3,4-二羟基苯乙酮抑制NF-κB核转位减轻脂多糖诱导巨噬细胞炎症反应

目的探讨3,4-二羟基苯乙酮(3,4-DHAP)抑制脂多糖(LPS)诱导小鼠巨噬细胞株(RAW264.7)炎症反应的可能机制。方法常规培养的RAW264.7细胞随机分为正常组(A);LPS组(B);3,4-DHAP组(C)、辛伐他汀组(D)。酶联免疫吸附(ELISA)法检测肿瘤坏死因子(TNF-α)、血管细胞黏附分子(VCAM-1)水平;免疫印迹(Western blot)法检测磷酸化IκB(P-IκB)、总IκB、核因子-κBp65(NF-κBp65)蛋白表达;实时定量荧光聚合酶链式反应(q RT-PCR)法检测IκB mRNA表达。结果 3,4-DHAP显著抑制TNF-α、VCAM-1分泌;抑制IκB蛋白磷酸化;细胞核内NF-κBp65蛋白表达明显减少(P<0.05),抑制了NF-κBp65核转位。结论 3,4-DHAP通过抑制NF-κB核转位,有效抑制LPS诱导RAW264.7细胞炎症反应。

温度变化对天山云杉凋落物3,4-二羟基苯乙酮自毒作用的影响

【目的】在全球气候变暖背景下,检验"自毒作用对天山云杉天然更新障碍温度效应假设",为应对气候变化的天山云杉林保育与可持续经营提供科学依据。【方法】以天山云杉生长季(5～8月)天然林地表层(1～5 cm)土壤昼(光同期)夜(暗同期)平均温度(12℃,4℃)为基准,采用智能环境模拟温度变化对天山云杉凋落物3,4-二羟基苯乙酮(DHAP)自毒作用的影响。【结果】温度≥(14℃,6℃),DHAP处理液浓度≥7.5mM时,显著或极显著抑制天山云杉种子萌发,并对幼苗生长表现出显著的抑制作用。【结论】温度升高会增强DHAP的活性,降低其产生自毒效应的临界浓度,使天山云杉天然更新更易受到自毒作用的影响。

3,4-二羟基苯乙酮胁迫对天山云杉种子萌发过程中内源植物激素含量变化的影响

3,4-二羟基苯乙酮(DHAP)是天山云杉(Picea schrenkiana ssp.tianschanica)叶和凋落物中存在的主要自毒物质,是导致天山云杉林天然更新障碍的原因之一。为了解释自毒物质发生作用的生理机制,该文设计多个浓度梯度的DHAP溶液处理天山云杉种子,以发芽率和发芽势为种子萌发参数,运用反相超高效液相色谱(UPLC)分析技术,检测了种子萌发过程中内源植物激素玉米素(ZT)、赤霉素(GA3)、吲哚乙酸(IAA)和脱落酸(ABA)含量水平的变化。研究结果表明:DHAP处理对天山云杉种子萌发影响具有浓度效应,表现为5.0 mmol·L–1>0.1 mmol·L–1>1.0 mmol·L–1>对照,即5.0 mmol·L–1DHAP处理组对种子萌发的抑制作用最强、0.1 mmol·L–1DHAP处理组次之、1.0 mmol·L–1DHAP处理组最弱;DHAP处理组的种子内源ZT、GA3浓度水平降低,ABA含量升高,GA3浓度峰值出现时间延迟,IAA浓度在高浓度(5.0 mmol·L–1DHAP)处理组短时间内(3–6天)过量积累,1.0和5.0 mmol·L–1DHAP处理组的种子内源ABA浓度峰值出现时间延迟;DHAP处理种子萌发1–6天时,ZT/(GA3+IAA)比值降低,IAA/ZT、ABA/ZT比值增大;ABA/(ZT+GA3+IAA)比值在0.1 mmol·L–1DHAP处理组增大,在5.0mmol·L–1DHAP处理组降低。DHAP处理引发种子内源激素含量水平及激素含量间比值变化,可能是抑制、延迟天山云杉种子萌发的主要原因。

DHAP胁迫对天山云杉种子萌发过程抗氧化酶活性影响的研究

通过对3,4-二羟基苯乙酮(DHAP)诱导天山云杉(Picea schrenkiana Fisch.et Mey.)种子萌发及幼苗生长过程抗氧化酶活性变化的分析阐明自毒物质发生作用的生理机制。选择3个浓度梯度DHAP溶液处理萌发中的天山云杉种子及生长的幼苗,以发芽率和发芽势为种子表观萌发参数,以胚芽长、胚根长、鲜重为幼苗生长表观参数,荧光素二乙酸酯-碘化丙啶(FDA-PI)荧光双染色法测定胚根发育状况,分光光度法测定不同时间阶段采集样品中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、过氧化物酶(POD)、抗坏血酸过氧化物酶(APX)、谷胱甘肽还原酶(GR)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)活性变化。荧光染色结果显示,1.0mmol/L DHAP处理加速种子萌发,根细胞组织营养胁迫过程提前出现,3.0和5.0mmol/L处理组发芽第3天种子根尖未突破种皮,比对照发芽延迟,5.0mmol/L处理组发芽第12天种子根弯曲程度提高出现畸变;酶活性分析结果显示,与对照相比,1.0mmol/L处理组SOD活性第2天、第10天峰值增大,3.0和5.0mmol/L处理组主峰出现时间提前且峰值减小;DHAP处理增强了CAT活性在第7天、第10天双峰峰值;1.0 mmol/L处理组POD活性第7天主峰峰值增大,3.0和5.0mmol/L处理组主峰出现时间延迟且峰值减小;1.0mmol/L处理组第4天、第8天APX活性主峰峰值增大,3.0mmol/L处理组主峰峰值减小,5.0mmol/L处理组主峰出现时间延迟且峰值减小;1.0mmol/L处理组第5天、第8天GR活性峰值增大,3.0和5.0mmol/L处理组峰值减小,第二个峰出现时间提前;1.0mmol/L处理组GPX活性第2天、第5天峰值增大第8天、第11天峰值减小,3.0 mmol/L处理组峰值减小且前两个峰时间延迟,5.0mmol/L处理组第6天、第9天出现强度减小双峰。DHAP处理诱导的种子萌发过程中抗氧化酶活性变化可能是延迟和抑制天山云杉种子萌发的原因之一。

青心酮对肺动脉内皮细胞及红细胞生物力学特性的影响

目的 观察青心酮对红细胞及肺血管内皮细胞生物力学特性的影响。方法 体外培养肺动脉内皮细胞 ,分对照组及青心酮大、中、小剂量处理内皮细胞 ,用微管吸吮技术观察细胞的变形过程。结果 与未用药组比较 ,在加用青心酮 30 min后 ,中、大剂量组内皮细胞弹性系数 K1 和 K2 增大 ,粘性系数μ变化不大 ;红细胞表观变形指数和最大变形值也明显增加。结论 青心酮可以增加肺血管内皮弹性 ,并使红细胞变形能力明显增强 。

青心酮抑制脂多糖诱导的小鼠巨噬细胞凋亡的机制探讨

目的阐明青心酮对脂多糖(LPS)诱导的巨噬细胞凋亡抑制作用的可能机制。方法采用LPS刺激小鼠RAW264.7巨噬细胞株为炎症模型,采用RT-PCR检测血红素氧合酶-1(HO-1)mRNA,血红蛋白结合法测定一氧化碳(CO)的相对水平,流式细胞仪结合细胞形态学检测观察细胞凋亡。结果1×10-5mol/L青心酮作用24h,在增加细胞HO-1mRNA及CO水平的同时,可使LPS诱导的巨噬细胞凋亡率显著下降(P<0.01);加入牛血红蛋白清除CO后,青心酮对LPS所致细胞凋亡的抑制率由(63.2±3.8)%降低为(45.1±5.3)%,差异显著(P<0.01)。结论青心酮可抑制LPS所致的小鼠RAW264.7巨噬细胞的凋亡,此作用部分由HO-1/CO系统所介导。

青心酮对小鼠动脉粥样硬化斑块中主要细胞TLR4表达的影响

目的:研究青心酮对小鼠动脉粥样硬化(AS)斑块中主要细胞(平滑肌细胞、内皮细胞、巨噬细胞)Toll样受体4(TLR4)表达的影响。方法:取小鼠胸主动脉,进行平滑肌细胞、内皮细胞的原代培养,RAW264.7细胞株传代培养。实验分5组,即对照、脂多糖(LPS)、辛伐他汀和青心酮高、低剂量组。应用RT-PCR及Western-blot方法检测TLR4mRNA表达及蛋白含量。结果:青心酮高剂量组血管平滑肌细胞、内皮细胞、巨噬细胞TLR4mRNA和蛋白含量显著低于LPS组(P<0.01)。结论:青心酮可下调LPS活化的小鼠平滑肌细胞、内皮细胞、巨噬细胞TLR4mRNA和蛋白的表达,其机制可能与通过TLR4途径发挥抗炎作用有关。