家蚕3-羟基异丁酸脱氢酶基因克隆及其在模拟失重环境中的表达模式分析

采用RT-PCR和RACE技术克隆了家蚕3-羟基异丁酸脱氢酶(hibadh)基因全长cDNA(GenBank登录号EU719652)并对其序列进行了分析,用RT-PCR方法检测了hibadh基因在家蚕5龄幼虫不同组织中的分布,最后用real-timeRT-PCR方法分析了整个胚胎期家蚕hibadh基因在模拟失重环境中的表达模式。克隆的hibadh基因cDNA全长1074bp,包含1个能编码完整Hibadh长度为969bp的开放阅读框。家蚕hibadh基因与伯霍尔德杆菌、果蝇、蜜蜂、热带爪蟾、小鼠、人类等6个物种hibadh基因推导的氨基酸序列同源性分别达到46%、43%、48%、44%、45%、45%。Hibadh蛋白为分泌蛋白,不存在糖基磷脂酰肌醇锚定位点,分子量和等电点分别为34.1kD和9.14。hibadh基因在家蚕5龄幼虫的头、丝腺、中肠、皮肤、血液、脂肪体、马氏管等组织中稳定表达。模拟失重环境中家蚕hibadh基因在胚胎发育的不同时期表达量不同,胚体突起发生期和反转期hibadh基因表达量分别上调2.3倍(P<0.05)和4.6倍(P<0.01),气管形成期hibadh基因表达量下调7.6倍(P<0.01),其余时间段hibadh基因表达量没有明显变化。整个胚胎发育期内,模拟失重组与对照组相比较hibadh基因总表达量下调2.6倍(P<0.05)。在模拟失重环境中,家蚕hibadh基因的表达模式与家蚕整体的响应模式有相似之处但不尽相同。基因对环境反应的灵敏度高于有机体整体对环境反应的灵敏度。该研究有利于进一步探讨hibadh基因的重力生物学机制。

BDH2抑制MIF影响鼻咽癌对巨噬细胞的招募

目的:研究3-羟基丁酸脱氢酶2(BDH2)和巨噬细胞迁移抑制因子(MIF)在鼻咽癌(NPC)中的表达特征及其对肿瘤免疫微环境中巨噬细胞浸润的影响。方法:使用BDH2过表达质粒转染5-8F细胞,实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)检测BDH2的转录水平。使用GEO数据库和蛋白免疫印迹法(western blotting)验证BDH2和MIF的表达差异。通过酶联免疫吸附法和比色法分别检测细胞内MIF和乙酰乙酸的表达。通过免疫组化分析BDH2和MIF在NPC和正常鼻咽上皮组织中的表达水平,使用连续切片染色和相关性分析评估MIF表达与M1、M2型巨噬细胞浸润的关系。结果:过表达BDH2显著增加了5-8F细胞内乙酰乙酸含量(P<0.01),且MIF表达下调。GEO数据库分析和免疫组化结果表明NPC中BDH2的表达显著下调(P<0.0001),MIF的表达显著上调(P<0.01)。在连续切片分析中,高表达MIF的NPC组织内M1巨噬细胞浸润减少(P<0.0001)。结论:NPC中BDH2-MIF轴通过抑制M1巨噬细胞的浸润调控免疫微环境,可能是NPC潜在的治疗靶点。

富养罗尔斯通氏菌菌株PHB“泄漏”机理的初探

建立了一种分离纯化聚羟基丁酸 (Polyhydroxybutyrate ,PHB)颗粒的改良方法。采用这种方法从Ralstoniaeu tropha菌株H1 6 (野生型 )、SK1 4 89(Tn5诱变的PHB泄漏菌株 )、JMP2 2 2 (野生的PHB泄漏菌株 )分离了PHB颗粒。进一步比较研究了不同菌株的PHB解聚酶和 3 羟基丁酸脱氢酶的活性。研究结果表明 ,菌株SK1 4 89的PHB解聚酶活性 (4 8h培养后达 1 .82U mg)明显高于野生型菌株H1 6 (4 8h培养后达 0 .37U mg) ,菌株JMP2 2 2的 3 羟基丁酸脱氢酶活性 (培养 96h后达 1 6 5 9U mg)比菌株H1 6培养 (96h后达 6 4 0U mg)高许多。这些结果显示 ,不同菌株PHB的泄漏有不同的原因 ,突变株SK1 4 89导致PHB泄漏的原因是解聚酶活性高 ,而野生型JMP2 2 2PHB泄漏的原因主要是 3

MNSV p42与寄主因子3-HIBADH互作

甜瓜坏死斑点病毒(melon necrotic spot virus,MNSV)是侵染甜瓜的重要病毒之一,为害严重。为了明确MNSV的致病机制,本研究以pGBK-p42为诱饵载体,利用Mating的方法从感染MNSV的甜瓜cDNA文库中筛选出6个与p42互作的寄主因子,进一步利用酵母双杂交系统、双分子荧光互补技术(Bimolecular fluorescence complementation,BiFC)等验证p42与寄主因子3-羟基异丁酸脱氢酶(3-Hydroxyisobutyrate dehydrogenase-like 1,3-HIBADH)的互作,并明确了p42蛋白的s-domain是与3-HIBADH互作的关键区域。此外,利用激光共聚焦显微镜观察发现p42 s-domain与3-HIBADH作用改变了3-HIBADH蛋白在烟草表皮的亚细胞定位,进一步证实p42可与3-HIBADH发生相互作用。该结果为阐明甜瓜响应MNSV侵染的互作机制奠定了基础。

ACAT1、BDH2基因与肾透明细胞癌患者发病及病情进展的关系

目的研究胆固醇酰基转移酶1(ACAT1)、3-羟基丁酸脱氢酶2(BDH2)基因与肾透明细胞癌患者发病及病情进展的关系。方法选择2018年5月至2020年5月巴中市人民医院收治的86例肾透明细胞癌患者为研究组,另选择同期收治的因肾外伤行肾切除的患者30例为对照组,收集研究组术中切除的癌组织及对照组术中切除的肾组织,比较两组组织中ACAT1、BDH2基因相对表达量,比较不同临床病理特征肾透明细胞癌患者癌组织中ACAT1、BDH2基因相对表达量,采用Spearman相关分析ACAT1、BDH2基因与肾透明细胞癌患者病情进展的相关性,采用Logistic回归分析肾透明细胞癌患者发病的影响因素。结果研究组的ACAT1、BDH2基因相对表达量为11.52±0.99、10.48±0.73,均低于对照组(分别为13.93±1.32、12.86±1.01),差异有统计学意义(P<0.05);不同性别、年龄、肿瘤直径、肿瘤部位、病理分级的肾透明细胞癌患者癌组织中ACAT1、BDH2基因相对表达量差异无统计学意义(P>0.05);不同病理分期、淋巴结转移情况的肾透明细胞癌患者癌组织中ACAT1、BDH2基因相对表达量差异有统计学意义(P<0.05);ACAT1、BDH2基因相对表达量与肾透明细胞癌患者的病理分期、淋巴结转移呈负相关(P<0.05);ACAT1、BDH2基因表达下调是肾透明细胞癌患者发病的危险因素(P<0.05)。结论 ACAT1、BDH2基因在肾透明细胞癌中表达下调,ACAT1、BDH2基因与肾透明细胞癌发病及病理分期、淋巴结转移有关。