同位素稀释高效液相色谱-串联质谱法测定乳与乳制品中3-甲氧酪胺和肾上腺素

本文建立高效液相色谱-串联质谱法(High performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry,HPLC-MS/MS)同时测定乳与乳制品中3-甲氧酪胺和肾上腺素的检测方法。样品前处理使用高氯酸溶液作为提取溶剂,通过弱阳离子固相萃取柱净化,样品采用Waters ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.7μm)分离,以0.1%甲酸-甲醇流动相体系进行梯度洗脱,采用电喷雾离子源正离子方式扫描,在多反应监测(Multiple reaction monitoring,MRM)模式下检测,内标法定量。结果表明,3-甲氧酪胺在0.5~12.0 ng/mL,肾上腺素在50~1200 ng/mL范围内线性关系均良好(r>0.99),3-甲氧酪胺的方法检出限为0.2μg/kg,定量限为0.5μg/kg;肾上腺素检出限为20μg/kg,定量限为50μg/kg。在0.5、1.0、3.0μg/kg浓度下,3-甲氧酪胺方法回收率在76.97%~119.20%之间,精密度在1.53%~9.61%之间;在50、100、300μg/kg浓度下,肾上腺素方法回收率在90.65%~108.55%之间,精密度在1.29%~3.95%之间。本方法建立的HPLC-MS/MS结果准确,特异性强,准确度和重复性好,适用于乳与乳制品中3-甲氧酪胺和肾上腺素的分析测定。

液相色谱-串联质谱检测血浆3-甲氧酪胺方法的建立

目的建立一种稳定的检测血浆3-甲氧酪胺(3-MT)的液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)方法。方法对LC-MS/MS的分离条件(色谱柱、柱温、p H值)进行优化,建立检测血浆3-MT的方法,并对该方法的线性范围、回收率、精密度、最低检测下限和稳定性进行评价。结果以同位素氘代作为内标,采用BEH HILIC色谱柱进行分离。流动相为100 mmol/L甲酸铵缓冲液(p H值为3)和纯乙腈,梯度洗脱;柱温为35℃。LC-MS/MS检测3-MT的线性范围为5~1 000 pg/mL,定量检出限为5 pg/mL,天间和批间变异系数(CV)分别为<6%和<7%,回收率为97.1%~109.3%。由于3-MT在室温中稳定性较差,因此需冰浴送检。结论建立了检测3-MT的LC-MS/MS方法,能够灵敏、准确地检测血浆3-MT水平。

甲氧基肾上腺素类物质、3-甲氧酪胺及嗜铬粒蛋白A在PPGL诊断中的作用

嗜铬细胞瘤和副神经节瘤(pheochromocytoma and paraganglioma,PPCL)是继发性高血压的病因之一,近年来其患病率呈上升趋势。甲氧基肾上腺素类物质(metanephrines,MNs)是儿茶酚胺(catecholamine,CA)的中间代谢产物。目前,血,尿MNs均已被广泛推荐为PPGL诊断的首选生化标志物。此外,3-甲氧酪胺(3-methoxytyramine,3-MT)和嗜铬粒蛋白A(chromogranin A,CgA)也可对PPGL的诊断和鉴别良,恶性提供一定的帮助。了解不同生化检测指标在PPCL诊断中的特点.标本采集的注意事项及方法学选择,将有助于提高临床合理规范应用。

超高效液相色谱串联质谱法检测晨尿中儿茶酚胺及其代谢产物的价值

目的建立一种稳定、灵敏、可靠且可以同时检测尿儿茶酚胺及其代谢产物的方法。方法采用超高效液相色谱串联质谱法(UPLC-MS/MS)检测晨尿标本中儿茶酚胺及其代谢产物。采用固相萃取的前处理方法,对液相色谱条件及质谱条件进行优化,并对该方法的检测限、定量下限、线性、精密度、准确度和基质效应及稳定性进行性能验证。检测100例体检健康者晨尿及其中20例体检健康者24 h尿液,根据肌酐检测值对稀释差异进行归一化,考察晨尿与24 h尿液收集这两种不同采样方法之间检测儿茶酚及其代谢产物的相关性,并建立了晨尿检测6种分析物的参考区间。结果6种分析物在相应的浓度范围内均线性关系良好,精密度、准确度、基质效应均<10%,室温放置24 h、4℃放置24 h、4℃放置48 h及—80℃放置7 d稳定性均较好,变化≤6.2%。晨尿与24 h尿液标本检测结果呈正相关(r=0.93~0.97,P<0.0001),6种分析物的参考区间去甲肾上腺素为2.6~140.4μg/g Cr,肾上腺素为0.3~37.2μg/g Cr,多巴胺为43.4~561.8μg/g Cr,3-甲氧酪胺为18.0~165.7μg/g Cr,甲氧基去甲肾上腺素为15.1~241.5μg/g Cr,甲氧基肾上腺素为6.8~192.0μg/g Cr。结论建立了一种方便快速、灵敏、特异的UPLC-MS/MS,一次进样可同时检测晨尿中6种儿茶酚胺及其代谢产物,可为儿茶酚胺的常规检测及临床应用提供一种简单、可靠的新手段。