同位素稀释高效液相色谱-串联质谱法测定乳与乳制品中3-甲氧酪胺和肾上腺素

本文建立高效液相色谱-串联质谱法(High performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry,HPLC-MS/MS)同时测定乳与乳制品中3-甲氧酪胺和肾上腺素的检测方法。样品前处理使用高氯酸溶液作为提取溶剂,通过弱阳离子固相萃取柱净化,样品采用Waters ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.7μm)分离,以0.1%甲酸-甲醇流动相体系进行梯度洗脱,采用电喷雾离子源正离子方式扫描,在多反应监测(Multiple reaction monitoring,MRM)模式下检测,内标法定量。结果表明,3-甲氧酪胺在0.5~12.0 ng/mL,肾上腺素在50~1200 ng/mL范围内线性关系均良好(r>0.99),3-甲氧酪胺的方法检出限为0.2μg/kg,定量限为0.5μg/kg;肾上腺素检出限为20μg/kg,定量限为50μg/kg。在0.5、1.0、3.0μg/kg浓度下,3-甲氧酪胺方法回收率在76.97%~119.20%之间,精密度在1.53%~9.61%之间;在50、100、300μg/kg浓度下,肾上腺素方法回收率在90.65%~108.55%之间,精密度在1.29%~3.95%之间。本方法建立的HPLC-MS/MS结果准确,特异性强,准确度和重复性好,适用于乳与乳制品中3-甲氧酪胺和肾上腺素的分析测定。

人血浆中3-甲氧基肾上腺素和3-甲氧基去甲肾上腺素的萃取和浓度检测方法研究

目的:建立固相萃取-高效液相-电化学检测器联用法测定人血浆中3-甲氧基肾上腺素(Metanephrine,MN)和3-甲氧基去甲肾上腺素(Normetanephrine,NMN)浓度的方法。方法:采用固相萃取弱阳离子交换小柱萃取人血浆中的MN和NMN,用HPLC-ECD测定其浓度,并对其方法专属性、回收率进行研究。结果:MN线性相关系数R^(2)=0.9972,NMN线性相关系数R^(2)=0.9996;MN的提取回收率和方法回收率为84.34%和99.10%,NMN的提取回收率和方法回收率为90.55%和100.48%。结论:本课题建立的固相萃取-高效液相色谱-电化学检测器联用检测法检测人血浆中MN和NMN的浓度,操作简单,提取率较高,为临床人血浆中MN和NMN浓度检测提供方法学参考。

液相色谱-串联质谱法测定血浆中甲氧基肾上腺素和甲氧基去甲肾上腺素

建立了血浆中甲氧基肾上腺素和甲氧基去甲肾上腺素的液相色谱-串联质谱定量测定方法。生物样本经过固相萃取方式进行前处理,采用Venusil XBP Silica色谱柱(100 mm×2.1 mm,3μm)分离,流动相为甲酸-甲酸铵水溶液(A相)和甲酸-水-甲酸铵乙腈溶液(B相),梯度洗脱。在电喷雾正离子模式下,以多反应监测模式检测待测组分。在最优条件下,分析物在相应的浓度范围内相关系数均大于0.999,加标回收率为85%~109%。

尿去甲基肾上腺素/甲氧基肾上腺素测定对嗜铬细胞瘤的方法学比较

目的:通过对尿儿茶酚胺代谢产物去甲肾上腺素、甲氧基肾上腺素的测定,综合分析其对嗜铬细胞瘤的早期临床诊断价值。方法:利用酶联免疫分析法和传统柱层析法,对正常人和临床诊断为嗜铬细胞瘤及肾上腺占位病变并伴有阵发性高血压患者的24h尿去甲基肾上腺素/甲氧基肾上腺素和3-甲氧基-4-羟基苦杏仁酸(VMA)进行测定。结果:与VMA相比,24h尿去甲基肾上腺素/甲氧基肾上腺素在嗜铬细胞瘤患者中的测定值要显著高于其他肾上腺占位性病变伴高血压患者和正常人群,二者方法学有显著性差异。结论:酶联免疫分析法检测24h尿去甲基肾上腺素/甲氧基肾上腺素具有灵敏度高、特异性好的特点,为临床从肾上腺占位性病变并伴有阵发性高血压患者中筛查嗜铬细胞瘤提供了一种有价值的参考方法。

去甲肾上腺素在3-氨基-5-巯基-1,2,4-三唑修饰金电极上的电化学行为及研究

本文通过自组装的方法制备了3-氨基-5-巯基-1，2，4-三唑（TA）修饰金电极。X射线光电子能谱表明，3-氨基-5-巯基-1，2，4-三唑是通过形成S-Au键而组装到Au电极表面。研究了去甲肾上腺素在该自组装膜电极上的电化学行为。实验结果表明：在PH4．5的0．1mol／L BR缓冲溶液中，膜电极对去甲肾上腺素的电化学氧化具有明显的催化作用，其氧化峰电流与去甲肾上腺素的浓度在2．0×10^-6～1．9×10^-4mol／L范围内呈良好线性关系。方法检出限为4．0×10^-7mol／L。

血浆游离3-甲氧基肾上腺素和游离3-甲氧基去甲肾上腺素在嗜铬细胞瘤/副神经节瘤临床诊断中的价值研究

目的 探讨血浆游离3-甲氧基肾上腺素(MN)和游离3-甲氧基去甲肾上腺素(NMN)在嗜铬细胞瘤/副神经节瘤(PPGL)临床诊断中的价值。方法 选取65例PPGL患者作为研究组,同期65例高血压非PPGL患者作为对照组。比较两组受试者一般临床资料及血浆游离MN、NMN水平。根据肿瘤不同分化程度将研究组患者分为高分化组(39例)、中分化组(15例)及低分化组(11例),比较3组患者血浆游离MN、NMN水平。相关性分析采用Pearson和Spearman相关分析。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血浆游离MN、NMN水平对PPGL的预测价值。结果 研究组收缩压、舒张压及血浆游离MN、NMN水平均高于对照组;随着PPGL患者肿瘤分化程度降低,血浆游离MN、NMN水平逐渐升高(P<0.05)。Pearson相关分析结果显示,PPGL患者血浆游离MN、NMN水平与收缩压、舒张压均呈正相关;Spearman相关分析结果显示,血浆游离MN、NMN水平与肿瘤分化程度均呈负相关(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血浆游离MN、NMN水平联合预测PPGL的ROC曲线下面积(AUC)大于二者单独预测的AUC。结论血浆游离MN、NMN水平检测可作为诊断PPGL的重要指标,且与肿瘤分化程度密切相关。

miR-373-3p参与去甲肾上腺素对结肠癌细胞RKO体外增殖的调控

目的确定miR-373-3p是否参与去甲肾上腺素对结肠癌细胞RKO细胞增殖的调控。方法将结肠癌细胞RKO分为处理组和对照组,处理组细胞培养于含有终浓度10μmol/L去甲肾上腺素的培养基中,对照组培养于正常培养基中,使用MTT法检测细胞增殖的差异。使用划痕实验观察细胞迁移,使用流式细胞术检测细胞周期。通过RT-PCR检测处理组细胞的miR-373-3p表达量。合成miR-373-3p的DNA抑制剂si-miR-373-3p,将其转染入细胞,观察其对RKO细胞增殖的影响。采用SPSS22.0对数据进行统计学分析,P<0.05视为有统计学差异。结果 10μmol/L去甲肾上腺素促进RKO细胞的体外增殖(P<0.05)和迁移过程。细胞周期结果显示,处理组细胞S期和G2期比例均上升。处理组细胞miR-373-3p表达量上升(P<0.05),转染si-miR-373-3p的RKO细胞增殖受到抑制(P<0.05)。对转染si-miR-373-3p的细胞,去甲肾上腺素不再促进细胞增殖。结论 miR-373-3p参与了去甲肾上腺素促进的结肠癌细胞RKO的增殖过程。

3-甲氧基-甲亚胺H光度法测定植物中硼的研究及应用

研究了3-甲氧基-甲亚胺H与硼的显色反应。在乙酸-乙酸铵缓冲溶液中。硼与3-甲氧基-甲亚胺H形成1:2的黄色配合物,最大吸收在420nm波长处,摩尔吸尤系数为7.19×10~3,Sandell灵敏度为0.0015/μg·cm^(-2)。当硼含量在0～35μg/25ml范围内符合比耳定律,应用于植物中硼的测定获得满意的结果。

3-甲氧基-甲亚胺H光度法测定食品中的硼酸

目的:建立3-甲氧基-甲亚胺H分光光度法测定食品中的硼酸。方法:食品样品在碱性条件下灰化,采用3-甲氧基-甲亚胺H作硼显色剂,测定食品中硼酸含量。结果:本法在硼酸浓度0～5 0 μg/ml线性良好,r >0 998,其回收率为93 0～99 1% ,变异系数CV % <5 % ,最低检出浓度为5 0mg/kg。与姜黄素分光光度法比较,差异无显著性(t=0 75 7,P >0 0 5 )。结论:该方法简便快速,灵敏度和准确度满足要求,适合于食品中硼酸的定量测定。

巯基葡聚糖凝胶分离富集后3-甲氧基-甲亚胺H分光光度法测定微量汞(Ⅱ)

研究了在溴化十六烷基三甲基铵(CTMAB)、聚乙二醇辛基笨基醚(OP)、正丁醇、正庚烷和水自制复配型微乳溶液存在下Hg(Ⅱ)与3-甲氧基-甲亚胺H的显色反应,建立了分光光度法测定微量汞的新方法。试验表明,在pH5.90的HAc-NaAc缓冲溶液中,Hg(Ⅱ)与试剂形成1∶2的淡黄色络合物,络合物的最大吸收峰位于470nm波长处,表观摩尔吸光系数ε为3.3×105L·mol-1·cm-1。Hg(Ⅱ)含量在0.008～0.60μg/mL范围内符合比尔定律,检出限为0.003μg/mL。本法采用巯基葡聚糖凝胶(SDG)分离样品中共存离子并富集汞,提高了方法的选择性。用于测定两个水样中微量汞,回收率分别为96.4%和98.6%,相对标准偏差分别为2.4%和3.5%(n=6)。

3-甲氧基-甲亚胺H分光光度法测定镓(Ⅲ)

研究了由十六烷基三甲基溴化铵（CTMAB）、正丁醇、正庚烷和水自制微乳溶液存在下，3-甲氧基-甲亚胺H与Ga（Ⅲ）的显色反应，建立了分光光度法测定微量镓的新方法。结果表明，在pH5．90的HAc-NaAc缓冲溶液中，Ga（Ⅲ）与试剂形成摩尔比为1：1的淡黄色络合物，络合物的最大吸收峰在440nm，表观摩尔吸光系数ε为1．60×10^5L·mol^-1·cm^-1。在10mL显色液中，Ga（Ⅲ）量在0．04～4．2μg范围内符合比尔定律，检出限为0．013μg／mL。方法已用于煤和矿石中微量镓的测定，回收率为103．2％～104．6％，相对标准偏差为4．70％～4．80％。

(E)-2-(2((6-环丙基-2-(苯胺基)嘧啶-4-基氧基)甲基)苯基)-3-甲氧基丙烯酸甲酯的合成与杀菌活性

以苯胍碳酸盐和3-环丙基-3-氧代丙酸叔丁酯为原料,经环合反应制得2-苯胺基-4-羟基-6-环丙基嘧啶,再与(E)-2-(2-(氯甲基)苯基)-3-甲氧基丙烯酸甲酯反应制得标题化合物,其结构经1HNMR进行确证。生测结果表明:该化合物在25mg/L下对水稻稻瘟病、番茄晚疫病、蔬菜灰霉病、玉米锈病、黄瓜霜霉病和黄瓜炭疽病等都具有100%的防治效果。

微乳液介质-3-甲氧基-甲亚胺H分光光度法测定痕量金(Ⅲ)

对3-甲氧基-甲亚胺H与金(Ⅲ)的显色反应作了试验。结果表明:在pH 4.5的乙酸-乙酸钠缓冲溶液中,在十六烷基三甲基溴化铵(CTMAB)、正丁醇、正庚烷和水配制的微乳液存在下,金(Ⅲ)与试剂形成1∶1∶3的黄色配合物,配合物的最大吸收峰在450 nm波长处,表观摩尔吸光率为2.6×105L.mol-1.cm-1。金(Ⅲ)质量浓度在0.55 mg.L-1范围以内符合比耳定律。方法用于金矿石中痕量金(Ⅲ)的测定,所得结果与原子吸收光谱法测得结果相符。测得方法的平均回收率为80%,测定结果的平均相对标准偏差(n=6)为0.25%。。

2-羟基-3-甲氧基苯甲酸甲酯的合成

以邻香兰素为主要原料,五氧化二钒和双氧水为氧化酯化催化剂,一锅氧化酯化合成阿利苯多中间体2-羟基-3-甲氧基苯甲酸甲酯。通过改进工艺条件,考察反应温度、时间等因素对反应产率的影响。在25℃下,与甲醇搅拌反应2 h,产率达到58%。

3-甲氧基-甲亚胺H分光光度法测定饮用天然矿泉水中硼酸

研究了在 p H6 .5乙酸铵介质中 ,硼酸与 3-甲氧基 -甲亚胺 H(C1 8H1 5O9NS2 )显色反应条件。该配合物的 λmax=42 0 nm,硼酸浓度在 0 .4～ 6 .0 mg/ L范围呈良好的线性关系 ,检出限为 0 .0 8mg/ L ,表观摩尔吸光系数 (ε)为 4.6× 10 4L / (mol· cm )。在 EDTA存在下 ,方法有很好的选择性 。

3-甲氧基-甲亚胺H分光光度法测定微量铜(Ⅱ)

研究了Cu（Ⅱ）与3-甲氧基-甲亚胺H的显色反应，建立了分光光度法测定微量铜的新方法。试验结果表明，在pH5．9的HAc—NaAc缓冲溶液中，3-甲氧基-甲亚胺H与Cu（Ⅱ）及溴代十六烷基吡啶（CPB）微乳液形成1：1：1的淡黄色络合物。络合物的最大吸收峰位于450nm波长处，表观摩尔吸光系数为ε=1．0×10^5L·mol^-1·cm^-1。10mL溶液中，Cu（Ⅱ）含量在0．04～12ug范围内符合比尔定律，检出限为0．0012μg／mL。方法可用于铝合金和水样中微量Cu（Ⅱ）的测定，回收率在97．3％～103．7％之间，RSD为1．46％～3．24％。

益气温阳活血方含药血清对肥大心肌细胞β_3-肾上腺素能受体的影响研究

目的探讨益气温阳活血方含药血清对β3-肾上腺素能受体(β3-AR)的影响。方法通过血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导肥大心肌细胞,以3H-亮氨酸掺入量检测心肌细胞蛋白质合成速率,酶联免疫吸附(ELISA)法检测细胞上清去甲肾上腺素(NE)、金属基质蛋白酶-2(MMP-2)、金属基质蛋白酶-9(MMP-9)、金属基质蛋白酶抑制物-1(TIMP-1)、金属基质蛋白酶抑制物-2(TIMP-2)含量,以逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法以及蛋白质印记法(Western blot)检测β3-AR m RNA及蛋白质表达水平。结果与正常组比较,模型组心肌细胞蛋白质合成速率、NE、MMP-2、MMP-9含量、β3-AR m RNA和蛋白质的表达水平明显升高(P<0.05),而TIMP-1、TIMP-2含量则明显降低(P<0.05);益气温阳活血方能够明显降低细胞蛋白质合成速率、NE、MMP-2、MMP-9含量,升高TIMP-1、TIMP-2含量,抑制β3-AR m RNA和蛋白质的表达,与正常组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论益气温阳活血方可抑制心肌细胞肥大,其机制与干预β3-AR表达有关。

3-溴-2-(2′,3′-二溴-4′,5′-二甲氧基苯甲基)-4,5-二甲氧基苯甲酸甲酯的合成及其PTP1B酶抑制活性研究

为了研究海洋溴系列化合物的生物活性,以香兰素(1)为起始原料,经过溴代、还原、氧化、傅克酰基化及酯化等反应,成功的合成了新化合物3-溴-2-(2′,3′-二溴-4′,5′-二甲氧基苯甲基)-4,5-二甲氧基苯甲酸甲酯(9),总收率为19.6%。通过1H-NMR,13C-NMR等方法对目标产物进行了结构表征。通过比色法对目标化合物进行了PTP1B酶抑制活性测定,结果显示化合物浓度为20 mg/L时,PTP1B酶抑制率为55.84%,表明该化合物有一定的PTP1B酶抑制活性。

用新显色剂3-甲氧基-甲亚胺H光度测定海水中的硼

采用新试剂 ３－甲氧基－甲亚胺Ｈ测定海水中的硼，加入ＥＤＴＡ和酒石酸掩 蔽各种干扰离子，不须分离可直接测定，方法简便、快速、准确。

非晶合金NiB/MCM-41催化合成3-(N-苄基)氨基-4-甲氧基乙酰苯胺

用负载型非晶合金NiB／MCM-41中孔分子筛催化剂将3-氨基4-甲氧基乙酰苯胺与苯甲醛缩合加氢制备3．（N-苄基）-氨基4-甲氧基乙酰苯胺，产物收率95％以上，比采用RaneyNi收率提高12％，较SiO2载体制成的催化剂收率提高5％。研究表明，中孔结构有利于减少体积较大分子的内扩散效应，发挥负载型非晶合金的高活性、选择性和稳定性。采用该催化剂合成3-（N-苄基）-氨基4-甲氧基乙酰苯胺的适宜条件为：催化剂中Ni负载量埘（Ni）=10％，n（AMA）：n（BAD）=1：1．1，m（cat）／m（AMA）=2．5％，反应温度55～65℃，反应压力1．2MPa。