3,6ʹ-二芥子酰基蔗糖神经保护作用研究

目的:研究远志中寡糖酯类成分3,6ʹ-二芥子酰基蔗糖(DISS)对神经的保护作用。方法:将不同浓度的DISS与APP-SH-SY5Y细胞共同孵育24 h,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测各组细胞的存活率,免疫荧光法检测细胞内活性氧(ROS)水平,生化法检测超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性,ELISA法检测细胞内和培养液中β-淀粉样蛋白(Aβ)含量,蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测细胞内淀粉样前体蛋白(APP)、微管相关蛋白轻链3-Ⅰ(LC3-Ⅰ)和LC3-Ⅱ的表达。结果:DISS可以提高APP-SH-SY5Y细胞的存活率(P<0.05),减少细胞内ROS的生成(P<0.01),提高SOD和GSH-Px活力(P<0.05),降低细胞内和培养液中的Aβ含量(P<0.01,P<0.05),明显升高细胞内LC3Ⅱ蛋白表达水平,升高LC3Ⅱ/LC3Ⅰ水平(P<0.05),对APP表达无明显影响。结论:DISS可能通过降低细胞内氧化应激,减少细胞Aβ表达及调节自噬发挥神经保护作用。

远志中远志酮Ⅲ和3,6′-二芥子酰基蔗糖含量测定方法的改进

目的:改进《中国药典》2020年版所载远志中远志(口山)酮Ⅲ和3,6′-二芥子酰基蔗糖的含量测定方法,解决远志(口山)酮Ⅲ中包含杂质成分且无法完全分离及甲醇和70%甲醇对远志(口山)酮Ⅲ和3,6′-二芥子酰基蔗糖响应值差异大的问题。方法:对照品溶液和供试品溶液的制备均以甲醇作为溶剂,供试品溶液采用超声提取,采用UHPLC方法,以乙腈(A)-0.1%磷酸溶液(B)为流动相,梯度洗脱(0~5 min,10%A→14%A;5~12 min,14%A→17%A;12~17 min,17%A→19%A;17~22 min,19%A→21%A;22~30 min,100%A);柱温30℃,体积流量0.3 mL·min^(-1),检测波长320 nm,进样量3μL。结果:采用70%甲醇制备的远志(口山)酮Ⅲ和3,6′-二芥子酰基蔗糖对照品溶液的峰面积分别比采用甲醇制备的相同浓度对照品溶液的峰面积高38.9%和34.5%;采用药典方法测得的远志(口山)酮Ⅲ中实际包含了杂质成分远志(口山)酮Ⅺ,而采用UHPLC梯度洗脱方法可以将远志(口山)酮Ⅲ中包含的杂质成分远志(口山)酮Ⅺ完全分开。结论:改进方法解决了远志(口山)酮Ⅲ中包含杂质成分远志(口山)酮XI且无法完全分离及甲醇和70%甲醇对远志(口山)酮Ⅲ和3,6′-二芥子酰基蔗糖响应值差异大的问题,可以更准确地反映远志中这2个指标成分的真实含量。

不同产地远志中远志酮Ⅲ、3,6'-二芥子酰基蔗糖、细叶远志皂苷A含量测定

目的:建立同时测定山西、甘肃等不同省区产远志中远志酮Ⅲ、3,6'-二芥子酰基蔗糖、细叶远志皂苷A 3种成分含量的HPLC测定方法。方法:超声提取,ODS-C18色谱柱,柱温35℃,流动相为0.05%磷酸乙腈溶液(A)-0.05%磷酸水溶液(B),梯度洗脱;检测波长315 nm。结果:远志中3种成分在30 min内良好分离,其它成分在65 min内基本分离。3种成分在0.002~1.0μg质量范围内线性关系良好、平均加样回收率95.3%~109.0%。结论:不同产地中远志酮Ⅲ、3,6'-二芥子酰基蔗糖、细叶远志皂苷A含量范围分别为1.01~7.47、2.44~5.63、2.13~7.19 mg·g^(-1)。方法操作简便,结果准确,可用于远志药材3种成分含量测定。

HPLC法测定萸苁强肾胶囊中远志[口山]酮Ⅲ、3,6'-二芥子酰基蔗糖和马钱苷

目的采用高效液相色谱法定量测定萸苁强肾胶囊中远志酮Ⅲ、3,6'-二芥子酰基蔗糖和马钱苷。方法萸苁强肾胶囊用75%甲醇作为溶剂超声提取。Hypersil C18色谱柱(4.6 mm×150 mm,5μm);体积流量1.0 mL/min;远志酮Ⅲ和3,6'-二芥子酰基蔗糖的测定以乙腈-0.1%磷酸溶液(15∶85)为流动相,检测波长330 nm;马钱苷的测定以四氢呋喃-乙腈-甲醇-0.05%磷酸溶液(1∶8∶4∶87)为流动相,检测波长234 nm。结果远志酮Ⅲ和3,6'-二芥子酰基蔗糖分别在0.027 7～0.554 0μg(r=0.999 7)、0.065 1～1.302 0μg(r=0.999 9)进样量与峰面积呈良好的线性关系,平均加样回收率分别为99.81%、99.20%,RSD(n=6)分别为0.46%、0.94%;马钱苷在0.060 8～1.216μg进样量与峰面积呈良好的线性关系(r=0.999 3),平均加样回收率为99.08%,RSD为1.19%(n=6)。结论该方法测定结果准确、灵敏、重复性好。

远志流浸膏中3种指标性成分的含量测定

目的 建立测定远志流浸膏中3种指标性成分的含量的方法。方法 采用高效液相色谱(HPLC)法同时测定8批远志流浸膏中远志[口山]酮Ⅲ,3,6′-二芥子酰基蔗糖这两种成分含量,和高效液相色谱法测定碱水解远志流浸膏中细叶远志皂苷成分含量。结果 远志[口山]酮Ⅲ、3,6′-二芥子酰基蔗糖、细叶远志皂苷在各自测定范围内线性关系良好(r>0.999 9),平均加样回收率为98.76%~103.05%,RSD 0.82%~3.79%。结论 本试验方法结果准确、专属性好、重复性好、稳定性好,可为远志流浸膏的质量控制提供依据。

3,6'-二芥子酰基蔗糖对卒中后抑郁星型胶质细胞的影响

目的 建立脑卒中后抑郁(PSD)大鼠模型,探讨3,6'-二芥子酰基蔗糖(3,6-disinapoyl?sucrose)对PSD大鼠行为学改变和星型胶质细胞(AS)功能的影响.方法 通过大鼠中动脉栓塞制备大鼠卒中模型,在此基础上利用孤养联合束缚应激处理,制备PSD模型,将PSD模型大鼠随机分为PSD+盐水组(PSD+NS组)、PSD+远志组(PSD+YZ组)、PSD+氟西汀组(PSD+FLX组),治疗后观察大鼠糖水偏好程度变化,采用免疫组织化学方法标记大鼠顶叶星型胶质细胞,用图像分析软件分析胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)平均光密度值(MOD).结果?PSD大鼠给药3周后,PSD+NS组较干预组大鼠糖水偏好程度显著下降(P<0.05),且PSD+YZ组大鼠糖水偏好程度显著上升(P<0.001).PSD+NS组GFAP的MOD较PSD+YZ组明显降低(P<0.05),PSD+YZ组GFAP的MOD与PSD+FLX组相当(P>0.05).结论 大鼠中动脉栓塞结合孤养束缚可为卒中后抑郁实验研究提供较理想的动物模型.3,6'-二芥子酰基蔗糖可能通过上调GFAP的表达,改善星型胶质细胞功能,发挥抗抑郁的作用.

RP-HPLC法同时测定芍枣胶囊中3种主要成分的含量

目的：建立同时测定芍枣胶囊中3种主要成分的RP-HPLC方法。方法：采用RP-HPLC法,选用Kromasil C18色谱柱（4.6 mm×250 mm,5μm）,流动相：乙腈（A）和水（B）;洗脱梯度：0~10 min 10%~19%A,10~16 min 19%~20%A,16~22 min20%~90%A,22~25 min 90%A,25~25.1 min 90%~10%A,25.1~35 min 10%A;流速：0.8 m L·min-1。Alltech 2000ES ELSD检测器,漂移管温度：115℃,空气流速3.3 L·min-1。结果：结果表明芍药苷,斯皮诺素,3,6＇-二芥子酰基蔗糖的检测分别在0.975~5.850μg,0.060~0.660μg,0.100~0.600μg范围内线性关系良好。上述3种成分的平均回收率（n=9）分别为99.5%（RSD 0.69%）,100.2%（RSD 1.03%）,99.9%（RSD 1.20%）。结论：该方法操作简单、结果准确,具有较好的重复性和稳定性,为芍枣胶囊的质量控制提供理论参考。

HPLC-DAD法测定益脑胶囊中3,6′-二芥子酰基蔗糖、五味子醇甲和人参皂苷Rb_(1)

目的建立HPLC-DAD法同时测定益脑胶囊中3,6′-二芥子酰基蔗糖、五味子醇甲和人参皂苷Rb_(1)的方法。方法采用Agilent Eclipe Zorbax XDB C_(18)柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:0.1%磷酸溶液–乙腈,梯度洗脱;检测器:DAD检测器;检测波长:203 nm(人参皂苷Rb_(1))、249 nm(五味子醇甲)、321 nm(3,6′-二芥子酰基蔗糖);体积流量:1.0 mL/min;柱温:室温;进样量:10μL。结果3,6′-二芥子酰基蔗糖、五味子醇甲和人参皂苷Rb_(1)分别在0.193~19.300、0.299~29.910、0.189~188.600μg/mL线性关系良好,平均回收率分别为99.5%、99.7%、98.3%,RSD值分别为1.2%、1.1%、0.7%。结论本法简便、准确、快速,适用于益脑胶囊中3,6′-二芥子酰基蔗糖、五味子醇甲和人参皂苷Rb_(1)的测定,为完善该产品的质量标准完善提供参考。

HPLC波长切换法同时测定复方桔梗止咳片中6个成分的含量

目的:建立HPLC波长切换法同时测定复方桔梗止咳片中6个成分含量的方法。方法:采用Waters XBridge C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以0.05%磷酸-乙腈为流动相进行梯度洗脱,流速为1.0 ml·min-1,检测波长为326 nm(绿原酸、甘草苷、异绿原酸A、3,6’-二芥子酰基蔗糖、异绿原酸C)、220 nm(款冬酮)。结果:绿原酸、甘草苷、异绿原酸A、3,6’-二芥子酰基蔗糖、异绿原酸C、款冬酮的线性范围分别为18.40~220.74 ng(r=0.999 5)、13.09~157.08 ng(r=0.999 6)、0.34~4.07 ng(r=0.999 3)、9.67~116.04 ng(r=0.999 0)、7.06~84.69 ng(r=0.999 2)、6.85~82.15 ng(r=0.999 2);平均加样回收率(RSD)分别为99.70%(1.41%),100.43%(1.68%),99.03%(2.21%),100.82%(0.45%),100.33%(1.35%),99.23%(1.06%)(n=6)。结论:本文建立的方法可同时测定复方桔梗止咳片中6个成分的含量,方法准确、简便,为复方桔梗止咳片的质量控制提供参考。

2种炮制工艺对远志化学成分的影响

目的对2种远志炮制工艺进行分析、比较,考察不同炮制工艺对远志化学成分的影响。方法按照《中国药典》方法和传统经验法炮制远志,采用高效液相色谱法测定2种不同工艺有效成分细叶远志皂苷、远志[口山]酮Ⅲ和3,6′二芥子酰基蔗糖的含量,并进行比较。结果传统经验法炮制远志中的化学成分细叶远志皂苷、远志[口山]酮Ⅲ和3,6′二芥子酰基蔗糖的含量均符合《中国药典》规定,且传统经验法炮制工艺操作简单易行。结论此炮制方法简单可行,为甘草制远志的炮制应用提供依据。

开心散^(60)Co-γ射线辐照灭菌工艺优化及不同灭菌方式对其质量影响研究

目的 优选开心散最佳^(60)Co-γ射线辐照灭菌工艺,并对比不同灭菌方式对开心散的灭菌效果及质量的影响。方法 以西伯利亚远志糖A5、西伯利亚远志糖A6、远志(口山)酮Ⅲ、3,6’-二芥子酰基蔗糖、人参皂苷Rb_(1)、β-细辛醚、α-细辛醚、去氢茯苓酸的含量和灭菌率的综合评分为指标,采用层次分析(analytic hierarchy process,AHP)法确定各指标权重系数,考察开心散不同辐照剂量的灭菌效果,优化开心散辐照灭菌工艺参数;通过微生物限度检测、指标成分含量及特征图谱检测,并结合灭菌后的制剂性状,对比辐照灭菌、湿热灭菌、干热灭菌和乙醇灭菌的灭菌效果和对开心散质量的影响。结果 按照确定的权重系数进行综合评价,确定开心散最佳^(60)Co-γ射线辐照灭菌工艺条件为辐照剂量6 kGy;不同方式灭菌样品的微生物限度检查均符合药典规定;与未灭菌制剂相比,经辐照灭菌后样品中西伯利亚远志糖A6、3,6’-二芥子酰基蔗糖含量降低,人参皂苷Rb_(1)、β-细辛醚和α-细辛醚含量增加;与辐照灭菌相比,经干热灭菌后多种指标成分含量降低,经乙醇灭菌后多种指标成分含量增加;特征图谱结果显示,各种灭菌方式样品与未灭菌样品相比相似度皆>0.99。结论 ^(60)Co-γ射线辐照剂量在6 kGy及以上时能完全杀灭制剂中的微生物,工艺稳定可行、重复性好,且辐照灭菌法与其他灭菌方法相比,在保证灭菌效果的同时能更大程度地保留开心散制剂中的主要成分,得到符合规定的开心散制剂。

RP-HPLC法测定脑力宝丸中5种成分

目的建立定量测定脑力宝丸（远志、地黄、五味子、地骨皮、菟丝子、茯苓、石菖蒲、川芎、维生素E和维生素B1）中远志口山酮Ⅲ、3，6’二芥子酰基蔗糖和五味子中3种木脂素类成分的RP-HPLC方法。方法测定远志中成分的色谱条件为AgilentHC-C188（4．6mm×250mm，5μm）色谱柱；以乙腈-．05％磷酸（18：82）为流动相；体积流量1．0mL/min；检测波长320nm；柱温30℃。测定五味子中成分的色谱条件为AgilentHC-C184．6mm×250mm，5μm）色谱柱；以甲醇-水（75：25）为流动相；体积流量1．0mL/min；检测波长254nm；柱温30℃。结果远志口山酮Ⅲ、3，6’二芥子酰基蔗糖、五味子醇甲、五味子甲素和五味子乙素分别在0．0125-0．250μg（r=0．9994）、0．0436-0．872μg（r=0．999）、0．348～2．088Ixg（r=0．9994）、0．064～0．384μg（r=0．9994）和0．112～0．672txg（r=0．9993）范围内呈良好线性关系，平均回收率分别为98．44％（RSD为1．30％）、98．21％（RSD为0．78％）、99．26％（RSD为0．54％）、98．82％（RSD为0．89％）和98．81％（RSD为1．01％）。结论该方法操作简便，准确度高，重复性好，可作为脑力宝丸的定量方法。

DISS对卒中后抑郁大鼠神经递质的作用

目的探讨远志药效成分3,6'-二芥子酰基蔗糖(3,6-disinapoylsucrose,DISS)对脑卒中后抑郁(PSD)动物模型的影响.方法建立卒中后抑郁大鼠模型,将30只SD模型造模中的大鼠随机分为PSD+生理盐水组(PSD+NS组)、PSD+氟西汀组(PSD+FLX组)、PSD+3,6'-二芥子酰基蔗糖组(PSD+DISS组),每组各10只,另取10只正常雄性SD大鼠为正常组(CC组),在治疗后行糖水偏好程度测试.第22天以ELISA法测定大鼠前额5-羟色胺(5-HT)、多巴胺(DA)、去甲肾上腺素(NE)浓度.结果在5-HT和DA水平测定中,与CC组比较,除FLX组外,其余PSD组均较低(P<0.05);与NS组比较,DISS、FLX组5-HT和DA水平较高(P<0.05).在NE水平上,FLX组高于CC组(P<0.05),PSD组均低于CC组(P<0.05),且NS组最低;与NS组比较,其余两个PSD组均较高(P<0.05).结论DISS对PSD大鼠有改善作用,并通过作用于单胺递质水平发挥作用.

基于差示浓度法的远志及其炮制品中三种成分的分析

[目的]采用差示浓度法分析远志及其炮制品中远志[口山]酮Ⅲ(PXⅢ)、3,6′-二芥子酰基蔗糖(DISS)、甘草酸(GA)的含量,以GA为标志物区分制远志与生远志、蜜远志。[方法]采用超高效液相色谱法(UPLC),以甲醇-0.1%甲酸水为流动相,梯度洗脱,流速0.3 mL/min;柱温60℃;检测波长320、237 nm;进样量2μL;测定高浓度供试品溶液中低含量成分(GA),测定低浓度供试品溶液中高含量成分(PXⅢ、DISS)。[结果]差示浓度法能够分析远志及其炮制品中含量悬殊的PXⅢ、DISS和GA的含量。[结论]该方法灵敏度高、准确性好,以GA为标志物能够区分制远志与生远志、蜜远志。

远志HPLC指纹图谱及rbcL序列分子鉴定研究

目的建立14批不同产地远志药材HPLC指纹图谱并利用化学计量学方法对其进行质量评价。采用DNA分子鉴定技术对远志药材进行物种鉴定,为远志药材质量控制提供依据。方法选用Agilent ZORBAX SB-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,0.5μm),流动相为乙腈-0.05%磷酸溶液,梯度洗脱,体积流量1.0 mL/min,柱温30℃,检测波长316 nm,进样量10μL,运用软件“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”(2012版)对14批远志药材进行相似度评价,确认共有峰,对测定结果进行聚类分析和主成分分析,并结合正交偏最小二乘-判别分析对样品进行模式识别。提取14批远志以及白薇、瓜子金样品的DNA进行序列分析和物种鉴定,并从NCBI数据库下载混淆品的序列,借助MEGA-X计算遗传距离并构建系统发育树。结果建立了14批远志药材的HPLC指纹图谱,标定了20个共有峰,相似度均大于0.918,化学计量学分析将14批远志药材分为3类。经DNA分子鉴定,14批远志药材均为远志科植物远志Polygala tenuifolia,遗传距离和NJ树分析可将远志与混淆品区分开。结论所建立的HPLC指纹图谱稳定可靠,可为远志的质量评价提供参考。rbcL序列能区分远志及其混淆品,可用于远志药材的鉴定。

HPLC波长切换法同时测定“宝根1号方”中6个成分的含量

目的:建立HPLC波长切换法同时测定'宝根1号方'中5-羟甲基糠醛、芍药苷、阿魏酸、甘草苷、3,6’-二芥子酰基蔗糖和甘草酸的含量。方法:采用Dikma C18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱;乙腈-0.1%磷酸水为流动相,梯度洗脱;流速为1.0 mL·min-1;柱温35℃;波长切换方式:0~10 min为280 nm,10~70 min为240 nm。结果:5-羟甲基糠醛、芍药苷、阿魏酸、甘草苷、3,6’-二芥子酰基蔗糖、甘草酸质量浓度分别在0.128~8.22 mg·L-1(r=0.999 9),3.31~212 mg·L-1(r=0.999 9),0.151~9.68 mg·L-1(r=0.999 9),0.580~37.1 mg·L-1(r=0.999 9),0.605~38.7 mg·L-1(r=0.999 9),1.14~72.8 mg·L-1(r=0.999 9)mg·L-1范围内与峰面积线性关系良好;平均回收率(n=6)分别为99.9%、98.4%、98.1%、99.4%、103.0%、102.6%,RSD分别为1.9%、1.4%、2.0%、1.9%、1.3%、1.4%。3批'宝根1号方'中上述6个成分的含量测定结果分别为0.079~0.082、2.331~2.353、0.133~0.134、0.370~0.380、0.284~0.289、0.915~0.944 mg·g-1。结论:该方法准确、可靠,重复性好,可用于'宝根1号方'的质量评价。

基于肠道菌群和短链脂肪酸代谢探讨甘草制远志降低肠道炎症的作用机制

目的 研究远志甘草制前后对正常大鼠肠道菌群和短链脂肪酸(short-chain fatty acids,SCFAs)代谢的影响,探讨甘草制远志降低肠道炎症的机制。方法 SD大鼠连续15 d ig远志或制远志后,ELISA法检测十二指肠组织中炎症因子白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、IL-8和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平;苏木素-伊红(HE)染色观察肠组织病理变化;采用16S rDNA测序技术检测大鼠肠道菌群结构变化;运用气相色谱法测定大鼠粪便中乙酸、丙酸、丁酸、戊酸含量。结果 甘草制远志可显著降低远志引起的大鼠十二指肠组织中IL-6、IL-8、TNF-α水平升高和肠道炎症损伤(P<0.05、0.01)。16S rDNA测序结果显示,甘草制远志后可改善远志引起的大鼠肠道菌群结构改变和物种多样性减少,在门水平上主要表现为厚壁菌门(Firmicutes)和疣微菌门(Verrucomicrobia)相对丰度回升(P<0.05、0.01),拟杆菌门(Bacteroidetes)、变形菌门(Proteobacteria)和放线菌门(Actinobacteriota)相对丰度下调(P<0.05、0.01);在属水平上,远志甘草制后可上调有益菌乳酸杆菌属Lactobacillus、毛螺菌属Lachnospira、颤螺旋菌属Oscillospira等菌属的丰度(P<0.05、0.01),下调潜在的致病菌拟杆菌属Bacteroides、梭状芽孢杆菌属Clostridium等菌属的丰度。甘草制远志可一定程度逆转远志引起的大鼠粪便中乙酸、丙酸、丁酸、戊酸含量降低(P<0.05、0.01)。结论 远志引起的肠道炎症可能与其引起肠道菌群和SCFAs紊乱有关,甘草制远志可通过改善肠道菌群和SCFAs代谢来降低肠道炎症反应。

基于指纹图谱和多指标含量测定的蜜远志质量评价

目的建立指纹图谱和多指标定量的蜜远志质量评价方法。方法Kromasil 100-5-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm)为固定相,以乙腈(A)-0.2%磷酸水溶液(B)为流动相进行梯度洗脱,体积流量为1.0 mL/min,检测波长318 nm。对16批蜜远志建立指纹图谱,确定共有峰并进行相似度分析结合化学计量学分析。采用Waters Xbridge Shiled RP C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm)进行同时测定远志[口山]酮Ⅲ、3,6′-二芥子酰基蔗糖、细叶远志皂苷、远志酸、远志皂苷元的含量。结果在指纹图谱研究中,标定了27个共有峰,结合对照品和HPLC-Q-TOF-MS共指认8个成分,分别为西伯利亚远志糖A5、西伯利亚远志糖A6、远志[口山]酮IX、远志[口山]酮Ⅲ、3,6′-二芥子酰基蔗糖、细叶远志皂苷、远志酸、远志皂苷元。聚类分析将16批样品分为3类;经主成分分析,主成分1~3是影响蜜远志质量评价的主要因子。多指标含量测定中远志[口山]酮Ⅲ、3,6′-二芥子酰基蔗糖、细叶远志皂苷、远志酸、远志皂苷元的质量分数分别为0.027%~0.068%、0.074%~0.798%、1.1%~1.4%、0.15%~0.36%、0.15%~0.37%。经方法学验证,线性关系良好(r≥0.9996),平均加样回收率为97.15%~100.9%。结论所建立的指纹图谱结合多指标含量测定方法准确、高效,特征性强,可为蜜远志饮片的质量评价和临床应用提供有效参考。

小儿健脾颗粒质量标准建立研究

目的建立小儿健脾颗粒(Xiao’er Jianpi Granules,XJG)的定性、定量分析方法。方法采用TLC法,以“整体鉴别”新模式为基础,建立了一样多测(炒莱菔子、甘草及陈皮)及一板多鉴(炒莱菔子、甘草)的鉴别方法。采用HPLC法,采用Kromasil C18色谱柱(150 mm×4.6 mm,3.5μm),以0.1%三氟乙酸-乙腈为流动相进行梯度洗脱,进样量5μL,柱温30℃,体积流量1 mL/min,检测波长252 nm(甘草酸)、275 nm(甘草苷)、283 nm(芸香柚皮苷、橙皮苷)、326 nm(3,6′-二芥子酰基蔗糖、芥子碱硫氰酸盐)。结果建立的TLC鉴别方法,斑点清晰,能专属的鉴别处方中白术、陈皮、山药、炒莱菔子、焦山楂、甘草;建立了芥子碱硫氰酸盐、3,6′-二芥子酰基蔗糖、橙皮苷、芸香柚皮苷、甘草苷、甘草酸含量测定方法,6个成分在各自质量浓度范围内线性关系良好(r≥0.9999),精密度、稳定性及重复性良好,加样回收率为97.8%~101.6%;4批样品中芥子碱硫氰酸盐、3,6′-二芥子酰基蔗糖、橙皮苷、芸香柚皮苷、甘草苷、甘草酸的质量浓度分别为0.57~0.80、0.44~0.64、3.81~4.93、1.45~2.72、0.56~1.14、1.20~1.58 mg/mL。结论建立了6个药味的TLC鉴别方法,斑点清晰且专属性强。建立了HPLC同时测定的6个成分含量测定方法,建立的方法快速、准确、专属性强,为其质量标准建立提供参考依据。

小远志中糖酯类成分及其体外抗黄嘌呤氧化酶活性研究

目的研究小远志Polygala sibirica var.megalopha中的糖酯类化学成分及其抗黄嘌呤氧化酶活性,并分析其构效关系。方法小远志75%乙醇提取物通过D101大孔树脂,依次用水和35%、65%、95%乙醇洗脱,采用尿酸生成法检测出65%乙醇洗脱部分抗黄嘌呤氧化酶活性最高(IC50=10.83μg/m L),对该部分采用多种柱色谱方法进行分离纯化,结合活性追踪,得到4个对黄嘌呤氧化酶具有高抑制活性的糖酯类化合物。结果 4个糖酯类化合物分别鉴定为远志寡糖酯A(1)、3,6′-二芥子酰基蔗糖(2)、3′-E-3,4,5-三甲氧基肉桂酰基-6-苯基蔗糖(3)、3′-E-3,4,5-三甲氧基肉桂酰基-4-苯基蔗糖(4),均为首次从该植物中分离得到。化合物1、3、4对黄嘌呤氧化酶的IC50分别为9.5、10.2、7.7μmol/L,比对照品别嘌呤醇(IC50=11.2μmol/L)抑制作用略强,而化合物2(IC50=1.3μmol/L)则显示出更强的抗黄嘌呤氧化酶活性,推测该类糖酯结构中苯乙烯基与糖基相连的结构片段是发挥药效的重要基团。结论糖酯类化合物作为新的黄嘌呤氧化酶高效抑制剂,具有开发成为抗痛风药的潜力。