国内首次“一牵3”张力放线试验成功

6月12日，我国首次大截面导线“一牵3”张力放线工程试验在唐山丰润正式开启。本次“一牵3”张力放线工艺工程试验选择在北京送变电公司姜家营一泉河头220千伏双回输电线路工程进行，试验区段起止桩号为N5～N12，包括6基直线塔，2基转角塔，长度为2．910公里。放线滑车采用北京变电公司特制“一牵3”四轮放线滑车，走板亦采用特制偏心走板。本次“一牵3”张力放线试验成功后，将在8月份左右运用于北京送变电公司负责的向一上±800千伏直流特高压线路。

基于PTEN/PI3K/AKT信号通路探讨旋覆花汤联合索拉非尼对肝癌荷瘤小鼠的抗肿瘤作用

目的探讨旋覆花汤联合索拉非尼对肝癌荷瘤小鼠的影响及机制。方法KM小鼠分为肝癌组、旋覆花汤组、索拉非尼组、联合组、联合+PTEN抑制剂(BPV)组、联合+PI3K激活剂(IGF-1)组、空白组。液相色谱-质谱检测肝癌组和旋覆花汤组小鼠血清旋覆花汤入血成分;检测血清ALT、AST及瘤重、瘤体积变化;检测肿瘤组织病理、TUNEL、p53、Bax阳性细胞数占比、IFN-γ、TNF-α水平及PTEN、p-PI3K、p-AKT蛋白变化。体外实验观察联合处理对小鼠肝癌H22细胞增殖、凋亡的影响。结果旋覆花汤入血成分11种。与肝癌组相比,旋覆花汤组、索拉非尼组、联合组肿瘤细胞分散,血清AST、ALT水平、瘤重、瘤体积及p-PI3K、p-AKT蛋白降低,肿瘤组织中TUNEL、p53、Bax阳性细胞数占比、IFN-γ、TNF-α水平及PTEN蛋白升高,且联合组趋势最明显(P<0.05);BPV或IGF-1逆转了联合处理对肝癌荷瘤小鼠的抗肿瘤作用。体外实验发现,联合处理对H22细胞增殖的抑制及细胞凋亡的促进作用优于旋覆花汤或索拉非尼单独处理;BPV或IGF-1逆转了联合处理对H22细胞增殖、凋亡的作用。结论旋覆花汤联合索拉非尼可能通过上调PTEN抑制PI3K/AKT通路发挥对肝癌荷瘤小鼠的抗肿瘤作用。

依托咪酯通过下调含WW结构域的E3泛素蛋白连接酶2表达抑制非小细胞肺癌A549细胞增殖并诱导其凋亡的实验研究

目的探讨依托咪酯(ETO)对非小细胞肺癌(NSCLC)A549细胞增殖和凋亡的影响及含WW结构域的E3泛素蛋白连接酶2(WWP2)在其中发挥的作用机制。方法分别采用0、1、2和3 mg/L的ETO处理人正常肺上皮细胞系BESA-2B和人NSCLC细胞系A549,细胞计数试剂盒法检测细胞活力;将A549细胞随机分为对照组、ETO(3 mg/L)组、ETO+NC组和ETO+WWP2-OE组,后2组分别于ETO处理后转染空载体pcDNA3.1-NC或WWP2过表达载体pcDNA3.1-WWP2,集落形成试验检测细胞增殖能力;TUNEL染色检测细胞凋亡;实时荧光定量聚合酶链反应法检测各组细胞中WWP2的mRNA表达;STITCH数据库选择与ETO直接相互作用的蛋白质;蛋白质印迹法检测各组细胞中WWP2、增殖、凋亡和磷酸酶与张力蛋白同源物(PTEN)/磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)通路相关蛋白表达。结果ETO以剂量依赖性方式显著降低A549细胞活力(F=147.923,P<0.001);而对正常肺上皮BESA-2B细胞活力无影响(F=1.427,P=0.126)。不同浓度(0、1、2、3 mg/L)ETO处理A549细胞后,集落形成数量逐渐减少[0、1、2、3 mg/L ETO组分别为(898±38)、(785±48)、(635±36)、(388±20)个],细胞凋亡率逐渐升高[0、1、2、3 mg/L ETO组分别为(2.23±0.65)%、(7.63±0.35)%、(13.24±0.47)%、(18.93±0.36)%],呈剂量依赖性(F=218.732、352.786,均P<0.001)。STITCH数据库预测ETO可通过上调WWP2蛋白表达和下调PTEN蛋白表达与WWP2和PTEN相互作用。与对照组相比,ETO组细胞中WWP2的mRNA和蛋白表达降低,集落形成数量减少,细胞凋亡率升高,增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞增殖抗原Ki67、B淋巴细胞瘤基因2(Bcl-2)和PTEN蛋白表达降低,Bcl-2相关X蛋白(Bax)和含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved caspase-3)蛋白表达升高,磷酸化PI3K(p-PI3K)/PI3K和磷酸化Akt(p-Akt)/Akt比值降低(均P<0.01);与ETO+NC组比较,ETO+WWP2-OE组细胞中WWP2的mRNA和蛋白表达升高,集落形成数量增多,细胞凋亡率降低,PCNA、Ki67、Bcl-2和PTEN蛋白表达增多,Bax和Cleaved caspase-3蛋白表达减少,p-PI3K/PI3K和p-Akt/Akt比值升高(均P<0.01)。结论ETO可抑制A549细胞增殖并促进细胞凋亡,其作用机制可能与调控WWP2的下调和PTEN/PI3K/Akt通路的激活有关。

榆栀止血颗粒含药血清对异位子宫内膜间质细胞PTEN/PI3K/AKT信号通路的影响

目的:探讨榆栀止血颗粒含药血清对异位子宫内膜间质细胞(ESCs)中第10号染色体同源丢失性磷酸酶张力蛋白(PTEN)/磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)信号通路的影响。方法:制备榆栀止血颗粒含药血清,体外培养人异位ESCs细胞,分为对照组(空白血清)、低剂量组(榆栀止血颗粒低剂量血清)、中剂量组(榆栀止血颗粒中剂量血清)和高剂量组(榆栀止血颗粒高剂量血清)。CCK-8法检测细胞增殖情况;Transwell法检测细胞侵袭情况;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测细胞中PTEN mRNA表达情况;蛋白印迹(WB)法检测细胞中PTEN、p-PI3K、PI3K、p-AKT、AKT蛋白表达情况。结果:与对照组相比,低、中、高剂量组异位ESCs细胞OD值、侵袭细胞数、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT蛋白表达水平显著降低(P<0.05),细胞中PTEN mRNA及蛋白表达水平显著升高(P<0.05);随着榆栀止血颗粒含药血清剂量升高,异位ESCs细胞OD值、侵袭细胞数、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT蛋白表达水平逐步递减(P<0.05),细胞中PTEN mRNA及蛋白表达水平逐步递增(P<0.05)。结论:榆栀止血颗粒含药血清可抑制异位ESCs细胞增殖与侵袭,上调PTEN表达并抑制PI3K/AKT信号通路。

新型表面张力测定装置在物理化学实验教学中的应用

目的采用新型实验装置改善最大泡压法测定液体表面张力的实验结果。方法采用新型DMPY-3C表面张力测定装置,测定了25℃和35℃不同浓度乙醇水溶液的表面张力,以及在20℃时不同浓度的油酸钠水溶液的表面张力。结果结合实验结果和origin软件处理可计算25℃下乙醇分子的截面积为3.88×10^(-19)m^(2),35℃下乙醇分子的截面积为5.11×10^(-19)m^(2),20℃下油酸钠的临界胶束浓度(CMC值)为3.12×10^(-3)mol/L。结论采用新型DMPY-3C表面张力测定装置可方便测定溶液浓度对表面张力的影响,可大大减小实验偏差。该实验教学装置有助于药学类专业学生巩固并加深理解溶液表面张力测定的意义并熟知其在药学相关领域的应用。

miR-30a对卵巢癌细胞PTEN/PI3K/AKT/mTOR自噬通路及顺铂耐药性的影响

目的:探究miR-30a对人卵巢癌SKOV3细胞自噬及顺铂耐药性的影响,并初步研究其作用机制。方法:体外培养人卵巢癌SKOV3细胞和人卵巢癌细胞(耐药)细胞(SKOV3/DDP);将SKOV3/DDP细胞随机分为对照组、miR-30a阴性对照(NC)组和miR-30a模拟(mimics)组,SKOV3细胞作为正常组。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测各组细胞miR-30a表达情况;CCK-8法检测各组细胞顺铂耐药性;Annexin V-FITC/PI法检测各组细胞凋亡情况;蛋白印迹分析法检测各组细胞微管相关蛋白轻链3 I/II(LC3I/II)、p62、磷酸酶和张力蛋白同源物(PTEN)、磷酸化磷脂酰肌醇-3-激酶(p-PI3K)、磷酸化丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶B(p-AKT)、磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)表达情况;双荧光素酶报告基因检测系统验证miR-30a与PTEN的靶向关系。结果:与对照组和miR-30a NC组相比,miR-30a mimics组SKOV3/DDP细胞miR-30a表达水平、凋亡率、p62、p-PI3K、p-AKT及p-mTOR水平显著升高(P<0.05),IC 50值、LC3II、PTEN蛋白表达水平及LC3II/LC3I比值显著降低(P<0.05);与正常组相比,对照组SKOV3/DDP细胞上述各指标变化趋势完全相反;mirbase数据库预测显示,miR-30a与PTEN mRNA 3'UTR区有结合位点,与PTEN-3'UTR-WT+miR-30a NC组比较,PTEN-3'UTR-WT+miR-30a inhibitor组荧光素酶活性降低(P<0.05)。结论:miR-30a可能通过靶向抑制PTEN表达,激活PI3K/AKT/mTOR信号通路调控人卵巢癌细胞自噬,降低卵巢癌细胞的顺铂耐药性。

基于PINK1/Parkin通路探讨丹红注射液对冠心病大鼠心肌线粒体损伤的保护作用及机制

目的:探讨丹红注射液(DHI)对冠心病(CHD)大鼠心肌线粒体的保护作用,以及其对同源性磷酸酶张力蛋白诱导激酶1(PINK1)/E3泛素连接酶(Parkin)信号通路的调控机制。方法:采用高脂饲料、自由饮水持续喂养大鼠8周构建大鼠CHD模型,以丹红注射液低(DHI-L)、丹红注射液高(DHI-H)剂量进行干预,以过表达PINK1的pcDNA3.1-PINK1(pc)进行功能挽救实验;电镜检测各组大鼠心肌组织中完整线粒体的比例;脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记试剂盒(TUNEL)检测大鼠心肌组织的细胞凋亡;超氧化物阴离子二氢乙啶(DHE)检测大鼠心肌组织中活性氧(ROS)的含量;实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)仪检测各组大鼠心肌组织中PINK1、Parkin、线粒体融合蛋白2(MNF2)、线粒体分裂基因动态相关蛋白1(DRP1)、B细胞淋巴瘤-2相互作用蛋白1(Beclin1)、自噬相关基因5(ATG5),微管相关蛋白1轻链3(LC-3)的mRNA表达;蛋白免疫印迹法(Western Blot)实验检测大鼠心肌组织中PINK1、Parkin、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达。结果:与CHD模型大鼠比较,DHI-L、DHI-H能明显升高CHD大鼠心肌组织中完整线粒体的比例,抑制心肌细胞凋亡,下调心肌组织ROS含量,降低心肌组织PINK1、Parkin、DRP1、Beclin1、ATG5和LC-3的mRNA表达,升高心肌组织中MNF2的mRNA表达;下调PINK1、Parkin和Bax表达,上调心肌组织中Bcl-2表达;pcDNA3.1-PINK1可部分逆转DHI对心肌线粒体的保护作用,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:丹红注射液能明显抑制CHD大鼠心肌组织的氧化应激,降低心肌线粒体的自噬水平,下调心肌组织中的细胞的凋亡率,改善实验动物的心功能,这可能与抑制PINK1/Parkin信号的传导有关。

900mm^2导线“2×一牵3”张力放线施工工艺

根据我国现阶段的张力放线施工工艺水平及放线施工机具的现状,对国内900mm2六分裂导线采用"3×一牵2"、"一牵2+一牵4"和"2×一牵3"3种放线方式进行了对比分析,指出"2×一牵3"放线方式较其他2种放线方式更适合大截面导线的展放。介绍了实现"2×一牵3"张力放线主要部件,即不对称四轮放线滑车和偏心走板的结构特点,使用研制的组合式不对称四轮放线滑车和偏心走板,解决了放线系统的不对称问题,此工艺顺利地通过了工程试验并完成了工程应用。

蛋白激酶在脊髓损伤中作用机制的研究进展

脊髓损伤(SCI)分为原发性脊髓损伤和继发性脊髓损伤〔1〕。炎性因子、活性氧、兴奋性毒性和代谢异常是导致继发性损伤的主要原因。正常或病理条件下,磷酸酶和张力蛋白同源物(PTEN)/磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路在中枢神经系统(CNS)中扮演着不同的角色,两条通路的激活均能够诱导细胞结构和功能的改变。

加味桂枝茯苓丸通过PTEN/PI3K/Akt通路调控线粒体凋亡途径预防小鼠结直肠腺瘤的作用机制

目的:探讨加味桂枝茯苓丸通过磷酸酯酶与张力蛋白同源物(PTEN)/磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)通路调控线粒体凋亡途径预防小鼠结直肠腺瘤(CRA)的作用及机制。方法:将60只SPF级C57BL/6雄性小鼠随机分为正常组、模型组、加味桂枝茯苓丸低、中、高剂量组(13、26、52 g·kg^(-1)·d^(-1)),阳性药阿司匹林组(0.015g·kg^(-1)·d^(-1)),通过氧化偶氮甲烷(AOM)/葡聚糖硫酸钠(DSS)化学诱导CRA小鼠模型,造模同时灌胃给予加味桂枝茯苓丸或阿司匹林。给药期间,每周检测各组小鼠体质量;9周后,观察腺瘤形成数目;酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)水平;苏木素-伊红(HE)染色观察腺瘤组织病理变化;免疫组织化学法(IHC)检测细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)和细胞增殖核抗原(Ki67)的表达;原位末端转移酶标记法(TUNEL)检测腺瘤组织细胞凋亡情况;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)观察PTEN、PI3K、Akt、磷酸化PI3K(p-PI3K)、磷酸化Ak(p-Akt)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、细胞色素C(Cyt C)、胱天蛋白酶-9(Caspase-9)、胱天蛋白酶-3(Caspase-3)mRNA和蛋白表达水平。结果:与正常组比较,模型组小鼠体质量在第1周至第2周无明显变化,第3周至第9周明显降低(P<0.05,P<0.01);结直肠长度显著缩短,结直肠重量显著增加,黏膜表面可见大小不等的瘤样突起(P<0.01);血清TNF-α、IL-6、IL-1β水平升高(P<0.01);小鼠肠上皮腺体结构紊乱,细胞核明显拉长且可见病理性核分裂,固有层可见大量淋巴细胞小灶性浸润;Cyclin D1、Ki67阳性表达率显著升高(P<0.01);腺瘤细胞凋亡率显著降低(P<0.01);腺瘤组织PI3K、Akt、Bcl-2 mRNA和蛋白表达显著增强(P<0.01),p-PI3K、p-Akt蛋白表达显著增强(P<0.01),PTEN、Bax、Cyt C、Caspase-9、Caspase-3 mRNA和蛋白表达明显降低(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,各给药组小鼠体质量上升(P<0.01);肠道重量减轻,结直肠长度增加,腺瘤数量明显减少(P<0.05,P<0.01);血清TNF-α、IL-6、IL-1β含量显著降低(P<0.01);肠上皮腺体结构紊乱及黏膜固有层中性粒细胞浸润程度有所改善;Cyclin D1、Ki67阳性表达率显著下降(P<0.01);腺瘤组织细胞凋亡率明显增加(P<0.05,P<0.01);腺瘤组织PI3K、Akt、Bcl-2 mRNA和蛋白表达下降(P<0.05,P<0.01),p-PI3K、p-Akt蛋白表达明显降低(P<0.05,P<0.01),PTEN、Bax、Cyt C、Caspase-9、Caspase-3 mRNA和蛋白表达明显升高(P<0.05,P<0.01),以加味桂枝茯苓丸高剂量组干预效果最为显著。结论:加味桂枝茯苓丸可能通过调控PTEN/PI3K/Akt信号通路,进而诱导线粒体凋亡途径发挥预防小鼠CRA的作用。

电针预处理通过PTEN/PI3K通路减轻2型糖尿病大鼠足细胞损伤的机制研究

目的:观察电针预处理对2型糖尿病肾脏损伤大鼠足细胞和磷酸酶与张力蛋白同源物(PTEN)/磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)信号通路的影响,探讨其减轻2型糖尿病的可能机制。方法:Wistar大鼠随机分为空白组、模型组、电针组、抑制剂组、假电针组,10只/组。空白组正常饮食,不予处理;余组予高脂高糖饮食并联合链脲佐菌素腹腔注射造模。电针组造模前电针“中脘”“关元”及双侧“足三里”“丰隆”,假电针组取穴同电针组,针至皮下不通电,隔日1次,每次15 min,抑制剂组在电针组的基础上腹腔注射BPV(HOpic,0.6 mg/kg,0.5 mg/mL),所有治疗均持续8周。检测大鼠随机血糖,ELISA法检测尿微量白蛋白(ALB)含量,全自动生化分析仪检测血清尿素(Urea)、肌酐(Crea)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)含量,HE染色、PAS染色、Masson染色观察大鼠肾脏组织病理学变化,透射电镜观察肾脏足细胞超微结构改变,Western blot法检测肾脏Synaptopodin、微管相关蛋白轻链3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)、PTEN和PI3K蛋白表达水平。结果:与空白组相比,模型组大鼠血糖、血清ALB、Urea、Crea、TC、TG含量及肾脏PI3K蛋白表达水平显著上升(P<0.01),Synaptopodin、LC3-Ⅱ、PTEN蛋白表达水平降低(P<0.01),肾小球肥大,肾小球内糖原沉积,胶原纤维增多,基底膜增厚,足突融合或消失,自噬体明显减少;与模型组相比,电针组大鼠血糖、血清ALB、Urea、Crea、TC、TG含量及肾脏PI3K蛋白表达水平下降(P<0.01,P<0.05),Synaptopodin、LC3-Ⅱ、PTEN蛋白表达水平上升(P<0.01),肾小球肥大和基底膜增厚减轻,糖原沉积明显减少,足突基本正常,并见自噬体;与电针组相比,抑制剂组大鼠血糖、ALB、Urea、Crea、TC、TG含量及肾脏PI3K蛋白表达水平不同程度上升(P<0.05,P<0.01),Synaptopodin、LC3-Ⅱ、PTEN蛋白表达水平下降(P<0.01),假电针组血糖、ALB、Urea、TC、TG含量及肾脏PI3K蛋白表达水平上升(P<0.05,P<0.01),Synaptopodin、LC3-Ⅱ、PTEN蛋白表达水平下降(P<0.01),两组肾小球肥大和基底膜增厚较明显,可见糖原沉积,足突不同程度融合,自噬体少见。结论:电针预处理对大鼠肾脏足细胞的保护作用可能是通过促进PTEN基因编码蛋白的表达从而抑制PI3K的激活,提高足细胞自噬水平而实现的。

微小RNA-486-5p通过调控缺氧诱导因子-1α/人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因/磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶A信号通路影响结肠癌的发生发展

目的探讨微小RNA-486-5p(miR-486-5p)通过调控缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)/人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因(PTEN)/磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶A(Akt)信号通路影响结肠癌的发生发展。方法脂质体Lipofectamine™3000将miR-486-5p模拟物NC(对照),miR-486-5p模拟物转入SW480结肠癌细胞中,细胞购自上海细胞库。反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测miR-486-5p表达,噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期,Transwell实验检测细胞侵袭,蛋白质印迹法(Western blot)检测B淋巴细胞瘤-2基因(bcl-2)、bcl-2相关蛋白X(bax)、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、p27、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、HIF-1α、PTEN、PI3K及磷酸化Akt(p-Akt)蛋白表达。组间比较采用t检验进行分析。结果miR-486-5p模拟物组细胞miR-486-5p表达量(1.87±0.09比1.00±0.10,t=5.589,P<0.05)、细胞早期凋亡率[(15.48±0.97)%比(1.47±0.09)%,t=4.327,P<0.05],细胞晚期凋亡率[(27.46±1.54)%比(3.24±0.13)%,t=5.652,P<0.05],细胞周期G1期[(60.32±4.43)%比(24.08±1.96)%,t=4.578,P<0.05]、bax(0.96±0.08比0.18±0.01,t=5.373,P<0.05)、p27(0.86±0.06比0.32±0.01,t=5.762,P<0.05)及PTEN(1.64±0.09比0.46±0.02,t=4.874,P<0.05)蛋白表达量高于对照组,miR-486-5p模拟物组细胞活力(0.33±0.01比0.54±0.03,t=4.582,P<0.05)、细胞侵袭数目[(37.59±2.64)个比(179.93±6.96)个,t=4.147,P<0.05],bcl-2(0.21±0.01比1.04±0.09,t=5.287,P<0.05)、Cyclin D1(0.14±0.00比0.85±0.07,t=4.642,P<0.05)、MMP-9(0.28±0.02比0.84±0.06,t=4.643,P<0.05)、HIF-1α(0.45±0.03比1.53±0.09,t=5.562,P<0.05)、PI3K(0.38±0.01比1.78±0.10,t=5.468,P<0.05)及p-Akt(0.38±0.02比1.10±0.08,t=4.129,P<0.05)蛋白表达量低于对照组。结论上调miR-486-5p表达量可诱导结肠癌细胞SW480凋亡、抑制细胞侵袭、使细胞周期发生阻滞,可能与抑制HIF-1α/PTEN/PI3K/Akt信号通路有关。

DJ-1在心肌缺血再灌注损伤中的研究进展

心肌缺血再灌注损伤(MIRI)是心肌梗死后冠状动脉再通治疗的常见并发症,严重影响急性心肌梗死患者心功能恢复,导致患者预后不良,同时也增加了患者主要不良心血管事件的发生率和病死率。帕金森病相关蛋白7(PARK7/DJ-1)作为一种多功能蛋白,参与氧化应激、细胞自噬与凋亡调控、线粒体稳态维持、信号转导等与MIRI密切相关的病理生理过程。人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因/磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B信号通路及核转录因子红系2相关因子2信号通路均在MIRI中发挥重要作用,而DJ-1作为上述通路的重要启动元件,可直接参与MIRI的发生、发展。MIRI病理机制复杂,进一步研究DJ-1在MIRI中的作用,可能为有效防治MIRI提供新的靶点和潜在研究方向。

基于PTEN/PI3K/AKT和线粒体凋亡信号通路探讨乳癖散结汤治疗乳腺增生大鼠作用机制

目的:研究乳癖散结汤对乳腺增生(MGH)大鼠的治疗作用及可能的作用机制。方法:MGH大鼠模型制作成功后,随机分为正常对照组、模型对照组、乳癖散结汤34、68 g/kg组、他莫昔芬0.004 g/kg组;大鼠分别灌胃给予相应的药物。给药8 w后,进行大鼠行为学观察、乳房直径和乳头高度测量,测定血浆中T淋巴细胞亚群(CD^(3+)、CD^(4+)、CD^(8+))、血清性激素[雌二醇(E2)、孕酮(P)、睾酮(T)、黄体生成激素(LH)、卵泡刺激素(FSH)、泌乳激素(PRL)]含量,取乳腺进行乳腺组织细胞线粒体细胞色素C(Cyto C)释放、乳腺组织形态学分析,采用Real-time PCR检测乳腺组织中线粒体凋亡信号通路的mRNA表达情况;采用Western blotting检测乳腺组织中磷酸酯酶与张力蛋白同源物/磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PTEN/PI3K/AKT)和线粒体凋亡信号通路相关蛋白表达。结果:与正常对照组比较,模型对照组大鼠行为学评分、乳房直径、乳头高度显著增加,乳腺导管上皮细胞增生层数和乳腺组织病理学评分增加,血浆中CD^(8+)T淋巴细胞亚群、血清E2、LH、FSH、PRL和乳腺组织中Cyto C含量及E2/P、E2/T比值升高,Pcna、Bcl2、Bclxl mRNA表达和Bcl-2/Bax、Bcl-xl/Bad比值升高,pro-Caspase-3、pro-Caspase-9蛋白表达上调,p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT比值显著升高(P<0.01);血浆中CD^(3+)、CD^(4+)T淋巴细胞亚群、P、T含量,乳腺组织中Cyto C含量及CD^(4+)/CD^(8+)比值显著降低,Bax、Bad、Apaf1 mRNA表达下调,PTEN、cleaved-Caspase-3、cleaved-Caspase-9和cleaved-PARP-1蛋白表达显著下调(P<0.01);用乳癖散结汤34、68 g/kg治疗后,上述指标被明显逆转(P<0.05或P<0.01)。结论:乳癖散结汤对MGH大鼠具有较好的治疗作用,其作用机制可能与其增强免疫功能、调节性激素及PTEN/PI3K/AKT信号通路,从而促进线粒体途径介导的细胞凋亡密切相关。

miR-21通过PTEN/PI3K/AKT信号通路调控胶质瘤细胞的增殖

探讨miR-21对胶质瘤细胞U87中人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源的基因/磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PTEN/PI3K/AKT)信号通路相关影响作用研究。脂质体Lipofectamine^(TM)2000将miR-21 inhibitor和miR-21 NC转入U87细胞中,48 h后,RT-PCR检测miR-21表达,MTT法检测细胞活力,Annexin V/PI流式双染检测细胞凋亡情况,Western blotting检测PTEN/PI3K/AKT激活情况及程序性细胞死亡因子4(PDCD4),Bax及Bcl-2的表达。与miR-21 NC组比较,miR-21 inhibitor组miR-21表达量显著降低,U87细胞活力下降,细胞凋亡率提高,PI3K、Bcl-2及p-AKT表达量下调,PTEN、PDCD4及Bax表达量上调,差异均具有统计学意义(p<0.01)。miR-21inhibitor能显著的抑制U87细胞的增殖,与PTEN/PI3K/AKT信号通路有关。

楮实子水提物对二乙基亚硝胺诱发小鼠肝细胞癌的抑制作用及PTEN/PI3K/Akt信号通路的影响

目的:基于同源性磷酸酶-张力蛋白(PTEN)/磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路探讨楮实子水提物对二乙基亚硝胺(DEN)诱发小鼠肝细胞癌(HCC)的抑制作用。方法:采用腹腔注射DEN的方法构建原发性HCC小鼠模型,将HCC小鼠随机分为模型组、索拉非尼组(0.01 g·kg^(-1)·d^(-1))、楮实子水提物低、中、高剂量组(0.9、1.8、3.6 g·kg^(-1)·d^(-1)),每组10只;另取10只C57BL/6小鼠作为空白组,腹腔注射等体积生理盐水。在小鼠肝脏出现肝癌样白色结节后灌胃给予不同浓度的楮实子水提物;索拉非尼组给予索拉非尼灌胃;空白组和模型组小鼠给予生理盐水灌胃。生化分析仪检测小鼠血清碱性磷酸酶(ALP)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)及γ-谷氨酰转移酶(γ-GT)活性;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测肿瘤标志物甲胎蛋白(AFP)、癌胚抗原(CEA)表达水平;苏木素-伊红(HE)染色及马松(Masson)染色观察肝细胞癌变程度及肝细胞损伤情况;免疫组织化学染色观察肝癌细胞增殖情况;脱氧核苷酸末端转移介导的缺口末端标记法(TUNEL)染色观察小鼠肝癌细胞凋亡情况;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测PTEN/PI3K/Akt信号通路相关蛋白PTEN、PI3K、磷酸化-Akt(p-Akt)蛋白表达水平变化。结果:与空白组比较,模型组小鼠ALP、AST、ALT、γ-GT活性及AFP、CEA表达水平显著升高(P<0.01);小鼠肝组织癌变和炎症细胞浸润现象明显,可见大量蓝色胶原纤维增生;肿瘤增殖抗原(Ki67)阳性的增殖细胞数量显著增加(P<0.01);PTEN蛋白表达被抑制(P<0.01),并促进PI3K、p-Akt蛋白表达(P<0.01);与模型组比较,楮实子水提物中、高剂量组小鼠血清中ALP、AST、ALT、γ-GT活性及AFP、CEA表达水平明显降低(P<0.05,P<0.01);且小鼠肝组织癌变程度和炎症细胞浸润明显减轻,胶原纤维增生明显减少;楮实子水提物中、高剂量组Ki67阳性的增殖细胞数量明显减少(P<0.05,P<0.01),楮实子水提物高剂量组TUNEL阳性的凋亡细胞数量明显增加(P<0.05,P<0.01);楮实子水提物楮实子水提物中、高剂量组促进PTEN蛋白表达(P<0.05,P<0.01),抑制p-Akt蛋白表达(P<0.05,P<0.01)。结论:楮实子水提物对DEN诱发的小鼠原发性HCC具有显著的抑制作用,其作用机制可能与调控PTEN/PI3K/Akt信号通路中关键蛋白表达有关。

基于PTEN/PI3K/AKT通路探讨miR-29a对卵巢癌细胞增殖、凋亡的影响

目的基于第10号染色体同源丢失性磷酸酶张力蛋白基因/磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PTEN/PI3K/AKT)通路探讨微小RNA-29a(miR-29a)对卵巢癌细胞增殖、凋亡的影响。方法体外培养人卵巢癌细胞A2780细胞,分为对照组(不转染)、siRNA NC组(转染nonsense siRNA)、miR-29a siRNA组(转染miR-29a siRNA)、mimic NC组(转染negative control-miR-29a)和miR-29a mimic组(转染miR-29a mimic)。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测各组A2780细胞中miR-29a、PTEN mRNA表达情况;采用CCK-8法及显微镜检测各组A2780细胞增殖情况;流式细胞仪检测各组A2780细胞凋亡情况;蛋白印迹法(WB)检测各组A2780细胞中PTEN/PI3K/AKT通路相关蛋白表达情况;双荧光素酶报告基因实验验证miR-29a与PTEN的靶向作用关系。结果与对照组、siRNA NC组相比,miR-29a siRNA组A2780细胞中miR-29a表达水平、p-PI3K/PI3K及p-AKT/AKT蛋白表达水平、细胞OD值降低(P<0.05),PTEN mRNA及蛋白表达水平、细胞凋亡率升高(P<0.05);与对照组、mimic NC组相比,miR-29a mimic组A2780细胞中miR-29a水平、p-PI3K/PI3K及p-AKT/AKT蛋白水平、细胞OD值升高(P<0.05),PTEN mRNA及蛋白水平、细胞凋亡率降低(P<0.05)。miR-29a与PTEN基因存在靶向关系。结论miR-29a对卵巢癌A2780细胞具有促进增殖、抑制凋亡的作用,可能是通过靶向下调PTEN表达并激活PI3K/AKT通路发挥作用的。

黄连解毒汤对脂多糖诱导的小鼠急性肾损伤治疗作用及机制

目的研究黄连解毒汤对脂多糖诱导的小鼠急性肾损伤的作用及作用机制。方法雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组、模型组和黄连解毒汤低、中、高剂量(50、100、150 mg/kg)组,每组8只。连续ig黄连解毒汤3 d,末次给药2 h后,ip脂多糖(10 mg/kg)建立急性肾损伤模型。检测血清中肌酐和尿素氮水平;苏木素-伊红(HE)和高碘酸-席夫(PAS)染色检测肾组织病理变化;免疫组化法检测肾组织B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)表达;TUNEL染色检测肾组织细胞凋亡情况;Western blotting检测肾组织磷酸酯酶与张力蛋白同源物(phosphatase and tensin homolog,PTEN)、磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)、蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)、p-PI3K和p-Akt蛋白表达。结果黄连解毒汤明显降低急性肾损伤小鼠血清中尿素氮及肌酐水平(P<0.01、0.001),改善肾脏组织病理变化,抑制肾组织细胞凋亡,上调肾组织PI3K、Akt蛋白表达(P<0.05),下调PTEN、p-PI3K、p-Akt蛋白表达(P<0.05)。结论黄连解毒汤通过调控PTEN/PI3K/Akt通路抑制细胞凋亡,进而缓解急性肾损伤。

大截面六分裂导线的滑车悬挂新方法

对国内900mm2六分裂导线采用3×"一牵2"放线方式的滑车悬挂方法进行了分析和改进。使用专门研制的三轮放线滑车挂架,使铁塔每极悬挂3个三轮放线滑车的布置和悬挂方式更加简单,将绝缘子、滑车进行同步安装和悬挂,减少了施工安装环节,提高了张力架线的总体施工效率,保证了铁塔的良好受力,为后序紧线施工和附件安装操作提供了方便。