3-溴丙酮酸-胆固醇酯增强乳腺癌细胞对他莫昔芬敏感性研究

目的:探讨3-溴丙酮酸-胆固醇酯(3-bromopyruvate cholesterol ester,3-BP-Cl)增强乳腺癌对他莫昔芬(tamoxifen,TAM)敏感性作用及机制。方法:MTT法检测药物对乳腺癌细胞活力的影响,并使用金氏公式检验3-溴丙酮酸-胆固醇酯与他莫昔芬是否具有协同抗乳腺癌作用。Calcein AM/PI染色法检测药物对细胞的毒性作用,集落克隆形成法检测药物对乳腺癌细胞的增殖抑制作用。流式细胞术检测药物诱导乳腺癌细胞的凋亡作用。Western blot检测药物对细胞己糖激酶2、Bcl-2、Bax蛋白表达的影响。结果:MTT结果显示3-溴丙酮酸-胆固醇酯具有抑制乳腺癌作用,与他莫昔芬联用能显著抑制MCF-7细胞生长活性(P<0.05)。金氏公式测算结果显示3-溴丙酮酸-胆固醇酯与他莫昔芬具有协同抑制乳腺癌细胞增殖作用(q>1.15)。Calcein AM/PI染色结果显示两药联用组细胞死亡数量最多。集落克隆形成实验结果显示两药联用组MCF-7细胞的集落数量最少。Annexin V凋亡结果显示与单药组相比,联用组细胞凋亡数量显著升高(P<0.01)。Western blot结果显示3-溴丙酮酸-胆固醇酯具有抑制MCF-7细胞内己糖激酶2、Bcl-2表达,增强Bax表达的作用。结论:3-溴丙酮酸-胆固醇酯可增加乳腺癌细胞对他莫昔芬的敏感性,协同发挥抑制乳腺癌细胞的作用。机制与其下调细胞内己糖激酶2、Bcl-2的表达,增强Bax的表达有关。

3-溴丙酮酸增强肝癌细胞对顺铂敏感性的作用

目的探讨3-溴丙酮酸（3-BP）增强肝癌细胞对顺铂敏感性的作用及其可能机制。方法MTT法检测3-BP、顺铂对HepG2、SMMC7721细胞的增殖抑制作用。选择低于半数抑制浓度（IC50）的100μmol／L的3-BP和8μmol／L的顺铂单独或联合处理细胞，PI单染流式细胞术检测细胞凋亡，caspase3活性检测试剂盒测定caspase-3的活性变化，ATP检测试剂盒测定细胞内ATP水平，Western blot检测XIAP、PARP蛋白的表达。结果3-BP在50-400μmol／L浓度范围内对HepG2、SMMC7721细胞具有明显的增殖抑制作用（P〈0．01），作用48h的IC50分别为238．9±13．9μmol／L、278．7±11．7μmol／L；顺铂在2～32μmol／L浓度范围内对HepG2、SMMC7721细胞具有明显的增殖抑制作用（P〈0．01），作用48h的IC50分别为16．4±0．9μmol／L、20．9±1．8μmol／L。100μmol／L3-BP与8μmol／L顺铂联合作用于HepG2、SMMC7721细胞48h的增殖抑制率分别为（60．6±2．2）％、（56．8±2.3）％，明显高于对照组和单独用药组（P〈0．01）。100μmol／L3-BP与8μmol／L顺铂联合作用于HepG2、SMMC7721细胞48h的凋亡率分别为（51．1±4．3）％、（46．5±3．9）％，较单用3-BP、顺铂的凋亡率明显提高（P〈0．01）。结论3-BP能增强肝癌细胞HepG2、SMMC7721对顺铂诱导的凋亡的敏感性，其机制可能是通过引起细胞内ATP缺乏、下调XIAP蛋白的表达以及增加caspase-3的活性。

3-溴丙酮酸与人血清白蛋白相互作用的光谱学研究

运用荧光光谱、紫外可见吸收光谱和圆二色光谱法研究了抗肿瘤药物3-溴丙酮酸(3-Brom opyruvic acid,3-BrPA)与人血清白蛋白(Human serum albumin,HSA)的相互作用。3-BrPA对HSA的猝灭机制属于静态猝灭,并发生分子间非辐射能量转移。热力学数据显示,二者之间的作用力主要为静电作用;同步荧光光谱表明,3-BrPA与蛋白质中接近色氨酸残基的区域发生了相互作用;荧光光谱研究发现,Zn2+存在时3-BrPA对HSA的猝灭程度进一步增强;圆二色光谱法研究蛋白二级结构结果显示,3-BrPA对HSA的结构影响非常小。

3-溴丙酮酸诱导人乳腺癌SK-BR-3细胞凋亡及对细胞线粒体膜电位的影响

目的探讨糖酵解抑制剂3-溴丙酮酸(3-BrPA)诱导乳腺癌细胞SK-BR-3凋亡的作用及其可能相关机制。方法 MTT法检测3-BrPA对乳腺癌细胞SK-BR-3增殖的抑制作用;碘化丙啶(PI)单染流式细胞术检测细胞凋亡;ATP检测试剂盒检测细胞内ATP水平;DHE荧光探针标记法检测细胞内超氧阴离子水平;线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1)检测细胞线粒体膜电位。结果MTT结果显示,3-BrPA可抑制SK-BR-3细胞的增殖活性,且呈浓度和时间依赖性。80、160、320μmol·L-1的3-BrPA诱导SKBR-3细胞24 h的凋亡率分别为6.7%、22.3%、79.6%。80、160、320μmol·L-13-BrPA作用于SK-BR-3细胞5 h后,细胞内ATP水平与对照组相比分别为87.7%、60.6%、23.7%。160μmol·L-1的3-BrPA增加SK-BR-3细胞中活性氧的生成,同时使细胞线粒体膜电位降低。结论 3-BrPA可以抑制乳腺癌细胞SK-BR-3的增殖活性,引起线粒体膜电位降低,并且诱导其凋亡,机制可能与抑制肿瘤细胞的糖酵解从而减少ATP的产生并升高细胞内活性氧的水平有关。

肝动脉灌注3-溴丙酮酸阻断大鼠肝癌能量代谢的实验研究

目的体外检测3-溴丙酮酸对Walker256细胞的抗肿瘤活性,体内研究经肝动脉灌注3-溴丙酮酸对大鼠肝癌的治疗作用。方法①体外研究采用二苯基四氮唑溴盐噻唑蓝比色法检测不同浓度(1、5、10、25、50μmol/L)3-溴丙酮酸对Walker256细胞的抗肿瘤活性,琼脂糖凝胶电泳检测肿瘤细胞凋亡。②取30只雄性Wistar大鼠建立肝癌模型,并于肿瘤种植后11 d行胃十二指肠动脉逆行插管动脉灌注治疗,随机分为动脉灌注3-溴丙酮酸组(A组)、生理盐水组(B组)和丝裂霉素联合碘油栓塞组(C组)。介入术前1 d和术后第3天进行磁共振成像(MRI)检测肿瘤体积,之后处死大鼠,病理检查肿瘤坏死情况。结果体外研究显示,1、5、10、25、50μmol/L 3-溴丙酮酸对Walker256细胞抑制率分别为(10.9±0.9)%、(18.5±1.7)%、(24.2±1.3)%、(40.4±3.0)%、(55.1±2.4)%,50μmol/L 3-溴丙酮酸能诱导Walker256细胞凋亡。3-溴丙酮酸治疗后第3天,A、B、C组肿瘤平均体积分别为(482.98±103.88)mm3、(432.44±437.39)mm3、(569.79±268.89)mm3,组间差异无统计学意义(P>0.05)。A组中7只Ⅲ级坏死,2只Ⅳ级坏死和1只Ⅰ级坏死,B组6只均为Ⅰ级坏死,C组5只Ⅲ级坏死和1只Ⅱ级坏死,A组肿瘤平均坏死率明显高于B组,差异有统计学意义(P=0.001),A组与C组间差异无统计学意义(P=0.927)。结论肿瘤能量阻断剂3-溴丙酮酸有较强的体内、外抗肿瘤作用。

3-溴丙酮酸对肠癌HCT116细胞的增殖抑制作用及其机制

目的:研究3-溴丙酮酸(3-BP)对肠癌细胞HCT116增殖的抑制作用并初步探讨其抑制作用的机制,为3-BP的临床应用提供依据。方法:将体外培养的HCT116细胞分为对照组和不同浓度3-BP组(3-BP的终浓度分别为25、50、75和100mg.L-1)。采用Western blotting法检测己糖激酶Ⅱ(HKⅡ)蛋白表达水平;采用6-磷酸葡萄糖(G-6-P)检测试剂盒检测培养液中G-6-P的浓度;采用MTT比色法测定细胞增殖活性;采用流式细胞术检测细胞周期。结果:与对照组比较,25mg.L-1 3-BP组HKⅡ蛋白表达水平无明显变化(P>0.05),与对照组和25mg.L-1 3-BP组比较,50、75和100 mg.L-1 3-BP组HKⅡ蛋白表达水平均显著下调(P<0.01)。与对照组比较,25 mg.L-1 3-BP组培养液中G-6-P浓度无明显变化(P>0.05);与对照组和25mg.L-1 3-BP组比较,50、75和100mg.L-1 3-BP组培养液中G-6-P的浓度均显著下降(P<0.01)。MTT法,与对照组比较,25mg.L-1 3-BP组细胞存活率无明显变化(P>0.05);与对照组和25mg.L-1 3-BP组比较,50、75和100mg.L-1 3-BP组细胞存活率明显降低(P<0.05)。流式细胞术,与对照组比较,25mg.L-13-BP组G1和S期细胞所占比例无明显变化(P>0.05);与对照组和25 mg.L-1 3-BP组比较,50、75和100mg.L-1 3-BP组S期细胞所占比例逐渐减少(P<0.05),G1期细胞则明显增加(P<0.01),细胞滞留在G1期。结论:3-BP可显著抑制HCT116细胞增殖,其机制可能与3-BP抑制HKⅡ活性、减少细胞对葡萄糖的利用有关。

3-溴丙酮酸对SMMC-7721肝癌细胞增殖的抑制作用

目的观察3-溴丙酮酸(3-BrPA)对SMMC-7721肝癌细胞增殖的抑制作用。方法对经0.25mmol/L～8.00mmol/L3-BrPA溶液处理的SMMC-7721细胞,采用MTT法检测细胞增殖抑制情况,并在荧光显微镜和电镜下观察细胞内部结构的变化。结果3-BrPA对SMMC-7721细胞的增殖有明显的抑制作用,其中在0.75mmol/L浓度下的抑制作用最强;经处理后的细胞,在荧光染色下显示坏死细胞增多,在电镜下显示细胞染色质分散,少量核染色质凝聚。结论3-BrPA对SMMC-7721肝癌细胞有抑制作用。

动脉灌注3-溴丙酮酸对兔移植性直肠肿瘤的作用

目的观察动脉灌注3-溴丙酮酸(3-Br PA)对兔移植性直肠肿瘤的作用效果。方法将60只移植有直肠肿瘤的新西兰大白兔随机分为低、中、高剂量治疗组及生理盐水对照组,每组各15只。对低、中、高剂量组实验兔分别经导管于肠系膜后动脉灌注0.5 mmol/L、1.0 mmol/L、2.0 mmol/L浓度的3-Br PA各10 ml;对照组灌注等量生理盐水。4 d后活体解剖取出直肠肿瘤,镜下观察肿瘤细胞坏死程度并计算坏死率,评估各浓度3-Br PA对肿瘤的作用效果。结果 60只实验兔完成直肠肿瘤移植、动脉灌注实验,镜下实验兔肿瘤细胞均有不同程度损坏。低剂量组Ⅰ级坏死3只,Ⅱ级坏死11只,Ⅲ级坏死1只,治疗有效率为6.7%;中剂量组Ⅱ级坏死2只,Ⅲ级坏死10只,Ⅳ级坏死3只,治疗有效率为86.6%;高剂量组Ⅲ级坏死2只,Ⅳ级坏死13只,治疗有效率为100%;对照组Ⅰ级坏死15只。中、高剂量组Ⅲ、Ⅳ级肿瘤坏死率、治疗有效率、4级肿瘤坏死水平比较差异有统计学意义(P<0.05),3-Br PA治疗作用明显,而正常肠组织无损伤。结论动脉灌注3-Br PA治疗兔移植性直肠肿瘤有一定疗效,高浓度剂量组肿瘤坏死率和治疗有效率最高,疗效显著。

3-溴丙酮酸对人结肠癌SWⅢ-C细胞增值和凋亡的影响

目的研究3-溴丙酮酸对SWⅢ-C细胞增殖和凋亡的影响。方法利用透射电镜、MTT法、流式细胞术、免疫组化等方法检测3-溴丙酮酸作用于SWⅢ-C细胞后,其细胞形态、超微结构的改变;细胞增殖、细胞周期分布和细胞凋亡率的变化以及Bcl-2、c-myc和mtp53蛋白表达的变化。结果 3-溴丙酮酸可抑制SWⅢ-C细胞的增殖,浓度为25μg·mL-1时抑制作用最明显;3-溴丙酮酸可有效诱导SWⅢ-C细胞凋亡,浓度为25μg·mL-1效果最明显;3-溴丙酮酸可下调SWⅢ-C细胞Bcl-2、c-myc和mtp53蛋白的表达。结论 3-溴丙酮酸可抑制SWⅢ-C细胞增殖并诱导其凋亡,其机制可能与下调Bcl-2、c-myc和mtp53的表达有关。

3-溴丙酮酸对肺腺癌A549细胞迁移、侵袭能力及转移相关蛋白表达水平的影响

目的 观察3-溴丙酮酸(3-BrPA)对肺腺癌A549细胞迁移、侵袭能力及转移相关蛋白波形蛋白(Vimentin)、基质金属蛋白-9(MMP-9)表达能力的影响。方法 划痕实验和Transwell实验检测A549细胞的迁移、侵袭能力;己糖激酶-2(HK2)活性试剂盒检测A549细胞内的HK2活性;ELISA检测试剂盒检测不同浓度3-BrPA对A549细胞培养上清液中和细胞内MMP-9、Vimentin表达水平的影响。结果 划痕实验和Transwell结果显示,3-BrPA干预组的A549细胞迁移距离、迁移细胞数和侵袭细胞数均显著低于阴性对照组(P<0.05);HK2活性结果显示,3-BrPA干预组A549细胞内HK2活性明显低于阴性对照组(P<0.05);ELISA实验结果显示,3-BrPA干预组MMP-9、Vimentin表达水平明显低于阴性对照组(P<0.05)。结论 3-BrPA能显著抑制人肺腺癌A549细胞的迁移和侵袭能力,能显著抑制肿瘤转移相关蛋白MMP-9和Vimentin的表达水平。

3-溴丙酮酸联合阿霉素对乳腺癌细胞增殖及凋亡的影响

目的:研究3-溴丙酮酸(3-BrPA)联合阿霉素(ADM)对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖及凋亡的影响。方法:采用3-BrPA 80、160、320μmol/L作用于MDA-MB-231乳腺癌细胞18 h后,测定其对细胞内ATP的影响;分别用3-BrPA 10、20、40、80、160μmol/L和ADM 0.75、1.5、3、6、12μmol/L,以及3-BrPA 80μmol/L与ADM 0.75、1.5、3、6、12μmol/L合用作用于MDA-MB-231乳腺癌细胞24、48和72 h后,MTT法检测乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖情况;3-BrPA 80μmol/L组、ADM0.75μmol/L组以及3-BrPA 80μmol/L与ADM 0.75μmol/L合用组作用于乳腺癌细胞MDA-Mb-231 24 h后,利用碘化丙啶染色,流式细胞仪检测其诱导乳腺癌细胞凋亡的影响;采用3-BrPA 16μmol/L、ADM 0.2μmol/L以及3-BrPA 16μmol/L与ADM0.2μmol/L合用作用于乳腺癌细胞MDA-MB-231,5 d后观察对集落克隆形成的影响。结果:3-BrPA对乳腺癌细胞MDA-MB-231 ATP的生成有抑制作用;3-BrPA联合ADM后可明显增强ADM的细胞毒性作用;3-BrPA 80μmol/L与ADM 0.75μmol/L合用组诱导乳腺癌细胞MDA-MB-231 24 h凋亡率为39.6%,均显著高于对照组、3-BrPA单用组和ADM单用组(P<0.01);3-BrPA增强ADM对乳腺癌细胞MDA-MB-231集落克隆形成的抑制作用。结论:3-BrPA可以增强ADM对乳腺癌细胞MDAMB-231增殖的抑制作用以及增强ADM诱导乳腺癌细胞凋亡的作用。

3-溴丙酮酸调控JAK/STAT信号通路抗人卵巢癌细胞株A2780增殖的实验研究

目的探讨3-溴丙酮酸对人卵巢癌细胞株A2780增殖的抑制作用,并观察其对Janus激酶/信号转导子及转录激活子(JAK/STAT)信号通路的调控作用。方法取人卵巢癌细胞株A2780,培养至对数期,常规分装(1.5×106个/孔)至6孔板中,设置低、中、高剂量组和对照组,每组各包含5个复孔。继续培养待细胞贴壁生长后,3剂量组分别加入25、50、100μmol/L浓度的3-溴丙酮酸,对照组加入等量磷酸盐缓冲液(PBS),培养72h。对比各组培养期间细胞形态学变化,培养24h、48h和72h增殖抑制率变化,培养72h后各组细胞周期分布结果,培养72h后各组JAK2mRNA、STAT3mRNA表达,培养72h后各组JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3蛋白表达。结果在透射电镜下检查发现对照组各时刻均表现出细胞形态结构规则、染色质均匀分布、细胞膜完整的形态,低中高剂量组细胞形态学均出现明显的异常,其中高剂量组形态学异常最为显著,中剂量组形态学明显异常,低剂量组稍有异常,且均呈时间依赖性;各组培养24h、48h、72h增殖抑制率对比差异均有统计学意义(P<0.05),且均呈时间依赖性和剂量依赖性,本组内每2个时刻、各时刻每2组间增殖抑制率对比差异均有统计学意义(P<0.05);各组培养72h后G0/G1期、G2/M期结果对比差异均有统计学意义(P<0.05),其中对照组G0/G1期最高,低剂量组次之,中剂量组更低,高剂量组最低,高剂量组G2/M期最高,中剂量组次之,低剂量组更低,对照组更低;各组培养72h后JAK2mRNA、STAT3mRNA表达对比差异均无统计学意义(P>0.05),且每2组间对比差异均无统计学意义(P>0.05);各组培养72h后p-JAK2、p-STAT3蛋白表达、p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3对比差异均有统计学意义(P<0.05),其中对照组均最高,低剂量组均次之,中剂量组均更低,高剂量组均最低。结论3-溴丙酮酸能够抑制人卵巢癌细胞株A2780增殖,阻滞于G2/M期,推测与调控JAK/STAT信号通路,下调p-JAK2、p-STAT3蛋白表达有关。

3-溴丙酮酸对耐顺铂鼻咽癌细胞增殖及凋亡的影响

目的:探讨糖酵解抑制剂3-溴丙酮酸(3-BP)对耐顺铂鼻咽癌细胞HNE1/DDP增殖和凋亡的影响。方法:MTT比色法和集落克隆形成实验检测3-BP对HNE1/DDP细胞的增殖抑制作用,PI染色法检测3-BP对HNE1/DDP细胞凋亡的影响,Western blotting检测凋亡相关蛋白多聚腺苷酸二磷酸核糖转移酶(PARP)、髓样细胞白血病-1(Mcl-1)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)的表达。结果:3-BP可显著抑制HNE1/DDP细胞的增殖,其48 h的IC50值为260.2μmol/L。低浓度(10、20、40μmol/L)的3-BP能明显抑制HNE1/DDP细胞集落克隆的形成。3-BP可诱导HNE1/DDP细胞发生明显的细胞凋亡(P<0.01),80、160、320μmol/L 3-BP作用48 h的细胞凋亡率分别为(13.7±2.1)%、(25.5±2.4)%、(45.5±3.5)%,对照组的细胞凋亡率为(1.6±0.6)%。Western blotting结果显示,3-BP处理HNE1/DDP细胞后可促进PARP的剪切,能下调抗凋亡蛋白Mcl-1和Bcl-2的表达。结论:3-BP对HNE1/DDP细胞具有增殖抑制及凋亡诱导作用,其机制可能与下调抗凋亡蛋白Mcl-1和Bcl-2的表达相关。

3-溴丙酮酸联合多西他赛对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和凋亡的影响

目的:观察3-溴丙酮酸(3-Bromopyruvic acid,3-Br PA)联合多西他赛(docetaxel,DTX)对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和凋亡的影响,并探讨相关分子机制。方法:MTT实验检测不同药物处理后乳腺癌MDA-MB-231细胞株存活情况;流式细胞术PI单染法检测用药后细胞凋亡情况;ATP试剂盒检测3-Br PA对细胞内ATP水平的影响;线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1)检测3-Br PA对细胞线粒体膜电位的影响;Western blot检测用药后HexokinaseⅡ、Bax、Bcl-2和Mcl-1蛋白的表达情况。结果:3-Br PA、DTX均可抑制MDA-MB-231细胞的生长,呈现浓度依赖性,低浓度3-Br PA明显增强DTX对MDA-MB-231细胞的抑制作用;3-Br PA作用于MDA-MB-231细胞5 h后,随药物浓度递增细胞内ATP水平递减;3-Br PA作用于MDA-MB-231细胞24 h后,HKⅡ表达减少,且使细胞线粒体膜电位发生降低;40μmol/L 3-Br PA联合2μmol/L DTX处理24 h后,MDA-MB-231细胞凋亡率为63.5%,较单独用药组的凋亡率明显提高(P<0.01)。3-Br PA与DTX联合作用于MDA-MB-231细胞后,凋亡相关蛋白Bcl-2和Mcl-1的表达减弱,Bax的表达增强。结论:3-Br PA可增强DTX对乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖抑制作用以及凋亡诱导作用,其机制可能与下调Mcl-1和Bcl-2表达、上调Bax表达有关。

3-溴丙酮酸对肝癌Bel7402细胞凋亡及相关蛋白表达的影响

目的:观察糖酵解抑制剂3-溴丙酮酸对肝癌Bel7402细胞凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法:采用MTT法检测3-溴丙酮酸对Bel7402细胞的增殖抑制效应,PI单染流式细胞术检测不同浓度3-溴丙酮酸(0、50、100、200μmol/L)对Bel7402细胞凋亡的影响,ATP检测试剂盒分析细胞内ATP水平,Western blot检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达。结果:3-溴丙酮酸可浓度和时间依赖性地抑制Bel7402细胞的增殖(P<0.01),作用24、48、72 h的IC50值分别为422.9、143.9、85.0μmol/L。3-溴丙酮酸可诱导Bel7402细胞发生明显的细胞凋亡,50、100、200μmol/L 3-溴丙酮酸作用24 h的细胞凋亡率均明显高于对照组(P<0.01)。ATP水平检测结果表明,3-溴丙酮酸可明显降低Bel7402细胞内的ATP水平(P<0.01)。Western blot结果显示,3-溴丙酮酸可下调凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达,并上调凋亡诱导蛋白Bax的表达。结论:3-溴丙酮酸具有诱导肝癌Bel7402细胞凋亡的作用,其机制可能是通过引起细胞内ATP降低、调节细胞凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达。

3-溴丙酮酸单独或联合牛熊去氧胆酸钠对人髓系白血病细胞存活、增殖、凋亡的影响及其机制

目的探讨3-溴丙酮酸(3-BP)单独或联合牛熊去氧胆酸钠(TUDCA)对人髓系白血病细胞存活、增殖、凋亡的影响及其机制。方法将对数生长期人髓系白血病细胞K562随机分为0μmol·L^(-1)3-BP组、40μmol·L^(-1)3-BP组、80μmol·L^(-1)3-BP组、120μmol·L^(-1)3-BP组,分别用含终浓度0、40、80、120μmol·L^(-1)3-BP的RPMI-1640培养液培养,采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)检测细胞存活能力,采用流式细胞术检测细胞凋亡情况,采用Western blot法检测细胞凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、cleaved-capsase-3及内质网应激相关蛋白免疫球蛋白结合蛋白(Bip)、真核翻译起始因子-2α(EIF-2α)、磷酸化真核翻译起始因子-2α(p-EIF-2α)、转录激活因子4(ATF4)的表达。将对数生长期的人髓系白血病细胞K562随机分为0μmol·L^(-1)3-BP组、5μmol·L^(-1)3-BP组、10μmol·L^(-1)3-BP组、20μmol·L^(-1)3-BP组、40μmol·L^(-1)3-BP组,分别用含终浓度0、5、10、20、40μmol·L^(-1)3-BP的RPMI-1640培养液培养,采用CCK-8法检测培养0、24、48、72、96 h时的细胞增殖能力。另将对数生长期K562细胞随机分为对照组、3-BP组、TUDCA组、3-BP+TUDCA组,分别使用含终浓度0μmol·L^(-1)3-BP和0 mmol·L^(-1)TUDCA、40μmol·L^(-1)3-BP、0.25 mmol·L^(-1)TUDCA、40μmol·L^(-1)3-BP和0.25 mmol·L^(-1)TUDCA的RPMI-1640培养液培养,采用CCK-8法检测各组细胞存活能力,采用流式细胞术检测各组细胞凋亡情况,采用Western blot法检测各组细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、cleaved-capsase-3的表达。结果3-BP干预16 h时,随着药物浓度的升高,0μmol·L^(-1)3-BP组、40μmol·L^(-1)3-BP组、80μmol·L^(-1)3-BP组、120μmol·L^(-1)3-BP组细胞存活能力呈显著降低趋势(F=542.170,P<0.05)。药物干预16 h时,3-BP组、TUDCA组、3-BP+TUDCA组细胞存活能力显著低于对照组,3-BP+TUDCA组细胞存活能力显著低于3-BP组和TUDCA组(P<0.05)。3-BP干预24、48、72、96 h时,随3-BP干预浓度的升高,0μmol·L^(-1)3-BP组、5μmol·L^(-1)3-BP组、10μmol·L^(-1)3-BP组、20μmol·L^(-1)3-BP组、40μmol·L^(-1)3-BP组细胞增殖能力呈显著降低趋势(F=284.875、819.658、199.535、467.633,P<0.05)。随着3-BP干预浓度的增加,0μmol·L^(-1)3-BP组、40μmol·L^(-1)3-BP组、80μmol·L^(-1)3-BP组、120μmol·L^(-1)3-BP组细胞的凋亡率及Bax、cleaved-capsase-3蛋白呈显著升高趋势,Bcl-2蛋白呈显著降低趋势(F=2148.278、1176.838、1350.646、6765.482,P<0.05)。随着3-BP浓度的升高,0μmol·L^(-1)3-BP组、40μmol·L^(-1)3-BP组、80μmol·L^(-1)3-BP组、120μmol·L^(-1)3-BP组细胞Bip、p-EIF-2α、ATF4蛋白相对表达量呈显著升高趋势(F=1600.447、504.672、1949.837,P<0.05);0μmol·L^(-1)3-BP组、40μmol·L^(-1)3-BP组、80μmol·L^(-1)3-BP组、120μmol·L^(-1)3-BP组细胞的EIF-2α蛋白相对表达量比较差异无统计学意义(F=1.034,P>0.05)。3-BP+TUDCA组细胞凋亡率及Bax、cleaved-caspase-3蛋白相对表达量显著高于对照组、3-BP组、TUDCA组(P<0.05);3-BP+TUDCA组细胞的Bcl-2蛋白相对表达量显著低于对照组、3-BP组、TUDCA组(P<0.05)。结论3-BP可显著抑制人髓系白血病细胞K562的增殖和存活能力,促进K562细胞凋亡,并可诱导内质网应激的发生;内质网应激抑制剂TUDCA可增加3-BP对K562细胞的促凋亡作用,抑制K562细胞存活。

扩散加权成像对肝动脉灌注3-溴丙酮酸治疗大鼠肝癌早期疗效的评价

目的探讨扩散加权成像(DWI)对3-溴丙酮酸介入治疗大鼠肝癌模型早期疗效的评价。方法 20只雄性Wistar大鼠采用瘤块种植法建立肝癌模型,种植术后10 d随机分为动脉灌注3-溴丙酮酸组(A组)和生理盐水组(B组),介入术前1 d和术后第3天行MRI检测肿瘤体积和表观扩散系数(ADC),术后第3天处死大鼠,病理分析肿瘤坏死率。结果 14只大鼠完成介入手术(A=10,B=4)。介入术后第3天A、B组肿瘤平均体积为:482.98±103.88 mm^3和255.04±148.30 mm^3,A、B组肿瘤体积无统计学差异(P=0.465);介入术后第3天A、B组肿瘤平均ADC值为(15.15±5.20)×10^(-4)s/mm^2和(7.57±0.53)×10^(-4)s/mm^2,A、B组ADC值有统计学差异(P=0.024)。肿瘤坏死率:A组7例为Ⅲ级坏死,2例为Ⅳ级坏死和1例Ⅰ级坏死,B组4例均为Ⅰ级坏死,治疗后A组肿瘤平均坏死率明显高于B组(P=0.005);肿瘤病理分级与术后ADC值呈正相关(r=0.897)。结论 3-溴丙酮酸对大鼠肝癌模型有较强的抗肿瘤作用,MRI测量肿瘤治疗后早期体积变化不能反映其疗效,尽管ADC值可评估3-溴丙酮酸对大鼠肝癌介入治疗的早期疗效,但尚须进一步研究确立其诊断标准。

3-溴丙酮酸对人肝癌HepG-2细胞增殖和凋亡的影响

目的:通过3-溴丙酮酸作用于HepG-2细胞,观察3-溴丙酮酸对HepG-2细胞增殖和凋亡的影响。方法:MTT法检测细胞增殖,倒置显微镜和透射电镜观察细胞形态,流式细胞术检测细胞周期分布和细胞凋亡。结果:3-溴丙酮酸在25～75μg/mL范围内,对HepG-2细胞的增殖具有明显的抑制作用并呈现剂量依赖性。3-溴丙酮酸处理HepG-2细胞后,倒置显微镜观察到细胞生长稀疏,细胞质透亮度下降,细胞脱落增多;透射电镜观察到染色质固缩、边集,核质内可见空泡。流式细胞术结果显示3-溴丙酮酸可将HepG-2细胞阻滞于S期,且DNA直方图上可见亚二倍体峰。在3.125～25μg/mL范围内,3-溴丙酮酸可剂量依赖性的诱导HepG-2细胞凋亡。结论:3-溴丙酮酸抑制HepG-2增殖并诱导HepG-2凋亡。

3-溴丙酮酸联合顺铂抑制肺癌细胞株A549的生长

目的探讨3-溴丙酮酸(3-bromopyruvate,3-BrPA)联合顺铂体外抗肺癌A549细胞的作用及其可能机制。方法采用CCK-8检测不同浓度的3-BrPA、顺铂单用及联用对A549细胞的增殖抑制;选择低于半数抑制浓度(IC50)的40μmol/L 3-BrPA与1 mg/L顺铂单独和联合作用A549细胞48 h后,用倒置相差显微镜观察细胞形态变化,流式细胞术检测细胞凋亡;不同浓度的3-BrPA作用A549细胞48 h后,流式细胞术检测细胞周期变化,己糖激酶(hexokinase,HK)活性检测试剂盒检测3-BrPA对细胞内HK活性的影响。结果 CCK-8结果显示,与阴性对照组比较,3-BrPA浓度大于20μmol/L时对A549细胞有明显抑制作用(P<0.01),与单用顺铂组比较,3-BrPA联合顺铂组可显著增强顺铂对A549细胞的毒性作用(P<0.01);3-BrPA作用A549细胞48 h后,倒置显微镜观察到3-BrPA组大多数细胞出现凋亡,而联合用药组细胞凋亡更加明显,部分区域出现细胞碎片等坏死征象;流式细胞术结果显示,3-BrPA和顺铂单用组及联合用药组细胞凋亡率均明显高于阴性对照组(P<0.01),且联合用药组细胞凋亡率明显高于单独用药组(P<0.01);细胞周期检测结果显示3-BrPA可将A549细胞阻滞于G1期;HK活性结果显示:与阴性对照组比较,3-BrPA组HK活性明显降低(P<0.01)。结论 3-BrPA有抑制肺癌A549细胞增殖、诱导其凋亡的作用,且与顺铂具有协同抗肺癌A549细胞增殖作用,其机制可能为抑制肺癌细胞糖酵解,进而影响肺癌细胞能量代谢。

3-溴丙酮酸通过抑制糖酵解阻止A549肺腺癌细胞增殖并诱导其凋亡

目的探究3-溴丙酮酸(3-BP)对人肺腺癌A549细胞的增殖和凋亡的影响及机制。方法采用噻唑蓝(MTT)法检测(10、20、40、80、160)μmol/L3-BP处理24、48 h,对肺腺癌A549细胞存活率的影响;采用(0、50、100、150)μmol/L 3-BP处理肺腺癌A549细胞24 h,异硫氰酸荧光素标记的膜联素Ⅴ/碘化丙啶(annexinⅤ-FITC/PI)双染法结合流式细胞术检测A549细胞的凋亡率;试剂盒检测A549细胞ATP水平、2′,7′-二氯二氢荧光黄二乙酸酯(DCFH-DA)染色结合流式细胞术检测细胞活性氧(ROS)水平变化,Western blot法检测糖酵解及凋亡相关蛋白己糖激酶2(HK-2)、单羧酸转运蛋白1(MCT1)、丙酮酸脱氢酶激酶1(PDK1)和凋亡相关B细胞淋巴瘤分子2(Bcl2)、Bcl2相关X蛋白(BAX)的表达。近红外荧光蛋白(iRFP)和荧光素酶双标记的A549细胞接种至裸鼠皮下,当皮下肿瘤体积达到100 mm^(3)时,将所有裸鼠随机分成PBS组、5 mg/kg顺铂(DDP)组、7 mg/kg 3-BP组;每组5只,采用腹腔注射方式进行给药。HE染色检测肿瘤病变情况,免疫组织化学染色检测KI-67抗原(ki67)表达确定对肿瘤细胞增殖的影响,原位末端转移酶标记技术(TUNEL)检测肿瘤细胞凋亡情况,评估3-BP的体内抗肿瘤效果并进行肝肾功能检测确定3-BP肝肾毒性。结果3-BP可以抑制A549细胞增殖,诱导其凋亡;与对照组相比,3-BP处理组ATP水平明显下降,ROS水平明显升高,HK-2、MCT1、PDK1、Bcl2蛋白表达明显降低,BAX表达明显增加。动物模型结果显示,与PBS组相比,3-BP可以抑制裸鼠肺腺癌移植瘤的生长,3-BP可以抑制肿瘤细胞的增殖并诱导其凋亡,3-BP对裸鼠肝肾毒性较为轻微,安全性较高。结论3-BP通过抑制糖酵解抑制A549人肺腺癌细胞增殖并诱导其凋亡,对荷肺癌裸鼠的抗肿瘤效果较好且肝肾毒性较低。