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禾谷镰孢菌β-1,3-葡聚糖合成酶催化亚基GLS2异源表达体系的建立
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作者 延扬帆 张峰 《农药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期611-620,共10页
本研究旨在利用草地贪夜蛾Spodoptera frugiperda昆虫细胞Sf9-杆状病毒表达系统筛选禾谷镰孢菌Fusarium graminearum β-1,3-葡聚糖合成酶催化亚基GLS2在昆虫细胞中的异源表达载体和分离纯化所用的去污剂,为后续研究该蛋白与药剂的结合... 本研究旨在利用草地贪夜蛾Spodoptera frugiperda昆虫细胞Sf9-杆状病毒表达系统筛选禾谷镰孢菌Fusarium graminearum β-1,3-葡聚糖合成酶催化亚基GLS2在昆虫细胞中的异源表达载体和分离纯化所用的去污剂,为后续研究该蛋白与药剂的结合模型提供基础。通过对杆状病毒表达质粒pFastBac进行设计和改造、利用同源重组的方法构建质粒、使用昆虫细胞表达系统对重组蛋白进行异源表达、筛选适合提取目的蛋白的去污剂等方法,得到适合禾谷镰孢菌β-1,3-葡聚糖合成酶催化亚基GLS2异源表达的载体和分离目的蛋白的方法。结果表明,载体pFastBac-GP67-8×His-GFP-TEV-FgGLS2、pFastBac-HA-8×His-GFP-TEV-FgGLS2、pFastBacGP67-6×His-2×Strep-TEV-FgGLS2和pFastBac-FgRHO-TEV-8×His均可在草地贪夜蛾昆虫细胞Sf9表达系统中进行表达,其中:GP67-8×His-GFP-TEV-FgGLS2融合蛋白可以用去污剂十二烷基二甲胺氧化胺(dodecyldimethylamine oxide,DDAO)从细胞膜上分离,HA-8×His-GFPTEV-FgGLS2融合蛋白可以用去污剂十二烷基-β-D-麦芽糖苷(n-dodecyl-β-maltoside, DDM)、十烷基-β-D-麦芽糖苷(n-decyl-β-maltoside, DM)或DDAO从细胞膜上分离,GP67-6×His-2×Strep-TEV-FgGLS2融合蛋白可以用去污剂DM或DDAO从细胞膜上分离。本研究首次成功地在草地贪夜蛾昆虫细胞Sf9表达系统中表达了β-1,3-葡聚糖合成酶催化亚基GLS2,FgRHO蛋白可促进FgGLS2的稳定表达,并筛选到适合FgGLS2提取的去污剂DDAO。 展开更多
关键词 禾谷镰孢菌 β-1 3-合成酶 催化亚基 昆虫细胞表达系统 去污剂
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(1,3)-β-D-葡聚糖合成酶小分子抑制剂研究进展
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作者 贺潇蒙 盛春泉 张万年 《中国药物化学杂志》 CAS CSCD 2014年第4期314-319,326,共7页
(1,3)-β-D-葡聚糖合成酶抑制剂通过破坏真菌细胞壁的合成而产生特异性的抗真菌作用。目前上市的(1,3)-β-D-葡聚糖合成酶抑制剂均为环六脂肽类,只能通过静脉注射给药。研发合成简便、可口服的(1,3)-β-D-葡聚糖合成酶小分子抑制剂具有... (1,3)-β-D-葡聚糖合成酶抑制剂通过破坏真菌细胞壁的合成而产生特异性的抗真菌作用。目前上市的(1,3)-β-D-葡聚糖合成酶抑制剂均为环六脂肽类,只能通过静脉注射给药。研发合成简便、可口服的(1,3)-β-D-葡聚糖合成酶小分子抑制剂具有巨大的研究前景。本文综述了近年来葡聚糖合成酶小分子抑制剂的研究进展。 展开更多
关键词 真菌感染 (1 3)-β-D-合成酶 小分子抑制剂
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维康芬净及其衍生物的抗真菌活性研究 被引量:3
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作者 陈杰鹏 段丽丽 +4 位作者 陈鸿锐 洪琳 李卫潘 罗建光 孔令义 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期15-17,60,共4页
维康芬净(alterfungin)是一种新型β-1,3-葡聚糖合成酶抑制剂,由一株高产紫杉醇菌种发酵产生,结构上是枝孢菌素(cladosporol)的手性异构体。本研究在于阐明维康芬净及其衍生物的抗真菌活性及其药用价值。采用琼脂块稀释法和液体稀释法,... 维康芬净(alterfungin)是一种新型β-1,3-葡聚糖合成酶抑制剂,由一株高产紫杉醇菌种发酵产生,结构上是枝孢菌素(cladosporol)的手性异构体。本研究在于阐明维康芬净及其衍生物的抗真菌活性及其药用价值。采用琼脂块稀释法和液体稀释法,以氟康唑为对照,经多次重复实验,测得维康芬净及其衍生物的MIC在0.2~128μg/ml之间,其中以维康芬净的抗菌活性较强,且抗菌谱较广。 展开更多
关键词 维康芬净 β-1 3-合成酶抑制剂 抗真菌活性
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抗真菌药物靶标及其抑制剂的研究进展 被引量:2
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作者 徐波 蒋琰 +1 位作者 张万年 盛春泉 《药学实践杂志》 CAS 2013年第5期321-325,379,共6页
目的综述抗真菌药物靶标及其抑制剂的研究进展。方法本文结合自身研究工作,分析近5年文献,总结抗真菌药物靶标及其抑制剂的最新进展。结果β-1,3-葡聚糖合成酶、羊毛甾醇14α-去甲基化酶、N-肉豆蔻酰基转移酶和分泌型天冬氨酸蛋白酶是... 目的综述抗真菌药物靶标及其抑制剂的研究进展。方法本文结合自身研究工作,分析近5年文献,总结抗真菌药物靶标及其抑制剂的最新进展。结果β-1,3-葡聚糖合成酶、羊毛甾醇14α-去甲基化酶、N-肉豆蔻酰基转移酶和分泌型天冬氨酸蛋白酶是目前研究最为集中的抗真菌药靶,其抑制剂显示了良好的新药开发前景。结论优化现有药物化学结构和发现全新作用机制的先导化合物,对研发新一代抗真菌药物具有重要意义。 展开更多
关键词 抗真菌药物靶标 β-1 3-合成酶 羊毛甾醇14α-去甲基化酶 N-肉豆蔻酰基转移酶 分泌型天冬氨酸蛋白酶
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