24-O-乙酰升麻醇-3-O-β-D-木糖苷对HepG2细胞的细胞毒性及其作用机制

目的研究24-O-乙酰升麻醇-3-O-β-D-木糖苷对HepG2细胞的细胞毒性及其作用机制。方法利用MTT法进行细胞毒活性初筛;用荧光染色细胞形态学观察法、流式细胞术和蛋白质杂交技术从细胞和分子水平研究该化合物的细胞毒作用机制。结果24-O-乙酰升麻醇-3-O-β-D-木糖苷可以抑制HepG2细胞生长,IC50值为13μmol.L-1。该化合物可以诱导HepG2细胞凋亡和G2/M细胞周期阻滞。进一步分子水平研究表明,该化合物可使PARP蛋白裂解,抗凋亡蛋白bcl2下调,凋亡蛋白Bax上调,细胞周期素cyclinB和细胞周期素依赖性激酶cdc2表达下调。结论24-O-乙酰升麻醇-3-O-β-D-木糖苷通过诱导细胞凋亡和G2/M细胞周期阻滞来发挥细胞毒作用,其凋亡机制涉及caspases家族激活,bcl2下调和Bax表达上调,而G2/M周期阻滞与cdc2和cyclinB下调直接相关。

23-O-乙酰升麻醇-3-O-β-D-木糖苷对HepG2细胞的细胞毒性及其作用机制

目的:研究自兴安升麻提取的23-O-乙酰升麻醇-3-O-β-D-木糖苷对HepG2细胞的细胞毒性及其作用机制。方法:利用MTT法进行细胞毒活性测定;用AO/EB染色法观察细胞个体的凋亡;以流式细胞光度术研究细胞周期的改变并验证凋亡的产生;用蛋白印迹技术从分子水平阐明该化合物的细胞毒作用机制。结果:23-O-乙酰升麻醇-3-O--βD-木糖苷可以明显抑制HepG2细胞生长,IC50为16μmol.L-1。同时该化合物可以使HepG2细胞产生凋亡形态学变化和G2-M细胞周期阻滞,并使PARP蛋白裂解,bc l-2,Bax,cdc 2和cyc lin B等凋亡和细胞周期相关蛋白表达改变。结论:23-O-乙酰升麻醇-3-O--βD-木糖苷对HepG2细胞具有明显的细胞毒作用,该化合物可诱导HepG2细胞凋亡和G2-M周期阻滞,其凋亡机制涉及caspases家族激活,bc l-2和Bax表达改变,而G2-M周期阻滞与cdc 2和cyc lin B下调直接相关。

单端孢酶烯3-O-乙酰转移酶编码基因Tri101的原核表达及多克隆抗体制备

【目的】克隆Tri101并通过原核表达获得纯化蛋白,通过免疫SPF大白兔获得高效价、高灵敏度的多克隆抗体,为Tri101蛋白及转Tri101作物的检测提供抗体基础【。方法】以禾谷镰刀菌(Fusarium graminearium)F3210为材料,PCR法获得Tri101并连接至表达载体pET29a(+),将重组表达载体转化大肠杆菌BL21(DE3)后利用IPTG进行诱导表达。利用纯化表达产物制备多克隆抗体。【结果】SDS-PAGE分析结果表明,Tri101在大肠杆菌BL21(DE3)中得到表达,重组蛋白大小为50 kD左右,以包涵体形式存在。利用HisTrap亲和柱纯化重组蛋白,最佳咪唑洗脱浓度为200 mmol.L-1。采用烟草蚀纹病毒蛋白酶切除重组蛋白中的His标签,酶切产物经HisTrap亲和柱再次纯化后免疫SPF大白兔,制备多克隆抗体。经ELISA法检测抗体效价为1﹕12 000,检测灵敏度为0.05×10-6μg.mL-1。Western blotting结果证明制备的多克隆抗体对Tri101具有较好的专一性。【结论】通过Tri101的克隆及原核表达,获得了纯化的融合蛋白,通过免疫动物制备了兔源多克隆抗体,可用于Tri101蛋白及转Tri101小麦的检测。

3-O-烯丙基-6-O-乙酰基-2,4-二-O-苯甲酰基-α-D-葡萄吡喃糖基三氯乙酰亚氨酯的合成

以3-O烯丙基葡萄糖1为原料,设计合成了尚未见报道的3-O烯丙基6-O乙酰基2,4二O苯甲酰基αD葡萄糖三氯乙酰亚氨酯7.其组成和结构已由元素分析、IR、1HNMR和13CNMR表征.

硫酸乙酰肝素3-O-硫酸磺基转移酶Ⅰ研究进展

肝素/硫酸乙酰肝素是目前临床运用最广泛的抗凝血与抗血栓类药物。硫酸乙酰肝素3-O-硫酸磺基转移酶Ⅰ(Hs3stⅠ)是肝素/硫酸乙酰肝素酶化学法合成中的关键酶,可以催化硫酸基团转移到葡萄糖胺C3的羟基位置,从而形成重要的抗凝血结构单元。总结了近年来Hs3stⅠ的酶学特性、外源表达以及应用等方面的研究进展。

8-O-乙酰山栀子苷甲酸对慢性炎性痛模型大鼠脊髓背角内HDAC1～5表达的影响及与JAK_2-STAT_3信号通路的关系研究

目的:研究8-O-乙酰山栀子苷甲酸(8-OaS)对慢性炎性痛模型大鼠脊髓背角内组蛋白去乙酰化酶1～5(HDAC1～5)表达的影响及与Janus激酶2-信号转导与转录活化因子3(JAK_2-STAT3)信号通路的关系。方法:取SD大鼠随机分为正常对照组、假手术组(生理盐水)、完全弗氏佐剂(CFA)组(生理盐水)和8-OaS低、中、高剂量组(2、20、200μg/kg),每组6只,除正常对照组和假手术组外,其余各组大鼠左侧后足趾侧皮下注射CFA复制慢性炎性痛模型,建模后腹腔注射相应药物,每日1次,连续7 d。采用热辐射法检测首次给药第1、2、3、4、5、6、7、8、11、15天大鼠的缩足潜伏期。另取大鼠按上述后5组方法进行分组给药,采用Western blot法检测大鼠末次给药后腰膨大节段脊髓背角中HDAC1～5、磷酸化JAK_2(pJAK_2)、磷酸化STAT3(pSTAT3)蛋白表达情况。再另取大鼠随机分为假手术组(生理盐水)、CFA组(生理盐水)、8-OaS组(20μg/kg)和JAK_2-STAT_3的拮抗药α-氰基-(3,4-羟基)-N-苄苯乙烯胺(AG490)组(8 mg/kg),每组6只,同上法复制IP模型后腹腔注射相应药物,每日1次,连续7 d,采用免疫荧光组织化学染色观察各组大鼠HDAC5和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)在脊髓背角的表达情况。结果:与正常对照组和假手术组比较,其余各组大鼠的缩足潜伏期均明显缩短(P<0.05);与CFA组比较,8-OaS低、中、高剂量组大鼠的缩足潜伏期均明显延长(P<0.05),且呈剂量依赖性。与假手术组比较,CFA组大鼠脊髓背角中HDAC1～5、pJAK_2、pSTAT3蛋白表达均明显增强(P<0.05);与CFA组比较,8-OaS低、中、高剂量组大鼠脊髓背角中HDAC5、pJAK_2、pSTAT3蛋白表达均明显降低(P<0.05),但HDAC1～4蛋白表达差异均无统计学意义(P>0.05)。HDAC5大量表达于星形胶质细胞上,与假手术组比较,CFA组大鼠脊髓背角中GFAP和HDAC5表达均明显增强(P<0.05);与CFA组比较,8-OaS组和AG490组大鼠脊髓背角中GFAP和HDAC5表达均明显降低(P<0.05)。结论:8-OaS可有效缓解由CFA诱导的慢性炎性痛,其机制可能与下调脊髓背角中HDAC5表达和JAK_2、STAT3的磷酸化水平有关。

3-O-乙酰转移酶的表达及其酶活特性研究

将3个不同来源的3-O-乙酰转移酶基因转入大肠杆菌表达宿主,成功实现3种3-O-乙酰转移酶的异源表达,并通过诱导条件优化提高了可溶蛋白表达量。酶活特性研究结果显示,3种不同来源的乙酰转移酶在不同温度及pH条件下活性有着显著差异,其中Fo1TRI201最适温度及pH分别为40℃及pH=5.0,有着更强的温度及pH耐受性。最后在工业物料中考察了粗酶液的脱毒效果,通过向玉米浸泡液中添加1%的Fo1TRI201粗酶液,在40℃、pH=5.0条件下24 h可将玉米浸泡液中的DON从2000μg·L^(-1)以上降解至500μg·L^(-1)以下,降解率最高达82.64%,为呕吐毒素脱毒产品和技术开发提供了选择和参考,具有一定的商业应用价值。

熊果酸(UA)对大鼠活化型肝星状细胞(HSC)的NADPH氧化酶(NOX)亚基及PI3K/Akt、P38MAPK信号通路活化的影响

目的观察熊果酸(ursolic acid,UA)对大鼠活化型肝星状细胞-6(hepatic stellate cell T6,HSC-T6)NADPH氧化酶(NAPDH oxidase,NOX)亚基及其调控的磷脂酰肌醇-3-羟激酶/蛋白激酶(phosphatidyl inosit013-kinase/Akt,PBK/Akt)、P38丝裂原活化蛋白激酶(P38 mitogen-activated protein kinase,P38MAPK)信号通路及其对基质金属蛋白酶组织抑制剂-1(tissue inhibitor of metalloproteinase-1,TIMP-1)、基质金属蛋白酶-1(metalmatrix proteinase-1,MMP-1)蛋白表达的影响,并探讨其机制。方法取对数生长期的HSC-T6细胞,随机分成6组:空白对照组、瘦素组(100 ng/mL)、UA干预组(UA 50μmol/L+瘦素)、NOX抑制剂DPI干预组(DPI 20μmol/L+瘦素)、P38MAPK抑制剂SB203580干预组(SB203580 10μmol/L+瘦素)及PI3K抑制剂LY294002干预组(LY294002 10μmol/L+瘦素)。采用Western blot法分别检测NOX亚基gp91^(phox)、p22^(phox)、p67^(phox)、Rac1蛋白表达;信号通路PI3K、Akt、P38MAPK的活化及TIMP-1、MMP-1蛋白表达。结果 UA能显著抑制瘦素诱导的gp91^(phox)、p22^(phox)、p67p^(phox)、Rac1蛋白表达(P均<0.01),但UA对gp91^(phox)、p67^(phox)蛋白表达的抑制作用不及DPI和LY294002。UA能抑制瘦素诱导的PI3K蛋白表达及Akt、P38MAPK蛋白磷酸化(P均<0.01),与DPI及LY294002作用的差异无统计学意义。UA能抑制瘦素诱导的TIMP-1蛋白表达,同时促进MMP-1蛋白表达(P均<0.01)。结论 UA能抑制瘦素诱导的大鼠HSC-T6细胞NOX亚基gp91p^(phox)、p22ph^(phox)、p67p^(phox)、Rac1表达及PI3K/Akt、P38MAPK信号通路的活化;其下调TIMP-1蛋白及上调MMP-1蛋白表达的机制可能与UA抑制NOX调控的PI3K/Akt及P38MAPK信号通路有关。

木瓜齐墩果酸和熊果酸等三萜酸类薄层色谱分离鉴别

目的建立木瓜齐墩果酸、熊果酸等三萜酸薄层色谱分离鉴别方法。方法将点于硅胶G板上的样品点浸入1%碘-二氯甲烷溶液中预处理,以环己烷-丙酮-乙酸乙酯-甲酸(9∶2∶1∶0.2)为展开剂。结果木瓜中熊果酸、齐墩果酸以及3-O-乙酰熊果酸能够被很好地分离和检识。结论薄层色谱法简便、可靠,使木瓜鉴别更具客观性和专属性。

新型抗生素葡糖脱乙酰基酶LpxC抑制剂研究进展

革兰阴性菌耐药性已经严重威胁人类健康,亟需开发新作用机制的抗菌药物。UDP-3-O-(R-羟基十四酰)-N-乙酰氨基葡糖脱乙酰基酶(LpxC)是催化合成革兰阴性菌外膜脂多糖主要成分类脂A的关键酶,在革兰阴性菌中具有较高的同源性,与哺乳动物(包括人)的各种酶都没有共同序列。LpxC的缺失或过表达都会使某些革兰阴性致病菌死亡,这使其成为具有开发前景的抗革兰阴性菌药物的全新靶标。为此,本文综述了LpxC的结构、酶学性质、催化机理及其抑制剂等研究进展。

增强型脂质去除固相萃取-液相色谱串联质谱法测定畜禽产品中泰万菌素和3-O-乙酰泰乐菌素残留量

建立了增强型脂质去除固相萃取-液相色谱串联质谱法测定畜禽产品中的泰万菌素和3-O-乙酰泰乐菌素残留量。通过比较多种类型固相萃取柱对泰万菌素和其代谢物3-O-乙酰泰乐菌素测定结果的影响,最终选用甲酸-乙腈-水溶液提取,Captiva EMR-Lipid柱净化。利用单因素实验优化了乙腈-水体积比、甲酸含量以及振荡提取时间等影响因素,并在此基础上进行L9 (3~3)正交实验。通过方差分析明确主次因素,确定各因素之间最佳组合方式为:采用0.3%甲酸-乙腈-水溶液(90/10, V/V)提取,振荡25 min,Captiva EMR-Lipid柱净化。结果显示,泰万菌素和3-O-乙酰泰乐菌素在0.2~10μg/L线性范围内线性关系良好,线性相关系数R>0.998。在1, 5, 10, 50μg/kg加标水平下,平均回收率为76.5%~93.5%,相对标准偏差为1.6%~7.3%。

ZnCl_2-KBH_4还原苹果酸和天冬氨酸的研究

在锌盐存在下 ,KBH4表现出良好的化学还原性和选择性 .报道以无水氯化锌和KBH4作还原剂选择性地还原 (S) 2 乙酰基苹果酸酐和 (S) 2 乙酰基天冬氨酸酐 ,分别以 88%和 74%的产率和大于 99%的光学纯度得到了 (S) 3 羟基 γ 丁内酯和 (S) 3 乙酰氨基 γ

GCNT3通过PI3K/Akt/mTOR和RhoA/ROCK/Cofilin途径促进肝癌细胞增殖、迁移和侵袭(英文)

β-1,3-半乳糖-O-糖基-糖蛋白β-1,6-N-乙酰氨基葡萄糖转移酶(β-1,3-galactosyl-O-glycosyl-glycoproteinβ-1,6-N-acetylglucosaminyltransferase,GCNT3)是黏液蛋白质生物合成中不可缺少的一类N-乙酰葡萄糖转移酶。越来越多的证据表明,GCNT3的异常表达与肿瘤的侵袭以及病人的生存率有关,然而相关的研究仍较少报道。本研究旨在揭示GCNT3在调控肝细胞癌进程中的潜在机制。本研究首先利用高通量基因表达数据库(Gene Expression Omnibus,GEO)和癌症基因组图谱(Cancer Genome Atlas databases,TCGA)数据库分析肝癌和正常组织中GCNT3的mRNA表达水平,结果表明,肝癌组织中GCNT3的mRNA表达水平高于正常组织(P≤0.001)。同时利用免疫组化、Western印迹进一步分析了肝癌组织、癌旁组织、正常组织中GCNT3蛋白的表达,发现有30%肝癌组织GCNT3表达水平高于癌旁组织和正常组织。随后,在肝癌细胞系HCCLM3和Huh7细胞中,采用CCK-8、平板克隆、划痕实验、Transwell实验分析GCNT3对肝癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响,结果显示,敲低GCNT3可抑制肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭,而过表达GCNT3发挥相反作用。细胞周期和Western印迹结果显示,GCNT3调控G_(0/)G_1期关键蛋白质的表达来促进肝癌细胞周期G_1/S的转换。进一步探究发现,GCNT3可能通过激活PI3K/AKT/mTOR信号通路促进细胞增殖;以及GCNT3上调RhoA/ROCK/Cofilin通路关键蛋白质的表达来促进F-肌动蛋白(F-actin)的形成,从而参与细胞的迁移和侵袭。总之,本研究通过对GCNT3在肝癌细胞中的功能分析,初步证明,GCNT3与肝癌细胞增殖、迁移和侵袭中的功能有关,证实了GCNT3在肝癌临床治疗中的潜在价值,为肝癌治疗和诊断提供了新思路。

皱皮木瓜中三萜化合物的分离鉴定

目的：通过对皱皮木瓜中化学成分的研究，阐明其药理活性及临床作用的化学基础。方法：采用有机溶剂提取，硅胶柱层析或薄层层析分离，理化性质和波谱数据鉴定结构。结果：分离并鉴定了３个五环三萜类化合物，分别为乙酰熊果酸、３Ｏ乙酰坡模醇酸和桦木酸。结论：木瓜中的化学成分以五环三萜类化合物为主。

醉鱼草化学成分的研究

目的 研究醉鱼草的化学成分。方法 利用硅胶色谱柱层析进行分离纯化 ,通过理化方法及光谱分析鉴定其化学结构。结果 从其全草的乙醇提取物中分得 10个化合物 ,分别鉴定为α-菠甾醇 ( )、豆甾醇 ( )、β-谷甾醇( )、熊果酸 ( )、齐墩果酸 ( )、二萜类化合物 phenanthrene( )、二十四烷酸 - α-单甘油酯 ( )、二十九烷 ( )、蒙花苷 ( )和 6 - O-香草酰筋骨草苷 ( )。结论 这些化合物均为首次从该植物中分得。

升麻地上部分皂苷类成分研究

目的 为开发中药升麻 (CimicifugafoetidaL .)的地上部分资源 ,从中寻找新的天然活性成分。方法 利用各种色谱技术进行分离纯化 ,根据理化性质和各种波谱技术辅以化学方法进行结构鉴定。结果 从 80 %的乙醇提取物中分得 5个升麻三萜皂苷类成分。分别鉴定为 :乙酰升麻醇 3 O α L 阿拉伯糖苷 (1) ,乙酰升麻醇 3 O β D 木糖苷 (2 ) ,2 5 脱水升麻醇 3 O β D 木糖苷 (3) ,升麻醇 3 O α L 阿拉伯糖苷 (4) ,升麻醇 3 O β D 木糖苷 (5 )。 结论 1为新化合物 ,2和

梅林青霉对熊果酸的微生物转化研究

目的利用梅林青霉(Penicillium melinii AS3.4474)对熊果酸进行微生物转化研究。方法将熊果酸投入梅林青霉液体培养基中,28℃、140 r/min条件下共培养5 d后,利用多种色谱学方法分离纯化转化产物,核磁共振波谱学技术进行结构鉴定。结果熊果酸在梅林青霉液体培养基中发生了生物转化反应,分离出3个主要转化产物,依次鉴定为3-羰基熊果酸、28-O-β-D-吡喃葡萄糖熊果酸酯和3-O-β-D-吡喃葡萄糖熊果酸酯。结论首次利用梅林青霉对熊果酸进行微生物转化并获得糖苷化和羰基化的转化产物,为熊果酸的衍生物研究奠定了基础。

滇白珠化学成分的研究(Ⅲ)

从滇白珠Ｇａｕｌｔｈｅｒｉａ ｙｕｎｎａｎｅｎｓｉｓ（Ｆｒａｎｃｈ．）Ｒｅｈｄ．根的石油醚部分分得 １０个化合物，其中８个化合物经理化性质和波谱分析，它们的结构分别鉴定为β－乙酰谷甾醇（Ⅰ），３β－乙酰基－１２，２５－二烯－达玛烷（Ⅱ），３β－乙酰氧基－２０（２９）－羽扇烯－２８－醛（Ⅲ），３β－乙酰齐墩果酸（Ⅳ），β－谷甾醇（Ⅴ），熊果酸（Ⅵ），豆甾醇（Ⅶ）和３β－羟基－２０（２９）－羽扇烯－２８－醛（Ⅷ）。其中Ⅱ为杜鹃花科植物中首次发现的达玛烷三萜类化合物，化合物Ⅰ、Ⅲ、Ⅷ为杜鹃花科植物中首次报道，其它４个化合物为从该植物中首次分得。

异叶青兰化学成分研究

采用大孔树脂、硅胶、MCI及Sephadex LH-20色谱法对异叶青兰全草进行分离，应用光谱法对所得化合物进行了结构鉴定。从异叶青兰中分离得到5个化合物，分别鉴定为乌苏甲酯（methylursolate，1）、熊果酸（ursolic acid，2）、3β-羟基-齐墩果烷-3—O-β-D-葡萄糖甙（3β-hydroxy—oleanane-3—O-β-D—glucopyranoside，3）、木樨草素-7-O-β-D-葡萄糖甙（1uteolin-7-O-β-D-glueopyranoside，4）、木樨草素（luteolin，5）。五个化合物均为首次从该植物中分离得到。