HPLC法测定小儿感冒颗粒中绿原酸、木犀草苷3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸、连翘苷的含量

目的:建立HPLC法测定小儿感冒颗粒中绿原酸、木犀草苷、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸和连翘苷的含量。方法:AgilentC18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm);流动相:乙腈-0.4%磷酸,梯度洗脱;检测波长:0~45min(327nm),45~83min(202nm);柱温:30℃;流速:1mL·min^-1,进样量10μL。结果:绿原酸、木犀草苷、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸、连翘苷浓度分别在0.01267~0.3801、0.1040~1.5600、0.00840~0.2526、0.03190~0.3190μg·mL^-1范围内呈良好的线性关系(r=0.9999,1.0000,0.9966,1.0000);平均加样回收率分别为97.89%、96.37%、96.63%和103.3%(n=6)。结论:所建立的方法可同时测定小儿感冒颗粒中的多种有效成分的含量。

RP-HPLC测定眩晕宁颗粒制剂中3种成分的含量

目的:建立了RP-HPLC法测定眩晕宁颗粒制剂中异绿原酸A等3种成分含量的方法。方法:CapcellPak UG C18色谱柱分离;检测波长:异绿原酸A、23-乙酰泽泻醇B和β-蜕皮甾酮检测波长分别设定348 nm、250 nm和208 nm;进样体积:10µL;柱温:28℃;以乙腈(A)-0.5%磷酸溶液(B)为洗脱溶剂,外标法定量检测。结果:异绿原酸A、β-蜕皮甾酮和23-乙酰泽泻醇B分别在浓度0.0767~7.67、0.0983~9.83和0.0197~1.97μg/mL范围内线性良好;回收率依次为100.05%、98.33%和99.42%;重复性和精密度RSD均在5.0%以内;供试品溶液在24h内稳定。结论:结果证明,此方法具有前处理简单等优点,可以用于眩晕宁颗粒制剂的质量控制。

RP-HPLC法测定眩晕宁颗粒中3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸、23-乙酰泽泻醇B和β-蜕皮甾酮

目的建立RP-HPLC法测定眩晕宁颗粒中3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸、23-乙酰泽泻醇B和β-蜕皮甾酮的测定方法。方法采用Capcell Pak UG C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为乙腈–0.5%磷酸溶液,梯度洗脱;检测波长:348 nm(3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸)、250 nm(23-乙酰泽泻醇B)、208 nm(β-蜕皮甾酮);体积流量:1.0 mL/min;柱温:28℃;进样量:10μL。结果3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸、β-蜕皮甾酮和23-乙酰泽泻醇B分别在0.0767~7.6700、0.0983~9.8300、0.0197~1.9700μg/mL线性良好,平均回收率分别为100.05%、98.33%、99.42%,RSD值分别为0.7%、1.2%、1.3%。结论方法具有前处理简单、分析时间短、检测结果准确等优点,适用于眩晕宁颗粒的质量控制。

高效液相色谱法测定兰紫解毒颗粒中5种主要成分

建立高效液相色谱法同时测定兰紫解毒颗粒中绿原酸、3,5-二-O-咖啡酰奎宁酸、苦参碱、氧化苦参碱和(R,S)-告依春含量的方法。取0.1 g兰紫解毒颗粒样品,用体积分数为75%的甲醇溶液超声提取30 min,取适量样品溶液上机测定;采用ACQUITY UPLCHSS T3 C18柱(150 mm×2.1 mm,1.8μm)作为分析柱,柱温为25℃,以乙腈-0.1%磷酸水溶液作为流动相梯度洗脱,洗脱流量为0.25 mL/min,进样体积为1μL。绿原酸、3,5-二-O-咖啡酰奎宁酸、苦参碱、氧化苦参碱和(R,S)-告依春的质量浓度在0.4076~42.5292μg/mL范围内与色谱峰面积线性关系良好,相关系数为0.9996~0.9998,方法检出限为0.001~0.014μg/mL。样品平均加标回收率为97.85%~100.35%,测定结果的相对标准偏差为1.05%~2.93%(n=6)。该方法简单、高效、准确、稳定,可同时测定兰紫解毒颗粒中5种主要成分的含量。

3,5-二咖啡酰奎宁酸体外透血脑屏障能力及抗大鼠脑缺血再灌注损伤作用研究

目的:研究灯盏细辛活性成分3,5-二咖啡酰奎宁酸的体外透血脑屏障(BBB)能力及其对大鼠脑缺血再灌注损伤的影响。方法:采用体外血脑屏障模型结合HPLC技术评价3,5-二咖啡酰奎宁酸的透血脑屏障能力。预给药3天后,采用线栓法阻塞大脑中动脉(MCA)致大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型,继续给药2天后,对各组大鼠进行神经功能缺失评分,并测定大鼠的脑梗死比率及其血清中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、一氧化氮合酶(NOS)含量。结果:3,5-二咖啡酰奎宁酸0.2 mg/ml对血脑屏障的透过率可达79%;与模型对照组比较,该药18.25mg/kg、9.13 mg/kg均能不同程度提高SOD、GSH-Px、NOS的活性,降低MDA活性及大鼠脑梗死比率与其神经行为学评分水平。结论:3,5-二咖啡酰奎宁酸能很好的透过血脑屏障,可通过降低大鼠脑梗死比率,增加脑缺血再灌注损伤大鼠血清SOD、GSH-Px、NOS活性,降低MDA含量,并改善其神经行为学体征,产生脑缺血保护作用。

3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸的制备及其对HeLa细胞的抗增殖活性研究

目的制备高纯度3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸,并评价其对人宫颈癌HeLa细胞的抗增殖活性。方法采用柱色谱提取法和中压液相色谱法从奇蒿花中分离、纯化得到高纯度的3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸。采用MTT法评价该化合物对人宫颈癌HeLa细胞的体外抗增殖活性。结果柱色谱提取的提取率和中压液相色谱法的回收率分别为99.0%,61.2%,总回收率为54.0%。随着3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸浓度升高,HeLa细胞存活率下降,细胞形态损伤增加,受试药物的IC50值为26.5μg·mL-1。结论本研究提供了一种简单、高效、节能的3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸制备方法。3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸对HeLa细胞具有一定的体外抗增殖活性。

洋甘菊中2种咖啡酰基奎宁酸大孔树脂纯化工艺的优化

目的优化洋甘菊中2种咖啡酰基奎宁酸大孔吸附树脂纯化工艺。方法以2种咖啡酰奎宁酸的吸附率和解吸率为评价指标筛选树脂种类。以吸附率和解吸率为评价指标,筛选最优工艺参数,包括上样液浓度、上样量、吸附速率、水冲洗用量、洗脱剂种类和用量等。结果最佳条件为采用AB-8大孔吸附树脂纯化,药液浓度0.20 g/ml,树脂柱径高比1:6,吸附速率2 BV/h,在此条件下,上柱量达7 BV;吸附好的树脂先用1 BV水洗净,流速5 BV/h,再用3 BV 50%乙醇和1 BV 70%乙醇洗脱活性部位,合并洗脱液,浓缩,干燥既得。结论该工艺稳定可靠,可用于大孔吸附树脂纯化洋甘菊中2种咖啡酰基奎宁酸。

亳州地区菊花的HPLC指纹图谱研究

目的 通过建立亳州地区菊花的HPLC指纹图谱,鉴别菊花的不同品种类型,为评价亳州地区菊花质量控制提供一定参考。方法 采用HPLC,ZORBOX SB-C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm, 5μm),以乙腈(A)-0.1%磷酸(B)为流动相,流速0.8 ml/min,柱温35℃,进行梯度洗脱,检测波长325 nm。结果 建立了亳州地区菊花药材的HPLC指纹图谱,标定13个共有峰,指纹图谱的相似度在0.100~0.999之间,并定量测定了菊花样品中绿原酸、木犀草苷、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸的含量。结论 本实验建立的高效液相指纹图谱方法能简便、快速地对亳州地区菊花品种进行区分,也为亳州地区菊花的质量控制与品质评价奠定初步的研究基础。

银菊散结口服液质量标准研究

目的建立银菊散结口服液（金银花、菊花、桔梗、玄参等）的质量标准。方法采用薄层色谱法对金银花、菊花、桔梗进行定性鉴别;并采用HPLC法同时测定金银花与菊花中绿原酸及木犀草苷、玄参中哈巴俄苷、菊花中3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸。结果薄层色谱斑点清晰;绿原酸、木犀草苷、哈巴俄苷、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸分别在0.082 4～0.824μg、0.103 9～1.039μg、0.048～0.48μg、0.185 6～1.856μg范围内呈良好线性关系（r分别为0.999 8、0.999 9、0.999 9、0.999 9）,平均回收率分别为100.67%、99.42%、99.79%、99.89%,RSD分别为0.75%、1.46%、0.81%、0.63%。结论该方法可准确用来定性、定量检测,具有简便、准确及专属性强的特点,可用于银菊散结口服液的质量控制。

正交试验法优选菊花炭炮制工艺研究

目的优选菊花炒炭的最佳工艺。方法通过L9(34)正交试验设计法制备菊花炭样品,采用高效液相色谱法测定绿原酸、木犀草苷、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸的含量,采用Diamonsil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈为流动相A和0.1%磷酸水溶液为流动相B进行梯度洗脱;流速为1.0 mL/min,检测波长为348 nm,柱温为30℃。并进行外观性状鉴别、水分和浸出物含量测定。以外观性状、浸出物含量和绿原酸、木犀草苷、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸的含量综合评分,优选菊花炭的最佳炮制工艺和具体工艺参数。结果菊花的最佳炒炭工艺为:取净制菊花1000 g,置300℃热锅内,翻炒6 min。结论通过此法优选得到的菊花炒炭的工艺稳定、技术参数明确、可行性高。

10种菊属植物花序不同成分含量比较

以大白菊、亳菊、滁菊、黄山贡菊、金丝皇菊5种茶用菊和萨摩野菊、野路菊、乙立寒菊、阴岐油菊、紫花野菊5种野生菊为样品,采用乙醇超声波法提取总黄酮,酶标仪测定其含量,采用高效液相色谱法检测绿原酸、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸和木犀草苷的含量.结果显示:总黄酮含量顺序为紫花野菊>野路菊>大白菊>黄山贡菊>萨摩野菊>阴岐油菊>滁菊>金丝皇菊>亳菊>乙立寒菊;绿原酸含量顺序为乙立寒菊>紫花野菊>野路菊>黄山贡菊>金丝皇菊>大白菊>亳菊>滁菊>萨摩野菊>阴岐油菊;3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸含量顺序为乙立寒菊>黄山贡菊>野路菊>紫花野菊>金丝皇菊>滁菊>萨摩野菊>大白菊>亳菊>阴岐油菊;木犀草苷含量顺序为野路菊>滁菊>大白菊>黄山贡菊>萨摩野菊>紫花野菊>亳菊>金丝皇菊>阴岐油菊>乙立寒菊.Q型聚类分析结果表明:10种菊属植物可分为两大类(野路菊、紫花野菊为一类,其他菊属植物为一类),或分为4小类;10种菊属植物基本可以检测到4种活性成分,且各材料活性物质含量存在显著差异,多种野菊在一种或多种活性成分含量上要高于茶用菊品种.

HPLC法测定市售杭白菊中2种有机酸和2种黄酮的含量

目的：测定市售杭白菊中有效成分的含量,比较不同产地杭白菊质量。方法：采用HPLC法测定绿原酸、3,5-O-双咖啡酰基奎宁酸2种有机酸成分以及木犀草苷、木犀草素2种黄酮成分的含量。结果：收集杭白菊样品各有效成分差异较大,12批市售杭白菊绿原酸含量在0.22%～0.70%之间,木犀草苷含量在0.09%～0.25%之间,3,5-O-双咖啡酰基奎宁酸含量在0.84%～1.67%之间,木犀草素含量在0.008%～0.042%之间。结论：市售杭白菊质量有较大差异,有必要进一步加强质量控制。

HPLC-DAD同时测定风热感冒颗粒中6种活性成分的含量

目的:建立高效液相色谱-二极管阵列检测器法(HPLC-DAD)同时测定风热感冒颗粒中苦杏仁苷、(R,S)-告依春、芦丁、连翘酯苷A、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸和牛蒡苷含量的方法。方法:采用液相色谱法,色谱柱为Waters Symmetry ShieldTM RP18,乙腈为流动相A,0.1%磷酸水溶液为流动相B,梯度洗脱;流速为1.0 mL·min-1;柱温为30℃;检测波长为苦杏仁苷和牛蒡苷207 nm,(R,S)-告依春245 nm,芦丁、连翘酯苷A和3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸330 nm。结果:苦杏仁苷、(R,S)-告依春、芦丁、连翘酯苷A、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸和牛蒡苷的线性范围分别为23~920(r=0.9994)、0.4~16(r=0.9995)、4.4~176(r=0.9999)、2.8~110(r=0.9998)、5.4~216(r=0.9996)、38~1520μg·mL^(-1)(r=0.9994),加样回收率的平均值(n=6)分别为98.8%、98.7%、98.4%、99.2%、99.8%和98.7%,RSD分别为1.0%、2.5%、1.8%、1.3%、1.3%和0.8%。结论:本法操作简便、结果准确、重复性好,可用于风热感冒颗粒的质量控制。

波长切换HPLC同时测定鼻通丸中6种成分含量

目的建立波长切换高效液相色谱(HPLC)同时测定鼻通丸中的氧化前胡素、欧前胡素、异欧前胡素、噻嗪双酮苷、1,5-二咖啡酰奎宁酸和3,5-二咖啡酰奎宁酸的方法。方法采用Agilent TC-C18(4.6 mm×250mm,5μm),以甲醇-0.1%磷酸溶液为流动相,进行梯度洗脱,流速0.9 mL/min,柱温30℃,进样量为10μL。结果氧化前胡素、欧前胡素、异欧前胡素、噻嗪双酮苷、1,5-二咖啡酰奎宁酸和3,5-二咖啡酰奎宁酸6个成分质量浓度分别在2.850~57.00μg/mL(r=0.9991),2.480~49.60μg/mL(r=0.9995),2.120~42.40μg/mL(r=0.9999),2.740~54.80μg/mL(r=0.9998),2.380~47.60μg/mL(r=0.9996),3.060~61.20μg/mL(r=0.9999)范围内与峰面积呈良好线性关系;6个组分的回收率分别为98.77%,97.53%,96.98%,99.29%,98.85%,100.03%,相应RSD分别为1.12%,1.33%,0.80%,1.19%,1.40%,0.95%。供试品溶液在室温条件下12 h内稳定,RSD≤1.33%。结论所建立的波长切换HPLC同时测定鼻通丸中氧化前胡素、欧前胡素、异欧前胡素、噻嗪双酮苷、1,5-二咖啡酰奎宁酸和3,5-二咖啡酰奎宁酸的方法,可为鼻通丸的质量控制提供依据。

HPLC法同时测定五加芪菊颗粒中刺五加、菊花含量

目的：建立高效液相色谱法同时测定五加芪菊颗粒中刺五加（以紫丁香苷计）和菊花（以3，5-O-二咖啡酰基奎宁酸计）含量的方法，为相关研究提供方法学参考。方法采用DiamonsilC18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5μm），流动相：甲醇为流动相A，0.1%磷酸溶液为流动相B，进行梯度洗脱。检测波长为348 nm。结果紫丁香苷和3，5-O-二咖啡酰基奎宁酸的线性范围分别为0.10~40.0μg/mL（r=0.9984）、0.05~10.0μg/mL（r=0.9991），方法回收率分别为98.76%（n=6）、94.26%（n=6）。结论所建立的方法准确、灵敏度高、重现性好，在同一试验过程中，同时测定五加芪菊颗粒中刺五加、菊花含量。

枸骨茎的化学成分研究

目的对冬青科冬青属植物枸骨Ilex cornuta茎进行化学成分研究,并考察分得化合物的自由基清除能力。方法利用硅胶、中压柱色谱及半制备高效液相色谱等方法,对枸骨茎的化学成分进行系统分离;通过质谱、核磁共振谱等光谱数据鉴定化合物结构;利用DPPH清除自由基实验测定化合物1~9的抗氧化活性。结果从枸骨茎50%乙醇提取物中分离并鉴定了15个化合物,分别为3,4-二咖啡酰奎宁酸（1）、3,4,5-三咖啡酰奎宁酸（2）、4,5-二咖啡酰奎宁酸甲酯（3）、3,4-二咖啡酰奎宁酸甲酯（4）、3,5-二咖啡酰奎宁酸甲酯（5）、3,4,5-三咖啡酰奎宁酸甲酯（6）、丁香醛（7）、没食子酸乙酯（8）、二氢芥子醇（9）、2,6-二甲氧基-1,4-苯醌（10）、牛蒡苷元（11）、1-O-香草酸-6-（3″,5″-二甲氧基没食子酰）-β-D-吡喃葡萄糖苷（12）、木质素苷（13）、（＋）-（7S,8S）-3,5-二甲氧基-4-羟基苯基丙三醇-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（14）、夏佛托苷（15）。结论化合物6、8~10、14、15为首次从该属植物中分离得到,化合物2、7、11、12为首次从该植物中分离得到;化合物1~6具有显著的清除自由基作用。

基于HPLC-Q-TOF-MS/MS技术咳喘宁颗粒化学成分分析及多指标定量测定

目的采用高效液相色谱-四极杆飞行时间串联质谱技术(HPLC-Q-TOF-MS/MS)对咳喘宁颗粒化学成分进行分析,并建立HPLC多成分含量测定方法。方法采用HPLC-Q-TOF-MS/MS技术,色谱柱Agilent ZORBAX C_(18)(150 mm×4.6 mm,5μm),柱温35℃,体积流量1.0 mL·min^(−1),进样量10μL,流动相A:0.1%甲酸,流动相B:乙腈,梯度洗脱;电喷雾离子源(ESI),正、负离子模式扫描,结合对照品和文献数据鉴定咳喘宁颗粒中的化学成分,并建立HPLC法同时测定新绿原酸、绿原酸、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸、异绿原酸B、4,5-O-二咖啡酰基奎宁酸、柚皮苷的含量。色谱条件:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(Waters AtlantisTM T3色谱柱,250 mm×4.6 mm,5μm),以甲醇-0.1%甲酸为流动相,梯度洗脱:0~20 min,3%~15%甲醇;20~25 min,15%~18%甲醇;25~26 min,18%~23%甲醇;26~45 min,23%甲醇;45~46 min,23%~38%甲醇;46~60 min,38%甲醇;60~61 min,38%~42%甲醇;61~70 min,42%甲醇;70~80 min,42%~90%甲醇;体积流量1.0 mL·min^(−1),柱温30℃;进样量10μL,检测波长324、283 nm。结果共鉴定咳喘宁颗粒中86个化合物,20个来自生麻黄、15个来自白屈菜、30个来自金银花、22个来自枇杷叶、12个来自金沸草、14个来自化橘红,其中有26个化合物经与对照品比对确认,选择新绿原酸、绿原酸、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸、异绿原酸B、4,5-O-二咖啡酰基奎宁酸和柚皮苷作为含量测定的质控指标,6种成分在各自质量浓度范围内线性关系良好(r≥0.9999),精密度、稳定性及重复性良好,加样回收率为99.48%~103.39%,RSD为1.29%~1.98%。对3批咳喘宁颗粒进行多成分含量测定,方法可行。结论在质谱成分解析的基础上,建立咳喘宁颗粒6种化学成分的含量测定方法,为咳喘宁颗粒的药效物质基础和质量标准研究提供参考。

HPLC法测定保健食品中4种菊花提取物功效成分的研究

目的建立同时测定含菊花提取物保健食品中的绿原酸、3,5-O-双咖啡酰基奎宁酸、木犀草苷和4,5-O-双咖啡酰基奎宁酸含量的高效液相色谱测定方法。方法采用70%甲醇为溶剂,超声提取样品。选择Waters Atlantis C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇和0.1%磷酸水溶液梯度洗脱,流速1.0 ml/min,进样量10μl,柱温35℃。检测波长选择每个化合物的最大波长进行检测。结果绿原酸在0.079μg^1.27μg、木犀草苷在0.007μg^0.114μg、3,5-O-双咖啡酰基奎宁酸在0.014μg^0.232μg,4,5-O-双咖啡酰基奎宁酸在0.015μg^0.236μg的浓度范围内线性关系良好,相关系数均达到0.9999,平均回收率在90%~107%之间(RSD 0.63%~6.6%,n=3)。结论本方法快捷、简便、准确。可用于同时测定保健食品中的绿原酸、木犀草苷、3,5-O-双咖啡酰基奎宁酸和4,5-O-双咖啡酰基奎宁酸。

绿原酸、异绿原酸A对大肠杆菌的抑菌机制

以大肠杆菌为试验对象,采用体外抑菌试验研究绿原酸、异绿原酸A的抑菌活性,并通过测定绿原酸类、异绿原酸A与菌作用前后细菌培养液260 nm吸光度、电导率、碱性磷酸酶(AKP)活性的变化及NPN对大肠杆菌细胞壁的渗透情况,初步阐明绿原酸、异绿原酸A对大肠杆菌的抑菌机制。结果显示,绿原酸、异绿原酸A对大肠杆菌均有抑菌活性,异绿原酸A的抑菌效果强于绿原酸。经绿原酸类物质处理后,细菌培养液的260 nm吸光度、电导率和AKP活性均增大,NPN能渗透进入绿原酸、异绿原酸A作用后的大肠杆菌细胞壁。表明绿原酸、异绿原酸A可破坏细菌细胞壁、膜的结构,导致细胞通透性增加,进而使细胞内容物外泄,异绿原酸A对细菌细胞壁、膜结构的破坏作用强于绿原酸。

蒙药蓝刺头的化学成分研究

目的研究蒙药蓝刺头(驴欺口Echinops latifolius干燥花序)的化学成分。方法采用溶剂法结合正相硅胶色谱柱、反相硅胶色谱柱以及Sephadex LH-20柱色谱,对蓝刺头的化学成分进行提取和分离纯化,利用理化鉴别及现代波谱分析技术(MS、1H-NMR、13C-NMR)鉴定化合物的结构。结果从蒙药蓝刺头中分离鉴定了14个化合物,分别为伪蒲公英甾醇乙酸酯(1)、芹菜素(2)、胡萝卜苷(3)、13-丙基-二十五烷(4)、芹菜素-7-O-β-D-(6″-p-香豆酰基)葡萄糖苷(5)、芹菜素-7-O-葡萄糖苷(6)、咖啡酸(7)、1,5-O-双咖啡酰基奎宁酸(8)、3,5-O-双咖啡酰基奎宁酸(9)、3,4-O-双咖啡酰基奎宁酸甲酯(10)、3,5-O-双咖啡酰基奎宁酸甲酯(11)、芹菜素-7-O-β-D-(4″-p-香豆酰基)葡萄糖苷(12)、3,4-O-双咖啡酰基奎宁酸(13)、1-O-甲基-3,5-O-双咖啡酰基奎宁酸甲酯(14)。结论化合物1、4、5、12为首次从该植物中分离得到,化合物7~11、13、14为首次从该属植物中分离得到。