茶黄素-3,3’-没食子酸酯修饰的纳米羟基磷灰石/聚已内酯复合多孔支架修复骨缺损

背景:茶黄素-3,3’-没食子酸酯(theaflavin-3-gallate,TF-3G)可明显抑制骨吸收,在预防骨质疏松方面具有明显的效果,但是将其应用于成骨方面的研究并不多见。目的:将TF-3G负载于纳米羟基磷灰石/聚己内酯(nano-Hydroxyapatite/Polycaprolactone,nHA/PCL)复合支架中,观察其成骨作用。方法:配制不同质量浓度的TF-3G溶液,通过CCK-8实验检测其细胞毒性。根据细胞毒性实验结果选择适宜质量浓度(0,0.86,4.30,8.60,17.20,34.4,68.8,86,106 mg/L)的TF-3G溶液干预骨髓间充质干细胞,采用CCK-8法检测其成骨分化过程中的增殖活性。选择一定质量浓度的TF-3G溶液诱导骨髓间充质干细胞向成骨方向分化,进行碱性磷酸酶活性检测与茜素红染色。利用选择性激光烧结快速成型技术制备nHA/PCL复合多孔支架,采用溶液浸渍与冷冻干燥法将TF-3G负载于nHA/PCL复合多孔支架中。在成年新西兰大白兔桡骨部位制作1.5 cm的骨缺损,空白对照组不植入任何材料,两实验组分别植入nHA/PCL、TF-3G/nHA/PCL复合多孔支架,术后分别进行影像学检查与组织学观察。结果与结论:(1)CCK-8检测显示,0.86,4.30,8.60 mg/L的TF-3G可促进骨髓间充质干细胞的增殖,17.20,34.4,68.8,86,106 mg/L的TF-3G抑制骨髓间充质干细胞的增殖,选择0.86,4.30,8.60 mg/L质量浓度进行骨诱导实验。(2)碱性磷酸酶活性检测与茜素红染色显示,随着TF-3G溶液质量浓度的增加,促成骨效果增强。(3)术后4,12周的Lane-Sandhu X射线评分显示,两支架组高于空白对照组(P<0.05),并且TF-3G/nHA/PCL组高于nHA/PCL组(P<0.05)。(4)术后12周,结合苏木精-伊红、Masson染色结果进行Huddleston组织学评分,两支架组高于空白对照组(P<0.05),并且TF-3G/nHA/PCL组高于nHA/PCL组(P<0.05)。(5)结果表明,TF-3G可促进骨髓间充质干细胞的增殖与成骨分化,负载TF-3G的nHA/PCL复合多孔支架可促进骨缺损的修复。

茶黄素-3’-没食子酸酯-壳聚糖纳米乳液的制备及其性能分析

纳米乳液系统实现了生物活性分子的高效运输、传递,解决了营养物质不稳定、易氧化、生物利用率低等问题。本实验以三聚磷酸钠(Sodium Triphosphate,TPP)作为交联剂,采用离子交联法制备茶黄素-3’-没食子酸酯-壳聚糖(Theaflavin-3’-gallate-Chitosan,TF2B-CS)纳米乳液,所制得乳液粒径为(241.31±6.92)nm,Zeta电位为(13.36±1.03)mV,包埋率为80.34%。通过体外模拟消化研究TF2B-CS纳米乳液的消化规律,对其进行粒径、Zeta电位和微观结构检测,并考察TF2B在小肠消化阶段的生物利用率。在体外模拟消化过程中,胃阶段粒径显著高于原始乳液,各阶段Zeta电位均小于原始乳液;经过口腔-胃-小肠三阶段体外模拟消化后的TF2B生物利用率为9.71%。研究通过制备纳米乳液作为递送TF2B的良好体系,有效地发挥TF2B的生物活性,为进一步优化纳米乳液的制备工艺及其应用提供理论依据。

茶黄素复合物中单体对照品的制备研究

目的研究茶黄素复合物和单体的对照品分离制备。方法AB-8树脂吸附茶黄素,乙醇梯度洗脱得茶黄素复合物,进一步用半制备液相色谱分离茶黄素单体。结果AB-8大孔树脂进行吸附,20%、30%、40%、50%、60%乙醇溶液梯度洗脱,洗脱速度为2 BV/h,制得质量分数80%的茶黄素复合物。以制备色谱进一步分离获得质量分数90%以上茶黄素-3-没食子酸酯、茶黄素-3′-没食子酸酯和茶黄素-3,3′-双没食子酸酯,以及质量分数大于70%的茶黄素的单体。结论大孔吸附树脂和制备色谱结合可以从茶黄素复合物中获得比较理想的单体对照品。