清眩润目饮对干眼模型鼠眼表炎性因子IFN-γ、IL-17、MMP3、MMP9的影响

目的 对雌性C57BL/6J小鼠进行干眼造模,给予中药清眩润目饮治疗,观察其对眼表炎性因子干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素-17(IL-17)、基质金属蛋白酶3(MMP3)、基质金属蛋白酶9(MMP9)的影响。方法 将健康雌性C57BL/6J小鼠随机分为A组(空白对照组)、B组(模型组)、C组(中药组)、D组(玻璃酸钠组),每组20只。B、C、D组进行干眼造模,C组给予18 mg/(kg·d)的中药灌胃处理,每天2次;D组给予0.1%玻璃酸钠滴眼液,每天2次。实验结束后取小鼠的泪腺、角膜,采用免疫组化法检测IFN-γ、IL-17、MMP3、MMP9水平。结果 在小鼠泪腺组织中,与B组比较,C组IFN-γ及IL-17蛋白表达水平降低(P <0.05),MMP3蛋白表达水平显著降低(P <0.01);与B组比较,D组IFN-γ蛋白表达水平显著降低(P <0.01),MMP9蛋白表达水平降低(P <0.05)。在小鼠角膜组织中,在小鼠角膜组织中,与B组比较,C组MMP3蛋白表达水平降低(P <0.05),MMP9蛋白表达水平显著降低(P <0.01);与B组比较,D组MMP9蛋白表达水平显著降低(P <0.01)。结论 清眩润目饮能够有效下调干眼模型鼠眼表炎性因子IFN-γ、IL-17、MMP3、MMP9水平,减轻干眼眼表损伤。

肺结核患者血清中可溶性T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子3(sTim-3)和IL-4水平升高但IFN-γ水平降低

目的检测肺结核患者血清中可溶性T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子3(sTim-3)、γ干扰素(IFN-γ)和白细胞介素4(IL-4)水平。方法收集48例肺结核患者和20例健康体检者外周血,ELISA检测血清中sTim-3水平;流式细胞微球捕获芯片技术(CBA)检测血清中IFN-γ、IL-4水平。Pearson法分析肺结核患者血清中sTim-3、IFN-γ及IL-4水平的相关性。结果与对照组相比,肺结核患者血清中sTim-3和IL-4水平显著升高,IFN-γ水平显著降低;Pearson分析显示:sTim-3与IFN-γ、IFN-γ与IL-4呈负相关;而sTim-3与IL-4呈正相关。结论肺结核患者血清中sTim-3和IL-4水平升高、但IFN-γ水平降低。

益髓解毒方对MDS-RA骨髓培养体系IL-3、IFN-γ的影响

探讨益髓解毒方对骨髓增生异常综合征难治性贫血 (MDS-RA)造血刺激因子和造血抑制因子的影响。通过Iscove's液体培养体系培养,观察MDS-RA患者骨髓单个核细胞经益髓解毒方不同剂量作用后,培养体系上清液造血刺激因子IL-3和造血抑制因子IFN -γ变化。结果:益髓解毒方大剂量组对IL-3和IFN-γ均有促进作用。提示:益髓解毒方有促进造血刺激因子和造血抑制因子恢复动态平衡的良性趋向作用。

IFN-β基因启动子调控区域的分析及IRF-3报告基因的构建

目的对IRF-3的主要靶基因———小鼠IFN-β基因启动子区域进行分析并构建IRF-3报告基因载体。方法将小鼠IFN-β基因启动子全序列以及不同截短片段克隆到无启动子的pGF3basic/enhancer质粒中,以EGFP为报告基因,转染小鼠Raw264.7巨噬细胞系后观察细胞对LPS刺激的反应。结果IFN-β启动子PRD调控区域上游序列、PRD I区,PRD II区和PRD IV区缺失后,LPS同样能诱导EGFP报告基因的表达。只保留PRD区及IFN-β启动子核心区的载体转染Raw264.7细胞后,可以在LPS刺激下诱导EGFP报告基因的高表达。结论构建了能检测IRF-3活性的报告基因载体,为进一步研究LPS激活IRF-3的信号转导通路奠定了基础。

IFN-α治疗对慢性丙型肝炎患者CD8^+T细胞亚群Tim-3表达水平的影响

为探讨应用IFN-α治疗和未治疗的慢性丙型肝炎患者外周血CD8+T细胞亚群细胞频数及各亚群上Tim-3表达的变化。采用流式细胞术检测IFN-α治疗和未治疗的慢丙肝患者外周血中CD8+T细胞及各亚群频数及膜表面Tim-3表达水平的方法;q T-PCR检测血清中HCV-RNA水平;Spearman相关性分析CD8+T细胞频数、Tim-3表达与HCV-RNA之间的相关性。结果显示,慢丙肝患者外周血CD8+T细胞频数较健康对照组、IFN-α治疗组显著降低(P<0.01)。初始T细胞明显增加(P<0.01)。TCM、TEM细胞分布频率降低(P<0.01)。经IFN-α治疗后,CD8+T细胞百分率上升(P<0.05),初始T细胞数量下降(P<0.01),TCM、TEM细胞频数均升高(P<0.01)。三组人群TEMRA细胞频数无统计学差异。与健康对照组、IFN-α治疗组相比,慢丙肝患者CD8+T细胞及各亚群Tim-3表达水平均有上调(P<0.05)。经抗病毒治疗后,CD8+T细胞、Naive细胞、TEM细胞、TEMRA细胞亚群Tim-3表达明显降低(P<0.05),TCM细胞亚群中Tim-3表达也有降低,但无统计学差异。Spearman相关性分析发现:慢丙肝患者外周血CD8+T细胞百分率与病毒载量呈反比(r=-0.3775,P<0.01),而Tim-3表达水平与病毒载量正相关(r=0.6230,P<0.0001)。由此可知,HCV感染慢性化时可出现CD8+T细胞亚群分布异常及各亚群Tim-3过表达。IFN-α通过调节各CD8+T细胞亚群分化状态,及下调各群细胞表面Tim-3的表达,促进HCV免疫清除。

鸡IFN-γ与鸡柔嫩艾美耳球虫3-1E抗原共表达DNA疫苗的免疫保护性研究

采用SOE-PCR将鸡柔嫩艾美耳球虫3-1E抗原基因与鸡IFN-γ基因用(GGGGS)3接头融合,扩增出IFN-γ/3-1E融合基因,将其克隆到真核表达载体proVAX中构建双价融合表达质粒proIE。通过IFA检测proI、proE、proIE重组质粒在转染细胞PK-15后的蛋白表达情况。将重组质粒于14、21日龄免疫AA肉鸡,28日龄感染5×104个柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊,观察免疫保护效果。结果显示,与proE和proI相比,proIE双价融合DNA疫苗具有增强免疫保护作用,可显著降低粪便中的卵囊排出量(P<0.05),但体重增加并不显著(P>0.05)。

PKC途径和PI3K在人γδT细胞分泌IL-2与IFN-γ中的作用

目的研究信号转导中的蛋白激酶C(PKC)途径与磷酸肌醇3激酶(PI3K)在人外周血γδT细胞分泌Th1型细胞因子IL-2与IFN-γ中的作用。方法人PBMC先用PI3K抑制剂Ly294002、PKC抑制剂Rottlerin或NF-κB抑制剂TPCK分别预处理1h,再加入结核杆菌低分子量多肽抗原(Mtb-Ag)和rhIL-2刺激3 d,最后用低浓度PMA+Ionomycin短时再刺激后检测γδT细胞IL-2和IFN-γ分泌;并同时检测αβT细胞作为对照。结果无抑制剂的对照组γδT和αβT细胞中分泌IL-2的比例分别为44.5%和15.2%,分泌IFN-γ的比例分别为51.1%和10.7%;Ly294002、Rottlerin、TPCK组分泌IL-2的γδT和αβT细胞均显著减少(P<0.05或P<0.01),后二组分泌IFN-γ的γδT和αβT细胞亦显著减少(P<0.05或P<0.01);但Ly294002组分泌IFN-γ的γδT和αβT细胞反而上升至77.2%和22.3%(P<0.01)。结论PKC途径活化促进人γδT细胞分泌IL-2与IFN-γ;PI3K亦促进人γδT细胞分泌IL-2但在其分泌IFN-γ中起负向作用。

醒脑静辅助超早期微创手术对基底节区脑出血患者外周血IFN-γ、TIM-3表达的影响

目的:探讨醒脑静辅助超早期微创手术对基底节区脑出血患者外周血干扰素(IFN-γ)、T细胞免疫球蛋白黏蛋白3(TIM-3)表达的影响。方法:收集2014年8月至2017年5月本院收治的102例基底节区脑出血患者,采用随机数字表法将患者分为观察组与对照组,每组51例。对照组进行常规治疗配合超早期微创手术,观察组则在对照组治疗基础上加用醒脑静注射液辅助治疗。比较两组治疗效果(NIHSS、GCS及FMA评分)、外周血IFN-γ、TIM-3mRNA水平差异。结果:治疗后,两组NIHSS评分、外周血IFN-γ、TIM-3 mRNA水平明显低于治疗前(P<0.05),GCS评分、FMA评分明显高于治疗前(P<0.05);观察组治疗后NIHSS评分、IFN-γ水平、TIM-3mRNA水平明显低于对照组(P<0.05),GCS评分、FMA上肢及下肢评分均明显高于对照组(P<0.05)。结论:醒脑静辅助超早期微创手术具有降低基底节区脑出血患者体内IFN-γ、TIM-3mRNA水平,提高免疫功能,抑制脑部缺血再灌注损伤,恢复神经功能的效果。

突变和修饰IFN-α2b基因的5’和3’端对其在E.coli表达的调控作用

目的对人 IFN- α2 b基因进行突变和修饰 ,从翻译水平上调控 IFN- α2 b基因在大肠杆菌中的表达。方法采用PCR技术 ,人工合成寡核苷酸引物 ,对人 IFN- α2 b基因进行了改造 :在不改变氨基酸的前提下 ,将 5’端编码区的四个 G、C位点突变为 A、T;去除 3’端非编码区。将突变和修饰后的基因片段分别克隆入原核表达载体 p BV32 1,在大肠杆菌中进行表达。对表达产物进行活性效价测定。结果 3’端删除非编码区 ,表达水平比删除前提高 4倍 ;5’端四个位点突变 ,表达水平比突变前降低 2倍。结论 IFN-α2 b基因的 3’端非编码区抑制其在原核系统的表达 。

抑郁症患者血清IFN-γ、IL-10水平与NGF、NT-3的相关研究

目的研究抑郁症患者血清干扰素-γ(IFN-γ)和白介素10(IL-10)与血清神经生长因子(NGF)、神经营养因子3(NT-3)是否相关。方法采用酶联免疫吸附试剂对31例抑郁症患者血清IFN-γ和、IL-10、NGF、NT-3水平进行检测。结果抑郁症血清IFN-γ水平与NGF呈正相关(P<0.05),患者血清IL-10水平与NT-3呈正相关(P<0.05)。结论抑郁症患者血清神经营养因子水平的变化与细胞因子的变化有关。

猪IFN-β和IRF-3基因实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立

为建立猪IFN-β及IRF-3基因实时荧光定量PCR检测方法,依据GenBank中IFN-β和IRF-3基因的保守序列,设计并合成各自特异性引物,并以β-actin为内参基因,采用SYBR Green-Ⅰ为染料,建立实时荧光定量检测方法。提取猪肺泡巨噬细胞总RNA,经反转录得cDNA,用特异性引物经PCR扩增得到IFN-β和IRF-3基因,将其克隆至pMD-19T载体,经测序鉴定后得重组质粒,依次10倍稀释做为标准品,建立标准曲线及溶解曲线。结果表明,β-actin基因、IFN-β基因和IRF-3基因标准曲线线性关系较好,R2≥0.997;溶解曲线为特异性单峰,无非特异性扩增,检测下限可达100个拷贝/μL。建立的猪IFN-β和IRF-3基因实时荧光定量RT-PCR检测方法,特异性强、重复性好,为从分子水平上研究猪的免疫应答奠定了基础。

通络止痛合剂对GA大鼠MMP-3、IFN-γ的影响

目的:观察通络止痛合剂对痛风性关节炎大鼠基质金属蛋白酶-3(MMP-3)、γ-干扰素(IFN-γ)的影响。方法:应用Coderre经典造模方法造模,予通络止痛合剂治疗,并以秋水仙碱、醋氯芬酸为对照,观察大鼠的一般状态、受试关节步态、关节肿胀周径及组织病理学的变化;采用ELISA法,检测各组大鼠受试关节内MMP-3、IFN-γ的含量;同时观察各治疗组对小鼠扭体实验的镇痛作用。结果:各治疗组均能明显改善关节滑膜炎症的病理改变、降低关节内MMP-3及IFN-γ的含量和减轻醋酸引起的小鼠疼痛(P<0.05);但各治疗组之间相比无差异(P>0.05)。结论:通络止痛合剂具有良好的消肿止痛作用、并通过抑制关节内MMP-3及IFN-γ的活性,减轻关节组织的炎症反应,以治疗痛风性关节炎。

IFN-γ和caspase-3在实验性自身免疫性脑脊髓炎病程中动态表达及雷公藤多甙保护作用的探讨

目的观察EAE大鼠模型脊髓caspase-3和IFN-γ的表达,探讨雷公藤多甙对EAE大鼠的保护作用。方法将60只Wistar大鼠随机分成CON组、EAE组、TWP1组、TWP2组,建模后各组又分为第7天、第14天、第21天3个亚组,分别行神经功能评分,大鼠脊髓组织行HE染色,免疫组化检测脊髓中caspase-3和IFN-γ的表达情况。结果 (1)行为学观察:在第14天、第21天TWP1、TWP2组神经功能评分均小于EAE组(P<0.05);第14天TWP2组神经功能评分小于TWP1组(P<0.05)。(2)组织病理学观察:CON组大鼠脊髓无炎性细胞浸润;第14天、第21天,TWP1组和TWP2组血管袖套数目少于同期的EAE组(P<0.05)。(3)caspase-3和IFN-γ表达:TWP1组、TWP2组低于同期EAE组(P<0.05);EAE组中21d组、7d组分别与14d组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 EAE大鼠脊髓caspase-3和IFN-γ阳性表达的细胞数量与病情变化一致,雷公藤多甙干预能减轻EAE大鼠发病,减少大鼠脊髓内caspase-3和IFN-γ的表达。

鸡Ⅰ型IFN及TLR-3和TLR-7实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立

为检测鸡抗病毒相关基因在病毒感染过程中的动态变化规律,研究建立了鸡IFN-a、IFN-β、TLR-3和TLR-7的实时荧光定量RT-PCR的检测方法。根据GenBank提供的鸡IFN-α、IFN-β、FLR-3和TLR-7参考序列设计了相应的特异引物,用常规RT-PCR方法从鸡脾脏总RNA中扩增得到鸡相应基因。将其cDNA分别克隆到pMD19-T载体中进行测序鉴定,采用SYBR Green I染料法,建立标准曲线并分析其溶解曲线。结果表明,这4种基因的检测灵敏度可高达46 copies/μL,且具有良好的特异性和重复性。此检测方法的建立为动态定量检测及研究鸡IFN-α、IFN-β、TLR-3和TLR-7基因的表达变化提供了有效的手段。

IFN-γ和TNF-α联合对MIN6细胞caspase-3活化的影响

目的研究细胞因子IFN-γ和TNF-α对小鼠胰岛瘤细胞株MIN6中caspase-3活化的影响。方法用IFN-γ、TNF-α单独或联合刺激MIN6细胞后,Western blot分析比较caspase-3活化的情况,并用免疫细胞化学法检测了其活化产物cleaved caspase-3的产生;酶学比色法测定细胞因子IFN-γ和TNF-α联合作用活化caspase-3的时间依赖性以及MTT法比较caspase-3特异性的抑制剂AC-DEVD预处理前后MIN6细胞活性的变化。结果 IFN-γ或TNF-α单独作用不能活化caspase-3,但两者联合作用24 h后可检测到caspase-3活化裂解片段的产生;Caspase-3的活性随着IFN-γ和TNF-α处理时间的增加而升高,呈现明显的时间依赖性;抑制caspase-3的活化可有效改善MIN6细胞的活性,并且呈剂量依赖性。结论 IFN-γ和TNF-α对MIN6细胞活性的抑制作用与caspase-3的活化密切相关。

补肾方药对免疫介导再生障碍性贫血小鼠IL-3、IFN-γ的影响

为探讨不同补肾方药治疗再障的作用机理 ,用温肾方、滋肾方灌喂DBA/2大鼠 ,抽取、制备含中药血清 ;Ba1b/C小鼠经6 0 Co 5 .5Gyγ射线照射后由尾静脉输入取自DBA/2小鼠胸腺淋巴结混合细胞悬液形成免疫介导再障模型。在含补肾方药血清的液体培养体系中培养再障小鼠骨髓造血细胞 ,检测培养体系中IL 3、IFN γ的浓度。结果 :液体培养体系中滋肾血清使正常小鼠的IL 3浓度升高 ,而在再障小鼠IL 3浓度则表现降低 ,温肾血清仅使正常小鼠的IL 3浓度升高 ;两组中药血清对IFN γ无影响。结论 :滋肾方对IL 3的生成有影响 ,温肾方、滋肾方对培养体系中IFN γ的生成均无影响。推测补肾方药临床治疗再障的作用是影响IL 3的生成 ,也可能影响造血组织局部IFN γ的生成进而促进造血干 /祖细胞增殖、分化有关。

伤寒患者血清C_3、C_4及IFN-γ的检测

目的 探讨血清C3、C4 及γ干扰素 (IFN γ)在伤寒发病中的变化及其意义。方法 应用免疫透射比浊法、双抗体夹心ELISA法分别检测 30例伤寒患者及 2 0例健康正常人血清中的C3、C4 和IFN γ水平。结果 伤寒患者急性期血清中的C3、C4 及IFN γ水平均明显高于正常对照 (P <0 .0 1)。结论 初步研究表明血清C3、C4 及IFN γ水平在伤寒患者急性期升高 ,是参与伤寒发生、发展的重要免疫调节分子。

TLR4对脑缺血再灌注小鼠海马IRF-3和IFN-β表达的影响

目的探讨Toll样受体4(TLR4)对脑缺血再灌注小鼠海马IRF-3和IFN-β表达的影响。方法采用TLR4抗体封闭阻断TLR4,Western blot检测海马TLR4、IRF-3和IFN-β表达变化。小鼠随机分为3组:假手术组(S组)、缺血再灌注组(I组)、TLR4阻断组(T组),各组又分1天、2天、3天、4天4个时间点组。结果缺血再灌注组TLR4、IRF-3和IFN-β表达水平明显高于假手术组表达水平(P<0.05),而TLR4阻断组表达水平明显少于缺血再灌注组(P<0.05)。结论缺血再灌注可激活TLR4,并引起IRF-3和IFN-β表达量增加,而采用TLR4抗体封闭阻断TLR4后,IRF-3和IFN-β表达量减少。提示TLR4通过上调IRF-3和IFN-β表达参与脑缺血再灌注的反应机制。

蕨麻多糖对小鼠脾淋巴细胞上清液IFN-γ和可溶性LAG-3分子水平的影响

为了观察蕨麻多糖对急性低剂量镉染毒小鼠脾淋巴细胞上清液中IFN-γ和可溶性LAG-3(soluble LAG-3,s LAG-3)分子水平的影响。将试验小鼠一次性腹腔注射氯化镉溶液(1 mg/kg)染毒,观察24h即造模成功后,腹腔注射低、中、高剂量蕨麻多糖治疗一周,于实验终末测各组小鼠脾脏、胸腺指数,ELISA法测IFN-γ、s LAG-3含量;免疫荧光法观察CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞。结果表明蕨麻多糖低、中、高剂量组中,IFN-γ、s LAG-3的含量较空白对照组和单纯镉染阳性对照组均增高,以高浓度组增高明显(P<0.05);CD3+、CD4+T淋巴细胞较空白对照组和单纯镉染阳性对照组均增多,仍以高浓度组增多明显,CD8+T变化不显著。蕨麻多糖能促进急性低剂量镉染毒小鼠脾淋巴细胞分泌IFN-γ和s LAG-3,CD3+、CD4+T淋巴细胞亦相应增加。

JMJD3参与IFN-α和TLR7诱导的B细胞活化及凋亡

目的:探索组蛋白去甲基化酶JMJD3对B细胞活化和凋亡的影响。方法:磁珠分选纯化正常人及SLE患者外周血B细胞,用IFN-α、R848或IFN-α+R848处理纯化的B细胞,流式细胞仪检测CD86+或CD69+的细胞百分率以及CD86+Annexin V+或CD69+Annexin V+的细胞百分率;实时定量PCR和Western blot方法检测JMJD3的表达。结果:获得的B细胞纯度高达95%;IFN-α能够增强TLR7对B细胞的活化和凋亡;IFN-α也增加TLR7信号诱导的B细胞表达JMJD3,且JMJD3高表达依赖于MAPK通路,而不是NF-κB信号通路;SLE患者外周血B细胞高表达JMJD3,且JMJD3抑制剂能够抑制IFN-α+R848诱导的CD19+B细胞活化及凋亡。结论:JMJD3参与IFN-α和TLR7诱导的B细胞活化及凋亡,提示JMJD3抑制剂可能具有缓解SLE症状的作用。