色氨酸-2,3-双加氧酶2在类风湿关节炎患者外周血单个核细胞和滑膜组织中的表达及意义

目的探讨色氨酸-2,3-双加氧酶2(TDO2)在类风湿关节炎(RA)患者外周血单个核细胞(PBMC)和滑膜组织中的表达及临床意义。方法选取40例RA患者作为RA组,另选取同期36例健康人作为正常对照组。流式细胞术检测RA组和正常对照组PBMC中TDO2表达;免疫荧光法检测RA组和正常对照组滑膜组织中TDO2表达;分析RA组PBMC中TDO2表达与其炎症指标之间的相关性。结果与正常对照组相比,RA组PBMC和滑膜组织中TDO2表达均显著升高,差异有统计学意义(P<0.001);RA组PBMC中TDO2表达与红细胞沉降率(ESR)呈正相关(r=0.405,P=0.045)。结论TDO2在RA患者PBMC和滑膜组织中表达增加,并与炎症指标ESR呈正相关,提示TDO2可能参与了RA的疾病进展。

色氨酸-2,3-双加氧酶2上调介导犬尿氨酸代谢在大鼠佐剂性关节炎中的作用研究

目的探究色氨酸-2,3-双加氧酶2(TDO2)表达及其介导的犬尿氨酸(Kyn)代谢在大鼠佐剂性关节炎(AA)不同炎症阶段(包括初期、高峰期、缓解期)变化特点。方法建立大鼠AA模型,各炎症阶段处死AA大鼠,HE染色观察关节滑膜和肝脏病理学变化;免疫组化法检测关节滑膜组织和肝脏组织中TDO2表达;高效液相色谱法检测血清和肝脏中色氨酸(Trp)、Kyn水平。结果与正常组比较,AA大鼠显示出与RA类似的临床表现和病理学特征。高峰期和缓解期大鼠关节滑膜和肝脏组织TDO2表达升高(P<0.05)。各炎症阶段AA大鼠血清Trp水平降低,初期Kyn水平升高(P<0.01);高峰期大鼠肝脏组织中Trp水平降低、Kyn水平升高,Kyn/Trp比值升高(P<0.01)。结论TDO2可能在AA高峰期发挥重要作用,介导Kyn代谢参与RA发生和发展。

PLOD1、NFE2L3、KLKB1蛋白在结直肠癌组织中的表达水平及与其临床病理特征的相关性

目的 探讨前胶原赖氨酸2-氧代戊二酸5-双加氧酶1(PLOD1)、核因子E2相关因子3(NFE2L3)、血浆激肽释放酶B1(KLKB1)蛋白在结直肠癌组织中的表达水平及与其临床病理特征的相关性。方法 回顾性选取2020年1月至2023年12月安康市中心医院收治的120例结直肠癌患者作为研究对象。分别取患者的结直肠癌组织及癌旁组织进行免疫组织化学检测,检测PLOD1、NFE2L3、KLKB1蛋白表达水平。并对比不同TNF分期、组织分化程度、淋巴结转移患者PLOD1、NFE2L3、KLKB1蛋白表达水平,并采用Spearman相关性分析法分析PLOD1、NFE2L3、KLKB1蛋白表达水平与临床病理特征的相关性。结果 结直肠癌组织PLOD1、NFE2L3蛋白阳性率分别为70.00%、60.00%,均高于癌旁组织(22.50%、17.50%),结直肠癌组织KLKB1蛋白阳性率为43.33%,低于癌旁组织(71.67%),差异均有统计学意义(P<0.05)。TNF分期Ⅳ期患者PLOD1与NFE2L3蛋白阳性率分别为100.00%与95.24%,均明显高于Ⅲ期(83.33%与73.33%)、Ⅱ期(59.09%与45.45%)、Ⅰ期(48.00%与32.00%),Ⅳ期患者KLKB1蛋白阳性率为14.29%,明显低于Ⅲ期(36.67%)、Ⅱ期(34.09%)、Ⅰ期(92.00%),差异均有统计学意义(P<0.05)。低分化患者PLOD1与NFE2L3蛋白阳性率分别为100.00%与90.00%,明显高于中分化(81.13%与50.94%)、高分化(44.68%与23.40%),低分化患者KLKB1蛋白阳性率为20.00%,明显低于中分化(30.19%)、高分化(68.09%),差异均有统计学意义(P<0.05)。Spearman相关分析显示:PLOD1、NFE2L3与TNF分期、淋巴结转移、肿瘤分化程度具有相关性,KLKB1与TNF分期、淋巴结转移、肿瘤分化程度具有相关性(P<0.05)。结论 结直肠癌患者肿瘤组织中PLOD1、NFE2L3蛋白呈现低表达状态,KLKB1蛋白呈现高表达状态,且PLOD1、NFE2L3、KLKB1蛋白表达水平与结直肠癌的TNF分期、组织分化程度及淋巴结转移情况密切相关。

急性髓细胞白血病细胞的吲哚胺2,3-双加氧酶介导免疫逃逸的实验研究

为了探讨急性髓细胞白血病细胞的吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)参与肿瘤免疫逃逸的机制,从23例急性髓性白血病患者获取骨髓细胞,采用免疫组织化学染色法和RT-PCR法检测白血病细胞IDO的表达;在有或无1-甲基色氨酸(1-MT)存在下,以白血病细胞为刺激细胞,外周T淋巴细胞为反应细胞建立单向混合淋巴细胞反应体系(MLR),利用MTT法检测T淋巴细胞增殖率,并以反相高效液相色谱法检测相应MLR体系上清液中的IDO活性。结果显示,在23例急性髓细胞白血病患者中17例患者的骨髓白血病细胞上有IDO的表达;白血病细胞上的IDO活性抑制MLR体系中T淋巴细胞的增殖。结论:白血病细胞表达的IDO活性能阻抑外周T淋巴细胞的增殖,它可能参与了肿瘤免疫逃逸。

吲哚胺2,3双-加氧酶介导肝癌细胞免疫逃逸的实验研究

目的:为了探讨吲哚胺2,3双-加氧酶(IDO)参与肝癌免疫逃逸的机制。方法:混合培养HepG2细胞和T淋巴细胞,在有或无1甲-基色氨酸(1-MT)存在下,用RT-PCR检测细胞中IDOmRNA的表达,流式细胞仪分析混合反应体系中HepG2细胞的凋亡率,MTT检测T淋巴细胞抗HepG2细胞的细胞毒活性。结果:混合反应体系中,HepG2细胞表达IDOmRNA的水平随着1-MT浓度的增高而降低;对照组及实验组(1-MT浓度分别为1.25mmol/L,2.5mmol/L,5mmol/L)中HepG2细胞的早期凋亡率分别为(3.48±0.34)%,(7.82±0.41)%,(18.62±0.42)%,(25.32±0.40)%(P<0.01),T淋巴细胞抗HepG2细胞的细胞毒活性分别为(17.36±1.24)%、(25.48±1.48)%、(32.89±1.73)%、(42.04±2.16)%(P<0.01)。结论:HepG2细胞表达的IDO能抑制外周T淋巴细胞发挥抗肿瘤免疫作用,它可能参与了肝癌的免疫逃逸。

吲哚胺2,3-双加氧酶与白血病的关系研究

吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)是一种含铁血红素单体蛋白,其表达和活化可以被干扰素γ强烈诱导。通过催化色氨酸降解,使表达IDO的肿瘤细胞周围形成低色氨酸环境,由于色氨酸是体内必需氨基酸,缺乏色氨酸时蛋白质合成下降,外周T淋巴细胞的增殖受到抑制。目前大量研究表明IDO在白血病细胞中较高表达,抑制T细胞的增生和T细胞介导的免疫反应,使T细胞活化信号转导受阻,诱导白血病细胞发生免疫逃逸。

外源性吲哚胺2,3-双加氧酶与肝癌的免疫耐受

目的:探讨吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)参与肝癌免疫逃逸的机制。方法:混合培养HepG2细胞和T淋巴细胞,在有或无外源性IDO存在下,用RT-PCR检测细胞中IDOmRNA的表达,流式细胞仪分析混合反应体系中HepG2细胞的凋亡率,MTT检测T淋巴细胞抗HepG2细胞的细胞毒活性。结果:混合反应体系中,HepG2细胞表达IDOmRNA的水平随着IDO浓度的增高而无明显变化;在对照组及实验组(IDO浓度分别为0.05,0.5,5 mmol/L)中,HepG2细胞的凋亡率分别为(3.48±0.34)%,(3.32±0.35)%,(3.46±0.40)%,(2.75±0.26)%,T淋巴细胞的细胞毒活性分别为(17.36±1.24)%,(17.30±0.52)%,(17.48±1.08)%,(15.74±0.79)%。结论:外源性IDO能抑制外周T淋巴细胞发挥抗肝癌免疫作用,它可能参与了肿瘤免疫耐受。

抑制吲哚胺2,3-双加氧酶活性促进慢性粒细胞白血病源树突状细胞的功能

目的:研究吲哚胺2,3-双加氧酶(indoleamine2,3-dioxygenase,IDO)在慢性粒细胞性白血病源性树突状细胞(dendritic cells derived from chronic myeloid leukemia,CML-DCs)中的表达,及抑制IDO活性对CML-DCs免疫刺激功能的影响。方法:RT-PCR检测17例患者CML-DCs的IDO mRNA的表达情况,流式细胞仪检测CML-DCs免疫表型。在有或无IDO抑制剂1-甲基色氨酸(1-methyltroptophan,1-MT)作用下,分别以不成熟CML-DCs(imDCs)和成熟CML-DCs(mDCs)为刺激细胞,完全缓解期(complete remission,CR)CML患者外周T淋巴细胞为反应细胞建立混合淋巴细胞反应体系,ELISA法检测CML-DCs上清液IL-12水平,MTT法检测CML-DCs刺激自体T淋巴细胞的增殖能力。结果:随着CML-DCs的诱导分化和成熟,IDO mRNA表达逐渐上调;经TNF-α诱导的DCs免疫表型除CD1a外,CD80、CD86、CD83、HLA-DR的表达均明显上调(P<0.05),且上述分子的表达不受1-MT的影响。用1-MT抑制IDO活性后的imDCs和mDCs,其IL-12水平均明显增加(P<0.05,P<0.01),且激发自体T淋巴细胞增殖的能力也明显增强(P<0.05,P<0.01)。结论:抑制IDO活性可提高CML-DCs的IL-12分泌水平,增强其对自体T细胞增殖的刺激能力,IDO对DCs的负性调节为白血病生物治疗提供了新的思路。

吲哚胺2,3-双加氧酶与自身免疫性疾病

吲哚胺2,3-双加氧酶（indoleamine 2,3-dioxygenase．IDO）是肝脏外唯一可催化色氨酸沿犬尿氨酸分解的关键酶和限速酶，通过降解色氨酸，使局部组织中的色氨酸耗竭，色氨酸的代谢产物犬尿氨酸的浓度增加，从而抑制T淋巴细胞的增殖。自身免疫性疾病是指机体对自身抗原发生免疫反应而导致自身组织损害所引起的疾病。

槲皮素通过影响吲哚胺-2,3-双加氧酶活性抑制HeLa细胞增殖的研究

目的研究槲皮素抑制人宫颈癌HeLa细胞增殖的机制。方法采用CCK-8法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞周期的变化;运用紫外可见分光光度计测定OD_(480)值,反映色氨酸代谢及犬尿氨酸的生成情况;qPCR法检测IDO1的mRNA表达;表达、纯化IDO1蛋白并进行体外酶活性反应,用高效液相色谱法检测色氨酸和犬尿氨酸的含量变化。结果槲皮素抑制HeLa细胞的增殖,引起G0/G1细胞周期阻滞;槲皮素抑制色氨酸的代谢;槲皮素能够明显抑制IDO1的体外酶催化活性,但不影响IDO1的表达;外源性添加色氨酸的代谢产物犬尿氨酸可以逆转槲皮素引起的细胞增殖抑制。结论槲皮素可能通过抑制IDO1的酶催化活性,影响细胞色氨酸的代谢,这可能是槲皮素发挥其抗宫颈癌HeLa细胞增殖作用的机制之一。

鼠源吲哚胺2,3-双加氧酶活性检测方法的建立

目的建立鼠源吲哚胺2,3-双加氧酶(mouse indoleamine 2,3-dioxygenase,mIDO)活性检测方法。方法利用基因工程方法表达纯化重组mIDO(recombinant mIDO,rmIDO),建立酶水平mIDO活性检测体系;构建过表达mIDO的小鼠Lewis肺癌(Lewis lung cancer,LLC)细胞株,建立细胞水平mIDO活性检测体系。比较L-1-甲基色氨酸(L-1-methyl tryptophan,L-1-MT)在酶及细胞水平上对mIDO及人源IDO(human IDO,hIDO)的抑制作用,测定抑制类型、抑制常数Ki值及半数抑制浓度(IC50)值。结果 L-1-MT对mIDO和hIDO均有抑制作用,抑制类型及抑制常数Ki值相似,但IC50值在酶水平及细胞水平上均有差异。结论 mIDO酶活性检测体系是筛选IDO抑制剂的有效工具,与hIDO酶活性检测体系联用,能反映种属差异,可更好地利用小鼠模型来替代人类进行IDO抑制剂治疗疾病的研究。

柴胡疏肝散精简方对抑郁大鼠行为学及中缝核内色氨酸代谢的影响

目的观察柴胡疏肝散精简方对抑郁大鼠行为学的影响,探讨柴胡疏肝散精简方可能存在的抗抑郁机制。方法采用腹腔注射利血平建立大鼠抑郁模型,以盐酸氟西汀为阳性对照药,将32只SD雄性大鼠随机分为空白组、模型组、氟西汀组、精简方组,每组8只,各药物组灌胃相应药物,连续14 d。观察大鼠一般情况行为学,检测大鼠中缝核内5-羟色胺(5-HT)、色氨酸羟化酶2(TPH2)、吲哚胺2,3双加氧酶(IDO)的含量。结果与空白组比较,模型组体质量增加、糖水偏好指数、旷场实验运动总距离明显减少(P<0.01);中缝核内TPH2、5-HT含量明显减少(P<0.01),IDO含量明显增加(P<0.01)。与模型组比较,精简方组体质量增加、旷场实验运动总距离明显增加(P<0.01);糖水偏好指数增加(P<0.05);中缝核内TPH2、5-HT含量明显增加(P<0.01),IDO含量明显减少(P<0.01)。结论柴胡疏肝散精简方可能通过增加中缝核内TPH2含量(促进色氨酸-5羟色胺途径),降低IDO的含量(抑制色氨酸-犬尿氨酸途径),进而使中缝核内5-HT含量增加,发挥抗抑郁作用。

吲哚胺2,3双加氧酶对肝癌细胞的作用

目的:用IDO以及色氨酸经IDO催化后分解生成的代谢产物(L-犬尿素、邻氨基苯甲酸、喹啉酸)作用于肝癌细胞,观察肝癌细胞的生长及凋亡的情况。方法:将IDO作用于肝癌细胞,用MTT法测定细胞的活力,并用IDO的抑制剂1-MT进行干预。观察各个代谢产物对肝癌细胞生长的影响,用流式细胞仪检测细胞周期、细胞凋亡率以及细胞坏死率的变化。结果:不同浓度的IDO作用于HepG2细胞具有明显的时间和剂量依赖性,IDO浓度在0.5 mmol/L和5 mmol/L时可以促进HepG2细胞的生长(P<0.05),加入1-MT后IDO的这一作用受到抑制。只有喹啉酸能发挥提高细胞坏死率和凋亡率,抑制肝癌细胞的作用。结论:IDO表现为促进肝癌细胞生长的作用,1-MT可以抑制这一作用。L-犬尿素、邻氨基苯甲酸能够促进HepG2细胞的生长。喹啉酸对HepG2细胞有抑制生长作用。

吲哚胺2,3双加氧酶对免疫的调节作用

1 IDO的生物学特性1963年,Shimizu等分离出IDO,发现其在哺乳动物体内分布广泛,在各种肝外组织中都有IDO的存在,尤以胎盘和肺中表达最多。IDO与肝内的L-色氨酸2,3-双加氧酶（TDO）催化的反应相同。IDO以超氧阴离子（02-）作为辅助因子,酶解吡咯环,生成N-甲酰犬尿氨酸和犬尿氨酸。其底物主要包括D-色氨酸、5-羟色氨、5-羟-L-色氨酸和L-色氨酸,动力学研究表明其最适底物是L-色氨酸。

原发性高血压患者血浆色氨酸、犬尿氨酸和犬尿喹啉酸浓度的变化

目的通过测定血浆色氨酸(TRP)、犬尿氨酸(KYN)和犬尿喹啉酸(KYNA)浓度,探讨外周吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)和犬尿氨酸氨基转移酶(KAT)活性与原发性高血压(EH)的关系。方法采用高效液相色谱法(HPLC)测定100例EH患者和80名健康体检者(对照组)血浆TRP、KYN和KYNA浓度,计算产物/底物的百分比来评价酶活性,即IDO活性=KYN/TRP×100%,KAT活性=KYNA/KYN×100%。结果 EH组血浆TRP浓度为(59.85±9.89)μmol/L,明显高于对照组[(48.19±7.72)μmol/L,P<0.001];KYN浓度为(2.01±0.48)μmol/L,明显低于对照组[(2.17±0.43)μmol/L,P<0.05]。EH组和对照组血浆KYNA浓度分别为(24.10±9.12)、(23.59±7.27)μmol/L,二者差异无统计学意义(P>0.05)。EH组IDO活性为3.40%±0.85%,明显低于对照组(4.54%±0.81%,P<0.001);而KAT活性为1.20%±0.36%,明显高于对照组(1.09%±0.27%,P<0.05)。EH组血浆TRP浓度与年龄呈负相关(r=-0.316,P=0.001),而对照组二者之间无明显相关性(r=-0.208,P=0.064)。EH组和对照组血浆IDO活性均与年龄呈正相关(EH组:r=0.264,P=0.008;对照组:r=0.305,P=0.006)。2组血浆KYN、KYNA浓度及KAT活性与年龄均无明显相关性。结论EH组血浆TRP浓度明显增高而KYN浓度明显降低,提示外周TRP-KYN代谢途径的IDO活性可能与EH有关。

色氨酸2，3-双加氧酶在色氨酸分解代谢及免疫调节中的作用

色氨酸2，3-双加氧酶（TDO）是催化色氨酸由犬尿氨酸（Kyn）途径分解代谢的限速酶。TDO主要在肝内降解色氨酸，调整体内色氨酸水平，能够抑制T细胞增殖，参与抗菌及炎性反应。代谢产物Kyn为芳烃受体（AhR）的内源性配体，TDO-Kyn-AhR通路具有调节肿瘤生长作用。随着对TDO介导色氨酸代谢免疫机制研究的不断积累，其在肿瘤治疗及移植免受耐受领域的应用前景令人期待。本文就TDO介导的色氨酸分解代谢及免疫调节作用进行综述。

吲哚胺-2，3-双加氧酶介导的色氨酸代谢在器官移植中的作用

色氨酸是细胞生长代谢的必需氨基酸，吲哚胺-2，3-双加氧酶是催化色氨酸沿犬尿酸途径分解代谢的限速酶。吲哚胺-2，3-双加氧酶主要通过降解局部微环境中色氨酸，造成色氨酸缺乏，抑制T细胞增生与活化。吲哚胺-2，3-双加氧酶介导的色氨酸代谢中间产物犬尿素、3-羟基犬尿氨酸、3-羟基邻氨基苯甲酸能抑制同种异体T细胞增生。吲哚胺-2，3-双加氧酶树突状细胞与Treg细胞协同作用可能促进免疫耐受的形成。虽然吲哚胺-2，3-双加氧酶介导的色氨酸代谢在移植免疫调节过程中的作用还不甚清楚，但大量的研究表明其诱导移植免疫耐受的应用前景广阔。

PGE2抑制TDO2表达和活性调控巨噬细胞功能变化的机制

目的探究色氨酸-2,3-双加氧酶(TDO2)在胶原诱导型关节炎(CIA)小鼠中的表达以及前列腺素E2(PGE2)抑制TDO2表达和活性调控巨噬细胞功能的机制。方法Ⅱ型胶原诱导DBA/1J小鼠制备CIA模型。X射线检测CIA小鼠踝关节损伤变化;免疫组化检测小鼠踝关节、脾脏中TDO2表达;qPCR和免疫荧光检测小鼠腹腔巨噬细胞中TDO2表达变化。通过在RAW264.7细胞中分别小干扰TDO2、给予TDO2抑制剂680C91、给予不同浓度PGE2(0.1、1、10μmol/L)刺激和给予前列腺素受体4(EP4)激动剂CAY10598后,qPCR和Western blot检测TDO2表达;流式细胞术检测巨噬细胞吞噬和极化功能;比色法检测TDO2活性。结果与正常组小鼠比较,CIA小鼠踝关节软组织肿胀变大,关节滑膜、脾脏及腹腔巨噬细胞中TDO2表达增加。在RAW264.7细胞中分别小干扰TDO2、给予TDO2抑制剂680C91、给予PGE2刺激、给予EP4受体激动剂CAY10598后TDO2表达明显被抑制,巨噬细胞吞噬功能下降,M1/M2比值下降(P<0.05);比色法结果显示RAW264.7细胞中分别给予PGE2刺激以及EP4激动剂CAY10598后TDO2的活性被抑制(P<0.05)。结论巨噬细胞TDO2表达升高可能促进了CIA小鼠关节滑膜损伤,PGE2通过激活EP4受体抑制TDO2表达和活性从而调节巨噬细胞功能。

PLOD1在口腔鳞状细胞癌组织和细胞中的表达及其意义

目的:探讨前胶原赖氨酸,2-酮戊二酸5-双加氧酶1(PLOD1)在口腔鳞状细胞癌(OSCC)组织和细胞中的表达及其对OSCC细胞生物学行为的影响,阐明PLOD1作为OSCC预后标志物的潜力。方法:采用肿瘤免疫评价资源(TIMER)数据库、基因表达谱交互分析(GEPIA)数据库和Kaplan-Meier Plotter数据库分析头颈部鳞状细胞癌(HNSC)组织中PLOD1 mRMA表达水平及其与HNSC患者生存期的关联。免疫组织化学法检测110例OSCC组织和64例癌旁组织中PLOD1蛋白表达情况,分析其与OSCC患者临床病理特征和预后的关系。采用受试者工作特征(ROC)曲线下面积(AUC)评估PLOD1在OSCC诊断中的价值。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法和Western blotting法检测人正常口腔上皮HOK细胞和OSCC SCC15和CAL27细胞中PLOD1 mRNA和蛋白表达水平。利用脂质体法将小干扰RNA(siRNA)片段转染至SCC15细胞,分为si-NC组(转染阴性对照si-NC)和si-PLOD1组(转染si-PLOD1),采用CCK-8法、细胞划痕愈合实验和Transwell小室实验分别检测2组细胞增殖活性、划痕愈合率和侵袭细胞数。结果:公共数据库分析,HNSC组织中PLOD1 mRNA表达水平高于癌旁组织(P<0.05);与PLOD1低表达组比较,PLOD1高表达组HNSC患者生存期较短(HR=1.41,P=0.018)。PLOD1蛋白主要表达于OSCC细胞的细胞质中,OSCC组织中PLOD1表达强度高于癌旁组织(P<0.01),并与OSCC患者T分期和TNM分期有关(P=0.021,P=0.004)。PLOD1诊断OSCC的AUC为0.811,特异度和灵敏度分别63.64%和90.63%。Kaplan-Meier生存分析,与PLOD1低表达组比较,PLOD1高表达组OSCC患者生存率降低(P<0.01);COX回归分析,PLOD1高表达是影响OSCC预后的独立危险因素(P=0.012)。OSCC细胞中PLOD1 mRNA和蛋白表达水平高于HOK细胞(P<0.05)。与si-NC组比较,si-PLOD1组细胞增殖活性和划痕愈合率降低(P<0.05),侵袭细胞数减少(P<0.01)。结论:PLOD1在OSCC组织和细胞中高表达,沉默PLOD1表达可抑制OSCC细胞增殖、迁移和侵袭。PLOD1可能是OSCC新的治疗靶点和预后标志物。

逍遥散对胃癌荷瘤共病抑郁小鼠程序性死亡受体1抑制剂治疗的增敏作用及机制探讨

目的 观察逍遥散对胃癌荷瘤共病抑郁小鼠程序性死亡受体1(programmed cell death protein 1,PD-1)抑制剂治疗的增敏作用,并探讨其作用机制。方法 采用皮下移植胃癌细胞系——MCF细胞构建荷瘤小鼠共60只,随机分为荷瘤对照组、荷瘤共病抑郁组、PD-1抑制剂组、逍遥散联合PD-1抑制剂组,每组15只。荷瘤对照组不做任何干预,共饲养56天;荷瘤共病抑郁组是在荷瘤对照组的基础上每天以慢性不可预知温和应激干预,每天行适量生理盐水灌胃,分别在第1天、15天、29天、43天小鼠尾静脉注射适量生理盐水;PD-1抑制剂组是在荷瘤共病抑郁组的基础上,将小鼠尾静脉注射生理盐水改为PD-1抑制剂;逍遥散联合PD-1抑制剂组是在PD-1抑制剂组的基础上,将生理盐水灌胃改为逍遥散水提物灌胃。分组后第57天,荷瘤对照组、荷瘤共病抑郁组进行糖水偏好测试、陌生环境摄食实验,分析两组小鼠的行为学变化。计算荷瘤共病抑郁组、PD-1抑制剂组、逍遥散联合PD-1抑制剂组小鼠的生存率并绘制生存曲线;获取小鼠瘤体,并测量瘤体体积及重量,计算抑瘤率;采用ELISA法检测小鼠肿瘤组织吲哚胺-2,3-双加氧酶(indoleamine-2,3-dioxygenase, IDO)、犬尿氨酸(kynurenine, Kyn)、芳香烃受体(aryl hydrocarbon receptor, AhR)的数值;对肿瘤组织通过免疫组化法检测小鼠肿瘤组织叉头样转录因子3(forkhead box P3,Foxp3)表达情况。结果 (1)行为学改变:与荷瘤对照组比较,荷瘤共病抑郁组的糖水偏好率显著降低(P<0.01),摄食潜伏时间显著延长(P<0.01)。(2)生存率差异:荷瘤共病抑郁组小鼠生存率为20%,PD-1抑制剂组小鼠生存率为26.7%,逍遥散联合PD-1抑制剂组小鼠生存率为40%。(3)肿瘤增值差异:逍遥散联合PD-1抑制剂组瘤体体积小于PD-1抑制剂组(P<0.05),PD-1抑制剂组小于荷瘤共病抑郁组(P<0.05);逍遥散联合PD-1抑制剂组瘤体重量显著小于PD-1抑制剂组(P<0.01),PD-1抑制剂组显著小于荷瘤共病抑郁组(P<0.01);逍遥散联合PD-1抑制剂组的抑瘤率为35.4%优于PD-1抑制剂组的22.1%。(4)相关蛋白表达差异:逍遥散联合PD-1抑制剂组肿瘤组织中IDO的表达显著低于PD-1抑制剂组及荷瘤共病抑郁组(P<0.01);逍遥散联合PD-1抑制剂组肿瘤组织中Kyn的表达显著低于PD-1抑制剂组(P<0.01),PD-1抑制剂组小于荷瘤共病抑郁组(P<0.05);逍遥散联合PD-1抑制剂组肿瘤组织中AhR的表达显著低于PD-1抑制剂组及荷瘤共病抑郁组(P<0.01);(5)各组小鼠肿瘤组织Foxp3表达情况:与荷瘤共病抑郁组比较,PD-1抑制剂组、逍遥散联合PD-1抑制剂组肿瘤组织中Foxp3蛋白表达均显著降低(P<0.01);与PD-1抑制剂组比较,逍遥散联合PD-1抑制剂组肿瘤组织中Foxp3蛋白表达显著降低(P<0.01)。结论 逍遥散对PD-1抑制剂的增敏作用可能与通过下调IDO、Kyn、AhR水平,进而有效降低调节性T淋巴细胞的增值与分化而实现的。