硫化氢/3-巯基丙酮酸转硫酶在癫痫患者颞叶中的表达

目的探讨硫化氢(H_2S)/3-巯基丙酮酸转硫酶(3-MST)在癫痫患者颞叶中的表达。方法难治性癫痫患者(实验组)外侧颞叶标本15例,高颅压患者(对照组)内减压切除的正常外侧颞叶脑组织标本15例。检测外侧颞叶脑组织中H_2S含量,采用免疫荧光及Western blotting技术检测3-MST表达,观察H_2S/3-MST在癫痫患者外侧颞叶及高颅压患者正常外侧颞叶脑组织中的表达变化。结果实验组外侧颞叶脑组织细胞中H_2S/3-MST表达显著高于对照组,差异均具有统计学意义(均P<0.05)。结论在癫痫的病理生理过程中,H_2S/3-MST的高表达可能与其在癫痫中神经保护作用相关。

3-巯基丙酮酸转硫酶在非酒精性脂肪性肝病中对脂肪变性的影响研究

目的探讨3-巯基丙酮酸转硫酶(MPST)在非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)中对脂肪变性的影响。方法取20只C57BL/6小鼠,高脂饮食喂养,建立NAFLD模型,分为观察组和对照组(每组10只)。另以10只小鼠予以正常饮食用来参照NAFLD模型的成功建立。观察组小鼠注射重组腺病毒载体shRNA(AD-shRNA)对肝脏MPST进行干预,对照组小鼠注射重组腺病毒载体(AD-GFP)。小鼠处死后取肝组织进行HE染色,观察肝脏脂肪变性情况,并测定肝组织MPST、固醇调节元件结合蛋白-1(SREBP-1)、脂肪酸合成酶(FAS)、胱硫醚γ裂解酶(CSE)表达与肝脏中游离脂肪酸(FFA)、三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、硫化氢(H2S)的含量。结果观察组小鼠肝脏MPST的mRNA表达水平与对照组相比显著下调,FFA、TG、TC含量与对照组相比也显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。对照组小鼠肝脏内弥漫性肝细胞脂肪变性,且出现肝细胞炎性表现;观察组小鼠肝细胞脂肪变性的弥漫性减轻,炎性肝细胞减少。观察组小鼠肝脏SREBP-1、FAS的mRNA表达水平与对照组相比显著下调,CSE的mRNA表达水平及肝组织H2S含量较对照组显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 H2S在MPST对脂肪肝的调节过程中起主要介导作用,且与SREBP-1相关通路抑制有关。

宫内香烟烟雾暴露对新生大鼠延髓3-巯基丙酮酸转硫酶表达的影响

目的探讨3-巯基丙酮酸转硫酶(3-mercaptopyruvate sulfurtransferase,3MST)在正常新生大鼠延髓的表达及宫内香烟烟雾暴露对其表达的影响。方法 SD孕鼠随机分为正常对照组和香烟烟雾暴露组(n=8),与孕鼠相对应的新生(1d)大鼠为本研究的实验对象。采用RT-PCR和Western blot法,分别观察正常新生大鼠延髓组织中3MST mRNA和蛋白的表达情况及宫内香烟烟雾暴露对其表达的影响;采用免疫组织化学法观察正常新生大鼠延髓呼吸相关核团神经元3MST的表达和分布情况及宫内香烟烟雾暴露对其表达的影响。结果正常对照组新生大鼠延髓组织中有3MST mRNA和蛋白的表达;香烟烟雾暴露组新生大鼠延髓组织中3MST mRNA和蛋白的表达水平显著增加(P<0.05)。3MST在正常对照组新生大鼠前包钦格复合体(pre-BtC)、舌下神经核(12N)、疑核(Amb)、面神经核(FN)和孤束核(NTS)神经元中有弱表达。与对照组比较,香烟烟雾暴露组新生大鼠pre-BtC、12N、Amb和FN神经元中3MST免疫阳性产物平均光密度值增加(P<0.05);NTS神经元中3MST免疫阳性产物平均光密度值无明显变化(P>0.05)。结论 3MST存在于正常新生大鼠延髓呼吸相关核团神经元;宫内香烟烟雾暴露可上调延髓3MST的表达,提示3MST-硫化氢(H2S)途径可能参与宫内香烟烟雾暴露致新生大鼠延髓呼吸中枢损伤保护过程。

3-MST mRNA在大鼠延髓的表达以及急性缺氧对其基因表达的影响

目的探讨3-巯基丙酮酸硫转移酶(3-mercaptopyruvate sulfurtransferase,3-MST)mRNA在正常、急性缺氧及急性缺氧加外源性H2S条件下的表达情况。方法 21只SD大鼠随机等分为正常对照组、急性缺氧组和急性缺氧+NaHS(H2S供体)组。建立大鼠急性缺氧模型,采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术,观察各组大鼠延髓3-MST mRNA的表达水平。结果正常大鼠延髓有3-MST mRNA表达;给予急性缺氧刺激后,大鼠延髓3-MST mRNA表达量明显增加(P<0.05);急性缺氧+NaHS组3-MST mRNA表达量比急性缺氧组明显减少(P<0.05)。结论 3-MST mRNA存在于正常成年大鼠延髓组织中,急性缺氧可上调其表达,外源性H2S可抑制由缺氧所引起的3-MST mRNA表达的增加,提示3-MST-H2S途径可能参与急性缺氧大鼠延髓呼吸中枢缺氧损伤保护作用及节律性呼吸的中枢性调节。

亚砷酸钠对SH-SY5Y细胞生长和3MST表达的影响

神经母细胞瘤是儿童最常见的恶性肿瘤之一。因其恶性程度高，手术加化疗的方案对于侵润性的神经母细胞瘤效果不佳。砷，俗名砒霜，很早被用来治疗急性粒性白血病。现在发现砷对神经母细胞瘤、胶质瘤，以及来源于肝脏、前列腺、肾脏、子宫颈和胆囊等固体肿瘤也有效［1］。然而，其作用机制尚未完全明了。有报道，肿瘤细胞H2 S合成酶表达上调［2］。那么，砷是否可通过下调H2 S合成酶的表达发挥抗癌作用？本实验采用SH－SY5Y细胞和亚砷酸钠（ NaAsO2）对此问题进行了探讨。

丁苯酞序贯疗法联合双联抗血小板治疗对急性脑梗死患者血清HMGB1、MMP-9、3-MST、Fibulin-5的影响

目的分析急性脑梗死患者采用丁苯酞序贯疗法联合双联抗血小板进行治疗,对患者血清高迁移率族蛋白1(HMGB1)、金属基质蛋白酶-9(MMP-9)、3-巯基丙酮酸转硫酶(3-MST)、Fibulin-5的影响。方法120例急性脑梗死患者,随机分为常规组和观察组,每组60例。常规组采用常规治疗联合双联抗血小板治疗,观察组在常规组治疗基础上采用丁苯酞序贯疗法治疗。比较两组患者的血清HMGB1、MMP-9、3-MST、Fibulin-5水平及治疗满意度。结果治疗3、7、28 d后,观察组血清HMGB1、MMP-9、Fibulin-5水平均明显低于常规组,血清3-MST水平高于常规组,差异具有统计学意义(P<0.05)。观察组治疗总满意率为95.00%,明显高于常规组的80.00%,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论对急性脑梗死患者采用丁苯酞序贯疗法联合双联抗血小板治疗,能够有效降低血清HMGB1、MMP-9、Fibulin-5水平,提高血清3-MST水平,使患者治疗满意度增加,值得临床应用推广。

丁苯酞序贯疗法联合双联抗血小板对急性脑梗死患者血清HMGB1、MMP-9、3-MST、Fibulin-5的影响

目的观察丁苯酞序贯疗法联合双联抗血小板对急性脑梗死(ACI)患者血清高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、巯基丙酮酸硫基转移酶-3(3-MST)和扣针蛋白-5(Fibulin-5)的影响。方法选取2014年4月至2018年4月本院收治的ACI患者104例,随机分为观察组和对照组各52例。对照组给予常规治疗和双联抗血小板治疗,观察组在对照组基础上加用丁苯酞序贯疗法。比较两组临床预后,治疗前后评价美国国立卫生研究院卒中量表(NIHHS)、FuglMeyer量表(FMA)、改良Barthel指数(MBI)和简易精神状态量表(MMSE)评分,并测定外周血HMGB1、MMP-9、3-MST、Fibulin-5水平。结果治疗28d、3个月后,观察组的NIHSS评分、FMA评分、MBI和MMSE评分均优于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);治疗第3d、7d、28d,观察组血清HMGB1、MMP-9、Fibulin-5低于对照组,3-MST高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);观察组预后良好率为88.46%,高于对照组的71.15%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论丁苯酞序贯疗法联合双联抗血小板治疗ACI能够保护患者的神经功能,促进神经功能、运动功能及认知功能的恢复,并提高日常生活活动能力,其机制可能与降低血清HMGB1、MMP-9、Fibulin-5和上调3-MST有关。

亚砷酸钠对SH-SY5Y细胞周期的影响及MPST过表达的干预

目的探讨亚砷酸钠(NaAsO_2)对神经细胞周期的影响及MPST过表达在其中的作用。方法以空白组(正常SH-SY5Y细胞,BC)、空载对照组(NC)、过表达组(过表达MPST,OP)细胞分别经NaAsO_2处理后,采用CCK-8法、结晶紫染色法、流式细胞术和Western blot法,分别检测细胞活力、细胞贴壁力、细胞周期及p53、CDC25A、CyclinA、CDK2等蛋白表达水平。结果经NaAsO_2处理48 h后,NC组细胞存活率、细胞贴壁率明显降低,而过表达MPST细胞上述变化明显得到改善(P<0.01)。同时,NaAsO_2明显上调BC、NC组细胞S期比例和p53蛋白表达,而下调CDC25A、CyclinA及CDK2蛋白(P<0.01);然而,过表达MPST则明显拮抗上述效应(P<0.05,P<0.01)。结论 NaAsO_2通过诱导SH-SY5Y细胞S期阻滞,抑制细胞生长,而过表达MPST可拮抗NaAsO_2诱导的毒性效应。

砷及MPST过表达对SH-SY5Y细胞GRP78/CHOP通路的影响

目的探讨内质网应激是否参与亚砷酸钠(NaAsO2)神经毒性损伤,明确3-巯基丙酮酸硫转移酶(3-mercaptopyruvate sulfurtransferase,MPST)过表达是否调节砷诱导的内质网应激。方法通过构建MPST基因慢病毒表达载体来获得稳定表达外源MPST基因的SH-SY5Y细胞株作为SH-MPST过表达组,另设空载体转染细胞为SH-PEB组,染砷组(NaAsO2组),内质网应激阻断剂TUDCA组,TUDCA预处理染砷组。Western blot法分别检测过表达MPST、染砷及TUDCA预处理后细胞内GRP78和CHOP蛋白表达的变化。结果单纯MPST过表达不影响SH-SY5Y细胞内GRP78、CHOP蛋白的表达水平;经NaAsO2处理后,SH-PEB细胞内GRP78、CHOP蛋白明显上调(P<0.01),而被内质网应激阻断剂TUDCA所拮抗;MPST过表达则抑制砷对GRP78、CHOP蛋白的上调(P<0.01);然而,TUDCA预处理则明显逆转MPST过表达对GRP78、CHOP蛋白的影响(P<0.01)。结论GRP78/CHOP内质网应激通路参与了砷诱导的神经毒性损伤;MPST过表达可降低砷诱导的内质网应激水平。

应激性高血压大鼠延髓CBS和MPST/H_(2)S途径的变化

目的观察应激性高血压(SIH)大鼠延髓胱硫醚-β-合酶(CBS)和3-巯基丙酮酸转硫酶(3-MPST)/硫化氢(H_(2)S)合成途径的变化。方法18只雄性WKY大鼠按照随机数字表法分为对照组(n=6)和SIH组(n=12)。对照组大鼠不做任何处理,SIH组大鼠采用电击足底结合噪音刺激制作SIH模型。四道生理记录仪测定两组大鼠血压和心率,亚甲蓝法测量两组延髓H 2S生成,蛋白质免疫印迹法检测对照组和SIH组大鼠延髓CBS和3-MPST蛋白的变化。结果对照组大鼠的收缩压和心率分别是(119.21±6.49)mmHg和(326.40±13.54)次/min,SIH组大鼠的收缩压和心率分别为(147.16±9.76)mmHg、(402.51±19.28)次/min。与对照组比较,SIH组大鼠的收缩压和心率分别增加了23.45%和23.35%,差异均有统计学意义(P<0.05)。对照组和SIH组大鼠延髓H 2S生成率分别是(1492.76±121.67)pmol·min^(-1)·mg^(-1)、(247.96±107.17)pmol·min^(-1)·mg^(-1),与对照组比较,SIH组大鼠延髓H 2S生成率显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。对照组大鼠延髓中CBS和MPST蛋白表达水平分别为2.98±0.43、0.77±0.14。应激刺激后,SIH组大鼠延髓CBS和MPST蛋白表达水平分别为2.20±0.18、0.56±0.16。与对照组比较,SIH组大鼠延髓CBS蛋白表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.05),MPST蛋白表达比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论SIH时H 2S生成减少,其机制可能是延髓H 2S生成酶CBS和3-MPST蛋白表达水平降低。

长期有氧运动增加自发性高血压大鼠肾脏内源性硫化氢的生成

背景:众所周知,长期有氧运动可以改善自发性高血压大鼠的肾脏功能,然而其中的机制尚未被完全阐明。目的:观察长期有氧运动对自发性高血压大鼠肾脏内源性硫化氢生成的影响。方法:构建长期有氧运动大鼠模型。实验随机分为4组,即WKY大鼠静止组、WKY大鼠运动组、自发性高血压大鼠静止组及自发性高血压大鼠运动组。运动为中等强度跑台运动,持续12周。造模完成后24 h称质量,尾动脉检测血压,收集血液和尿液检测肾脏功能相关的生化指标,取肾脏观察肾小球硬化程度,检测肾脏组织的硫化氢生成活性,RT-PCR法检测硫化氢生成相关酶的mRNA表达水平;同时考察肾脏组织的氧化应激情况。结果与结论:(1)经过长期的有氧运动之后,自发性高血压大鼠的体质量、收缩压、舒张压明显降低;肾小球滤过率和肾血流量增加,血肌酐和尿素氮水平降低,尿白蛋白水平降低,肾小球硬化评分明显降低;血浆中硫化氢含量和肾脏组织中硫化氢生成速率明显增加;胱硫醚γ分解酶表达明显上调;血清中和肾脏中丙二醛含量明显降低;还原型谷胱甘肽和氧化型谷胱甘肽比值明显增加;(2)结果提示,长期有氧运动可增加自发性高血压大鼠肾脏内源性硫化氢的生成,从而减轻肾脏组织的氧化应激,最终有助于维持自发性高血压大鼠的肾脏功能。

硫化氢在结直肠肿瘤中的作用及机制

硫化氢（H2S）作为新发现的第3种气体信号分子，在胃肠道系统等多种病理生理过程中发挥着重要作用。最近研究发现H2S可能通过Sirtuin type1（SIRT1）途径或Ras／mitogen activated protein kinase（Ras／MAPK）信号通路等机制影响结直肠肿瘤细胞的增殖、转移和分化；也可通过抑制细胞自噬和细胞凋亡等途径促进结直肠肿瘤的发生；还可能通过激活ERK、p38-MAPK的磷酸化抑制肿瘤细胞（WiDr）的增殖。本文对胃肠道组织中H2S的生成与代谢及其在结直肠肿瘤中的作用及机制研究作一综述。

缺氧和无血清培养对骨髓间充质干细胞内源性硫化氢生成的影响

背景:大鼠骨髓间充干细胞移植后的低存活率多与缺血微环境相关,而硫化氢可以对抗多种细胞与组织的凋亡和损伤模型。目的:检测大鼠骨髓间充质干细胞在不同缺氧和无血清培养时间后的细胞凋亡、细胞活力、硫化氢含量及其合成酶体系的变化情况。方法:取第3代大鼠骨髓间充质干细胞,设立5个(0,3,6,12和24 h)不同的缺氧和无血清培养时间点。用SubG1法检测细胞的凋亡率,用CCK-8法检测细胞的活力,并检测细胞培养基中硫化氢的含量以及细胞中硫化氢合成酶体系的表达变化情况。结果与结论:与正常培养组相比,缺氧和无血清培养不同时间后,细胞的凋亡率显著增高,细胞活力明显下降。缺氧和无血清时间越长,细胞凋亡越多,活力越低,并且细胞培养基中硫化氢含量和细胞中硫化氢合成酶体系的表达也越低,差异有显著性意义。表明缺氧和无血清培养可以抑制大鼠骨髓间充质干细胞中硫化氢及其合成酶体系的生成和表达。

硫化氢对大鼠局灶性脑缺血损伤的影响

目的 观察硫化氢（H2）对局灶性脑缺血损伤大鼠脑组织硫化氢/3-巯基丙酮酸转硫酶（H2/3MST）及脑缺血体积的影响。方法 健康成年雄性SD大鼠共80只,体重250-280 g,随机分为5组,每组16只,分别为假手术组;缺血模型组;NaHS低剂量组;NaHS中剂量组;NaHS高剂量组。NaHS低、中、高剂量组分别于大鼠脑缺血3 h时腹腔注射0.7、1.4和2.8 mg/kg的NaHS。5组大鼠均于缺血24 h断头取脑,TTC染色测定脑梗死灶体积,测定脑组织中H2S含量,改良法测定脑组织3-巯基丙酮酸转硫酶（3MST）的活性。结果 与缺血模型组比较,NaHS中、高剂量组大鼠脑梗死体积明显缩小,脑组织中H2含量和3MST活性明显升高（P〈0.05）。结论 NaHS中、高剂量可明显缩小脑缺血体积,增强脑组织3MST活性,升高脑组织H2含量,表明NaHS对大鼠局灶性脑缺血损伤具有治疗作用。

大鼠视神经挫伤致视网膜硫化氢合成酶表达变化

目的探讨大鼠视神经挫伤后视网膜硫化氢合成酶胱硫醚γ-裂解酶(cystathionineγ-lyase,CSE)、胱硫醚β-合成酶(cystathionine β-synthase,CBS)和3-巯基丙酮酸硫基转移酶(3-mercaptopyruvate sulfur-transferase,3-MST)的表达变化。方法建立大鼠视神经挫伤模型。将大鼠分为正常对照组、视神经挫伤组和假手术组。观察大鼠视网膜的组织病理学变化,检测视网膜神经节细胞数量和视网膜内侧部分厚度。用实时荧光定量PCR技术检测CBS、CSE和3-MST的mRNA表达变化。结果正常对照组大鼠视网膜组织结构正常,假手术组仅有轻微变化。与假手术组比较,视神经挫伤后各组大鼠视网膜出现明显损伤,视网膜神经节细胞数量呈时间依赖性减少且视网膜内侧部分厚度呈进行性变薄。正常对照组大鼠视网膜存在CSE、CBS和3-MST mRNA的基础表达。与正常对照组比较,假手术组CSE、CBS和3-MST的mRNA表达无明显变化。与假手术组比较,CBS mRNA表达在视神经挫伤后3 d、7 d和14 d呈时间依赖性上调;CSEmRNA表达在伤后7 d达到峰值,14 d时有所下降;3-MST mRNA表达在视神经挫伤后3 d和7 d有上调的趋势,14 d时有明显上调。结论大鼠视神经挫伤后视网膜硫化氢合成酶CBS、CSE和3-MST表达上调,这可能引起视网膜局部内源性硫化氢生成增多并产生代偿性保护效应。

嗜酸热古菌Metallosphaera cuprina中MST的初步分析与鉴定

3-巯基丙酮酸硫转移酶(MSTs)为细胞内重要的参与脱毒与抗氧化的硫转移酶,在生物体内广泛分布。Metallosphaera cuprina为嗜酸嗜热硫代谢古菌,前期研究发现其基因组中具有MSTs同源蛋白的编码基因,本研究对该基因的序列进行了分析,对其所编码的蛋白结构进行了同源建模,并进行了基因克隆和蛋白表达,以期对该蛋白的基本特点进行初步鉴定。

外源性硫化氢诱导大鼠神经胶质瘤血管形成机制的研究

目的研究外源性硫化氢(H2S)对大鼠胶质瘤血管形成的诱导机制。方法成年SD大鼠40只,随机分为4组,对照组、硫氢化钠(Na HS)组、肿瘤组、肿瘤+Na HS组,每组10只。肿瘤组、肿瘤+Na HS组,大鼠纹状体内注射C6胶质瘤细胞,建立胶质瘤模型;对照组、Na HS组,大鼠大脑不做任何处理。4组大鼠正常饲养3周后,对其进行断头取脑,用敏感硫电极法检测各组大鼠脑组织及瘤内H2S的含量;Real time PCR法检测胱硫醚-β-合成酶(CBS)、3-巯基丙酮酸硫转移酶(3-MST)的mRNA转录水平;ELISA及蛋白免疫印迹法检测缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达;同时计数瘤内微血管密度(CD105-MVD)。结果肿瘤组、肿瘤+Na HS组,均可见明显的肿瘤组织,与对照组相比,瘤内毛细血管数明显增多;肿瘤+Na HS组,瘤体内有更多的HIF-α、VEGF、MMP-9的表达,且MVD明显高于对照组、Na HS组、肿瘤组(均P<0.01)。结论外源性H2S能诱导并促进大鼠恶性胶质瘤内的血管生成,其发生机制可能与H2S促进CBS、3-MST、HIF-α、VEGF及MMP-9的表达密切相关。

内源性硫化氢及其合成酶在膀胱癌恶性进展中的表达

目的探讨内源性硫化氢(H2S)及其合成酶胱硫醚-β-合成酶(CBS)、胱硫醚-γ-裂解酶(CSE)和3-巯基丙酮酸硫转移酶(MPST)在正常膀胱组织以及膀胱癌中的表达。方法选取因膀胱癌而行膀胱肿瘤电切术或膀胱癌根治术的肿瘤组织标本76例,同时收集15例正常膀胱组织作对照组。通过免疫组化和Western blot研究CBS、CSE和MPST在正常膀胱组织以及不同病理分期/分级膀胱癌组织中的表达情况;通过敏感硫电极法检测H2S在正常膀胱组织和膀胱癌中的含量。分别比较H2S及其合成酶在各组之间的差异,初步探讨H2S及其合成酶与膀胱癌恶性进展之间的关系。结果免疫组化结果显示CBS(79.1%)、CSE(81.3%)和MPST(84.6%)在膀胱癌黏膜和肌层组织中均有表达。CBS(P=0.021和P<0.001)和MPST(P=0.015和P=0.045)的表达在膀胱癌不同分期和分级之间有统计学差异。在所有检测的标本中,肌层浸润性膀胱癌中的H2S含量最高[(52.6±2.91)nmol·mg-1·min-1],各组之间有统计学差异。结论内源性H2S及其合成酶CBS、CSE和MPST在膀胱癌组织中的表达明显高于正常膀胱组织,且其表达在膀胱癌不同分期和分级之间有统计学差异。