PCAF、PEGFP-N1转染3T3-L1细胞,油红O染色观察脂滴形成情况,实时荧光定量PCR检测PCAF、C/EBPδ、PPARγ基因相对表达量,Western blotting检测C/EBPβ、C/EBPδ、PPARγ蛋白表达水平。将3条PCAF siRNA(siRNA1、siRNA2、siRNA3)、siRNA NC转染3T3-L1细胞,Western blotting法检测PCAF蛋白水平,筛选最佳PCAF siRNA。将最佳PCAF siRNA和siRNA NC转染3T3-L1细胞,油红O染色观察脂滴形成情况,实时荧光定量PCR检测PCAF、C/EBPβ、C/EBPδ与PPARγ基因相对表达量,Western blotting检测C/EBPβ、PPARγ蛋白表达水平。分别将miR-140-5p mimics、NC与PGL0-PCAF 3′-UTR载体和PGLO空载体共转染293T细胞,用双荧光素酶报告试验检测miR-140-5p与PCAF的靶向关系。【结果】在诱导3T3-L1细胞成脂分化过程中,与诱导分化前1 d相比,在细胞成脂分化第1、2天时miR-140-5p相对表达量极显著升高(P<0.01),在分化第3天时显著升高(P<0.05)。与NC组相比,miR-140-5p mimics组脂滴数量明显增加,miR-140-5p mimics组成脂标志基因C/EBPδ与PPARγ相对表达量均极显著升高(P<0.01)。靶基因预测结果表明,miR-140-5p与PCAF存在预期结合位点;保守性分析结果表明,靶基因PCAF结合位点序列在不同物种间具有高度保守性。与NC组相比,mimics组miR-140-5p和PCAF相对表达量均极显著升高(P<0.01),inhibitor组miR-140-5p极显著降低(P<0.01)、PCAF显著降低(P<0.05),PCAF蛋白表达量显著升高(P<0.05)。与PEGFP-N1组相比,PEGFP-N1-PCAF组脂滴数量增多,PCAF、PPARγ基因相对表达量和C/EBPβ、C/EBPδ蛋白水平极显著升高(P<0.01),PPARγ蛋白水平显著升高(P<0.05)。PCAF siRNA1、siRNA2与siRNA3均极显著抑制PCAF蛋白的表达(P<0.01),siRNA3的效果最显著,因此选择siRNA3进行后续试验。与NC组相比,PCAF siRNA3组3T3-L1细胞中脂滴数量较少,PCAF、C/EBPβ、C/EBPδ、PPARγ基因相对表达量和C/EBPβ蛋白水平均极显著下降(P<0.01)。双荧光素酶报告试验结果显示,miR-140-5p与PCAF基因之间无靶标关系。【结论】内源性miR-140-5p在3T3-L1细胞分化过程中表达升高,miR-140-5p可能通过间接上调PCAF基因表达促进3T3-L1细胞成脂分化。

建立人肝微粒体-小鼠3T3成纤维细胞模型评价5-羟基雷公藤内酯醇代谢产物的细胞毒性

目的:以环磷酰胺(cyclophosphamide,CPA)和他莫昔芬(tamoxifen,TMX)为模型药物,建立人肝微粒体-小鼠3T3成纤维细胞模型,并用该模型评价5-羟基雷公藤内酯醇(T8)代谢产物的细胞毒性。方法:采用人肝微粒体(加或不加NADPH)-小鼠3T3成纤维细胞模型,测定吸光度(A值)并计算细胞孵育液的EC50值和EC50shift,以EC50 shift评价代谢产物毒性。结果:模型药物CPA和TMX及创新药物T8的EC50 shift分别为0.34、>4.7和1.2,表明CPA和TMX的代谢物会分别增加和降低细胞毒性,而T8代谢产物不影响或稍许降低对细胞的毒性。结论:本实验成功建立人肝微粒体-小鼠3T3成纤维细胞模型,这为T8进入体内的安全性提供了一定依据,也为候选化合物开发初期在不合成代谢物的情况下初步评价代谢物的细胞毒性提供了一种体外方法。

3,3′5′-三碘甲状腺原氨酸(rT_3)放射免疫分析的临床应用

机体血液中除外T3还存在着另外一种3，3’，5’-三碘甲状腺原氨酸(Reverse Triiodothyronine．简称rT3)，又称反三碘甲状腺原氨酸(简称反T3）。1956年Rocher已发现大鼠血液中有rT3物质的存在，由于rT3的生物活性很低，临床上几乎没有证实其生物活性作用。因此，

MiR-324-5p可能通过靶向淀粉样前体蛋白抑制棕榈酸诱导的3T3-L1脂肪细胞凋亡

miRNAs是一种非编码的小RNA,通过靶向mRNA的3′UTR调控基因的转录后翻译。为明确miR-324-5p对棕榈酸诱导的3T3-L1脂肪细胞凋亡的作用和机制,体外培养3T3-L1脂肪细胞,利用棕榈酸诱导细胞凋亡的同时过表达或抑制miR-324-5p,通过Annexin-V/FITC染色、RT-qPCR等方法检测miR-324-5p对3T3-L1脂肪细胞凋亡的作用。通过在线软件预测miR-324-5p的靶基因并进行验证。结果显示,过表达miR-324-5p能够显著抑制凋亡相关基因BCL-2相关X蛋白(BCL2-associated X protein, Bax)和胱天蛋白酶3(caspase3)的表达水平(P<0.05);而抑制miR-324-5p后能够显著促进这些基因的表达(P<0.05);靶基因预测及验证结果表明,miR-324-5p能够显著降低淀粉样前体蛋白(amyloid precursor protein, APP)的表达水平(P<0.05)。本研究认为,miR-324-5p可能通过靶定APP抑制棕榈酸诱导的3T3-L1脂肪细胞凋亡。

血清3,5,3’-三碘甲腺原氨酸酶联免疫分析试剂盒的研制

以辣根过氧化物酶标记链亲合素（SA）,T3抗体包被微孔,T3生物素化,四甲基联苯胺（TMB）为底物,建立了3,5,3’-三碘甲腺原氨酸（T3）生物素-亲合素酶联免疫分析（T3-BA-EL1SA）方法。结果显示,本方法分析灵敏度为0.2μg/L,批内、批间变异系数分别为7.1%－8.3%和6.5%－10.5%,回收率为98.1%－107.2%;高浓度T3血清样品系列倍比稀释后,测定值与稀释度呈线性相关,相关系数为0.995 7。本试剂盒操作简便、快速,适用于临床检测和科研应用。

模拟失重下miR-138-5p靶向SIRT1负调控成骨细胞分化的研究

背景机械刺激对于维持骨骼重塑和平衡至关重要,机械卸载引起的骨骼系统损伤是长期航天飞行的主要局限性之一。研究表明微小RNA(miRNA)可通过调控与骨形成相关的基因和信号通路调节成骨细胞功能。目的探究模拟失重下mi R-138-5p/SIRT1信号通路对成骨细胞分化的影响,为失重性骨质丢失的在体靶向干预寻求治疗靶点。方法利用2D回转器对前成骨细胞MC3T3-E1进行模拟失重处理,验证沉默信息调节因子2相关酶I(SIRT1)及miR-138-5p在模拟失重下的表达发生变化;向MC3T3-E1细胞中转染miR-138-5p mimic、inhibitor、pcDNA3.1(+)-SIRT1及相应的阴性对照进行功能验证;向MC3T3-E1细胞中转染inhibitor-NC、miR-138-5p inhibitor后模拟失重处理48 h进行挽救实验;采用qRT-PCR方法检测mi RNA及SIRT1、Runx2、Osx的mRNA表达变化;采用Western blot方法检测SIRT1、Runx2、Osx的蛋白表达变化;采用碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性检测和ALP染色方法检测成骨细胞分化能力的变化。结果模拟失重下,MC3T3-E1细胞中Runx2、SIRT1的mRNA及蛋白均表达下降(P<0.01或P<0.05);转染miR-138-5p mimic和inhibitor后,qRT-PCR、Western blot、ALP活性及ALP染色检测均表明过表达miR-138-5p能够显著抑制成骨细胞分化,而抑制miR-138-5p能够促进MC3T3-E1细胞分化(P<0.05或P<0.01)。miR-138-5p mimic与pEX-SIRT1共转染实验表明miR-138-5p通过抑制SIRT1负调控成骨细胞分化(P<0.01)。此外,抑制miR-138-5p可以降低模拟失重对成骨细胞的分化抑制,表现为促进SIRT1、Runx2、Osx mRNA和蛋白表达(P<0.01)。结论 SIRT1表达在模拟失重下下调,而miR-138-5p表达上调;miR-138-5p通过直接靶向SIRT1调控Runx2、Osx的mRNA及蛋白表达,抑制成骨细胞分化;此外,抑制miR-138-5p/SIRT1通路可以部分降低模拟失重对成骨细胞的分化抑制,miR-138-5p可以作为潜在的干预靶点。

miR-202-5p通过下调NFATc3的表达抑制口腔鳞状细胞癌细胞的生长、迁移和侵袭

目的:探讨miR-202-5p对口腔鳞状细胞癌(oral squamous carcinoma,OSCC)细胞生长、集落形成、迁移和侵袭的影响及其可能的机制。方法:通过qPCR法检测OSCC细胞系(Tca8113和SCC-4)和口腔角质细胞HOK中miR-202-5p和T细胞核因子c3(nuclear factor of activated T-cells isoform c3,NFATc3)mRNA的表达水平;将miR-202-5p mimic或/和NFATc3过表达质粒转染入Tca8113和SCC-4细胞,用MTT和集落形成实验检测转染对细胞增殖的影响,划痕伤口愈合实验和Transwell实验检测转染对细胞迁移和侵袭的影响,用Western blotting实验检测转染对NFATc3蛋白表达的影响;通过双荧光素酶报告基因实验验证miR-202-5p对候选靶基因NFATc3的直接调控作用。结果:与正常口腔角质细胞HOK相比,miR-202-5p在OSCC细胞Tca8113和SCC-4中呈低表达(均P<0.01),NFATc3 m RNA和蛋白质表达显著升高(P<0.01)。在Tca8113细胞和SCC-4细胞中,过表达miR-202-5p可显著抑制细胞生长、集落形成、迁移、侵袭以及细胞中NFATc3表达(均P<0.01)。NFATc3被证实是miR-202-5p的靶基因,过表达NFATc3能逆转miR-202-5p对OSCC细胞生长、迁移和侵袭的抑制作用。结论:miR-202-5p通过下调NFATc3表达发挥其肿瘤抑制功能,导致OSCC细胞的生长、迁移和侵袭受到抑制。

miR-129-5p调控MC3T3-E1细胞成骨分化的体外研究

背景微小RNA(microRNA,miR)是一种非编码的小分子化合物,在成骨分化等生命过程中发挥重要调控作用。目的探讨miR-129-5p对小鼠成骨前体细胞(preosteoblast cell line,MC3T3-E1)成骨分化功能的影响及相关作用机制。方法体外培养MC3T3-E1细胞后,分别转染慢病毒载体(miR-control、miR-129-5p mimic和miR-129-5p inhibitor),以过表达或敲低细胞miR-129-5p水平。成骨诱导分化培养细胞后,使用碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色试剂盒检测碱性磷酸酶的活性,茜素红(alizarin red staining,ARS)染色观察钙结节形成情况,以检测细胞成骨分化水平。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法和Western blot法检测成骨分化基因Runx2和OCN的mRNA及蛋白表达水平。生物信息学方法预测mi R-129-5p靶基因,并用双荧光素酶基因报告实验验证。结果转染慢病毒载体的MC3T3-E1细胞进行成骨诱导分化后,与mi R-control组相比,转染miR-129-5p mimic的MC3T3-E1细胞7 d后碱性磷酸酶染色增强,成骨早期标志物Runx2表达增加,14 d后成骨晚期标志物OCN表达升高,21 d后茜素红染色显示钙化结节较大且量多(P<0.05)。而转染miR-129-5p inhibitor慢病毒的MC3T3-E1细胞与miR-control组相比,碱性磷酸酶活性低,钙结节较小且少,成骨标志物Runx2和OCN表达下降(P<0.05)。通过Targetscan网站(生物信息分析)预测miR-129-5p的靶基因为BMP通路负向调控蛋白Smad6;双荧光素酶报告实验验证Smad6为靶基因,过表达miR-129-5p后Smad6蛋白表达水平下调。结论 miR-129-5p通过靶向抑制Smad6的表达对MC3T3-E1细胞成骨分化产生促进作用。

miR-335-5p/ADCY3诱导的再生障碍性贫血患者免疫异常的机制研究

目的:探究miR-335-5p/ADCY3失衡对获得性再生障碍性贫血(AA)患者淋巴细胞功能的影响。方法:采集AA患者外周血标本50例,其中重型再生障碍性贫血(SAA)38例,非重型再生障碍性贫血(NSAA)12例,同时采集健康志愿者(HC)外周血标本22例。标本分离单个核细胞(PBMNC)后,用RT-PCR检测miR-335-5p及ADCY3 mRNA的表达量。用RNAimax转染试剂,将阴性对照miR-335-5p及miR-335-5p mimic分别转染至AA患者的PBMNC,流式细胞术检测CD4^+T和CD8^+T细胞增殖、活化及分泌细胞因子的能力。应用双荧光素酶报告基因系统验证miR-335-5p与靶基因的靶向关系。结果:同HC来源的PBMNC(HC-PBMNC)相比,SAA和NSAA来源的PBMNC中miR-335-5p的表达量均明显降低(0.08±0.01 vs 0.74±0.10,P<0.01^**;0.17±0.02 vs 0.74±0.10,P<0.01^**)。而且,SAA来源的PBMNC中miR-335-5p的表达量显著低于NSAA(P<0.01^**)。与对照组相比,体外上调miR-335-5p的表达,AA来源的PBMNC(AA-PBMNC)中,CD4+T和CD8+T细胞增殖能力均明显降低(P<0.05^*和P<0.05^*)。而且上调miR-335-5p的表达可显著抑制AA-PBMNC中CD4^+和CD8^+T细胞的活化(P<0.01^**和P<0.01^**)。此外,上调AA-PBMNC中,miR-335-5p的表达还可明显降低CD4^+TNFα^+T细胞、CD8^+IFNγ^+T细胞和CD8^+TNFα^+T细胞的比例(P<0.01、P<0.05和P<0.05)。靶基因筛查显示,ADCY3在AA-PBMNC中的表达量明显高于HC-PBMNC(1.70±0.15 vs 0.76±0.12,P<0.001)。而且,miR-335-5p可显著抑制ADCY33′UTR野生型质粒的荧光素酶活性(P<0.05)。结论:MiR-335-5p在AA-PBMNC中显著低表达,且与疾病严重程度相关。体外上调AA-PBMNC中miR-335-5p的表达量可纠正患者免疫异常状态。这些改变可能与靶基因ADCY3的抑制增强有关。

API RP 5L3—2014与SY/T 6476—2013中关于落锤撕裂试验有关规定的对比

对比了API RP 5L3—2014与SY/T 6476—2013标准中落锤撕裂试验的适用范围、试样制备、设备参数、试验温度和试样评价等主要技术要求。分析认为:这两个标准在落锤撕裂试验取样位置、试验尺寸、试样保温条件和试验结果评定方面存在较大差异;API RP 5L3—2014只适用于管线钢管,对试样缺口半径尺寸要求较为宽松,保温介质为液体,不接受异常断口的评定;SY/T 6476—2013适用于管线钢管和制管用板卷、钢板,对试样缺口半径要求严格,保温介质为液体或气体,规范性附录B中规定了异常断口的评定方法。

MMP3-11715A/6A位点基因多态性与COPD严重程度的关系

目的探讨MMP2和MMP3基因多态性与COPD易感性的关系。方法用聚合酶链反应限制性片段长度多态性方法检测80例健康人和109例COPD患者MMP2(-735C/T)和MMP3(-1171 5A/6A)各位点等位基因和基因型。结果 MMP2和MMP3基因型及等位基因频率分布在COPD组和对照组间差异均无统计学意义(均P>0.05),但MMP3 6A/6A基因型在Ⅲ～Ⅳ级COPD患者中出现频率较高,与重度、极重度COPD的发病风险相关,OR值为2.677(1.177～6.088)。结论 MMP3(-1171 5A/6A)位点6A/6A基因型可能与重度、极重度COPD的发病风险相关联,MMP2(-735C/T)位点基因多态性与COPD易感性无关。

地榆成分3,3'-二甲氧基逆没食子酸-4-木糖苷对NIH3T3细胞促增殖作用及其机制研究

本文探讨地榆成分3,3'-二甲氧基逆没食子酸-4-木糖苷(3,3'-dimethyl ellagic acid-4-xylycoside,DEAX)促进NIH3T3细胞增殖和迁移的作用及其分子机制。实验采用UPLC-DAD-TOF-MS对受试样品DEAX进行纯度分析和结构验证,然后采用MTS法考察不同DEAX浓度和作用时间对NIH3T3细胞增殖的影响;应用划痕法检测不同浓度的DEAX对NIH3T3细胞迁移能力的影响,并分别使用ELISA和qRT-PCR检测DEAX处理NIH3T3细胞的TGF-β1和I型胶原蛋白的蛋白表达和mRNA表达水平。结果表明DEAX能显著促进NIH3T3细胞的增殖和迁移,提高TGF-β1和I型胶原蛋白mRNA表达及蛋白表达水平。提示DEAX可通过调控TGF-β1和I型胶原蛋白mRNA及蛋白表达水平,以促进NIH3T3细胞增殖和迁移,为阐明地榆促创面愈合的物质基础及其机理提供了实验依据。

5-酮-3-(5’-氨基-3’-偶氮异呋咱)-异呋咱和5,5’-二酮-3,3’-偶氮异呋咱的晶体结构和热稳定性

以二氰胺钠为原料,经环化、偶联、硝化三步反应分别合成了5-酮-3-(5′-氨基-3′-偶氮异呋咱)-异呋咱(BAKIF)和5,5′-二酮-3,3′-偶氮异呋咱(BDKIF)。采用溶剂挥发法从甲醇中得到了BAKIF·2H2O和BDKIF的单晶。利用X-射线单晶衍射技术对它们的单晶结构进行了表征。用DSC-TG研究了它们的热稳定性。采用EXPLO5预测了它们的的爆轰性能。结果表明,BAKIF·2H2O分子在173K下晶体密度为1.645g·cm-3,该晶体属于正交晶系,P212121空间群,晶胞参数为a=4.6661(4)A,b=13.5836(10)A,c=14.8537(10)A,V=941.46(12)A^3,Z=4,μ=0.149mm^-1,F(000)=480。BDKIF分子在173K下晶体密度为1.708g·cm-3,该晶体属于三方晶系,R-3空间群,晶胞参数为a=20.4183(12)A,b=20.4183(12)A,c=4.8017(7)A,V=1733.7(3)A3,Z=9,μ=0.153mm^-1,F(000)=900。5℃·min^-1时,BAKIF和BDKIF的放热峰温度分别为290.01℃和149.75℃。BAKIF的理论爆速和理论爆压分别为7292m·s^-1和21.5GPa,BDKIF的理论爆速和理论爆压分别为7363m·s^-1和20.7GPa,均优于TNT,认为它们是潜在的钝感含能材料。

生物素中间体:四氢-7-乙氧羰基-3,3-五亚甲基-5-硫代-1-戊基-3H,5H-咪唑并[1,5c]噻唑的合成

以正庚醛为起始原料 ,α 溴化后与环己酮、氨、硫氢化钠反应合成 2 ,2 五亚甲基 5 戊基 3 噻唑啉 ,再用三氟化硼催化后 ,与异硫氰基乙酸乙酯的锂衍生物反应合成生物素中间体四氢 7 乙氧羰基 3 ,3 五亚甲基 5 硫代 1 戊基 3H ,5H 咪唑并 [1,5c]噻唑 ,收率达 17 1% ,通过

1,25(OH)2D3通过STAT5抑制Th17细胞分化的调控作用研究

目的研究1.25二羟基维生素D3[1,25(OH)_2D_3]抑制辅助性T细胞17(Th17)的分化与STAT5调控的关系。方法通过分选出的CD4+T细胞,在1,25(OH)_2D_3和/或STAT5抑制剂的作用下,采用ELISA法检测抑制剂处理后细胞培养上清液Th17细胞因子(IL-17A、IL-22)水平的变化;采用细胞免疫荧光技术检测STAT5的磷酸化水平,采用Western blot技术检测STAT5蛋白表达水平。结果 1,25(OH)_2D_3组细胞培养上清IL-17A和IL-22水平(12.5±0.5 ng/ml,48.5±0.9 pg/ml)明显低于对照组(22.7±0.5 ng/ml,73.8±1.9 pg/ml),而STAT5抑制剂组IL-17A和IL-22水平明显升高(33.5±0.7 ng/ml,89.1±1.4 pg/ml),1,25(OH)_2D_3与STAT5抑制剂联合作用细胞IL-17A和IL-22水平(18.5±0.7 ng/ml,54.1±1.6 pg/ml)显著高于1,25(OH)_2D_3组,但低于STAT5抑制剂组,差异有统计学意义(P<0.01);1,25(OH)_2D_3组细胞p-STAT5表达显著强于对照组,1,25(OH)_2D_3联合STAT5抑制剂组p-STAT5表达量低于对照组,而STAT5抑制剂组细胞p-STAT5表达量最低;1,25(OH)_2D_3组STAT5蛋白表达明显升高,而1,25(OH)_2D_3联合STAT5抑制剂组或STAT5抑制剂组STAT5蛋白表达明显降低,以STAT5抑制剂组细胞表达最弱,差异均具有统计学意义(P<0.01)。结论 1,25(OH)_2D_3通过STAT5信号通路能抑制Th17细胞分化。

老年肺心病患者T_(3)、T_(4)、rT_(3)测定的临床价值

甲状腺激开绿灯在内科非甲状腺疾病中的变化，尤其在老年患者中的变化是近年来人们所关注的问题。本文对60例老年慢性肺心病患者作了血清三碘甲状腺原氨酸(T3)，甲状腺素(T4)，及3，3′，5′-三碘甲状腺原氨酸(rT3)测定，并与20例健康老年人和18侧老年冠心病患者比较，报告如下。

四君子汤对胃癌MGC803细胞NFAT5及凋亡因子表达的影响

目的观察四君子汤含药血清对胃癌MGC803细胞活化T细胞核因子5(Nuclear factor of the activated T cell 5,NFAT5)及凋亡因子表达的影响,进一步探讨四君子汤抗肿瘤的作用机制。方法SD大鼠随机分为4组,依次为空白对照组(生理盐水等体积剂量灌胃),四君子汤低剂量组(0.246 g·kg^(-1))、中剂量组(0.492 g·kg^(-1))和高剂量组(0.984 g·kg^(-1)),各组连续灌胃10 d,末次给药1.5 h后,行腹主动脉取血,收集血清,过滤后制备高、中、低剂量四君子汤含药血清。采用细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测各组MGC803细胞增殖水平,流式细胞术检测各组MGC803细胞凋亡率,Real-time PCR法检测各组MGC803细胞B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)及NFAT5 mRNA的表达。结果与空白对照组比较,四君子汤中、高剂量组含药血清在24、48、72 h均能降低细胞增殖能力(P<0.05),且48、72 h抑制效果更为显著。与空白对照组比较,四君子汤中、高剂量组含药血清细胞凋亡率升高(P<0.05)。与空白对照组比较,四君子汤低、中、高剂量组含药血清的Bcl-2 mRNA表达降低,四君子汤低、中、高剂量组含药血清的Caspase-3 mRNA表达升高,四君子汤中、高剂量组含药血清的NFAT5 mRNA表达降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论中、高剂量四君子汤含药血清能够促进Caspase-3表达,抑制NFAT5 mRNA、Bcl-2 mRNA的表达,抑制胃癌MGC803细胞增殖并促进其凋亡发生,发挥抗肿瘤作用。

茶黄素-3,3′-双没食子酸酯对骨质疏松的作用及机制初探

目的:探究茶黄素-3,3′-双没食子酸酯(theaflavin-3,3′-digallate,TF3)对骨质疏松的作用及其机制。方法:建立小鼠去卵巢(ovariectomy,OVX)骨质疏松模型,注射剂量为1 mg/kg和10 mg/kg的TF3,3个月后取股骨进行微型CT(Micro-CT)分析。体外应用过氧化氢(H2O2)建立MC3T3-E1细胞氧化应激模型,并分别加入0、1、10μmol/L的TF3,检测TF3对细胞活性、细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)含量和抗氧化基因表达的影响。结果:Micro-CT分析结果表明,TF3能降低骨质疏松的骨小梁丢失程度,且随TF3的剂量增加,效果越明显。进一步的体外实验结果表明,加入H2O2后,MC3T3-E1的细胞活性明显降低,ROS含量明显增加;而同时加入TF3后,ROS水平明显下降,抗氧化基因Nrf2及其下游的HO-1、CAT表达水平增加,且随TF3浓度增加,效果越明显。结论:TF3可以降低OVX引起的骨丢失程度,其作用可能与TF3具有细胞氧化损伤的保护作用有关。