3-磷酸肌醇依赖性蛋白激酶-1激活AGC家族激酶的机制研究进展

3磷酸肌醇依赖性蛋白激酶1(3phosphoinositidedependentproteinkinase1,PDK1PDPK1)是蛋白激酶B(proteinkinaseB,PKBCAKT)的上游激酶,通过与3,4,5三磷酸磷脂酰肌醇[PtdIns(3,4,5)P3]作用激活相邻的PKB分子.同时,PDK1被称为AGC激酶的掌管者(master),能够激活包含PKB在内的一系列的AGC激酶家族成员.PDK1磷酸化这些激酶的保守区域Tloop区,使它们充分激活,从而调节细胞代谢,生长,扩散,生存,抗凋亡等诸多生理过程.本文就PDK1调节AGC激酶的活性,与功能上命名的PDK2的关系,PDK1分子自身的调节,PH结构域对自身活性及AGC激酶活性的影响,PDK1定位以及作为一个新药物靶标等方面做了综述.

3-磷酸肌醇依赖性蛋白激酶1结构和功能

PDK1可调节AGC激酶家族中一些重要蛋白激酶。这些激酶包括蛋白激酶B(PKB/Akt)、p70 核小体S6激酶(p70 ribosomal S6 kinase,S6K)、血清和糖皮质激素诱导激酶(SGK)和蛋白激酶C(PKC)等, 它们在细胞代谢、生长、增殖和存活等生理过程中具有重要作用。因此,了解PDK1生物学特性可能对其调节的AGC激酶持续活化的癌症治疗具有一定推动作用。本文对PDK1的结构、遗传和生化特点进行了综述。

3-磷酸肌醇依赖性蛋白激酶1基因敲除对心肌梗死诱导心力衰竭小鼠心血管重构的影响及其机制研究

目的:研究3-磷酸肌醇依赖性蛋白激酶1(PDK1)基因敲除对心肌梗死诱导的心力衰竭小鼠心血管重构的影响,并探讨其潜在的机制。方法:随机选取15只野生型雄性昆明小鼠作为对照组,20只野生型雄性昆明小鼠(模型组)和20只心肌组织PDK1敲除雄性昆明小鼠(PDK1组)通过结扎小鼠冠状动脉前降支制备心肌梗死诱导的心力衰竭模型。对照组小鼠仅开胸而不结扎动脉。术后1周,模型组存活15只,PDK1组存活15只,对照组存活15只。术后4周,观察并比较三组小鼠心电图(P波、QRS波宽度、S波),血流动力学指标[左心室收缩压(LVSP)、左室舒张末压(LVEDP)、左室最大压力下降速率(-dp/dtmax)和左室最大压力上升速率(+dp/dtmax)],心室重构指标(心重指数、心肌细胞横截面积),血清和心肌组织炎性因子含量[肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素10(IL-10)]及脑钠肽(BNP)的含量。结果:术后4周,与对照组相比,模型组小鼠心电图S-T段升高明显,其中P波高度和QRS波宽度显著降低(均P<0.05),而P波宽度、S波宽度和高度均显著升高(均P<0.05);与对照组比较,模型组和PDK1组血流动力学指标LVEDP显著升高(P<0.05),而LVSP、+dp/dtmax和-dp/dtmax均显著降低(均P<0.05);与对照组小鼠相比,模型组和PDK1组小鼠心重指数、心肌细胞横截面积均显著升高(均P<0.05),并且PDK1组小鼠心重指数、心肌细胞横截面积均显著高于模型组小鼠(均P<0.05);与对照组小鼠相比,模型组和PDK1组小鼠血清和心肌组织TNF-α、IL-1β和BNP均显著升高(均P<0.05),而IL-10含量却显著下降(P<0.05)。此外,PDK1组小鼠血清和心肌组织TNF-α、IL-1β和BNP含量均显著高于模型组小鼠,而IL-10含量却显著低于模型组小鼠(均P<0.05)。结论:PDK1基因敲除加重心肌梗死诱导的心力衰竭而小鼠心血管重构,其机制可能与PDK1基因敲除加重炎性反应有关。

小分子3-磷酸肌醇依赖性蛋白激酶1抑制剂研究进展

3-磷酸肌醇依赖性蛋白激酶1(PDK1)是AGC激酶家族中的成员之一,能激活AGC激酶家族中多种其他激酶。PDK1也是PI3K/Akt信号转导途径的重要成员,在细胞生长、增殖及代谢过程中发挥着重要作用,PDK1的异常活化与肿瘤的形成密切相关。因此,PDK1抑制剂的研究对癌症治疗新型药物的发现有一定推动作用。本文主要对近年以PDK1为靶标的小分子激酶抑制剂的研究进展进行综述。

松材线虫磷酸肌醇依赖性蛋白激酶1基因的克隆及表达

应用BLAST比对技术,在松材线虫基因组数据中鉴定得到模式线虫pdk–1的同源基因Bxpdk–1。结合RT–PCR技术进行Bxpdk–1基因完整蛋白编码区(CDS)扩增,得到CDS区全长2298bp。Bx PDK–1蛋白含有"STKc_PDK1""PH_PDK1"2个保守结构域,属于磷酸肌醇激酶超家族。序列比对及进化树分析显示,松材线虫Bx PDK–1蛋白与捻转血矛线虫PDK–1蛋白(CDJ88126.1)同源性为50%,进化树聚在同一小分支上,亲缘关系较近。原位杂交试验表明,Bxpdk–1基因主要在线虫的头部神经元及咽部神经处表达。q PCR结果分析显示,Bxpdk–1基因表达响应鱼藤酮药剂胁迫处理。RNAi试验显示,Bxpdk–1在dsRNA处理12 h时,基因表达量显著下降,基因被沉默。

miR-106a通过调控PI3K/PDK1/AKT蛋白通路调节胃癌细胞生物学行为的研究

目的探讨miR-106a对胃癌细胞生物学行为的影响及其作用机制。方法选取AGS人胃癌细胞系,经培养后分为27个样本。所有样本随机分为miR-106a inhibitor、miR-mimic、miR-NC共计3组,分别给予miR-106a抑制剂、miR-106a模拟物及安慰剂干预。观察各组细胞存活率、细胞周期、细胞侵袭、迁移及caspase活性、Bax、Bcl-2、Casepase-3蛋白相对表达量、p85β、p-PDK1、p-AKT蛋白相对表达量。结果与miR-NC组比较,miR-106a inhibitor组AGS细胞活性降低[(分别为15.01±0.97)、(69.82±2.31)%](P<0.01);miR-106a mimics组AGS细胞G0/G1期细胞比例降低(P<0.05)(分别为17.33±1.04、58.24±0.82),G2/M和S期细胞比例升高(分别为50.11±1.12、35.64±1.07和31.56±0.92、9.24±0.25);miR-106a inhibitor组AGS细胞G0/G1期细胞比例升高(分别为78.43±1.12、58.24±0.82)(P<0.05),G2/M和S期细胞比例降低(分别为33.65±0.99、35.64±1.07和19.78±0.84、9.24±0.25)(P<0.01)。与miR-NC相比,miR-106a mimics组AGS细胞的迁移、侵袭能力增强,miR-106a inhibitor组AGS细胞的迁移、侵袭能力减弱(P<0.01);与miR-NC相比,miR-106a mimics组AGS细胞caspase-3、caspase-8、caspase-9活性降低,miR-106a inhibitor组AGS细胞caspase-3、caspase-8、caspase-9活性升高(P<0.05);miR-NC相比,miR-106a mimics组AGS细胞Bax(分别为0.69±0.07、1.48±0.15)、Casepase-3蛋白(分别为0.37±0.04、0.91±0.09)相对表达量降低,Bcl-2蛋白相对表达量升高(分别为1.53±0.12、0.94±0.09),miR-106a inhibitor组AGS细胞Bax(分别为2.07±0.21、1.48±0.15)、Casepase-3蛋白(分别为1.23±0.12、0.91±0.09)相对表达量升高,Bcl-2蛋白相对表达量降低(P<0.05)(分别为0.65±0.07、0.94±0.09);与miR-NC相比,miR-106a mimics组AGS细胞p85β(分别为1.24±0.12、0.94±0.09)、p-PDK1(分别为2.13±0.23、1.01±0.10)、p-AKT蛋白(分别为1.14±0.11、0.72±0.06)相对表达量升高,miR-106a inhibitor组AGS细胞p85β(分别为0.69±0.07、0.94±0.09)、p-PDK1(分别为0.75±0.07、1.01±0.10)、p-AKT(分别为0.53±0.05、0.72±0.06)相对表达量降低(P<0.05)。结论miRNA-106a表达能通过调控宫颈癌细胞PI3K/PDK1/AKT蛋白通路调控其细胞生物学行为,包括降低癌细胞活力、迁移和侵袭,诱导癌细胞细胞周期停滞,抑制miRNA-106a表达可能是胃癌患者治疗的新靶点之一。

3-磷酸肌醇依赖性蛋白激酶1小干扰RNA对人胃癌BGC823细胞增殖和凋亡的影响

目的观察3-磷酸肌醇依赖性蛋白激酶1（PDK1）小干扰RNA（siRNA）对胃癌BGC823细胞增殖和凋亡的影响。方法采用不同浓度的PDK1 siRNA体外分组转染BGC823细胞24、48、72h；采用免疫细胞化学检测各组细胞中PDK1的蛋白表达；运用噻唑蓝（MTF）法检测各组细胞生长抑制率；采用原位缺口末端标记法（TUNEL）法检测各组细胞凋亡情况。结果3条PDK1 siRNA转染BGC823细胞后PDK1 mRNA水平（PDK1 siRNA1：5．01±1．21；PDK1 siRNA2：6．32±1．28；PDK1 siRNA3：6．41±1．32）均明显低于细胞对照组（11．17±2．36，P〈0．05），与其他2条抑制效率[PDK1 siRNA2：（21．56±3．87）％；PDK1 siRNA3：（22．01±3．98）％]比较，PDK1 siRNA1抑制效率最高[（34．37±4．09）％，P〈0．05]，且具有时间依赖性（P〈0．05）；与对照组[各时间段均为（0．00±0．00）％]比较，PDK1 siRNA1可增加BGC823细胞生长的抑制率[24h：（13．02±2．96）％；48h：（21．21±3．60）％；72h：（34．37±4．09）％]，且具有时间依赖性（P〈0．05）；与对照组比较，PDK1 siRNA1转染BGC823细胞72h后凋亡指数[AI，（18．24±2．73）％]，较对照组细胞[（2．65±0．74）％]增加，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论PDK1 siRNA能有效沉默BGC823细胞中PDK1表达，进而抑制BGC823细胞增殖，诱导其凋亡。

3-磷酸肌醇依赖性蛋白激酶1在肿瘤发生发展及治疗中的作用

3-磷酸肌醇依赖性蛋白激酶1（PDK1）是磷脂酰肌醇3激酶-蛋白激酶B（P13K-Akt）通路的一个关键调节分子。PDK1可通过激活Akt，参与P13K—Akt信号通路的活化，促进肿瘤的发生、发展及浸润转移。目前已经发现PDK1在头颈部肿瘤、多发性骨髓瘤、胰腺癌、食管癌、结肠癌等多种恶性肿瘤中高表达。抑制PDK1过表达可为恶性肿瘤的治疗找到新的突破点。目前已有多种PDK1抑制剂投入生产，发挥了抗肿瘤作用。

丙泊酚对神经元缺血再灌注损伤的保护与磷酸化蛋白激酶信号通路的关系

目的:探讨丙泊酚在脑缺血/再灌注损伤(CI/RI)中的作用及可能机制。方法:采用氧糖剥夺再灌注(OGD/RP)法体外构建缺血/再灌注细胞模型,将细胞分为对照组、OGD/RP组和丙泊酚+OGD/RP联合组。采用MTT法检测皮质神经元存活率,Annexin V-PI检测细胞凋亡情况,RT-PCR方法检测碱性成纤维细胞生长因子(b FGF)的m RNA表达,Western blot检测丙泊酚对皮质神经元内b FGF、磷酸化蛋白激酶B(p PKB)和磷酸化细胞外信号调节激酶1/2(p ERK1/2)表达。采用小干扰RNA构建b FGF沉默的细胞。结果:丙泊酚能够显著促进CI/RI后神经元的存活,抑制其凋亡,OGD/RP处理组神经元凋亡率为43.2%,以10 mg/L的丙泊酚预处理后细胞的凋亡率即降为19.5%(P<0.05)。与对照组(1.02±0.03)相比较,OGD处理后细胞中b FGF的含量(0.78±0.06)显著下调(P<0.05),丙泊酚处理的皮质神经元中b FGF含量(1.43±0.04)显著高于OGD处理组(P<0.05)。沉默的b FGF或者施加蛋白激酶B(PI3K-p PKB)以及p ERK1/2信号通路抑制剂都会导致细胞存活率显著下降(P<0.05),抑制PI3K-p PKB以及ERK1/2的激活。结论:丙泊酚可以通过上调b FGF的表达,激活PI3K-p PKB和ERK1/2的信号通路,减轻体外培养神经元凋亡/再灌注损伤,从而增加皮质神经元的存活。

METTL3介导的PDK1 mRNA m^(6)A修饰通过Akt/mTOR信号通路促进肺上皮细胞增殖

腺苷N6-位点甲基化(m^(6)A)在细胞增殖过程中发挥重要作用。RNA甲基转移酶3(METTL3)作为催化m^(6)A关键酶,其介导m^(6)A修饰在肺上皮细胞增殖中的作用机制尚不明确。本研究旨在探讨METTL3介导m^(6)A修饰调控肺上皮细胞增殖的效应及机制。结果显示,在肺上皮细胞中敲低METTL 3显著抑制细胞生长,而过表达METTL3则促进了细胞增殖(P<0.05)。进一步的蛋白质免疫印迹结果显示,细胞生长和增殖的关键蛋白质PCNA在METTL 3敲降的肺上皮细胞中蛋白质水平的表达显著下调,并且Akt以及mTOR的磷酸化水平显著降低(P<0.05)。细胞免疫荧光结果发现,METTL 3敲降的肺上皮细胞中m^(6)A修饰水平显著降低(P<0.05)。实时荧光定量PCR及蛋白质免疫印迹结果表明,Akt-mTOR信号通路上游调控分子PDK1的mRNA和蛋白质表达水平在METTL 3敲降的肺上皮细胞中显著下降(P<0.05)。机制上,m^(6)A-IP-qPCR和RIP-qPCR结果进一步表明,METTL3催化PDK 1 mRNA的3′UTR区域m^(6)A修饰,进而被YTH N6-甲基腺苷RNA结合蛋白1(YTHDF1)识别,增强其mRNA的稳定性。总之,本研究揭示了METTL3通过增强PDK1 m^(6)A修饰,进而激活Akt-mTOR信号通路,促进细胞增殖。本研究为METTL3在上皮细胞增殖中的新角色提供了证据,同时为治疗肺上皮细胞损伤修复提供了新的治疗靶点。

RNA干扰抑制食管癌EC9706细胞中3－磷酸肌醇依赖性蛋白激酶1基因的表达及其对肿瘤细胞恶性生物学行为的影响

目的研究RNA干扰抑制食管癌EC9706细胞中3－磷酸肌醇依赖性蛋白激酶1（PDK1）的表达及其对肿瘤细胞恶性生物学行为的影响。方法以PDK1siRNA转染EC9706细胞，分别采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和Western blot法检测PDK1mRNA和蛋白的表达以及下游Akt蛋白的磷酸化水平。分别以四甲基偶氮唑蓝（MTF）法、流式细胞术、Transwell侵袭实验和裸鼠移植瘤实验检测PDK1 siRNA对EC9706细胞增殖、凋亡、侵袭以及体内抑瘤能力的影响。结果与未转染组相比，PDK1siRNA转染细胞后继续培养24、48和72h时，PDK1 mRNA的表达均明显降低，抑制率分别为（28．5±4．2）％、（51．1±5．7）％和（60．6±4．1）％，PDK1蛋白和Akt蛋白的磷酸化水平也明显降低（P〈0．05）。PDK1siRNA能有效抑制EC9706细胞的增殖、侵袭并促进细胞凋亡，且能抑制裸鼠移植瘤的生长并降低移植瘤组织中PDK1蛋白的表达。结论PDK1可能与食管癌细胞的增殖、凋亡和侵袭等生物学行为密切相关，是肿瘤基因治疗的有效靶点。

18β-甘草次酸对肝癌HepG2细胞增殖及PI3K、PDK1、AKT蛋白表达的影响

目的观察18β-甘草次酸(18β-GA)对肝癌Hep G2细胞增殖及磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)、磷脂酰肌醇依赖性蛋白激酶1(PDK1)、蛋白激酶B(AKT)蛋白表达的影响。方法 118β-GA对Hep G2细胞增殖的影响观察:以20、40、60、80、100μg/m L的18β-GA作用于Hep G2细胞,分别于培养24、48、72 h后采用MTT法观察细胞增殖情况,以细胞增殖抑制率>50%为依据,选择合适的18β-GA作用浓度和作用时间进行后续实验。218β-GA对Hep G2细胞中PI3K、PDK1、AKT蛋白表达的影响观察:将Hep G2分为处理组和对照组,处理组加入40μg/m L的18β-GA,对照组加入等体积的DMSO,培养48 h后采用Western blotting法检测两组细胞中的PI3K、PDK1、AKT蛋白。结果相同18β-GA浓度下,随着作用时间延长,Hep G2细胞增殖抑制率逐渐升高,基本呈时间依赖性;相同作用时间、不同浓度18β-GA作用后细胞增殖抑制率升高,基本呈浓度依赖性。处理组细胞中PI3K、PDK1、AKT蛋白相对表达量分别为0.49±0.08、0.78±0.10、0.84±0.27,对照组分别为0.71±0.11、0.99±0.09、1.88±0.47,两组相比,P均<0.05。结论 18β-GA可抑制Hep G2细胞增殖,这种作用可能是通过下调PI3K/AKT通路相关信号分子(PI3K、PDK1、AKT蛋白)表达实现的。

受体酪氨酸激酶通过磷酸肌醇3激酶／蛋白激酶B-p21激活激酶-1通路对肝癌细胞转移的调控

目的观察受体酪氨酸激酶（Axl）在肝癌细胞转移过程中的作用及其对磷酸肌醇3激酶（P13K）／蛋白激酶B（Akt）-p21激活激酶-l（PAKl）信号通路的调控作用。方法体外培养肝癌细胞株MHCC97-H和MHCC97-L细胞。运用Westernblot方法研究Axl在肝癌细胞MHCC97-H和MHCC97．L细胞株中的蛋白表达水平。通过短发夹RNA（shRNA）转染肝癌细胞MHCC97-H细胞株抑制Axl的表达，探究Axl对P13K／Akt-PAK1信号通路的调控作用机制，并分析Axl蛋白表达与肝癌细胞侵袭与转移的关系。结果与MHCC97-L细胞株比较，Axl在MHCC97-H细胞株中具有更高的表达水平。MHCC97-H细胞中Axl表达下调降低了P13K、Akt、PAKl信号通路分子的磷酸化水平，并明显抑制了肝癌细胞的侵袭性；侵袭实验结果示：Axl-短发卡RNA（shRNA）转染组穿过基质胶的细胞数为（23±3）个，较质控组的（37±5）个和正常细胞MHCC97-H组的（38±5）个明显减少（P〈0．05）。用P13K特异性抑制剂LY294002或Akt-小干扰RNA（siRNA）阻断P13K／Akt信号通路明显抑制PAK1的激活及细胞的侵袭性；侵袭实验结果显示：Akt-siRNA转染组和P13K特异性性抑制剂LY294002抑制组穿过基质胶的细胞数为（23±3）、（18±3）个，较质控组的（37±5）个，二甲基亚砜（DMSO）组的（384-5）个明显减少（P〈0．05）。结论Axl能够通过P13K／Akt-PAKl调节肝癌细胞的转移过程。

磷酸肌醇3激酶／蛋白激酶B信号通路在基质细胞衍生因子-1诱导的Tip血管内皮细胞迁移中的作用

目的磷酸肌醇3激酶（P13K）／蛋白激酶B（Akt）信号通路在基质细胞衍生因子-1（SDF-1）诱导的Tip内皮细胞迁移中的作用。方法采用密度梯度离心法从人外周血单个核细胞中分离培养出血管内皮祖细胞，并将其诱导分化为Tip内皮细胞，将TiP内皮细胞随机分成阴性对照组、AMD3100对照组、LY294002对照组、实验组、AMD3100阻断组、LY294002阻断组、外源性PIP3组，Transwell迁移实验检测各组中Tip内皮细胞的迁移数。结果实验组迁移到下室的细胞数量[（100．667±4．509）个／高倍视野]较阴性对照组[（16．333±2．082）个／高倍视野]增多（t=29．415，P=0．003），AMD3100阻断剂组迁移到下室的细胞数[（20．333±0．577）个／高倍视野]与阴性对照组比较，差异无统计学意义（t=2．590，P=0．096），AMD3100阻断剂组和LY294002阻断剂组迁移到下室的细胞数分别为（20．333±0．577）、（40．000±2．646）个／高倍视野，均小于实验组（t=30．603、20．102．P=0．019、0．006），而在AMD3100阻断剂组中外源性的加人磷脂酰肌醇3激酶（P13K）产物PIP3，迁移到下室的细胞数[（99．667±3．786）个／高倍视野]与实验组比较差异无统计学意义（t=0．294，P=1．000）。结论P13K／Akt信号通路是SDF-1诱导Tip血管内皮细胞迁移的下游机制之一。

丙泊酚通过上调纤维细胞生长因子的表达激活磷酸肌醇3激酶-蛋白激酶B和磷酸化细胞外信号调节激酶1／2信号通路抑制体外培养神经元缺血／再灌注损伤

目的探讨丙泊酚在脑缺血，再灌注损伤（ischemia／reperfusioninjury，I／RI）中发挥的作用及其具体机制。方法采用氧糖剥夺再灌注（oxygen-glucose deprivation／reperfusion，OGD／RP）法体外构建缺血／再灌注细胞模型，将细胞分为对照组、OGD／RP组、丙泊酚＋OGD／RP组。采用甲基噻唑基四唑（methylthiazolyl tetrazolium，MTF）法检测皮质神经细胞存活率，AnnexinV-PI检测细胞凋亡情况，即时聚合酶链式反应（real-time polymerase chain reaction，RT-PCR）方法检测碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor，bFGF）的mRNA表达情况，免疫印迹法（Westernblot）检测丙泊酚对皮质神经细胞内bFGF，磷酸化蛋白激酶B（phosphorylated proteinkinaseB，pAkt）以及磷酸化细胞外信号调节激酶1／2（phosphorylated extracellular signal-regulatedkinase1／2，pERKl／2）蛋白表达的影响；采用小干扰RNA构建bFGF沉默的细胞。结果OGD／RP处理组神经细胞凋亡率为43．2％，经10mg／L的丙泊酚预处理后，细胞的凋亡率降为19．5％。与对照组比较，OGD处理后，细胞中bFGF的含量显著下调（P〈0．05），丙泊酚处理的皮质神经元中bFGF含量显著高于OGD处理组（P〈0．05）。丙泊酚能够上调pAKT以及pERKI／2的表达，激活这两条信号通路。沉默bFGF或者施加磷酸肌醇3激酶．蛋白激酶B（phosphotylinosital3kinase-proteinkinaseB，P13K-Akt）以及pERK1／2信号通路抑制剂都会导致细胞存活率显著下降（P〈0．05），抑制P13K-Akt以及pERKl／2的激活。结论丙泊酚可以通过上调bFGF的表达，激活P13K-Akt和ERK1／2信号通路，增加皮质神经元的存活。

匙羹藤对胰岛素抵抗小鼠脂肪组织蛋白激酶B的影响

目的:观察匙羹藤对胰岛素抵抗(IR)KKAy小鼠脂肪组织中蛋白激酶B表达及磷酸化的影响以及调节机制。方法:将18只胰岛素抵抗KKAy小鼠按体质量随机分为模型组(DM)和匙羹藤水提物组(GS),并选取9只C57BL/6J小鼠为正常对照组(NC),连续灌胃给药8周。实验结束后取血测定空腹血糖(FPG),空腹血清胰岛素(Fins),并计算胰岛素敏感指数(ISI),测定附睾脂肪组织中磷酸激酶依赖的激酶1(PDK1)、蛋白激酶B(PKB)、P-PKB(Ser473),P-PKB(Thr308)蛋白相对含量,及磷酸酶和张力蛋白同源物基因(PTEN)mRNA相对含量。结果:与DM组相比,GS组小鼠FPG、Fins降低,ISI升高,P-PKB(Ser473)蛋白相对含量及其磷酸化水平升高,P-PKB(Thr308)蛋白相对含量升高,PDK1蛋白相对含量降低,PTEN mRNA表达量降低。结论:匙羹藤可通过增加脂肪组织中P-PKB(Ser473)蛋白相对含量,增强Ser473位点磷酸化水平,以及增加P-PKB(Thr308)蛋白相对含量激活PKB,进而改善IR。

第10号染色体缺失的磷酸酶与张力蛋白的同源基因通过调控乳腺癌扩增性抗原1和磷酸肌醇3激酶/蛋白激酶B信号通路抑制胆管癌细胞QBC939的增殖能力

目的探讨第10号染色体缺失的磷酸酶与张力蛋白的同源基因（PTEN）对人胆管癌细胞QBC939增殖能力的抑制作用及其机制。方法利用4 μg PTEN质粒或小干扰RNA（siRNA）转染人胆管癌细胞株QBC939，转染72 h后，采用噻唑蓝（MTT）实验和Western blot检测上调或下调PTEN表达对QBC939细胞增殖能力、乳腺癌扩增性抗原1（AIB1）和磷酸肌醇3激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）信号通路中重要的分子标志物表达的影响。结果人胆管癌细胞株QBC939经PTEN质粒转染72 h后，其吸光度（A）值（0.216±0.013）较对照组（0.243±0.002）降低（P＝0.026），表明增殖能力减弱，同时AIB1蛋白和PI3K/Akt信号通路中的磷酸化Akt（p-Akt）蛋白表达也明显减少。用siRNA下调PTEN表达，其A值（0.403±0.011）较对照组（0.490±0.033）降低（P＝0.013），表明增殖能力减弱，同时上调AIB1蛋白和p-Akt蛋白表达。

磷酸肌醇3激酶／蛋白激酶B通路在脐静脉内皮细胞缺氧诱导因子-1α表达中的作用

组织缺氧是慢性下肢缺血性疾病发生发展的重要原因，其分子机制尚不清楚。本研究旨在观察ECV304细胞缺氧环境下缺氧诱导因子-1a（HIF—l仪）及磷酸肌醇3激酶（P13K）／蛋白激酶B（Akt）信号通路的变化并探讨其意义。

ATF1与CDK3蛋白相互作用研究

研究真核细胞转录激活因子1(activating transcription factor1,ATF1)与细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶3(cyclin-dependent kinase3,CDK3)的相互作用机制,分别构建ATF1的激酶诱导区域(kinaseinducible domain,KID)结构域、谷氨酰胺富含域(glutamine rich domain,Q2)结构域及亮氨酸拉链区(basic leucine zipper domain,bZIP)结构域缺失体与VP16的融合表达载体,在HEK293细胞过表达,应用真核细胞双杂交系统,研究ATF1结构域与CDK3的相互作用.结果表明,ATF1全蛋白与CDK3蛋白之间存在强烈的相互作用;ATF1结构域缺失体与VP16的融合蛋白在HEK293细胞中可获得高表达,但ATF1的任何一种结构缺失体与CDK3蛋白结合都会严重减弱其与CDK3蛋白的相互作用,只有完整的ATF1蛋白才能实现与上游CDK3蛋白的结合.

慢性心力衰竭患者外周血PDK1表达与炎症反应的相关性及临床意义

目的研究慢性心力衰竭(CHF)患者外周血3⁃磷酸肌醇依赖性蛋白激酶1(PDK1)表达与炎症反应的相关性及临床意义。方法选择2022年3月至2024年3月成都蓝生脑科医院收治的180例CHF患者作为CHF组,按照纽约心脏病协会(NYHA)分级Ⅱ级的轻度心衰患者和Ⅲ~Ⅳ级的重度心衰患者;将同期在本院进行健康体检的110名健康人作为对照组。检测外周血PDK1的mRNA表达水平,血清C反应蛋白(CRP)、可溶性尿激酶型纤溶酶原激活物受体(suPAR)、白细胞介素⁃6(IL⁃6)、白细胞介素⁃8(IL⁃8)的水平。采用Pearson检验进行相关性分析,采用ROC曲线分析各指标对CHF病情的评估价值。结果CHF组外周血PDK1的mRNA表达水平低于对照组,差异有统计学意义(t=12.356,P<0.05)。血清CRP、suPAR、IL⁃6、IL⁃8的水平高于对照组,差异有统计学意义(t=12.193、19.347、18.742、13.044,P<0.05);CHF组中重度心衰患者外周血PDK1的mRNA表达水平低于轻度心衰患者,差异有统计学意义(t=9.925,P<0.05)。血清CRP、suPAR、IL⁃6、IL⁃8的水平高于轻度心衰患者,差异有统计学意义(t=5.444、5.647、6.312、8.015,P<0.05);CHF组中外周血PDK1的mRNA表达水平与血清CRP、suPAR、IL⁃6、IL⁃8的水平呈负相关(P<0.05)。结论CHF患者外周血PDK1表达下降且与心衰加重、炎症反应激活相关。