HPLC-MS法测定大鼠血浆中白藜芦醇衍生物(E)-3，5，4′-三甲氧基二苯乙烯的浓度

目的:建立测定大鼠血浆中白藜芦醇衍生物(E)-3,5,4′-三甲氧基-1,2-二苯乙烯的液相色谱-质谱法(HPLC-MS)定量分析方法。方法:血浆样品0.1 mL,经乙腈沉淀蛋白后,以 ODS Hypersil C_(18)(5 μm,250 mm×4.6 mm)为固定相,甲醇-10 mmol·L^(-1)醋酸铵(0.2%甲酸)(80:20,v/v)为流动相,流速为0.85 mL·min^(-1);采用 HPLC-MS,选择离子监测(SIM)法检测(E)-3,5,4′-三甲氧基-1,2-二苯乙烯([M+H]^+,m/z 271.3),卡马西甲([内标,M+H]^+,m/z 237.5),保留时间分别为8.9,4.0 min。结果:(E)-3,5,4′-三甲氧基-1,2-二苯乙烯的线性范围为0.01～5.0 μg·mL^(-1),r>0.999;日内、日间精密度 RSD 小于12.9%;相对回收率在94.8%～104.7%之间,最低检出限为0.005 μg·mL^(-1)结论:经方法学确证和稳定性评价,该方法成功用于大鼠血浆中(E)-3,5,4′-三甲氧基-1,2-二苯乙烯的定量测定。

HPLC测定三乌胶丸中2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷含量

目的:建立三乌胶丸中2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷含量测定方法。方法:采用高效液相色谱法。用Hypersil ODS2 C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:乙腈-水(20∶80);柱温:室温;检测波长:320 nm。结果:2.3,5,4'-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷浓度在0.5～2.5 mg·ml^(-1)范围内与峰面积呈良好线性关系,r=1.000 0.平均回收率为98.56%(RSD为1.5%)。结论:本方法专属、重复性好,可用于三乌胶丸中2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的含量测定。

3,5,4'-三甲基白藜芦醇对豚鼠心室肌细胞钠电流和钾电流的影响

目的研究3,5,4'-三甲基白藜芦醇(trans-resveratrol derivative3,5,4'-trimethoxystilbene,TMS)对豚鼠心室肌细胞钠电流(INa)和钾电流(IK1)的直接作用,探讨其心肌保护作用。方法用全细胞膜片钳技术记录TMS对单个心室肌细胞INa和IK1的作用。结果TMS(10μmol·L-1)可快速抑制豚鼠心室肌细胞INa,用药后3min左右即开始起效,10min时抑制率为(36.8±5.6)%(P<0.005),洗脱后可完全恢复;1,3μmol·L-1TMS未影响INa大小。TMS不改变INa的最大激活电压,也不影响IK1的大小。10μmol·L-1使半数最大失活电压(V1/2)由(-87.0±3.3)mV变化到(-96.7±3.5)mV(P<0.001),使失活曲线斜率(S)由(4.9±0.3)mV变化到(5.4±0.3)mV(P<0.01);使半数最大激活电压(V1/2)(-38.9±1.4)mV变化到(-47.3±1.3)mV(P<0.001),未改变激活S。结论TMS可直接作用于豚鼠心室肌细胞,快速抑制INa,且此作用快速、可逆。

大鼠血浆中白藜芦醇衍生物(BTM-0512)药代动力学研究

目的:建立 RP-HPLC 法测定大鼠血浆中白藜芦醇衍生物3,5,4'-O-三甲基白藜芦醇(BTM-0512)浓度的方法并进行药代动力学研究,为该化合物的进一步开发提供实验依据。方法:取血浆样品,以乙腈沉淀蛋白,用 Hypersil C_(18)柱(5 μm,250 mm×4.6 mm)分离,己烯雌酚为内标,乙腈-水(65:35)为流动相,流速1.0 mL·min^(-1),检测波长319 nm。结果:BTM-0512的线性范围为0.01～10.0μg·mL^(-1),r>0.999;日内、日间精密度 RSD 小于10.0%;相对回收率在98.2%～101.3%之间,最低检出限为0.005μg·mL^(-1),最低定量限为0.01μg·mL^(-1)。结论:本方法灵敏度高,操作简便、准确,经方法学确证和稳定性评价,可用于大鼠血浆中 BTM-0512的测定及药代动力学研究。

RP-HPLC法研究白藜芦醇衍生物(BTM-0512)在大鼠血浆与组织中的分布(英文)

建立大鼠血浆与组织中白藜芦醇衍生物（BTM-0512）高效液相色谱测定方法,用于研究BTM-0512在大鼠体内的分布。色谱柱：BDS Hypersil C18（250 mm×4.6 mm ID,5μm）,流动相：乙腈-水（55∶45）,流速：1 mL·min^-1,检测波长：319 nm,己烯雌酚作内标。含药血浆与组织匀浆液用乙腈直接沉淀蛋白后,进样分析。本法线性范围为血浆：0.01-10.0μg·mL^-1,组织样品：0.04-40μg·g^-1,r2均大于0.996（n=7）,方法的准确度平均值在95.3%-100.1%;提取回收率在95.9%-100.9%;日内、日间RSD〈5.1%。BTM-0512在血浆中含量较低,在肝脏中分布最多,在脂肪中有蓄积现象。本法灵敏度高,操作简便、准确,可用于大鼠血浆及组织中BTM-0512的测定及分布研究。

白藜芦醇对人乳腺癌骨高转移细胞株MDA-MB-231BO生长抑制和凋亡的影响

目的观察白藜芦醇(Res)对人乳腺癌骨高转移细胞株MDA-MB-231BO生长抑制和凋亡的影响,探讨其在抑制乳腺癌骨转移中的应用价值。方法将0、12.5、50、100、200μmo/L的Res分别与MDA-MB-231BO细胞作用24、48、72 h;用CCK-8法检测MDA-MB-231BO细胞的生长抑制率,流式细胞仪分析细胞周期并检测细胞凋亡率,荧光显微镜观察细胞形态。结果随Res浓度的增加及作用时间的延长,MDA-MB-231BO细胞的生长抑制率逐渐升高,S期细胞逐渐增多。Res浓度为200μmol/L、作用48 h,MDA-MB-231BO生长抑制率为82.17%±5.37%、早期凋亡率为4.48%±1.23%、晚期凋亡率为9.48%±2.30%,荧光显微镜下观察用药组随着Res浓度的增加,凋亡细胞逐渐增多。结论Res能抑制人乳腺癌骨高转移细胞株MDA-MB-231BO细胞增殖,使MDA-MB-231BO细胞阻滞于S期,并可诱导该细胞凋亡。

白藜芦醇的全合成

目的合成天然活性物质白藜芦醇。方法以3，5-二甲氧基苯甲酸为原料，经还原、溴代后，与亚磷酸三乙酯反应成3，5-二甲氧基苄磷酸酯，再与市售茴香醛进行Wittig-Homer反应后，脱去酚羟基保护基而得到目标产物白藜芦醇。结果成功合成得到了白藜芦醇。结论该合成路线具有工艺简单、试剂价格低廉等优点。

三羟基二苯乙烯及其对肺动脉平滑肌细胞生长抑制和致凋亡作用的研究

目的:以虎杖为原料提取的白藜芦醇(Res),再经甲基化反应合成的3,5,4'-三羟基二苯乙烯(3,5,4'-trimethoxystilbene,TMS),对TMS进行结构鉴定和药代动力学测定。检测TMS对肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)的生长抑制和致凋亡作用。方法:用紫外吸收光谱、红外吸收光谱、1H-NMR谱、13C-NMR图谱、质谱检测等方法对TMS进行结构鉴定。测定大鼠口服TMS后的生物利用度,肠道吸收特点,体内组织分布和体内排泄。测定TMS对小鼠的急性毒性。利用大鼠肺动脉制备PASMCs。将细胞分为8组。A组(空白对照组):不加TNF-α,TMS,Res;B组(TNF-α组):100 pg/mL TNF-α;C^E组(低~高浓度TMS组):TNF-α(100 pg/mL)+TMS(5,10,20μmol/L);F^H组(低~高浓度Res组):TNF-α(100 pg/mL)+Res(50,100,200μmol/L)。MTT法测定TMS对PASMCs增殖的影响。流式Annexin V/PI法测定TMS对PASMCs凋亡的影响。结果:TMS的紫外吸收图谱为λmax(MeOH):318,306.2,217.8nm;红外光谱解析为IRνKmaBxr/cm:2999,2935,2836,1591,1511,1456/cm;1H-NMR谱解析显示结构含有3个羟基;13C-NMR图谱解析为17个碳信号,并且其结构中含有对称的结构片段。质谱图谱解析为ESI-MS m/z:271[M+H]+,256[M+H-CH3]+,241[256-CH3]+,相对分子质量为270,推测分子式为C17H18O3,结构中含有甲基。样品元素分析得分子结构式可用C17H18O3表示,因此可确定化合物为反-3,5,4'-三羟基二苯乙烯。TMS绝对生物利用度为45.4%,在小肠上段有较好吸收,通过粪便、胆汁排泄,在各组织中均有分布,最大耐受量(MTD)约5.85 g/kg。TMS干预PASMCs 24 h后经MTT法测定显示对其生长具有显著的抑制作用,其强度呈剂量依赖性改变。A^H组的生长抑制率分别为(4.07±2.12)%,(6.54±4.78)%,(9.35±4.26)%,(16.75±5.34)%,(23.74±7.07)%,(6.78±5.58)%,(8.81±5.16)%,(17.81±6.03)%。流式Annexin V/PI法检测结果显示:TMS干预PASMCs 24 h组细胞凋亡率显著高于TNF-α干预组,且其作用呈剂量依赖性。A^H组的细胞凋亡率分别为(2.63±0.74)%,(3.54±0.81)%,(5.77±4.62)%,(11.68±5.35)%,(18.79±4.15)%,(4.11±3.59)%,(6.33±4.8)%,(12.47±5.06)%。结论:TMS的分子式可用C17H18O3表示,结构式为反-3,5,4'-三羟基二苯乙烯。TMS的生物利用度为45%。TMS呈剂量依赖性地抑制PASMCs的增殖并诱导其凋亡。

白藜芦醇和三甲基白藜芦醇对豚鼠心室肌细胞钠电流的作用

目的研究反式白藜芦醇(RES)和反式3,5,4’-三甲基白藜芦醇(3,5,4’-Trimethoxystilbene,TMS)对豚鼠心室肌细胞钠电流(INa)的直接作用,探讨其心肌保护机制并比较其作用强弱。方法用全细胞膜片钳技术记录RES和TMS对豚鼠单个心室肌细胞INa的作用。结果 RES(10,30,100μmol/L)浓度依赖性的抑制豚鼠心室肌细胞INa,其中30μmol对INa的抑制率为(17.3±3.1)%(P<0.005),而100μmol对其抑制率为(52.7±10.2)%(P<0.01);TMS(10μmol)对其抑制率(36.8±5.6)%(P<0.005),作用迅速,用药后3 min左右即开始起效,洗脱后均可以完全恢复,1、3μmol/L TMS未影响INa大小。结论 RES和TMS均可浓度依赖性的抑制豚鼠心室肌细胞INa,作用快、可逆,且TMS作用强于RES。

土茯苓的化学成分研究(一)

从土茯苓中分得2个单体化合物,经光谱分析分别鉴定为3,5,4’—三羟基芪(Ⅰ)和(-)表儿茶精(Ⅱ),这两个化合物系首次从该植物中分离得到。并通过2维核磁共振相关谱准确地指定了这两个化合物的碳氢归属。

白藜芦醇三甲醚乳胶体外经皮渗透研究

目的制备白藜芦醇三甲醚(BTM)乳胶,考察载药量、促渗剂及其组合对BTM经皮渗透性的影响,评价药物透皮给药的可行性。方法以卡波姆940为凝胶基质制备BTM乳胶,选用改良Franz扩散池,以离体乳猪腹部皮肤为屏障进行体外经皮渗透实验,用HPLC-UV法测定各时间点接收室中药物浓度,计算经皮渗透动力学参数。结果载药量由1%增加到2%时,BTM 24 h单位面积渗透量增加1倍,2%与4%乳胶渗透量没有统计学差异(P>0.1)。促渗剂均可显著促进BTM透皮吸收,其透皮速率为:2%香叶醇>2%肉豆蔻酸异丙酯>2%油酸>2%氮酮>2%橙花叔醇>无促渗剂;香叶醇的浓度大小对BTM的透皮吸收无明显影响(P>0.05);与单用2%香叶醇相比,促渗剂联用(2%香叶醇+2%丙二醇、2%香叶醇+2%肉豆蔻酸异丙酯)未显示出显著协同促渗作用(P>0.05),而2%香叶醇+2%异丙醇则显示弱拮抗促渗作用(P<0.05)。结论常用促渗剂均能不同程度促进BTM经皮渗透,载药量为2%、促渗剂为2%香叶醇时,BTM体外透皮可达最大吸收。但BTM体外透皮吸收具有饱和性,该结果为BTM经皮给药研究提供了基础。

白藜芦醇衍生物TMS对脂多糖诱导血管内皮细胞表达NO、ICAM-1和NF-κB的影响

目的探讨白藜芦醇衍生物反式-3,5,4'-三甲氧基二苯乙烯(TMS)对脂多糖(LPS)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEs)表达NO、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)和核转录因子-κB(NF-κB)的影响。方法采用CCK-8检测不同浓度TMS对HUVEs存活率的影响。细胞分为正常对照组(CON组)、LPS组、低浓度TMS+LPS组、中浓度TM S+LPS组、高浓度TM S+LPS组和吡咯烷二硫代氨基甲酸铵(PDTC)+LPS组,不同浓度TM S和10μmol/L PDTC预处理细胞,0.1μg/m L的LPS进行诱导后,Griess法检测各组细胞产生的NO浓度;Real-time PCR检测ICAM-1、NF-κB p65的m RNA表达;Western blotting检测ICAM-1、NF-κB p65和IκBα的蛋白表达;免疫细胞化学染色检测ICAM-1及NF-κB p65的蛋白表达。结果较低浓度(5、10μmol/L)TMS对细胞的存活率影响较小,而较高浓度(50、100μmol/L)TMS处理后,细胞存活率明显下降,并呈时间、剂量依赖性。Griess法结果显示低、中、高浓度TMS+LPS组与PDTC+LPS组的NO表达量均较LPS组降低(P<0.05)。Real-time PCR和Western blotting检测结果均显示,与LPS组、CON组相比,中浓度TM S+LPS组和PDTC+LPS组中ICAM-1、NF-κB p65的m RNA和蛋白表达差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。Western blotting结果还显示,除CON组外,NF-κB p65蛋白在LPS组、中浓度TM S+LPS组和PDTC+LPS组中均有核表达;IκBα蛋白在LPS组中表达量较CON组降低(P<0.01),其在中浓度TMS+LPS组和PDTC+LPS组的表达低于CON组(P均<0.05)。细胞免疫荧光检测结果显示,ICAM-1蛋白在LPS组中表达强荧光,在中浓度TMS+LPS组和PDTC+LPS组中表达均减弱;NF-κB p65蛋白在CON组中无表达,在LPS组中为细胞核荧光强表达,在中浓度TM S+LPS组和PDTC+LPS组中荧光表达相对减弱,且无核表达。结论白藜芦醇衍生物TMS抑制LPS诱导血管内皮细胞的NO、ICAM-1和NF-κB p65表达,且其对ICAM-1的抑制可能是通过NF-κB细胞信号通路起作用。

白藜芦醇衍生物大鼠在体肠吸收特性研究

目的:研究白藜芦醇衍生物[(E)-3,5,4′-三甲氧基-1,2-二苯乙烯(BTM-0512)]在大鼠肠道的吸收特性。方法:采用大鼠在体肠循环实验,考察不同的药物浓度、肠段及胆汁对吸收参数的影响。BTM-0512在大鼠肠循环液中的药物浓度采用HPLC法测定;循环液中酚红浓度采用UV法测定。结果:在肠道正常pH情况下,低、中、高3个浓度的BTM-0512的吸收速率常数(K_a)分别为0.6290,0.5329(扎胆管),0.5330(未扎胆管),0.6791 h^(-1),表明不同浓度BTM-0512在肠道的吸收速率常数相近,且胆汁对BTM-0512肠道吸收没有影响(P>0.05);在十二指肠、空肠、回肠,结肠的吸收速率常数分别为0.9492,0.5216,0.3835,0.1185 h^(-1),统计结果显示,不同肠段间吸收有明显差异(P<0.05)。结论:BTM-0512在肠道内是以被动扩散的方式被吸收,呈现一级动力学过程。因BTM-0512在整肠段均有吸收,剂型设计时可考虑肠溶制剂。

乙酰化白藜芦醇对脂多糖诱导急性肺损伤中微循环修复作用机制探究

目的观察脂多糖(LPS)诱导急性肺损伤大鼠肺组织中微循环的变化,探讨乙酰化白藜芦醇对其干预作用及机制。方法 32只SD大鼠随机分为空白对照组、LPS处理组、乙酰化白藜芦醇预处理组和白藜芦醇预处理组,每组8只。采用气管内滴注LPS(5 mg/kg)的方法制作急性肺损伤动物模型,观察病理变化、肺组织湿/干重比值,用伊文思蓝法检测肺微血管通透性,用酶联免疫吸附试验法检测肺组织中肿瘤坏死因子α和白细胞介素1β的含量,用蛋白质印迹法检测细胞骨架重构相关蛋白FAK、cofilin的表达变化,免疫荧光观察肺微血管内皮细胞单层细胞间隙改变情况。结果 LPS干预4 h后,大鼠肺部损伤明显,肿瘤坏死因子α和白细胞介素1β的含量增高,肺湿/干重比值及通透性明显增加,FAK-cofilin通路明显激活,肺微血管内皮单层细胞间隙明显增加;乙酰化白藜芦醇预处理显著减轻了LPS导致的急性肺损伤,减少了炎症因子的释放,并且抑制了FAK-cofilin通路的激活及肺微血管内皮单层细胞间隙的增加。结论肺微循环的改变参与了LPS诱导肺损伤的发生发展,乙酰化白藜芦醇能够通过抑制FAK-cofilin通路减轻肺损伤。

白藜芦醇衍生物TMS对脂多糖诱导人脐静脉内皮细胞中一氧化氮、血管细胞间黏附分子-1及核转录因子-κB表达的影响

目的探讨白藜芦醇衍生物TMS(trans-3,5,4′-trimethoxystilbene)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)中一氧化氮(nitric oxide,NO)、血管细胞间黏附分子-1(vascular cell adhesion molecule-1,VCAM-1)及核转录因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)表达的影响。方法取P3代HUVECs,采用CCK-8法检测不同TMS浓度(0、5、10、20、50、100μmol/L)对HUVECs细胞存活率的影响。将P6代HUVECs分为正常对照组、LPS组、TMS(高、中、低浓度)+LPS组及PDTC+LPS组,Griess法检测各组细胞产生NO浓度;Real-time PCR法检测各组细胞中VCAM-1、NF-κB p65基因m RNA的转录水平;Western blot法检测各组细胞中VCAM-1、NF-κB p65和IκBα蛋白的表达水平;免疫细胞化学染色法检测各组细胞中VCAM-1和NF-κB p65蛋白的表达水平。结果 5、10μmol/L浓度组TMS对细胞存活率影响较小,50、100μmol/L浓度组中细胞生存率明显下降(P<0.05),且呈时间、剂量依赖性。低、中、高浓度TMS+LPS组与PDTC+LPS组细胞中NO浓度显著下降(P<0.05);中浓度TMS+LPS组和PDTC+LPS组细胞中VCAM-1、NF-κB p65基因m RNA转录和蛋白表达水平均明显低于LPS组(P<0.05),IκBα蛋白表达水平明显高于LPS组(P<0.05);正常对照组细胞胞质中有弱VCAM-1蛋白荧光表达,未见NF-κB p65蛋白荧光表达,LPS组可见VCAM-1和NF-κB p65蛋白的强荧光表达,中浓度TMS+LPS组和PDTC+LPS组中VCAM-1和NF-κB p65蛋白荧光表达均弱于LPS组。结论白藜芦醇衍生物TMS可抑制LPS诱导HUVECs表达NO、VCAM-1和NF-κB p65,且其抑制VCAM-1效应可能是通过NF-κB细胞信号通路而发挥作用的,本研究为临床治疗血管内皮功能紊乱相关疾病提供了实验依据。

乙酰化白藜芦醇和白藜芦醇在大鼠体内的药代动力学比较研究

目的:建立测定大鼠血浆中白藜芦醇的高效液相色谱法,并比较研究乙酰化白藜芦醇和白藜芦醇在大鼠体内的药代动力学。方法:色谱柱为UltimateAQ-C18柱(150mm×4.6mm,5μm),流动相乙腈-水(32∶68),流速为1.0mL/min,检测波长306nm:血浆样品用乙酸乙酯萃取法预处理。结果:线性范围0.1～10.0μg/mL,相关系数r=0.9995。日内RSD<10%,日间RSD<15%,回收率98.0%～102.0%。结论:该方法灵敏度高,操作方便,适用于白藜芦醇在大鼠体内的药代动力学研究:SD大鼠灌服等摩尔的白藜芦醇或乙酰化白藜芦醇,后者的半衰期t1/2是前者的1.34倍,AUC(0-∞)为前者的1.15倍,后者的t1/2比前者延长,生物利用度增加,药代动力学性质有明显改善。