外源性甲状腺激素T3对酒精性肝纤维化小鼠肝细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨外源性甲状腺激素T3对酒精性肝纤维化小鼠肝细胞增殖和凋亡的影响。方法将38只6~8周龄健康SPF级C57BL/6N雄鼠分为正常对照组6只、模型组和3个不同剂量T3干预组每组各8只。对照组用TP4060C对照饲料喂养8周,模型组和T3干预组用TP4060A酒精饲料喂养8周并在第3周联合31.5%乙醇灌胃,建立酒精性肝纤维化模型。第6周起分别用不同剂量T3每天对干预组小鼠进行腹腔注射至第8周末。检测小鼠血清ALT、AST,取肝组织进行HE和天狼星红染色;免疫蛋白印记迹法检测PCNA、Caspase-9、a-SMA的相对表达水平。结果模型组小鼠ALT(35.544±4.039)U/L和AST(78.250±9.307)U/L比正常组ALT(14.336±3.553)U/L和AST(40.842±3.834)U/L都有所升高(P<0.05),但经低、中、高T3干预的小鼠血清ALT分别为(25.242±3.469)、(22.940±4.566)、(27.556±4.609)U/L,均低于模型组小鼠(P<0.05);同时T3干预组小鼠的AST分别为(52.213±9.664)、(40.938±7.565)、(48.696±12.443)U/L相比于模型组小鼠也有不同程度的降低(P<0.05)。五组小鼠的PCNA(0.475±0.019、1.001±0.034、0.876±0.015、0.618±0.035、0.906±0.092),Caspase-9(0.832±0.024、1.23±0.0541.040±0.035、0.943±0.036、1.114±0.072),a-SMA(0.592±0.046、1.037±0.043、0.892±0.028、0.715±0.034、0.854±0.047),模型组三种蛋白的相对表达量均比正常组有所升高(P<0.05),而T3干预组的三种蛋白相对表达量都比模型组有所降低(P<0.05)。结论适当补充甲状腺激素T3可以抑制肝纤维化小鼠HSC的活化,进而抑制肝细胞凋亡。

甲状腺激素T_3诱导K562细胞铁蛋白表达与细胞凋亡和生长的关系

目的 探讨甲状腺激素T3对K562细胞铁蛋白表达及其对细胞凋亡和增殖的影响。方法 收集各组细胞胞浆蛋白,用放射免疫法检测铁蛋白含量,并用流式细胞术分析各组细胞凋亡百分率及细胞周期变化。结果 中等浓度及高浓度的T3均能增加K562细胞铁蛋白表达,与空白对照相比有显著性差异（P<0.05）,且随T3浓度增加,铁蛋白的表达亦增高。同一浓度T3与K562细胞共培养,随时间延长,铁蛋白表达增加,与空白对照相比具有显著性差异（P<0.01）。24h培养组细胞凋亡率较空白对照略有下降,差异有统计学意义,72h培养组T3=200nM时凋亡百分率明显下降。T3各处理组中S+G2期细胞比例较空白对照组明显减少（P<001）,且72h各组G2+S细胞百分率较24h明显下降。结论 甲状腺激素T3能诱导K562细胞铁蛋白表达增加,且能干预细胞凋亡和细胞增殖周期。

甲状腺激素受体结合蛋白3基因在儿童急性淋巴细胞白血病中的表达及意义

目的研究甲状腺激素受体结合蛋白3(TRIP3)基因在急性淋巴细胞白血病(ALL)患儿中的表达,探讨其与儿童ALL缓解的关系。方法采集空腹静脉血2～4mL,依地酸(EDTA)抗疑,采用Ficoll密度梯度离心法收集单个核细胞,Trizol试剂一步法提取总RNA。采用反转录-聚合酶链反应法(RT-PCR)检测73例不同阶段ALL及20例健康儿童外周血单个核细胞TRIP3基因表达水平,并分析其与儿童ALL缓解的关系。结果1.TRIP3基因在ALL初治及复发组的表达水平均明显低于健康对照组(Pa<0.01);在完全缓解的ALL患儿中的表达水平明显高于健康对照组(P<0.01);2.TRIP3基因在初治组与复发组ALL中的表达水平无明显差异(P>0.05);在缓解组表达水平明显高于复发及初治组(Pa<0.01);3.在初治的ALL患儿中,TRIP3基因表达阴性者其治疗后完全缓解率明显低于TRIP3基因表达阳性者(缓解率分别为25.0%vs84.2%,P<0.05)。结论TRIP3基因与儿童ALL的缓解有一定关系,其表达水平可作为评价ALL患儿化疗效果及评估预后的指标之一。

牙鲆碱性磷酸酶基因调控序列的功能分析及甲状腺激素对其调节作用

为分析牙鲆碱性磷酸酶基因5'调控区和第一内含子调控序列的功能,本研究运用DNA重组技术将PCR扩增得到的牙鲆碱性磷酸酶基因的5′调控区序列、第一内含子序列及5′调控区和第一内含子串联序列分别插入启动子缺失的增强型绿色荧光蛋白表达载体pAcGFP1-1中,得到pAcGFP1-5′ALP、pAcGFP1-Intron1和pAcGFP1-AI报告基因表达载体。通过脂质体介导重组质粒转染中国仓鼠卵巢细胞(CHO)并检测荧光信号。转染后细胞状态良好,24 h后发现,在倒置荧光显微镜下均可看到不同强度的绿色荧光信号,且荧光信号随时间的延长而增强,其中转染pAcGFP1-AI后的荧光信号强度最强。以上结果表明,牙鲆碱性磷酸酶基因5′调控区和第一个内含子序列均具有启动子活性,且第一内含子与5′调控区存在协同效应,两者协同能增强基因的表达。为了解甲状腺激素T3对调控序列启动子活性的调节作用,用不同浓度的T3处理转染的CHO细胞,24 h后发现加入50、75和100 nM的T3都增强了绿色荧光蛋白的表达,而且信号强度随T3浓度的增加而增强。这表明甲状腺激素T3对牙鲆碱性磷酸酶基因调控序列的启动子活性有一定的增强作用。本研究为深入阐明牙鲆碱性磷酸酶基因转录表达的分子机制提供了实验依据。

碱性磷酸酶在大菱鲆不同组织的表达及其与甲状腺激素的关系

为了探讨碱性磷酸酶(ALP)基因在大菱鲆(Scophthatmus maximus)体内的表达情况及在细胞水平上三碘甲状腺原氨酸(T3)对碱性磷酸酶(ALP)基因表达量的影响,利用荧光定量PCR法检测了大菱鲆肠、肌肉、脾脏、心脏、鳃、肝脏、肾脏及脑8个不同组织中ALP mRNA的表达情况,并且用0 nmol/L、50 nmol/L、75 nmol/L、100 nmol/L、200 nmol/L 5个不同浓度的T3处理大菱鲆肾细胞(SMKC),采用实时荧光定量PCR法测定T3处理后细胞中ALP mRNA的表达情况。结果表明,ALP mRNA在大菱鲆不同组织中的表达量各不相同,具有组织特异性。心脏组织中ALP mRNA的表达量最高,其次是肝脏组织中和鳃组织中,肌肉组织中ALP mRNA的表达量最少。不同浓度T3处理后大菱鲆肾细胞后,细胞中碱性磷酸酶基因的表达量存在明显的差异,ALP mRNA的表达量随着T3浓度的增加有递增趋势。结论认为,ALP基因在大菱鲆成鱼8个不同组织中均有表达,但其表达量却有明显的差异,具有组织特异性。ALP基因的表达量受甲状腺激素T3正向调控,并有浓度依赖性。

云南撒尼族新生儿、孕母及非孕妇女血清游离与总甲状腺激素水平的研究

研究45对撒尼族新生儿、孕母及30例非孕妇女的血清甲状腺激素水平及其相关性,发现:①新生儿(脐血)组甲状腺激素浓度与孕母组间有极显著差异,具有活性高者浓度低、活性低者浓度高的特征;②孕母组与非孕组比较,前者TT_4偏高,FT_3,FT_4偏低,其FT_3降低有显著意义;③脐血与孕母血中的FT_3,FT_4值完全无相关性,相对浓度亦各异,据此,对胎盘能通透FT_3,FT4的结论提出质疑。

摘除公羊甲状腺血清T3、T4含量变化研究

通过摘除公羊甲状腺,探讨血清中T4、T3含量变化。摘除9～12个月后,T4含量上升,与摘除前和对照组相比较差异不显著。摘除6个月后,T3含量上升,与摘除前和对照组相比较差异不显著。由此可推测,体内可能有其它组织合成或贮存T4、T3的机能,但需深入研究。

外源性甲状腺激素T3对酒精性肝纤维化小鼠肝脏氧化应激的影响及其机制

目的构建小鼠酒精性肝纤维化(ALF)模型,探讨补充外源性甲状腺激素T3对小鼠肝脏氧化应激的影响。方法80只小鼠随机分为6组:正常对照组、酒精性肝纤维化模型组、低浓度T3干预组(25μg/kg)、中浓度T3干预组(50μg/kg)、高浓度T3干预组(100μg/kg)及T3对照组(T3浓度为100μg/kg)。采用酒精液体饲料(TP4060A)喂养,联合31.5%乙醇溶液灌胃构建酒精性肝纤维化模型,从第6周起腹腔注射T3,干预持续3周。T3对照组及正常对照组采用对照液体饲料(TP4060C)喂养。通过天狼星红染色检测胶原纤维含量,免疫印迹法检测肝组织α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和Ⅰ型胶原蛋白(collagenⅠ)蛋白表达,以及血清转氨酶活性检测分析小鼠肝脏损伤及纤维化程度;采用ELISA法检测肝组织中超氧化物歧化酶(SOD)活性、谷胱甘肽(GSH)和丙二醛(MDA)含量;免疫组织化学法和免疫印迹法检测肝脏自噬相关蛋白微管相关蛋白轻链3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)和p62的表达水平。结果模型组小鼠肝脏结构与功能损伤严重,自噬被抑制,氧化应激反应较对照组明显增强;与模型组相比,T3干预组小鼠肝脏出现不同程度的功能和结构的恢复,自噬功能恢复,低、中浓度T3干预组肝脏中SOD活性和GSH含量升高,MDA含量明显减少;高浓度T3干预组则表现为SOD活性升高,MDA含量明显减少,GSH含量仍明显低于正常对照组,与模型组无明显差异。结论适当补充T3能够通过恢复肝脏自噬功能抑制氧化应激反应,进而影响酒精性肝纤维化的发生发展。

甲状腺激素T3对急性酒精性肝损伤小鼠肝脏细胞增殖与凋亡的影响

目的研究甲状腺激素T3对急性酒精性肝损伤小鼠的肝脏结构与功能的影响及细胞增殖与凋亡的相关基因表达。方法对正常小鼠提前给予不同浓度的甲状腺激素T3腹腔注射干预,最后一次给药后给予50%酒精溶液一次性灌胃,24 h后处死,并留取血清和肝脏。该实验通过建立小鼠急性酒精性肝损伤模型,对甲状腺激素T3在其中的作用进行分析。结果经T3干预后的急性酒精性肝损伤小鼠可观察到肝小叶轮廓清晰,肝索排列较为整齐,但存在炎细胞浸润,血清ALT活性和肝脏ROS含量增加,高剂量组PCNA表达增加(P<0.05),凋亡基因Caspase3和Bax表达较模型组有所降低(P<0.01),但随T3干预浓度升高凋亡基因表达出现上升趋势。结论浓度较高的甲状腺激素T3干预,会使小鼠急性酒精性肝损伤加重。

甲状腺激素T_3影响K562细胞转铁蛋白受体和铁蛋白表达的分子机制研究

目的 探讨甲状腺激素T3 对白血病细胞K5 6 2转铁蛋白受体 (TfR)和铁蛋白 (Fn)表达的调控作用及其可能的机制。方法 采用流式细胞术和放射免疫法分别检测TfR和Fn的表达水平 ,用RNA 蛋白带移动分析法测定铁调节蛋白 (IRP)与铁反应元件 (IRE)的结合活性。应用RT PCR方法半定量分析TfR和Fn的mRNA水平。结果 T3 对K5 6 2细胞TfR的表达无明显作用 ,而以不同浓度的T3处理细胞后使Fn的表达增加 ,其中当T3 为 10 0nmol L和 2 0 0nmol L时 ,与空白对照组相比 ,差异有显著性 (P <0 .0 5 )。T3 能减少IRP IRE的结合活性 ,且以T3 为 5 0nmol L时减少最为明显。不同浓度的T3 在不同的作用时间内均能提高H FnmRNA水平 ,而对TfRmRNA水平无显著影响。结论 T3 可增加细胞Fn的表达 ,而对TfR的表达无明显调控作用 ,其机制除包含转录后的调节外 ,可能还具有转录水平的调控作用。

甲状腺激素T_3增补于心脏停搏液中对心肌的保护作用

目的 探讨Ｔ３ 增补于停搏液中的心肌保护作用。方法 离体鼠心（ ｎ ＝ １６） 在改良的ＬａｎｇｅｎｄｏｒｆｆＮｅｅｌｙ 灌注模型上、３７ ℃下经历２０ 分钟预灌注、２０ 分钟停搏、３０ 分钟再灌注。结果 再灌注３０ 分钟时，左室功能指标（ＬＶＤＰｄｐ／ｄｔ）百分恢复率治疗组显著高于对照组（ Ｐ ＜０ ．０１），心肌超氧化物歧化酶（ＳＯＤ） 治疗组显著高于对照组（ Ｐ＜ ０．０１），过氧化脂质（ＬＰＯ） 治疗组显著低于对照组（ Ｐ ＜０．０５）；心肌酶（ＨＢＤＨ．ＬＤＨ）释放量再灌注期对应时点组间比较，治疗组显著低于对照组（ Ｐ＜ ０ ．０１） ；电镜观察心肌超微结构，治疗组显著优于对照组。结论 Ｔ３ 增补于心脏停搏液中可以显著地促进缺血后左室功能的恢复，显著减轻心肌缺血再灌注损伤，具有良好的心肌保护作用。

防治甲状腺疾病,自我调理很重要

甲状腺是人体最大的内分泌腺体,产生和分泌的甲状腺激素T3、T4作用于身体的各个器官,全面调节机体的新陈代谢活动,也是人体生长、发育不可缺少的重要调节激素之一.当一些原因导致甲状腺激素分泌过多（通常称之为“甲亢”）或甲状腺激素分泌不足（通常称之为“甲减”）时,机体就会出现一系列相关脏器代谢增快或减慢的表现.由于多数甲状腺疾病的早期表现无明显特异性,并且是渐进发展的.

甲状腺激素对急性胰腺炎严重程度的评判价值

目的探讨甲状腺激素对急性胰腺炎疾病严重程度早期评判的价值。方法前瞻性收集52例急性胰腺炎（重症32例、轻症20例）患者的临床资料。疾病严重程度根据亚特兰大标准分为32例重症（SAP）和20例轻症急性胰腺炎（MAP）。检测入院时患者的甲状腺激素水平（FT4、FT3、FT3、TSH）。比较甲状腺激素水平的组间差异,分析甲状腺激素水平与APACHEII评分及BalthazarCT分级的关系，并采用受试者工作特征（ROC）曲线评价甲状腺激素预测疾病严重程度的有效性。结果SAP组血清FT3水平明显低于MAP组（P〈0.01）;而FT4、FT3和TSH水平组间差异无统计学意义（P〉0.05）。血清FT3水平与APACHEH评分及BalthazarCT分级呈显著性负相关（分别为r=-0.687，P〈0.01；r=-0.720,P〈0.01）。FT3的ROC曲线下面积为0.875。采用优选的分界点2.87pmol/L,FT3预测重症胰腺炎灵敏度、特异度、阳性预测值和阴性预测值分别为75%，95%,93.8%和79.2%。

Ⅱ型脱碘酶在甲状腺疾病中的研究进展

Ⅱ型脱碘酶(D2)是一种重要的含硒蛋白酶,负责将甲状腺素(T4)的外环去碘化,形成生物活性更高的三碘甲状腺素(T3),从而调节体内的新陈代谢、生长发育和能量平衡。D2的活性受到多种因素的调控,包括自身甲状腺激素水平、cAMP途径、泛素化、内质网应激以及环境等。D2不仅与甲状腺疾病的发生、发展密切相关,而且在调节细胞增殖方面具有重要作用,因此被认为可能是有用的癌症标志物。此外,Ⅱ型脱碘酶基因(DIO2)Thr92Ala多态性已被证实是甲状腺疾病的相关因素,了解这种多态性与甲状腺疾病的关系,不仅可以帮助预测个体患病的风险,还有望为个性化治疗提供依据。本综述重点介绍D2的调控机制及其在甲状腺疾病中的重要作用,以及DIO2 Thr92Ala多态性在疾病发展中的影响,为今后的研究与临床实践提供指导。

利用CRISPR/Cas9系统构建HepG2细胞THRAP3基因敲除细胞系

目的使用CRISPR/Cas9基因编辑系统敲除人类肝癌细胞HepG2中的甲状腺激素受体相关蛋白3(THRAP3)基因,构建THRAP3基因敲除细胞系。方法根据CRISPR/Cas9靶点设计规则,设计特异性靶向THRAP3基因第3个外显子相关序列的多条小向导RNA,通过T7核酸内切酶筛选出切割效率最高的载体,构建pSpCas9-THRAP3真核重组表达质粒。测序鉴定后,将重组质粒转染至HepG2细胞中,用嘌呤霉素(puromycin)抗性筛选细胞株,挑取单克隆,再用PCR、测序等方法鉴定细胞基因型,免疫印迹方法鉴定细胞THRAP3敲除效果。使用高通量测序的方法进行基因表达分析。用流式细胞仪检测基因敲除对细胞周期的影响,CCK-8试剂盒检测细胞增殖。结果成功构建pSpCas9-THRAP3真核重组表达质粒,筛选出特异性敲除THRAP3基因的细胞系,验证了THRAP3敲除对细胞周期以及细胞增殖的影响。结论利用CRISPR/Cas9基因编辑技术成功构建并获得了THRAP3基因敲除细胞系并初步探究了THRAP3基因功能。

斑马鱼Dio3b基因敲除模型的构建

目的 通过观察3型甲状腺激素脱碘酶（Dio3b）基因敲除的斑马鱼在心率、自主运动及胚胎发育等方面的变化,探讨斑马鱼Dio3b基因的生物学功能.方法 利用CRISPR-Cas9基因编辑技术敲除斑马鱼Dio3b基因,利用PCR和测序技术鉴定突变位点,确定Dio3b-/-斑马鱼的建立;利用显微镜拍摄并记录Dio3b--和野生型胚胎在受精后48 h的心率变化;利用斑马鱼行为追踪系统观察Dio3b-/-和Dio3b＋/＋胚胎在胚胎出生后5~7 d的运动变化.结果 成功构建了携带8碱基缺失移码突变的斑马鱼Dio3b敲除的斑马鱼模型;在胚胎出生后48 h,Dio3b-/-胚胎的心率相较于野生型明显增加（P＜0.001）;在胚胎出生后5~7 d,Dio3b-/-幼鱼的自主运动明显加快（P＜0.05）.结论 敲除Dio3b基因的斑马鱼存在心率加快、自主运动增加,这类表型与临床甲状腺功能亢进患者相似,说明该模型可以作为局部组织中甲状腺功能亢进的疾病模型,用于研究胚胎期过量的甲状腺激素对发育的影响.