肺炎链球菌3型多糖对支气管哮喘小鼠气道炎症及Treg/Th17细胞的影响

目的观察肺炎链球菌3型多糖(T3P)对支气管哮喘小鼠气道炎症以及Treg/Th17细胞的影响,探讨T3P对哮喘小鼠的免疫调节作用。方法 BALB/c小鼠随机分成对照组、哮喘组和T3P组,每组8只。哮喘组以卵清蛋白(OVA)致敏、气道激发建立哮喘模型,对照组以PBS代替,T3P组在OVA致敏前皮下注射T3P进行干预。观察小鼠肺组织病理改变,对支气管肺泡灌洗液(BALF)进行细胞计数及分类,ELISA法检测血清OVA特异性IgE(OVA-IgE)以及BALF中白介素4(IL-4)、干扰素γ(IFN-γ)、IL-10、IL-17浓度,实时荧光定量PCR法检测肺组织中转录因子Foxp3和RORγt mRNA表达水平,流式细胞术检测Treg和Th17细胞占CD4^+细胞百分比。结果 T3P组小鼠肺组织炎症反应程度弱于哮喘组,血清OVA-IgE,BALF中细胞总数、嗜酸粒细胞比例以及IL-4、IL-17浓度均低于哮喘组(P<0.05),IFN-γ、IL-10浓度高于哮喘组(P<0.05),小鼠肺组织Foxp3 mRNA表达水平及Treg占CD4^+细胞百分比均高于哮喘组(P<0.05),RORγt mRNA表达水平和Th17细胞占CD4^+细胞百分比均低于哮喘组(P<0.05)。哮喘组和T3P组小鼠肺组织Foxp3-mRNA/RORγt-mRNA比值及Treg/Th17细胞比例与BALF中嗜酸粒细胞数量呈负相关。结论 T3P可以通过抑制过敏原特异性IgE表达调节Th1/Th2、Treg/Th17细胞平衡,抑制气道炎症。

3型肺炎球菌荚膜多糖结合疫苗的研制

目的:研制3型肺炎球菌荚膜多糖-CRM197结合疫苗。方法:将3型肺炎球菌的荚膜多糖与蛋白CRM197通过化学方法偶联结合,制备成多糖蛋白结合疫苗并使用该疫苗免疫幼小鼠。结果:经过实验条件的考察,发现在85℃,0.2mol/L乙酸水解处理多糖1 h,活化度为10.0,投料比为20∶10时制得的疫苗,在小鼠体内产生了高滴度的抗体。结论:该实验条件下制备的结合疫苗保留了完好的抗原性,以本工艺条件制备3型肺炎球菌荚膜多糖蛋白结合疫苗是可行的。

3型肺炎球菌多糖抗原口服给药途径的效力研究

[目的]分析3型肺炎球菌多糖抗原口服给药途径的有效性。[方法]用注射器对小鼠灌喂3型肺炎球菌多糖抗原,33 d后检测小鼠NK杀伤细胞活性和抗体形成细胞数,并进行统计学分析。[结果]3型肺炎球菌多糖抗原口服前后小鼠NK杀伤细胞活性和抗体形成细胞数差异有统计学意义(P<0.05),与同类产品比较差异无统计学意义(P>0.05)。[结论]3型肺炎球菌抗原能显著提高小鼠NK杀伤细胞活性和抗体形成细胞数。

不同载体蛋白制备的3型肺炎球菌结合物在小鼠体内免疫原性比较

目的:比较由破伤风类毒素(TT)、破伤风类毒素己二酸酰肼衍生物(TTAH)、重组铜绿假单胞菌外毒素A(r EPA)、重组铜绿假单胞菌外毒素A己二酸酰肼衍生物(r EPAAH)4种载体蛋白与3型肺炎球菌荚膜多糖制备的3型肺炎球菌结合物在小鼠体内免疫原性。方法:3型荚膜多糖先经0.5M乙酸水解降低其分子量制备成水解物,水解物经1-氰基-4-二甲胺基吡啶四氟硼酸盐(CDAP)活化后分别与4种载体蛋白制备成结合物。结合物均经Sepharose 4 Fast Flow柱层析纯化,收集KD0.0~0.2部分得到4种结合物,将结合物分别免疫小鼠,采用ELISA法检测,比较各结合物在小鼠体内产生的抗体水平。结果:4种结合物均能在小鼠体内产生较高水平的Ig G抗体。对于同类载体蛋白,PS3-TTAH在小鼠体内产生的Ig G抗体水平比PS3-TT低,但二者抗体水平的差异无统计学意义(P>0.05);PS3-r EPAAH在小鼠体内产生的Ig G抗体水平比PS3-r EPA低,二者抗体水平的差异也无统计学意义(P>0.05);对于不同类载体蛋白,PS3-TT在小鼠体内产生的Ig G抗体水平比PS3-r EPA及PS3-r EPAAH高,抗体水平的差异无统计学意义(P>0.05);PS3-TTAH在小鼠体内产生的Ig G抗体水平比PS3-r EPAAH高,但与PS3-r EPA相当,其抗体水平的差异无统计学意义(P>0.05)。结论:对于3型肺炎球菌多糖,TT、TTAH、r EPA及r EPAAH均是较好的载体,r EPA可以作为一种新的候选载体运用于肺炎球菌结合疫苗。