儿童3型人腺病毒感染64例临床特点分析并文献复习

人腺病毒(HAdV)是儿童呼吸道感染的常见病原体之一,感染率呈逐年上升趋势,在儿童呼吸道感染中占5%~10%[1],2%~10%的细支气管炎、4%~10%的肺炎与人腺病毒感染密切相关[2]。人腺病毒可分为A~G七个亚属,其中B亚属的3型占儿童呼吸道感染的50%左右[3],人群对3型人腺病毒普遍易感。现整理并分析儿童感染3型人腺病毒后的临床特点、治疗与转归情况,旨在为临床诊治提供参考。

人腺病毒3型六邻体基因的克隆与鉴定

目的 克隆人腺病毒 3型 (Ad3)六邻体 - L 1(Hexon- L 1)、六邻体 - L 2 (Hexon- L 2 )区基因 ,构建含有该基因的重组质粒 ,并进行测序鉴定 ,为进一步构建表达载体 ,制备基因工程疫苗打下基础。方法 从 Ad3感染的 He L a细胞中提取 Ad3DNA,用 PCR方法扩增 Hexon- L 1、Hexon- L 2基因 ,将得到的片段定向克隆到克隆载体 p U C19质粒中 ,对克隆片段进行 DNA测序鉴定。结果 构建了重组质粒 p UC19Hexon,测序结果与 Genebank中该序列进行同源性比较证明克隆的片段为 Ad3六邻体序列。结论 成功克隆了 Ad3的 Hexon- L 1、Hexon- L 2区基因。

昆明市一起聚集性发热疫情中腺病毒3型Penton base、Hexon和Fiber基因遗传进化分析

目的对昆明市一起聚集性发热疫情样本进行腺病毒检测和遗传进化分析。方法采集典型发热患者咽拭子标本,使用微流体芯片技术进行30种常见呼吸道传染病病原体核酸检测。对腺病毒核酸阳性标本使用Nanopore三代高通量测序技术进行Penton base、Hexon和Fiber三个重要基因全长序列扩增、测定和分型鉴定,构建系统进化树,开展分子变异、遗传进化等分析。结果共采集5份标本,均检出呼吸道腺病毒及流感嗜血杆菌。对腺病毒进行Nanopore三代基因测序最终均获得Penton base、Hexon和Fiber基因全长编码区核苷酸序列,5份标本之间3个基因核苷酸相似性依次为100.0%、99.9%~100.0%和100.0%,氨基酸同源性均为100.0%;与HAdV3原型株(AY599834)核苷酸相似性最高,分别为98.6%、98.7%和98.9%。系统发育分析表明,3个基因系统进化树分析结果基本一致,人腺病毒3型(HAdV3)原型株单独一支,本研究中HAdV3序列均划分在同一进化分支上,与较早年份国外及中国台湾毒株亲缘关系较远,与近年国内外毒株亲缘关系较近,与2019年日本株(LC703523)和中国广州株(MZ540961)高度同源。与原型株比较分析昆明HAdV3氨基酸突变位点,Penton base有5处变异;Hexon有10处变异;Fiber有11处变异。结论本起疫情中的腺病毒在Penton base、Hexon和Fiber基因全长序列中型别分型结果一致,为P3H3F3型,与包括原型株在内的国内外HAdV3毒株显示出非常小的遗传变异。与原型株相比发生了多处氨基酸位点突变,并且多数氨基酸位点变异发生在蛋白质的高变区或功能区,其中Hexon蛋白中M7L为昆明序列独有氨基酸突变位点。

呼吸道人腺病毒3型感染患儿细胞因子水平变化及持续发热危险因素分析

目的 探讨呼吸道人腺病毒3型(HAdV-3)感染患儿细胞因子特征及持续发热的危险因素,为早期诊治儿童HAdV-3感染提供经验。方法 选取2022年6—10月金华市妇幼保健院儿科门诊及住院的69例呼吸道HAdV感染患儿为研究对象,通过多重靶向扩增和高通量测序技术确定病毒种类,纳入50例HAdV-3感染患儿,将其依据发热时间分为持续发热组(发热时间≥7 d)与非持续发热组(发热时间<7 d)。选取40例同期体检健康儿童为对照组。比较各组血常规、细胞因子水平,分析HAdV-3感染患儿持续发热的危险因素。结果 HAdV-3感染患儿白细胞(WBC)计数、中性粒细胞计数、C-反应蛋白(CRP)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)、白细胞介素-10(IL-10)、γ-干扰素(INF-γ)水平分别为(10.67±4.22)×10~9/L、(7.90±3.34)×10~9/L、(44.21±33.23)mg/L、(22.04±14.69)pg/ml、(6.36±4.99)pg/ml、(13.38±12.26)pg/ml、(9.79±20.11)pg/ml,显著高于对照组的(7.56±2.48)×10~9/L、(3.34±1.51)×10~9/L、(1.18±1.94)mg/L、(2.12±2.22)pg/ml、(4.39±3.84)pg/ml、(2.76±1.47)pg/ml、(1.30±1.09)pg/ml,差异均有统计学意义(t=4.348,7.657,9.137,9.450,2.052,6.067,2.979,均P<0.05)。持续发热组患儿IL-6、IL-8[(26.65±15.79)pg/ml、(7.18±4.89)pg/ml]水平高于非持续发热组[(16.17±10.89)pg/ml、(5.32±5.03)pg/ml],IL-10[(10.75±11.45)pg/ml]水平低于非持续发热组[(15.44±12.69)pg/ml],差异均有统计学意义(t=2.772,2.143,2.369,均P<0.05)。logistic回归分析结果显示:IL-6为HAdV-3患儿持续发热的独立危险因素,受试者工作特征(ROC)曲线显示IL-6≥25.795 pg/ml时预测HAdV-3患儿持续发热的准确度为70.60%,灵敏度为53.60%,特异度为90.90%。结论 HAdV-3感染患儿外周血WBC计数,中性粒细胞,血清CRP、IL-6、IL-8、IL-10、INF-γ均异常升高,持续发热患儿IL-6、IL-8水平明显升高,IL-10水平明显降低,IL-6≥25.795 pg/ml是HAdV-3感染持续发热的危险因素。

一起腺病毒3型引起暴发疫情的调查

目的对发生在富阳市渔山乡小学的一起上呼吸道感染暴发疫情进行流行病学调查和病原学鉴定。方法对该暴发疫情进行流行病学调查和采集现症病例咽拭子。应用实时RT-PCR和实时PCR技术分别进行流感病毒和人腺病毒检测。对人腺病毒核酸阳性标本,应用PCR技术扩增六邻体基因超变区7的核酸片段并进行核苷酸序列测定,根据序列相似性以鉴定血清型。结果 2013年5月20—28日共有21例上呼吸道感染病例,均集中在二(1)班,全校罹患率为4.77%,班级罹患率高达70.00%。病例均有发热,部分有咳嗽、咽痛、腹痛、腹泻和结膜充血等症状。检测的8份咽拭子中,实时PCR检测腺病毒核酸阳性5份,甲型流感病毒(通用型)、H1N1、H3N2、H7N9及乙型流感病毒核酸的实时RT-PCR检测结果均为阴性。选取其中1份阳性标本,进行人腺病毒六邻体基因超变区7的核酸序列测定,结果与近年国内其他地区分离的多株腺病毒3型毒株的相似性为100.00%,因此鉴定为腺病毒血清型3型。结论结合流行病学调查、病例临床症状及实验室检测结果,判断该起呼吸道感染暴发疫情的病原体为人腺病毒血清型3型。

2023年广东省深圳市一起3型腺病毒学校暴发疫情调查分析

目的探讨2023年广东省深圳市某学校一起3型腺病毒感染暴发疫情的流行病学及病原学特点。方法采用现场流行病学调查方法,用描述性流行病学和病例–对照研究方法分析可能的危险因素,采集咽拭子样本用荧光定量聚合酶链式反应方法检测常见呼吸道病毒,对腺病毒核酸阳性样本进行序列扩增及测定,测序结果在GenBank上进行序列比较,并进行系统进化分析。结果此次疫情共发现疑似病例27例,确诊病例17例,合计44例。全部病例均为学生,年龄分布在6~9岁,中位数为7.50岁,男生24例(罹患率2.48%),女生20例(罹患率2.25%),男女性罹患率差异无统计学意义(χ^(2)=0.105,P=0.745)。全部病例均有不同程度的发热。确诊病例中,发热39℃以上者占47.06%(8/17),有咳嗽、咽痛等呼吸道症状者占64.71%(11/17),有呕吐、腹泻等胃肠道症状者占52.94%(9/17)。其中15份确诊病例样本经检测为腺病毒B亚属3型,系统进化树结果显示,毒株hexon基因序列与广州省、重庆市等分离的毒株同源性达99.54%,基因变异程度较小。病例对照研究结果显示,大扫除后未规范洗手(比值比=6.37,95%置信区间:1.04~39.15)是该起疫情的独立危险因素。结论本次事件为一起腺病毒B亚属3型引起的学校暴发,可能通过接触被污染的手间接传播,应重点关注学生手卫生及人腺病毒感染的早诊断、隔离及报告。

2018年北京市西城区呼吸道腺病毒感染疫情流行病学和病原学特征分析

2018年5~9月,北京市西城区五所小学先后共报告了5起呼吸道感染集中发热疫情。为了解报告的5起疫情的流行病学和病原学特征,开展了现场调查,并采集病例咽拭子标本,使用荧光定量PCR方法检测17种常见呼吸道病毒进行病原学筛查,对鉴定为人腺病毒(Human adenovirus,HAdV)阳性的标本进行病毒分离,并分别扩增六邻体蛋白基因Loop2区域以及三个衣壳蛋白(五邻体基座蛋白、六邻体蛋白和纤维蛋白)基因全长,进行HAdV型别的初筛和确认,同时与GenBank数据库中国内外HAdV-3流行株序列进行比对分析。结果显示,5起集中发热疫情的致病原均为HAdV-3。进一步研究发现,全球流行HAdV-3可划分为Clade1和Clade2两个进化分支,2004年至今我国流行的HAdV-3病毒株均属于Clade2进化分支,也是近年全球优势流行株。两个进化分支HAdV-3病毒株在三个基因序列上均高度保守。本研究为我国呼吸道HAdV防控,以及HAdV-3型疫苗研发提供了基础科学数据。

预防“非普通感冒”病毒的新疫苗

由中国和美国科学家组成的国际小组开发了能预防人腺病毒3型的新疫苗，这种病毒有时被称为“非普通感冒”病毒，因为它引起的症状与鼻病毒引起的普通感冒相似。然而，腺病毒3型引起的症状通常更严重，而且感染可能致命。病毒能在人群密集的市区繁殖，而且已在中国南部及邻国多次暴发。2000年，美国衣阿华州一家长期收养所暴发腺病毒7型感染期间4名儿童死亡，2007年在俄勒冈州、得克萨斯州和华盛顿流行腺病毒14型时9例患者死亡。