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细粒棘球绦虫3-羟基酰基-CoA脱氢酶基因的克隆及在其不同阶段的差异表达和生物信息学分析
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作者 县锦雯 王炜烨 +5 位作者 王芸菲 陆宝燕 张艳艳 孟季蒙 王正荣 薄新文 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2020年第11期1289-1294,共6页
目的研究细粒棘球绦虫3-羟基酰基-CoA脱氢酶分子特性及其在细粒棘球绦虫不同发育阶段的表达差异。方法通过分析细粒棘球绦虫原头蚴高通量转录组测序文库对Unigene进行KEGG通路分析,筛选出一个脂肪酸代谢酶通路及该通路的一个主要调控基... 目的研究细粒棘球绦虫3-羟基酰基-CoA脱氢酶分子特性及其在细粒棘球绦虫不同发育阶段的表达差异。方法通过分析细粒棘球绦虫原头蚴高通量转录组测序文库对Unigene进行KEGG通路分析,筛选出一个脂肪酸代谢酶通路及该通路的一个主要调控基因3-羟基酰基-CoA脱氢酶基因。PCR扩增3-羟基酰基-CoA脱氢酶基因,分析其核苷酸序列及其编码蛋白的结构和功能;通过实时荧光定量PCR分析虫体的原头蚴、成虫发育阶段的mRNA的转录情况。结果细粒棘球绦虫3-羟基酰基-CoA脱氢酶基因具有完整的开放阅读框,cDNA全长为822bp,编码274个氨基酸。生物信息学预测3-羟基酰基-CoA脱氢酶蛋白质的相对分子质量及等电点分别为32.98×10^5和8.87。该蛋白无跨膜螺旋区,具有亲水性,且具有多个潜在的优势抗原表位。氨基酸序列多重比对分析显示其与多房棘球绦虫亲缘关系较近。实时荧光定量PCR检测对该基因在原头蚴和成虫期均有表达,以成虫阶段表达量更高。结论细粒棘球绦虫3-羟基酰基-CoA脱氢酶基因在原头蚴和成虫期高表达,其编码蛋白具有潜在的优势抗原表位该基因可作为细粒棘球绦虫终末宿主抗原候选基因。 展开更多
关键词 细粒棘球绦虫 3-羟基酰基-coa脱氢酶 基因克隆 生物信息学分析 差异表达分析
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膜联蛋白5对大鼠睾丸间质细胞睾酮分泌及3β-羟基类固醇脱氢酶表达的影响 被引量:13
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作者 陶晓倩 王大勇 +6 位作者 柳海燕 林钗英 韩雪峰 时姗姗 崔英霞 戈一峰 姚兵 《医学研究生学报》 CAS 2010年第4期342-346,共5页
目的先前研究发现促性腺激素释放激素(gonadotropin-releasing hormone,GnRH)刺激Leydig细胞后,膜联蛋白5(annexin 5)及睾酮水平同时增加,推测annexin 5和睾酮之间可能存在某种内在的联系,3β-羟基类固醇脱氢酶(3β-HSD)是间质细胞的标... 目的先前研究发现促性腺激素释放激素(gonadotropin-releasing hormone,GnRH)刺激Leydig细胞后,膜联蛋白5(annexin 5)及睾酮水平同时增加,推测annexin 5和睾酮之间可能存在某种内在的联系,3β-羟基类固醇脱氢酶(3β-HSD)是间质细胞的标记酶。文中旨在研究annexin 5对大鼠睾丸间质细胞睾酮分泌及3β-HSD表达的影响。方法原代培养大鼠睾丸间质细胞,用不同浓度的annexin 5(0、10-10、10-9、10-8mol/L)处理间质细胞24h和用10-9mol/L的annexin 5处理细胞不同时间(6、12、24、36h),收集培养液,用化学发光法测定培养液中的睾酮含量;Western blotting方法分析睾丸间质细胞中3β-HSD的表达变化。结果不同浓度的annexin 5处理间质细胞24h后,与对照组比较,终浓度为10-10mol/L和10-9mol/L时,睾酮水平分别升高了18%[(14.38±0.30)nmol/Lvs(12.12±0.74)nmol/L](P<0.01)和26%[(15.25±0.47)nmol/Lvs(12.12±0.74)nmol/L](P<0.01);浓度为10-8mol/L时,睾酮水平虽也有升高趋势,但无显著性差异;而Western blotting结果显示,浓度为10-9mol/L时,3β-HSD表达量升高了63%(2.19±1.00vs1.34±0.19,P<0.05),浓度为10-10mol/L和10-8mol/L时,3β-HSD表达量无显著性差异;睾酮分泌与3β-HSD的表达呈显著正相关(r=0.430,P<0.05)。10-9mol/L的an-nexin5处理细胞不同时间,与对照组相比,6h和12h后睾酮的分泌虽有升高,但无统计学意义(P>0.05);24h后睾酮的分泌量显著升高了18%[(12.59±0.41)nmol/Lvs(10.70±0.09)nmol/L](P<0.01);而处理36h后,睾酮分泌量下降了21%[(14.44±1.65)nmol/Lvs(17.46±0.31)nmol/L](P<0.01)。结论在大鼠睾丸间质细胞中,annexin 5对睾酮分泌具有调节功能且呈剂量和时间依赖性;3β-HSD是该调节过程中的关键酶之一。 展开更多
关键词 膜联蛋白5 间质细胞 睾酮 3β-羟基类固醇
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家蚕3-羟基异丁酸脱氢酶基因克隆及其在模拟失重环境中的表达模式分析 被引量:2
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作者 田宗成 周博 +7 位作者 骞爱荣 续惠云 狄升蒙 赵云坡 章玉萍 刘佳 黄勇平 商澎 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第12期2041-2048,共8页
采用RT-PCR和RACE技术克隆了家蚕3-羟基异丁酸脱氢酶(hibadh)基因全长cDNA(GenBank登录号EU719652)并对其序列进行了分析,用RT-PCR方法检测了hibadh基因在家蚕5龄幼虫不同组织中的分布,最后用real-timeRT-PCR方法分析了整个胚胎期家蚕hi... 采用RT-PCR和RACE技术克隆了家蚕3-羟基异丁酸脱氢酶(hibadh)基因全长cDNA(GenBank登录号EU719652)并对其序列进行了分析,用RT-PCR方法检测了hibadh基因在家蚕5龄幼虫不同组织中的分布,最后用real-timeRT-PCR方法分析了整个胚胎期家蚕hibadh基因在模拟失重环境中的表达模式。克隆的hibadh基因cDNA全长1074bp,包含1个能编码完整Hibadh长度为969bp的开放阅读框。家蚕hibadh基因与伯霍尔德杆菌、果蝇、蜜蜂、热带爪蟾、小鼠、人类等6个物种hibadh基因推导的氨基酸序列同源性分别达到46%、43%、48%、44%、45%、45%。Hibadh蛋白为分泌蛋白,不存在糖基磷脂酰肌醇锚定位点,分子量和等电点分别为34.1kD和9.14。hibadh基因在家蚕5龄幼虫的头、丝腺、中肠、皮肤、血液、脂肪体、马氏管等组织中稳定表达。模拟失重环境中家蚕hibadh基因在胚胎发育的不同时期表达量不同,胚体突起发生期和反转期hibadh基因表达量分别上调2.3倍(P<0.05)和4.6倍(P<0.01),气管形成期hibadh基因表达量下调7.6倍(P<0.01),其余时间段hibadh基因表达量没有明显变化。整个胚胎发育期内,模拟失重组与对照组相比较hibadh基因总表达量下调2.6倍(P<0.05)。在模拟失重环境中,家蚕hibadh基因的表达模式与家蚕整体的响应模式有相似之处但不尽相同。基因对环境反应的灵敏度高于有机体整体对环境反应的灵敏度。该研究有利于进一步探讨hibadh基因的重力生物学机制。 展开更多
关键词 家蚕 3-羟基异丁酸 RACE(Rapid AMPLIFICATION of cDNA ends) 失重
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增产菊胺酯对小鼠睾丸间质细胞-氧化氮合酶和3β-羟基甾体脱氢酶影响的酶组织化学研究 被引量:5
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作者 毛新良 宋瑞琨 +3 位作者 石年 张艳 余海波 熊希凯 《中国组织化学与细胞化学杂志》 CAS CSCD 1997年第1期50-54,共5页
本文用NADPH-黄递酶法研究了NOS在小鼠睾丸的分布与活性,用NBT法研究了3β-HSDH的活性,以探讨新型植物生长调节剂增产菊胺酯的生殖毒作用机理。光镜观察和图像分析表明,NOS主要存在于睾丸间质细胞,而支持细胞... 本文用NADPH-黄递酶法研究了NOS在小鼠睾丸的分布与活性,用NBT法研究了3β-HSDH的活性,以探讨新型植物生长调节剂增产菊胺酯的生殖毒作用机理。光镜观察和图像分析表明,NOS主要存在于睾丸间质细胞,而支持细胞和生精细胞未见或仅见弱阳性反应产物。进一步观察表明,随着剂量的增加,NOS和3β-HSDH活性均明显减弱,睾丸内睾酮含量也随之减少。结果提示。 展开更多
关键词 增产菊胺酯 3β-羟基甾体 一氧化氮合组织化学 睾丸 小鼠
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大鼠睾丸间质细胞体外培养不同时间3β-羟基类固醇脱氢酶的表达 被引量:8
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作者 毕宏达 王晓云 +3 位作者 周广东 刘伟 李鸣 邢新 《组织工程与重建外科杂志》 2009年第1期7-11,共5页
目的探讨通过差速贴壁法获得的7天龄、3周龄大鼠睾丸间质内细胞的细胞群体构成、体外培养不同时间3β-羟基类固醇脱氢酶(3β-HSD)的表达水平变化,以及细胞睾酮分泌功能变化。方法联合应用胶原酶消化、不锈钢滤网过滤及差速贴壁法获得7... 目的探讨通过差速贴壁法获得的7天龄、3周龄大鼠睾丸间质内细胞的细胞群体构成、体外培养不同时间3β-羟基类固醇脱氢酶(3β-HSD)的表达水平变化,以及细胞睾酮分泌功能变化。方法联合应用胶原酶消化、不锈钢滤网过滤及差速贴壁法获得7天龄、3周龄雄性Wistar大鼠睾丸间质组织内细胞,贴壁细胞以DMEM/F12培养液培养,分别对原代培养2h、4d细胞进行3β-HSD免疫化学染色及流式细胞分析,原代培养细胞同时给予人绒毛膜促性腺激素(HCG)刺激,测定HCG刺激组和非刺激组各代细胞培养液上清中睾酮水平及其对HCG刺激的反应。结果7天龄、3周龄鼠差速贴壁法获得的睾丸间质内细胞群经流式细胞鉴定,3β-HSD阳性细胞所占比例分别为(5.4±1.2)%、(59.2±3.2)%;培养4d后,两组3β-HSD阳性细胞比例分别为(93.6±1.2)%、(95.4±3.2)%。两组原代培养细胞均有睾酮生成功能,在HCG刺激下睾酮分泌均明显上升,7天龄组培养细胞睾酮分泌高峰迟于3周龄组。结论差速贴壁法获得的7天龄、3周龄大鼠睾丸间质细胞群中均含有部分Leydig干细胞(Stem Leydig cells,SLCs),SLCs在体外培养过程中逐渐分化,表达3β-羟基类固醇脱氢酶,并产生睾酮。 展开更多
关键词 睾丸间质细胞 差速贴壁法 睾酮 3β-羟基类固醇 组织工程
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分枝杆菌HGMS2中类固醇C20-羟基脱氢酶的鉴定
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作者 明卓 胡青 +1 位作者 宋士奎 苏正定 《工业微生物》 CAS 2023年第4期170-178,共9页
分枝杆菌常被用作甾体药物中间体生产菌种,然而当前人们对其具体的甾醇降解机制仍然不是很清楚。为了获得C20-羟基甾药中间体,文章直接以RS为底物进行了转化,并通过对转化产物进行TLC、HPLC、LS-MS和核磁分析,初步确定分枝杆菌中存在类... 分枝杆菌常被用作甾体药物中间体生产菌种,然而当前人们对其具体的甾醇降解机制仍然不是很清楚。为了获得C20-羟基甾药中间体,文章直接以RS为底物进行了转化,并通过对转化产物进行TLC、HPLC、LS-MS和核磁分析,初步确定分枝杆菌中存在类固醇C20-羟基脱氢酶(1DHC)参与的代谢途径。同时,基于生物信息学和结构生物学,通过序列和结构比对分析,最终从分枝杆菌中鉴定出了一个与类固醇C20-羟基脱氢酶同源性很高的基因。将该基因在大肠杆菌中异源表达,并对其功能活性进行分析,证明该基因所编码的酶和类固醇C20-羟基脱氢酶具有相同的功能活性。文章首次从分枝杆菌中鉴定出一种类固醇C20-羟基脱氢酶,使研究者对分枝杆菌甾醇代谢机制有了更深入的理解,同时也为新型甾药中间体的制备以及分枝杆菌的改造奠定了理论基础。 展开更多
关键词 分枝杆菌 类固醇C20β-羟基 产物分析 17α-羟基-孕甾-4--3 20-二酮
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3β-羟基类固醇脱氢酶在甾体激素生成组织中的功能 被引量:5
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作者 王威仪 张彬 徐国恒 《生理科学进展》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期215-219,共5页
3β-羟基类固醇脱氢酶(3β-hydroxysteroid dehydrogenase,3β-HSD)是一类依赖于NAD+/NADP+接受质子的氧化还原酶。在胆固醇转化为类固醇激素中起限速酶作用,在体内广泛分布。3β-HSD催化环戊烷并多氢菲结构3号位CH-OH转化为C=O,是参与... 3β-羟基类固醇脱氢酶(3β-hydroxysteroid dehydrogenase,3β-HSD)是一类依赖于NAD+/NADP+接受质子的氧化还原酶。在胆固醇转化为类固醇激素中起限速酶作用,在体内广泛分布。3β-HSD催化环戊烷并多氢菲结构3号位CH-OH转化为C=O,是参与肾上腺糖皮质激素合成中唯一非细胞色素P450家族中的酶;3β-HSD催化孕烯醇酮生成孕酮、17α-羟孕烯醇酮转化为17α-羟孕酮、雄烯二醇生成睾酮等多步化学反应。3β-HSD通过参与细胞内甾体激素生成,进而在生殖系统中发挥功能。此外,3β-HSD在脑、脂肪组织中也有较强表达,本文就3β-HSD在甾体激素生成组织中的功能及其临床意义进行总结。 展开更多
关键词 3β-羟基类固醇 甾体激素生成组织 睾丸 脂肪组织 脂肪分解
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1例2-甲基3-羟基丁酰辅酶A脱氢酶缺陷症患儿的临床诊治 被引量:2
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作者 李莹莹 崔亚利 +4 位作者 王霞 戴维 蒋冬梅 张晓东 王泓 《四川生理科学杂志》 2017年第4期183-186,共4页
目的:通过对1例2-甲基3-羟基丁酰辅酶A脱氢酶缺陷症患儿的临床表现及检查结果的分析,提高对此类疾病的认识,为该病的及时诊断和治疗提供依据。方法:采用回顾性方法对我院收治的这名患儿的临床症状和体征、实验室常规检查结果、血、尿串... 目的:通过对1例2-甲基3-羟基丁酰辅酶A脱氢酶缺陷症患儿的临床表现及检查结果的分析,提高对此类疾病的认识,为该病的及时诊断和治疗提供依据。方法:采用回顾性方法对我院收治的这名患儿的临床症状和体征、实验室常规检查结果、血、尿串联质谱和气相质谱检查结果、X光胸片、彩超、头颅MR、脑电图以及诊疗情况进行回顾和分析。结果:患儿3岁,主要临床表现初期以腹泻、呕吐为主,后来出现嗜睡、意识障碍,气促、难以纠正的代谢性酸中毒等。头颅MRI显示双侧侧脑室轻度扩张,脑沟、脑裂稍增宽。脑电图检查结果为界线性幼儿期脑电图,额、中央区尖波数次发放。血串联质谱检查天冬氨酸等氨基酸升高,尿气相质谱2-甲基-3-羟基丁酸明显增高,但未发现甲基巴豆酰甘氨酸和2-甲基乙酰已酸的异常,基因检测结果为hadh2基因第4外显子p.R130C突变。结论:2-甲基3-羟基丁酰辅酶A脱氢酶缺陷症极为罕见,对有不明原因的难于纠正的代谢性酸中毒、高氨血症、或不明原因的精神萎靡、意识障碍等神经系统症状患儿应警惕该病,可送血或尿标本进行串联质谱、气相质谱及基因分析,以便早期诊断及治疗。 展开更多
关键词 遗传代谢病 2-甲基3-羟基丁酰辅A缺陷症 串联质谱技术 气相质谱技术
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不同醛脱氢酶对重组克雷伯氏菌生产3-羟基丙酸的影响
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作者 贾东旭 陈铁男 +3 位作者 周佳锋 牛坤 秦海彬 金利群 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2017年第8期15-21,共7页
PCR扩增Cupriavidus necator Gab D4和Azospirillum brasilense KGSADH醛脱氢酶基因,分别与经改造获得卡那霉素抗性的p UC19质粒(p UC19Kan)连接,再转化至Klebsiella pneumoniae DSM2026,获得重组菌KpKan/KGSADH和KpKan/Gab D4。经摇瓶... PCR扩增Cupriavidus necator Gab D4和Azospirillum brasilense KGSADH醛脱氢酶基因,分别与经改造获得卡那霉素抗性的p UC19质粒(p UC19Kan)连接,再转化至Klebsiella pneumoniae DSM2026,获得重组菌KpKan/KGSADH和KpKan/Gab D4。经摇瓶发酵,KpKan/KGSADH和KpKan/Gab D4的最高3-羟基丙酸(3-HP)产量分别为3.66与2.56 g/L,与未导入醛脱氢酶的K.pneumoniae对照菌相比,分别提高了352%与216%。对其他产物的研究表明,2株重组菌的1,3-丙二醇(1,3-PDO)的产量低于对照菌,而2,3-丁二醇(2,3-BD)和乙酸产量高于对照菌。该研究首次将C.necator Gab D4醛脱氢酶基因导入K.pneumoniae,并对比了KpKan/KGSADH与KpKan/Gab D4的3-HP产量,实验中确定的性能优良的发酵菌株为继续提高3-HP产量提供了帮助。 展开更多
关键词 克雷伯氏菌 甘油 3-羟基丙酸
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外源添加VB_(12)对肺炎克雷伯氏菌代谢3-羟基丙酸的影响
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作者 敖国旭 田甜 +1 位作者 葛菁萍 平文祥 《中国农学通报》 2024年第12期85-93,共9页
为了探究外源添加维生素B12(Vitamin B12,VB_(12))对Klebsiella pneumoniae HD79和K.pneumoniae HD79-T利用甘油还原途径生产3-羟基丙酸(3-hydroxypropionic acid,3-HP)的影响以及摸索VB_(12)对K.pneumoniae HD79和K.pneumoniae HD79-T... 为了探究外源添加维生素B12(Vitamin B12,VB_(12))对Klebsiella pneumoniae HD79和K.pneumoniae HD79-T利用甘油还原途径生产3-羟基丙酸(3-hydroxypropionic acid,3-HP)的影响以及摸索VB_(12)对K.pneumoniae HD79和K.pneumoniae HD79-T的阈值上限,将不同浓度(0.01、0.02、0.03、0.04、0.05 g/L)的VB_(12)添加到K.pneumoniae HD79及K.pneumoniae HD79-T的发酵培养基中,利用HPLC检测其底物消耗及产物产生情况、qRT-PCR检测还原途径相关基因的mRNA表达情况以及酶联免疫试剂盒检测代谢相关酶活性。结果表明,VB_(12)对K.pneumoniae HD79和K.pneumoniae HD79-T的阈值为0.01 g/L和0.03 g/L。与未添加VB_(12)相比,菌株K.pneumoniae HD79和K.pneumoniae HD79-T的3-HP产量分别提高了24.39%,8.86%;醛脱氢酶基因puuC表达量分别提高了2.49倍和1.68倍;ALDH、GDHt和PDOR的酶活力分别提高了50.24%、40.36%和18.29%,及30.49%、37.84%和13.56%。说明通过外源添加辅酶因子VB_(12)对肺炎克雷伯氏菌高产3-HP是可行策略。 展开更多
关键词 维生素B_(12) 肺炎克雷伯氏菌 3-羟基丙酸 基因puuC 甘油
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交联醇脱氢酶聚集体的制备及其在(R)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯合成中的应用 被引量:1
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作者 沙凤 顾金海 +1 位作者 许琳 严明 《生物加工过程》 CAS 2015年第6期24-29,共6页
基于基因组序列数据库挖掘新酶的技术,从白色念珠菌Candida albicans基因组中克隆了一条新型醇脱氢酶(CADH)基因,并在大肠杆菌Escherichia coli Rosetta(DE3)中表达。为克服游离酶稳定性差、不能重复使用的缺点,探索并优化了交联醇脱氢... 基于基因组序列数据库挖掘新酶的技术,从白色念珠菌Candida albicans基因组中克隆了一条新型醇脱氢酶(CADH)基因,并在大肠杆菌Escherichia coli Rosetta(DE3)中表达。为克服游离酶稳定性差、不能重复使用的缺点,探索并优化了交联醇脱氢酶聚集体(CLEAs-CA)的制备条件。结果表明:重组CADH对底物四氯乙酰乙酸乙酯(COBE)的比活力为1.8 U/mg,产物(R)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯((R)-CHBE)的对映体过量值大于99%。CLEAsCA沉淀剂选择为60%饱和度的(NH_4)_2SO_4,交联剂为10 mmol/L戊二醛。在固定化操作前,加入50 mmol/L异丙醇和0.1 mmol/L NAD^+对CADH催化活性位点、辅酶结合位点进行保护,CLEAs-CA的活力回收率提高了48.3%。将CLEAs-CA用于不对称合成(R)-CHBE,经过19次的重复使用,CLEAs-CA的活性仍保留有50%。 展开更多
关键词 (R)4氯-3-羟基丁酸乙酯 交联醇聚体 固定化
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17β-羟基类固醇脱氢酶3基因插入/缺失与公猪睾丸表型性状关联研究 被引量:1
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作者 闫海龙 高晔 +5 位作者 刘暖 王珂 户会娜 陈明月 吕晓燕 潘传英 《家畜生态学报》 北大核心 2020年第10期24-28,共5页
17β-羟基类固醇脱氢酶3(Hsd17b3)基因主要表达于哺乳动物睾丸间质细胞(LCs)中,是合成睾酮和维持雄性生殖功能的关键基因之一。为进一步推进猪产业的分子标记辅助育种,该研究探究Hsd17b3基因遗传变异位点与公猪睾丸表型性状的相关性,以... 17β-羟基类固醇脱氢酶3(Hsd17b3)基因主要表达于哺乳动物睾丸间质细胞(LCs)中,是合成睾酮和维持雄性生殖功能的关键基因之一。为进一步推进猪产业的分子标记辅助育种,该研究探究Hsd17b3基因遗传变异位点与公猪睾丸表型性状的相关性,以期丰富该基因多态位点与公猪繁殖的遗传关联。利用PCR技术在大白猪(n=257)和长白猪(n=62)中检测到Hsd17b3基因第2内含子和第4内含子的两个indel位点,通过琼脂糖凝胶电泳及测序技术验证了该基因L3-10-bp和L11-11-bp的indel突变。关联分析结果表明:L3-10-bp的indel位点与40日龄长白猪的睾丸长轴长、睾丸短轴长和睾丸重均呈显著相关(P<0.01)。该结果与雄性睾丸的早期发育阶段和初始快速发育阶段睾丸发育过程相吻合,提示该indel位点可作为猪标记辅助选择的潜在DNA标记,为Hsd17b3基因在猪遗传育种中的研究和应用提供指导。 展开更多
关键词 17β-羟基类固醇3基因 插入/缺失 繁殖性状 关联分析
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过表达醛脱氢酶对Klebsiella pneumoniae合成3-羟基丙酸的影响
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作者 李莎 曹宁 +1 位作者 葛喜珍 田平芳 《北京化工大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期72-75,共4页
克隆了肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella pneumoniae)及大肠杆菌(Escherichia coli)各自的醛脱氢酶基因puuC和aldH,获得了重组肺炎克雷伯氏菌K.p(pET-PK-puuC)和K.p(pET-PK-aldH),这两株菌均能以甘油为唯一碳源生产3-羟基丙酸(3-HP)。发酵实... 克隆了肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella pneumoniae)及大肠杆菌(Escherichia coli)各自的醛脱氢酶基因puuC和aldH,获得了重组肺炎克雷伯氏菌K.p(pET-PK-puuC)和K.p(pET-PK-aldH),这两株菌均能以甘油为唯一碳源生产3-羟基丙酸(3-HP)。发酵实验结果显示K.p(pET-PK-puuC)的甘油转化率和单位菌体产量与野生菌相比分别提高了135%和18%;K.p(pET-PK-aldH)的3-HP产量达1.43 g/L,是K.p(pET-PK-puuC)的1.8倍,比野生菌提高了81%,甘油转化率和单位菌体产量比野生菌分别提高了150%和88%。 展开更多
关键词 肺炎克雷伯氏菌 3-羟基丙酸
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DEHP对3β-羟类固醇脱氢酶表达水平的影响 被引量:2
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作者 王利 彭鹏 +2 位作者 徐新云 袁建辉 龙鼎新 《癌变.畸变.突变》 CAS CSCD 2017年第6期445-449,共5页
目的:研究邻苯二甲酸二(2-乙基己)酯(DEHP)对MCF-7细胞中3β-羟类固醇脱氢酶(3β-HSD)表达的影响。方法:采用不同浓度(0.05、0.1、0.2、0.4、0.8 mmol/L)DEHP对体外培养的MCF-7细胞分别染毒12、24和48 h,或同一浓度(0.8 mmol/L)染毒不... 目的:研究邻苯二甲酸二(2-乙基己)酯(DEHP)对MCF-7细胞中3β-羟类固醇脱氢酶(3β-HSD)表达的影响。方法:采用不同浓度(0.05、0.1、0.2、0.4、0.8 mmol/L)DEHP对体外培养的MCF-7细胞分别染毒12、24和48 h,或同一浓度(0.8 mmol/L)染毒不同时间(3、6、12、24、48 h)后,荧光定量PCR检测各组MCF-7细胞3β-HSD m RNA表达水平,Western blot检测3β-HSD蛋白表达水平。结果:DEHP 0.1~0.8 mmol/L分别染毒细胞12~48 h,3β-HSD m RNA表达水平均较对照组升高,差异有统计学意义(P<0.01);DEHP0.05 mmol/L染毒细胞48 h,3β-HSD m RNA表达水平比对照组升高,差异有统计学意义(P<0.05)。DEHP 0.8 mmol/L染毒细胞6~48h,3β-HSD m RNA表达水平均较对照组升高,差异有统计学意义(P<0.01)。DEHP 0.2~0.8 mmol/L染毒细胞24 h,3β-HSD蛋白表达水平较对照组升高,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论:DEHP可引起3β-HSD m RNA和蛋白表达水平升高,推测DEHP可能通过影响类固醇激素合成过程中3β-HSD表达水平的变化,从而产生生殖毒性作用。 展开更多
关键词 邻苯二甲酸二(2-乙基己)酯 3β-羟基类固醇 基因表达 生殖毒性
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影响睾丸3β-羟基类固醇脱氢酶的内分泌干扰物及其作用机制进展
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作者 潘承双 王佩玉 +1 位作者 费前进 葛仁山 《中华生殖与避孕杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期602-609,共8页
睾丸3β-羟基类固醇脱氢酶(3β-hydroxysteroid dehydrogenase,3β-HSD)是一种类固醇生成酶,催化3β-羟基类固醇转化为3-酮类固醇。目前已克隆了人类的两种不同亚型,HSD3B1和HSD3B2;其中,HSD3B2位于睾丸中,表达3β-HSD2。HSD3B2是一种... 睾丸3β-羟基类固醇脱氢酶(3β-hydroxysteroid dehydrogenase,3β-HSD)是一种类固醇生成酶,催化3β-羟基类固醇转化为3-酮类固醇。目前已克隆了人类的两种不同亚型,HSD3B1和HSD3B2;其中,HSD3B2位于睾丸中,表达3β-HSD2。HSD3B2是一种双底物酶,可与辅因子NAD^(+)和3β-类固醇结合。许多内分泌干扰物,包括工业化合物(邻苯二甲酸盐、双酚类、全氟烷基物质和二苯甲酮类)、杀虫剂和杀菌剂(有机氯杀虫剂和有机锡)、食品添加剂(丁基羟基苯甲醚、白藜芦醇、棉酚、黄酮和异黄酮、类姜黄素和查尔酮类)和药物(依托咪酯、甲羟孕酮和酮康唑)可抑制睾丸中3β-HSD的活性,可能干扰雄激素合成。本文总结了3β-HSD的独特睾丸亚型,其基因、化学、亚细胞、位置以及直接抑制睾丸3β-HSD的内分泌干扰物及其抑制模式,期望为临床研究雄激素调控方法及以雄激素为靶点的药物研发提供参考。 展开更多
关键词 3β-羟基类固醇 睾酮生成 类固醇生成 环境内分泌干扰物 多酚 邻苯二甲酸盐
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山羊胎儿肝脏3β—羟基甾体脱氢酶/Δ^4—Δ^5异构酶(3β—HSD)cDNA的克隆
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作者 邹胜伟 陈清轩 《Developmental and Reproductive Biology》 2001年第1期31-36,共6页
3β-羟基甾体脱氢酶/Δ^4-Δ^5异构酶(3β-HSD)是哺乳动物体内广泛存在的一类参与甾体激素代谢的氧化还原酶,且具有异构酶活性。3β-HSD催化3β-羟基甾体的脱氢及随后的Δ^5-3-甾酮产物的异构化反应,以产生α,β-非饱和酮,... 3β-羟基甾体脱氢酶/Δ^4-Δ^5异构酶(3β-HSD)是哺乳动物体内广泛存在的一类参与甾体激素代谢的氧化还原酶,且具有异构酶活性。3β-HSD催化3β-羟基甾体的脱氢及随后的Δ^5-3-甾酮产物的异构化反应,以产生α,β-非饱和酮,3β-HSD在甾体激素代谢中起着重要作用。本文以胎羊肝为材料,首次获得了山羊胎肝的3β-HSD的cDNA,并进行了3β-HSD在肝脏组织的表达分析。参照牛,啮齿类的3β-HSD CDNA的高同源区设计引物,以2-3月雌性胎羊肝脏mRNA为模板,经RT-PCR获得416 bp cDNA片段(Fig.a),然后以其为探针筛选胎羊肝λgt10cDNA文库最后获得3-端缺失的3β-HSD cDNA克隆,并推导了其氨基酸序列(Fig.s)。同源分析表明山羊胎肝3β-HSD的氨基酸序列与牛卵巢,人I型3β-HSD的同源性分别为96%,78%和73%(Fig.3),提取雌性胎羊,雄性胎羊及母体羊肝脏的总RNA,同时做RT-PCR,表明3β-HSD在不同个体肝脏中的表达存在差异,雌性胎羊和母体孕羊肝脏中都有3β-HSD的表达,而在雄性胎羊肝脏中,则未检测到表达信号(Fig.4)。 展开更多
关键词 山羊 胎儿 肝脏 3β-羟基甾体 CDNA 克隆
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洋地黄毒苷合成途径3β-羟基类固醇脱氢酶基因克隆及功能分析
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作者 韩洋 夏梦 +2 位作者 张逸风 苏平 黄璐琦 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期370-378,共9页
洋地黄毒苷作为中药洋地黄中重要的次生代谢产物,是临床中最常用的强心药物之一。3β-羟基类固醇脱氢酶(3βHSD)是洋地黄毒苷生物合成途径酶,属于短链脱氢酶/还原酶(SDR)家族,起到氧化和异构前体化合物甾醇的作用,参与强心苷类化合物的... 洋地黄毒苷作为中药洋地黄中重要的次生代谢产物,是临床中最常用的强心药物之一。3β-羟基类固醇脱氢酶(3βHSD)是洋地黄毒苷生物合成途径酶,属于短链脱氢酶/还原酶(SDR)家族,起到氧化和异构前体化合物甾醇的作用,参与强心苷类化合物的生物合成。该研究从洋地黄中首次克隆得到2个3βHSD基因,实验结果显示:Dp3βHSD1开放阅读框为780 bp,编码259个氨基酸;Dp3βHSD2开放阅读框为774 bp,编码257个氨基酸。Dp3βHSD1/2均具有TGxxxA/GxG辅因子结合位点和YxxxK催化位点基序,含有SDR酶的活性位点和NAD(P)结合位点。通过体外酶促试验证实Dp3βHSD1/2均能催化孕烯醇酮生成洋地黄毒苷前体化合物黄体酮,且Dp3βHSD1较Dp3βHSD2具有更强的催化能力。基因表达水平分析表明Dp3βHSD1基因在叶中的表达水平显著高于Dp3βHSD2,而洋地黄毒苷在叶中特异性富集,基于以上结果推测洋地黄毒苷生物合成途径中孕烯醇酮脱氢生成黄体酮过程主要由Dp3βHSD1催化完成。该研究成功解析了功能性3β-羟基类固醇脱氢酶,为进一步解析洋地黄中强心苷类化合物的生物合成途径奠定基础。 展开更多
关键词 洋地黄 洋地黄毒苷 3β-羟基类固醇 功能鉴定
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关于3β-羟基类固醇脱氢酶与代谢性疾病的相关研究进展
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作者 包余婕 丁波 马建华 《国际内分泌代谢杂志》 2024年第1期23-26,共4页
3β-羟基类固醇脱氢酶(3β-hydroxysteroid dehydrogenase,3β-HSD)参与多种甾体激素的合成,是影响代谢性疾病发生发展的重要生物标志物,以3β-HSD作为治疗靶点的药物已经成为了近年的研究热点。此文就3β-HSD在糖尿病、肥胖、高血压、... 3β-羟基类固醇脱氢酶(3β-hydroxysteroid dehydrogenase,3β-HSD)参与多种甾体激素的合成,是影响代谢性疾病发生发展的重要生物标志物,以3β-HSD作为治疗靶点的药物已经成为了近年的研究热点。此文就3β-HSD在糖尿病、肥胖、高血压、多囊卵巢综合征以及非酒精性脂肪肝中潜在生理病理机制及临床应用前景的最新研究进展进行总结。 展开更多
关键词 3β-羟基类固醇 代谢性疾病 类固醇激素
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puuC基因过表达对肺炎克雷伯氏菌发酵甘油生产3-HP的影响
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作者 涂绣军 田甜 葛菁萍 《黑龙江大学自然科学学报》 CAS 2024年第4期443-452,共10页
为获得高产3-羟基丙烯酸(3-hydroxypropionic acid,3-HP)的基因重组菌,从肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella pneumoniae,K.pneumoniae)HD79中克隆乙醛脱氢酶基因puuC,进行同源过表达,探究其对K.pneumoniae HD79甘油还原途径中乙醛脱氢酶(Aldehy... 为获得高产3-羟基丙烯酸(3-hydroxypropionic acid,3-HP)的基因重组菌,从肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella pneumoniae,K.pneumoniae)HD79中克隆乙醛脱氢酶基因puuC,进行同源过表达,探究其对K.pneumoniae HD79甘油还原途径中乙醛脱氢酶(Aldehyde dehydrogenase,ALDH)活性与3-HP产量的影响。结果表明,成功构建了同源过表达puuC的重组菌株K.pneumoniae HD79-T,过表达puuC基因后提高了K.pneumoniae HD79的3-HP生产能力。K.pneumoniae HD79-T的3-HP最高产量为(2.05±0.03)g·L^(-1),比K.pneumoniae HD79((1.47±0.02)g·L^(-1))提高了39.46%。K.pneumoniae HD79-T中puuC基因、甘油脱水酶基因(dhaB)和1,3-丙二醇氧化还原酶基因(dhaT)的相对表达量较K.pneumoniae HD79分别提高94.35、1.72和1.35倍。K.pneumoniae HD79-T中ALDH、甘油脱水酶(Glycerol dehydratase,GDHt)和1,3-丙二醇氧化还原酶(1,3-propanediol oxidoreductase,1,3-PDOR)的酶活性相比,K.pneumoniae HD79分别提高了27.40%、18.85%和5.10%。本研究构建的K.pneumoniae HD79-T提高了甘油还原途径关键酶ALDH的酶活性,是高效利用甘油发酵生产3-HP的前景菌株。 展开更多
关键词 肺炎克雷伯氏菌 3-羟基丙酸 乙醛 过表达
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光学纯(4S,5R)-4-甲基-5-羟基-3-羰基己酸特丁酯的化学酶促合成 被引量:1
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作者 吉爱国 Michael Mueller +2 位作者 Michael Wolberg Werner Hummel Christian Wandreyb 《有机化学》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2002年第12期1009-1012,共4页
采用化学方法合成了 4 甲基 3,5 二羰基己酸特丁酯 .以Lactobacillusbrevis醇脱氢酶为生物催化剂 ,选择性地将 4 甲基 3,5 二羰基己酸特丁酯还原为 (4S ,5R) 4 甲基 5 羟基 3 羰基己酸特丁酯 (99.2 %ee,syn∶anti=97∶3) .
关键词 光学纯 (4S 5R)-4-甲基-5-羟基-3-羰基己酸特丁酯 化学促合成 Lactobacillus brevis醇 药物中间体
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