3,5,3′-三碘甲腺原氨酸对人胎大脑神经细胞培养物微管蛋白发育的影响

本文报道利用3个月龄人胎大脑神经细胞无血清培养液培养的原代培养物,经同位素法测定观察了细胞内微管蛋白(Tubulin)发育的变化。培养5,10,15,20天的培养物,证明生理剂量的3,5,3′(?)三碘甲腺原氨酸(T_3)对神经细胞微管蛋白的发育有明显的影响,可直接促进人胎大脑神经细胞分化成熟。

3,5,3′-三碘甲腺原氨酸对体外培养人胎成骨细胞生长、功能的影响

本文利用无血清培养的人胎成骨细胞(OB)体外模型,通过对 OB 内碱性磷酸酶(ALP)活性、胶原合成、DNA、蛋白含量及 cAMP 水平的测定,研究了生理浓度的 T_3(3,5,3′-三碘甲腺原氨酸)对 OB 生长、功能、分化的作用,结果显示:生理浓度的 T_3可显著地增加 OB内 ALP 的活性,并有时间相关关系,T_3作用96小时可显著地增加~3H-脯氨酸掺入到胶原蛋白中;然而,在96小时时期内,却未显著地改变细胞内蛋白及 DNA 的含量。这些结果表明.T_3引起 ALP活性、胶原合成的增加,不是由于促进了 OB 的增生,而是直接促进了体外培养的 OB 的分化而增加其功能。本研究提示,T_3在生理浓度下与体内骨形成有关。

血清3,5,3’-三碘甲腺原氨酸酶联免疫分析试剂盒的研制

以辣根过氧化物酶标记链亲合素（SA）,T3抗体包被微孔,T3生物素化,四甲基联苯胺（TMB）为底物,建立了3,5,3’-三碘甲腺原氨酸（T3）生物素-亲合素酶联免疫分析（T3-BA-EL1SA）方法。结果显示,本方法分析灵敏度为0.2μg/L,批内、批间变异系数分别为7.1%－8.3%和6.5%－10.5%,回收率为98.1%－107.2%;高浓度T3血清样品系列倍比稀释后,测定值与稀释度呈线性相关,相关系数为0.995 7。本试剂盒操作简便、快速,适用于临床检测和科研应用。

固真方对老年大鼠胸腺三碘甲状腺原氨酸(T_3)受体、Na^+-K^+-ATP酶等作用的研究

本研究观察了补肾益精方药固真方对老年大鼠胸腺重/体重比值,老年大鼠胸腺细胞三碘甲状腺原氨酸(T_3)受体数、Na^+-K^+-ATP酶活性以及下丘脑、血浆亮氨酸脑啡肽(L-EK)含量的影响。结果表明:老年大鼠胸腺重/体重比值,胸腺细胞T_3受体数、Na^+-K^+-ATP酶活性以及血浆亮氨酸脑啡肽(L-EK)含量均明显低于青年对照鼠,下丘脑L-EK含量则显著高于青年对照鼠,而固真方能明显改善老年大鼠胸腺三碘甲状腺原氨酸(T_3)受体、Na^+-K^+-ATP酶活性的改变,提示固真方可能通过增加老年大鼠降低的胸腺细胞T_3受体数和提高胸腺摄取T_3的功能,从而增强甲状腺激素(T_3)对胸腺的促进作用,提高老年机体胸腺依赖性免疫功能。

游离三碘甲腺原氨酸(FT3)生物素-亲合素酶联免疫分析

采用T3抗体包被酶标板微孔、生物素化T3和辣根过氧化物酶(HRP)标记链亲合素作为信号放大体系,一系列定量游离T3(FT3)为标准品,并以四甲基联苯胺-过氧化氢为显色底物,建立了FT3的生物素-亲合素(BA)酶联免疫分析(FT3-BA-EIA)法。其灵敏度为0.90pmol/L,标准曲线范围0.9～45.0pmol/L,批内变异系数3.1%～8.1%,批间变异系数4.9%～10.6%。测定了101例临床血样,其中正常人46例,实测范围2.5～11.1pmol/L,均值为5.1±2.0pmol/L;27例甲亢病人,实测范围9.7～37.3pmol/L,均值为20.5±7.1pmol/L;20例甲低病人,实测范围0.9～3.8pmol/L,均值为2.0±0.9pmol/L;8例孕妇,实测范围为3.4～8.5pmol/L,均值为6.0±2.5pmol/L。通过对临床血样的检测,本法与化学发光法(CIA)及放免法(RIA)的测定结果有良好的相关性。应用本法可有效地诊断甲状腺疾病,具有操作简便、灵敏、快速的特点,适于临床检测和科研应用。

应用FITC系统建立非均衡竞争游离三碘甲腺原氨酸(FT_3)化学发光法

目的制备抗人T3多克隆抗体,应用异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanat,FITC)系统开发新型非均衡竞争技术,建立一种能广泛应用于临床检测游离三碘甲腺原氨酸(free triiodothyronine,FT3)的方法。方法以T3-牛血清白蛋白(bovin serum albumin,BSA)为抗原免疫新西兰大白兔,制备抗人T3多克隆抗体,亲和层析法纯化并联接辣根过氧化物酶(horse radish peroxidase,HRP)。用FITC标记T3-类似物。采用抗FITC抗体包被发光板,FITC-T3类似物与抗FITC抗体结合形成固相抗原,通过非均衡竞争法原理,固相抗原与血清中FT3竞争结合抗T3抗体-HRP,通过标准曲线计算FT3浓度,建立方法学评价并与直接用T3-牛血清γ球蛋白(Bovine serum gamma globulin,BGG)包被(非FITC系统)的检测系统相比较。将本方法应用于临床120份血清标本的检测,定量结果与德国罗氏2010电化学发光全自动免疫分析系统(Elec-sys 2010)定量结果进行比较。结果抗体经酶联免疫吸附实验证明对T3、具有高度特异性。应用FITC系统建立的非均衡竞争化学发光免疫分析标准曲线的线性R>0.99,线性范围0.25～50 pg/ml,分析灵敏度为0.25 pg/ml,精密度测试批内、批间变异系数CV<5%,检测结果优于非FITC系统的检测。对于临床血清标本的检测,其定量结果与德国Elecsys2010定量试剂盒的定量结果具有很好的相关性,相关系数r=0.962 2,两者的测定值无显著性差异。结论制备的抗人T3多克隆抗体特异性强,以FITC系统为平台建立的非均衡竞争FT3检测化学发光法具有精密性好、灵敏度高、稳定性强,有良好的准确性,达到临床测定的需求,可代替进口化学发光产品用于临床样本的检测。

三碘甲腺原氨酸对心肌细胞肌浆网钙-ATP酶活性的影响及对心肌功能的调控

目的 研究不同甲状腺功能状态下，缺血再灌注（Ｉ／Ｒ）过程中心肌细胞肌浆网钙－ＡＴＰ酶（ＳＲ·Ｃａ２＋－ＡＴＰａｓｅ， ＳＥＲＣＡ）活性的变化及三碘甲腺原氨酸（Ｔ３）对其变化的影响，同时探讨心肌功能的调控。方法将实验大鼠分为甲状腺 功能正常（Ａ组）和甲状腺功能减退（甲减，Ｂ组）两组，每组又分别随机分成对照组、缺血组、单纯灌注液组、Ｔ３灌注液 组；建立高体心工作模型；测定各组心肌细胞ＳＥＲＣＡ活性。结果甲减状态下大鼠心肌细胞ＳＥＲＣＡ活性下降４３．２％ （Ｐ＜０．０１）。缺血３０ｍｉｎ时，Ａ、Ｂ两组的ＳＥＲＣＡ活性均显著降低，并随着复灌进一步下降。但在复灌２０ｍｉｎ时，Ｔ３ 灌注 液组的酶活性较单纯灌组显著提高，Ａ组分别为（１１．２０±１．０７）和（７．３３±０．５６）μｍｏｌ·ｍｇ－１·ｈ－１（Ｐ＜０．０１） ；Ｂ组分别为 （６．８９±０．５２）和（５．２３±０．７１）μｍｏｌ．ｍｇ－１·ｈ－１（Ｐ＜０．０５），甚至高于缺血组。结论甲减状态及Ｉ／Ｒ过程中，心肌细胞ＳＥＲＣＡ活 性受到严重损害，可导致胞浆中Ｃａ２＋超负荷。Ｔ３可显著提高ＳＥＲＣＡ活性，降低胞浆中Ｃａ２＋?

三碘甲腺原氨酸(T_3)第三次免疫测定用国家标准品的建立

目的:建立三碘甲腺原氨酸(T3)第三次定量免疫测定用国家标准品。方法和结果:精确称取高纯T3原料,用含0.5%BSA的0.02M PBS缓冲液配制成100ng/ml溶液,经无菌过滤处理后,分装、冻干制成候选品。以T3第二次国家标准品(150550-0004)为对照品,经协作标定,候选品中T3免疫活性为50ng/支。结论:候选品各项指标均符合要求,可作为T3第三次免疫测定用国家标准品使用。本标准品的建立,为T3免疫测定用试剂盒的标准化提供定量基础。

三碘甲腺原氨酸免疫分析工作标准品的研制

制备供免疫分析用的 3,5 ,3 -三碘甲腺原氨酸 (T3 )工作标准品并标定其免疫效价。用每升含 193.2 7mgT3的 4 0mol/LNaOH溶液和去激素血清 ,配制浓度为 10 0 μg/L的T3 溶液。将该溶液按每 1mL分装 ,冻干。以国产现行标准品为对照品 ,标定配制的T3 工作标准品免疫效价为 91.4ng/安瓿 ,95 %的可信限为 88- 95ng/安瓿。并从T3 药盒工作标准曲线上 ,读出本所 16 0 1- 970 3批低、中、高质控血清的T3 值。在以相应的参考值为参照时 ,测定值的偏倚均小于 10 %。总之 ,配制的T3 工作标准品适用于国产T3

3,3′5′-三碘甲状腺原氨酸(rT_3)放射免疫分析的临床应用

机体血液中除外T3还存在着另外一种3，3’，5’-三碘甲状腺原氨酸(Reverse Triiodothyronine．简称rT3)，又称反三碘甲状腺原氨酸(简称反T3）。1956年Rocher已发现大鼠血液中有rT3物质的存在，由于rT3的生物活性很低，临床上几乎没有证实其生物活性作用。因此，

^125 I-3，3’-二碘甲腺原氨酸标记物的制备和鉴定

目的建立3，3＇-二碘甲腺原氨酸（3，3＇T2）的^125 I标记方法，并对标记产物进行鉴定。方法用氯胺T法以^125I标记3，3’T2；用Sephadex LH-20柱层析和下行纸层析纯化分离；以3，3’-T2纯品作为标准，通过下行纸层析、放射自显影、茚三酮显色等方法对标记产物进行鉴定。结果3，3＇-T2的^125 I标记率为26．57％，放化纯度为95．24％，比放射性为116μCi/μg，经Sephadex LH-20柱分离出现2个峰；标记产物下行纸层析分离后经放射自显影鉴定可见^125 I-rT3、^125I-3，3＇-T2、游离^125I，计算其Rf值分别为0．33、0．46、0．74；经下行纸层析、放射自显影、茚三酮显色的联合应用及标准品的对照证明Rf值0．46位置的物质就是^125I-3，3’T2。结论成功建立了3，3＇T2^125。I标记方法。

3,3',5-碘-L-甲腺原氨酸对成骨细胞前体增殖和成骨分化的作用

目的观察不同浓度的3,3',5-碘-L-甲腺原氨酸(3,3',5-triiodo-L-thyronine,T3)对小鼠颅顶前成骨细胞亚克隆14(MC3T3-E1 subclone 14)细胞增殖及分化水平的作用.方法分别给予不同浓度T3干预细胞,培养1、2、3 d后采用CCK8法检测细胞增殖水平;在成骨分化诱导试剂干预7 d基础上,结合上述T3给药,通过碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色检测各浓度组成骨细胞分化水平,通过实时荧光定量PCR和免疫蛋白印迹(Western blot)法检测各浓度组的成骨细胞标记性基因及蛋白的表达差异.结果在分别干预1、2、3 d后,T3随着浓度增高,对细胞的增殖水平均呈明显上调;而且相同剂量的T3对于细胞增殖呈时间依赖性增强.此外,MC3T3-E1 Subclone 14细胞诱导7 d后,对比于0对照组,低浓度T3(1 nmol/L)对成骨细胞各分化参数均无明显作用,而10、100、1000 nmol/L的T3对细胞ALP染色,成骨细胞相关基因及蛋白均明显上调,其中以10和100 nmol/L组最为显著.结论T3对于MC3T3-E1 Subclone 14细胞的增殖和成骨细胞分化均有显著的促进作用.

血清3,5,3’-三碘甲腺原氨酸化学发光定量免疫分析方法的建立

目的建立血清3,5,3’-三碘甲腺原氨酸（T3）化学发光定量免疫分析方法。方法采用固相竞争法,96孔微孔板包被T3抗体,辣根过氧化物酶标记T3,鲁米诺为发光底物,建立T3化学发光定量免疫分析方法。结果本方法的线性范围为0.5~8.0ng/m L;分析灵敏度为0.18ng/m L;批内变异系数为4.4%~6.6%,批间变异系数为5.5%~10.6%;回收率为90.0%~113.3%;高值T3血清样品经系列倍比稀释后的测定值与稀释度呈线性关系,相关系数为0.9922;与T4、γT3的交叉率分别为0.35%、0.54%;与罗氏电化学发光分析法的测定值具有较好的相关性。结论本方法具有分析灵敏度高、特异性好和操作简便快速的特点,适用于临床检测和科研应用。

低三碘甲腺原氨酸综合征与抗N-甲基-D-天冬氨酸受体脑炎严重程度及预后的相关分析

目的探讨抗N-甲基-D-天冬氨酸受体(NMDAR)脑炎患者出现低三碘甲腺原氨酸(T3)综合征与疾病严重程度及预后的关系。方法回顾性分析2016年1月至2021年1月海军军医大学(第二军医大学)第一附属医院确诊的32例抗NMDAR脑炎患者的临床资料。根据入院后首次测定的血清游离三碘甲腺原氨酸(FT3)水平,将患者分为低T3综合征组及甲状腺功能正常组,并比较两组患者的人口学信息、临床特征等。根据患者发病后2~4周时的改良Rankin量表(mRS)评分,将患者分为预后良好组(mRS评分<3分)和预后不良组(mRS评分≥3分),并比较两组患者临床特征及实验室检查结果。采用Pearson双变量相关分析探究低T3综合征与抗NMDAR脑炎严重程度及预后的相关性。结果32例患者中有14例(43.75%)出现低T3综合征。与甲状腺功能正常组相比,低T3综合征组患者的意识障碍发生率、入院时mRS评分、癫痫发作率、并发肺部感染率、头颅MRI异常率、死亡率均较高(P均<0.05)。预后不良组合并低T3综合征、癫痫持续状态、发热、并发肺部感染的患者比例均高于预后良好组(P均<0.05)。相关分析结果显示,FT3水平与mRS评分呈负相关(r=-0.514,P=0.003)。结论抗NMDAR脑炎患者甲状腺激素水平改变可能与体内自我保护机制有关,可能是一种潜在的重症抗NMDAR脑炎患者不良预后的生物标志物。常规监测FT3水平对抗NMDAR脑炎患者进行危险分层及预后判断具有重要的临床意义。

抗三碘甲腺原氨酸(T_3)和甲状腺素(T_4),单克隆抗体(McAb)的研制及T_3、T_4放射免疫分析的研究

放射免疫分析(RIA)技术是具有高度灵敏和高度特异性的核医学体外检测技术。抗体的质量是建立RIA技术的关键之一。抗体的亲和力则直接影响方法的灵敏度。而抗血清(PcAb)的制备具有周期长。

化学发光酶免疫法测定游离三碘甲腺原氨酸

以辣根过氧化物酶为三碘甲腺原氨酸类似物的标记物，鲁米诺为化学发光反应底物，建立了一种高灵敏度化学发光免疫检测游离三碘甲腺原氨酸的方法。该法线性范围为0．90～80ng／L，批内变异小于12．1％，批间相对标准偏差均小于15％，其余各项指标均良好。利用本法对血清样品进行了测定，关于甲状腺机能亢进组病人的临床诊断符合率达到83．3％。与其它化学发光免疫分析方法比较所得相关系数为0．9005。在方法条件选择上，以尽可能保持游离激素和蛋白结合激素之间的平衡为原则，提高游离三碘甲腺原氨酸浓度测定的准确性。

氯化镧对牛血清谷胱甘肽过氧化物酶、生长激素、胰岛素、三碘甲腺原氨酸和四碘甲状腺原氨酸浓度的影响

选用36头平均体重420 kg,年龄2.5岁的中国西门答尔阉牛,采用随机区组设计分为4组,以混合精料和风干玉米秸秆为基础日粮,研究日粮中添加不同水平氯化镧对西门答尔阉牛营养物质消化、血清谷胱甘肽过氧化物酶、生长激素、胰岛素、三碘甲腺原氨酸和四碘甲状腺原氨酸浓度的影响。结果表明:实验至第60天时,每天添加0.9 g氯化镧的饲粮有机物质、粗蛋白、粗脂肪、粗纤维、中性洗涤纤维和酸性洗涤纤维的表观消化率较对照组和其它处理组分别提高了8.09%、7.13%、15.20%、9.47%、13.09%和20.48%,血清谷胱甘肽过氧化物酶活性较对照组和其它处理组显著提高了8.22、3.95和5.04个单位,血清生长激素、胰岛素浓度、三碘甲腺原氨酸和四碘甲状腺原氨酸浓度均显著高。

三碘甲腺原氨酸对心肌细胞能量代谢的影响及其在心肌保护中的作用

目的 研究不同甲状腺功能状态下，三碘甲腺原氨酸（T3）对大鼠缺血再灌注（I/R）心肌细胞能量代谢的影响，探讨T3在心肌保护中的作用。方法 将实验大鼠分为甲状腺功能正常（A组）和甲状腺功能减退（甲减，B组）组，两组又随机分成空白缺血组、单纯灌注液组、T3灌注液组；建立离体心工作模型；利用反相高效液相色谱法测定各组心肌细胞ATP、ADP、AMP含量。结果 甲减状态心肌细胞ATP、ADP、AMP含量均明显降低（P<0.01）；I/R过程中，A、B两组ATP、ADP、AMP含量均大幅度下降，然而，T3灌注液组ATP含量显著高于单纯灌注液组：A组（1.03±0.02）vs（0.62±0.02）(mol/g，B组（0.85±0.02）vs（0.40±0.01）(mol/g，P<0.01。结论 甲减或I/R损伤使心肌细胞的能量合成及利用受到严重损害，T3可明显增加心肌细胞ATP的合成量与储备量，具有良好的心肌保护作用。

三碘甲腺原氨酸对斜带石斑鱼卵黄囊期仔鱼消化道发育和存活的影响

运用放射免疫测定方法检测了斜带石斑鱼早期发育过程中三碘甲腺原氨酸(T3)的变化,并用T3处理卵黄囊期仔鱼,研究其对发育、生长和存活的影响。斜带石斑鱼受精卵中含有相当量的T3,T3随发育而逐渐下降,到仔鱼开口时已经检测不到,提示甲状腺激素可能被胚胎和卵黄囊仔鱼所利用而参与其发育进程。在孵化后24h内,T3促进发育的作用不明显;在孵化24h后,T3对仔鱼消化道的发育有促进作用。在孵化72h后,0.01mg.L-1T3处理组仔鱼直肠管径明显比对照大,而小肠管径和全长与对照相比差异均不明显;0.1mg.L-1和1mg.L-1T3处理组仔鱼小肠和直肠管径显著比对照大,而全长显著比对照短。1mg.L-1T3显著加速了仔鱼卵黄囊的吸收,但对油球的吸收无影响。在孵化后第8天,0.01mg.L-1T3处理组仔鱼存活率明显比对照组高。结果表明,甲状腺激素促进卵黄囊期仔鱼消化道发育的作用与发育时期密切相关,孵化后24h内,消化道对T3不敏感,此后则变得敏感;0.01mg.L-1T3能提高仔鱼存活率。

急性心肌梗死患者的临床特点与低游离三碘甲腺原氨酸的相关性研究

目的探讨急性心肌梗死（acute myocardial infarction,AMI）患者的临床特点与低游离三碘甲腺原氨酸（freetriiodothyronine,FT3）的关系。方法选择2012年10月～2013年3月中日友好医院收治的AMI并行冠状动脉造影（coronary angiography,CAG）的患者共106例。收集研究对象的临床和CAG资料,对其进行回顾性研究。结果 106例患者中54例（50.9%）FT3减低,52例（49.1%）FT3正常。低FT3组和正常FT3组糖尿病的发生率分别为40.74%、19.23%（P=0.000）;左室射血分数分别为（50.00±11.90）%、（56.67±12.84）%（P=0.045）;血红蛋白分别为（129.27±19.31）、（139.64±17.99）g/L（P=0.041）;与正常FT3组比较,低FT3组心功能差,KillipⅠ级患者比例少,KillipⅣ级患者比例多,梗死相关动脉多为前降支（left anterior descending,LAD）,右冠状动脉病变少,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 AMI患者发生低FT3比例高,低FT3组糖尿病发生率高、心功能差、血红蛋白低、冠脉LAD病变多。