调神益肾针法对更年期大鼠卵巢、肾上腺皮质中3β-羟类固醇脱氢酶的影响

目的:研究调神益肾针法对更年期大鼠卵巢、肾上腺中3β-羟类固醇脱氢酶(3β-HSDH)的影响。方法:建立自然的更年期大鼠模型,实验动物包括青年组、更年组、针刺组,采用细胞酶化学技术,辅以计算机图像分析,观测卵巢、肾上腺中阳性物质总面积、积分光度值。结果:更年组大鼠卵巢窦状卵泡及成熟黄体细胞中3β-HSDH含量或活性明显降低,间质腺及肾上腺皮质束状带、网状带细胞中该酶的含量或活性仍维持正常。经针刺干预后,上述部位该酶的含量或活性均有显著提高。结论调神益肾针法能增加卵巢、肾上腺中雌激素合成关键酶的含量或活性,这可能是针刺提升体内雌激素水平的物质基础之一。

3-羟酰基辅酶A脱氢酶在大肠杆菌中的表达及抗血清的制备

目的:克隆并在大肠杆菌中表达3-羟酰基辅酶A脱氢酶(3-hydroxyacyl-CoA dehydrogenase,HCDH)并制备其抗血清。方法:通过PCR方法扩增HCDH基因片段,经DNA测序证实后克隆到原核表达载体pMAL-P2X,重组质粒转化大肠杆菌DE3,IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析表达结果,经麦芽糖树脂亲和纯化的蛋白皮下注射免疫獭兔,琼扩和ELISA检测抗血清的效价,Western blot检测其特异性。结果:PCR扩增得到786bp的目的片段,序列测定证实与GeneBank上登录的序列一致;成功构建了HCDH基因片段的原核表达载体;在详细探索表达条件的基础上,成功诱导HCDH的表达,并制备了相应的抗血清。结论:检测HCDH蛋白在表达水平上的变化及为HCDH基因表达调控的进一步研究奠定了基础。

家蚕3-羟酰辅酶A脱氢酶基因全长cDNA克隆及其在质型多角体病毒感染家蚕的差异表达

家蚕质型多角体病毒(Bombyx mori cytoplasmic polyhedrosis virus,BmCPV)是家蚕的重要病毒病原之一,往往给养蚕业生产造成极大危害。我们以前的研究运用基因芯片技术在感染质型多角体病毒的家蚕中肠中鉴定出一个差异表达的3-羟酰辅酶A脱氢酶蛋白基因(Bombyx mori3-hydroxyacyl-CoA dehyrogenase protein gene-Bm3HAD)。本研究利用cDNA末端快速扩增技术(RACE)克隆了该基因,其全长cDNA序列为1168bp,包含一个83bp5'端非翻译区序列(5'-UTR)、一个930bp的开放阅读框(ORF)和一个155bp的3'端非翻译区序列(3'-UTR);基因结构分析发现该基因由5个外显子和4个内含子组成。RT-PCR结果显示该基因在家蚕中肠、脂肪体、血液、丝腺及生殖体中均有表达。荧光定量PCR结果表明该基因在BmCPV感染初期为上调表达,随着病毒感染的进展,该基因的表达水平逐渐降低,并转变为下调表达。研究结果为进一步研究BmCPV对家蚕致病的分子机制提供了有益的信息。

复方麦芽丸对多囊卵巢综合征模型大鼠3-β-羟甾脱氢酶、细胞色素P450酶表达的影响

目的研究复方麦芽丸(CMP)对多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠3-β-羟甾脱氢酶(3-β-HSD)、细胞色素P450酶(CYP450)表达的影响,探讨其可能的作用机制。方法 9日龄SD大鼠于颈背部皮下注射睾丸酮建立PCOS模型,随机分为模型组,阳性对照组和CMP低、中、高剂量组(分别相当于丸药量3.15、6.3、12.6 g·kg^(-1))(n=9),另设正常组(n=10)。CMP低、中、高剂量组按10 m L·kg^(-1)分别灌以相应浓度的中药煎剂,阳性对照组灌以炔雌醇环丙孕酮片水溶液,正常组和模型组均灌以等量的蒸馏水。观察大鼠动情周期及卵巢大体形态变化,运用免疫组化、Western blot、RT-q PCR测定卵巢组织3-β-HSD、CYP450的蛋白和m RNA表达。结果 CMP可以降低PCOS模型大鼠3-β-HSD表达水平(P<0.01),升高模型大鼠CYP450表达水平(P<0.01),均以高剂量组的作用效果最佳。结论 3-β-HSD和CYP450共同参与了PCOS模型大鼠卵巢的激素调节;CMP治疗PCOS的机制可能是通过调节卵巢组织3-β-HSD、CYP450的表达水平实现的。

17β-HSD3抑制剂抗前列腺癌活性及急性毒性的研究

目的探讨17β-羟基类固醇脱氢酶3(17β-HSD3)抑制剂的抗前列腺癌活性、药代动力学及其急性毒性。方法取对数生长期人雄激素依赖性前列腺癌LNCaP细胞,设置空白对照组(Con组)、姜黄素组(Cur组,Cur 150µmol/L)、雄激素受体(AR)抑制剂组(AR inhibitor组,AR抑制剂5µmol/L)和姜黄素类似物H7组(H7组,H7150µmol/L),分组处理后采用xCELLience RTCA DP细胞分析仪检测各组细胞活性、流式细胞术检测细胞凋亡率、Western blot法检测细胞中Caspase-3、AR蛋白表达。C57小鼠32只,采用随机数字表法分成4组(n=8),分别为空白对照组和姜黄素类似物H7高、中、低剂量组。用1%羧甲基纤维素钠(CMC-Na)溶解H7(100、50、25 mg/kg),每天灌胃1次,空白对照组小鼠灌胃1%CMC-Na,观察小鼠有无死亡及异常现象,14 d后取材,苏木素-伊红(HE)染色,观察肝脏和肾脏的病理形态学变化。SD大鼠10只,用1%CMC-Na溶解H7(5 mg/kg)灌胃后,高效液相色谱仪(HPLC)检测血药浓度,分析药代动力学参数。另取SD雄性大鼠10只,H7(5 mg/kg)灌胃30 min后,HPLC检测大鼠脑、肝、脾、肺、小肠、胃、肾、心和睾丸中药物浓度,考察药物组织分布。结果与Con组比较,Cur组、AR inhibitor组和H7组LNCaP细胞的细胞指数(CI值)显著下降,凋亡率明显升高,Caspase-3蛋白表达水平明显升高,而AR蛋白表达水平降低(P<0.05);H7组凋亡率较Cur组和AR inhibitor组明显升高(P<0.05)。连续灌胃H714 d,小鼠未出现活动增加、流涎、抽搐、昏迷等异常现象。与Con组相比,小鼠肝脏和肾脏未见明显的病理形态学变化。药代动力学参数结果显示,测出血药浓度-时间曲线下面积(AUC)为(557.31±36.12)mg/(L·h);峰浓度(Cmax)为(36.92±1.29)mg/L;最高峰时间(t_(max))为2 h;消除半衰期(t_(1/2))为(22.13±1.74)h。H7在小肠中的浓度约是脑组织中的5000倍。结论H7作为17β-HSD3抑制剂,具有明显抗激素依赖性前列腺癌的活性和良好的药代动力学参数,无明显的急性毒性作用,以胃肠吸收为主,具有进一步研究开发前景。

长链脂肪酸氧化酶LCHAD胎盘表达与早发型重度先兆子痫的研究

目的：探讨线粒体长链脂肪酸氧化酶-长链-3-羟酰基辅酶A脱氢酶（10ngchain3-hydroxyacyl-CoAdehydrogenase，LCHAD）在重度先兆子痫（severepreeclampsia，S-PE）不同发病时期中的作用。方法：用免疫组化SP法，检测70例重度先兆子痫不同发病时期的伴或不伴有肝损害的胎盘组织中LCHAD蛋白的表达特点，并与54例正常妊娠早、中、晚期的绒毛和胎盘组织比较。统计学方法采用t检验。结果：正常妊娠和重度先兆子痫胎盘组织均有LCHAD表达。正常胎盘组织LCHAD表达强度随妊娠孕周的增加逐渐降低，妊娠晚期的表达强度较妊娠早期明显降低，差异有显著性（P〈0．05）。发病孕周小于28周的重度先兆子痫组LCHAD表达强度明显低于对照组，差异有显著性（P=0．019）。孕28～32周发病的重度先兆子痫伴有肝损害组LCHAD的表达强度明显低于对照组，差异有显著性（P=0．010）；无肝损害组LCHAD表达强度降低，但与相同孕周对照组比较，差异无显著性（P=0．093）。大于32孕周发病的重度先兆子痫各组LCHAD表达强度与对照组比较无明显变化。结论：LCHAD在正常妊娠及重度先兆子痫胎盘组织中均有明确表达，进一步揭示胎盘的发生和发展需要脂肪酸氧化供能，对维持胎盘正常功能和保证胎儿正常生长发育可能起重要作用。脂肪酸氧化代谢异常与早发型重度先兆子痫尤其是伴有肝损害有关。

粘虫飞行过程中四种相关酶的活性变化

对3日龄粘虫雌蛾吊飞过程中4种相关酶3-羟酰辅酶A脱氢酶(HOAD)、3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)、3-磷酸甘油脱氢酶(GDH)和乳酸脱氢酶(LDH)的研究结果表明,在室内条件下,粘虫在吊飞过程中其能量代谢有以下特点: 在吊飞的初始5 min,所有与糖代谢和脂肪代谢相关的酶活性都快速升高,这段时期脂肪代谢的酶活性也完全被活化,HOAD活性明显增强;但在随后的5～60 min持续吊飞期间与能量代谢有关的酶活性都有所下降,表明此时飞行活性趋于平稳.飞行中的粘虫具有极高的有氧代谢能力,也具备一定的无氧代谢能力.吊飞过程中HOAD∶GAPDH大于1,说明粘虫飞行过程中能源物质利用属于混合型,但动用脂肪比糖类要多.

卡前列甲酯合并酪氨酰肼对小鼠的抗早孕作用

目的观察卡前列甲酯（ＰＧ０５）合并酪氨酰肼对小鼠抗早孕作用。方法小鼠于妊娠第７～９天给药，观察妊娠率；用放射免疫法测定血清孕酮水平。结果小鼠口服９０ｍｇ／ｋｇ酪氨酰肼（３ｄ）能显著增强皮下注射０．２ｍｇ／ｋｇＰＧ０５（２ｄ）的抗早孕作用，并协同ＰＧ０５降低孕小鼠血清孕酮的水平。３０μｇ／ｍｌ酪氨酰肼对大鼠黄体细胞３β－ＨＳＤ的活性有明显的抑制作用。口服１５０ｍｇ／ｋｇ酪氨酰肼（３ｄ）对假孕大鼠子宫孕激素受体数目无显著影响。结论酪氨酰肼抑制体内孕酮的生成可能是其协同ＰＧ０５抗早孕作用的主要机制。

胆汁酸胆碱酯酶测定对慢性无症状乙型肝炎携带者的临床应用

目的通过对慢性无症状乙型肝炎携带者(ASC)血清总胆汁酸(TBA)、胆碱酯酶(CHE)的分析,为其治疗提供依据。方法HBsAg用酶联免疫法,TBA用3α羟类固醇脱氢酶(3αHSD)酶循环法,CHE用丙酰硫代胆碱连续监测法。结果在512例HBsAg阳性体检者实验组中,TBA为(15.87±7.34)μmol/L,CHE为(4.86±1.88)kU/L;对照组TBA为(8.85±3.34)μmol/L,CHE为(6.99±1.26)kU/L。两组间存在显著性差异(P<0.001)。并且,实验组TBA高于正常参考值者62例,占12.1%;CHE低于正常参考值者19例,占3.71%。结论ASC应定期作包括TBA、CHE等多项指标检测,并进行综合分析、合理治疗。仍需治疗。所以对ASC的治疗应结合TBA、CHE等多指标检测结果进行综合分析,以便合理治疗。

LCHAD基因表达及甲基化与病理妊娠状态相关性研究

目的:探讨长链3-羟酰基辅酶A脱氢酶(LCHAD)基因表达及甲基化与病理妊娠状态的相关性。方法:选取早发重度子痫前期病人18例(A组)、溶血、肝酶升高和血小板减少(HELLP)综合征15例(B组)、抗磷脂综合征17例(C组),同时选取正常妊娠女性20名作为对照组。比较各组一般资料、LCHAD基因启动子区甲基化及LCHAD mRNA表达水平,分析LCHAD基因启动子区甲基化水平与mRNA表达相关性。结果:A、B组分娩孕周低于对照组(P<0.05),C组分娩孕周高于B组(P<0.05);A、B组收缩压、舒张压及24 h尿蛋白水平均高于对照组(P<0.05);B组丙氨酸氨基转移酶和血肌酐水平均高于对照组(P<0.05)。A组LCHAD基因-899、-853、-615、-984、-774、-727及-579位点甲基化水平高于对照组,-853位点甲基化水平高于B组,-899、-853及-615位点甲基化水平高于C组(P<0.05);B组-899、-853、-774及-615位点甲基化水平高于对照组,-899、-853及-615位点甲基化水平高于C组(P<0.05)。A组、B组、C组LCHAD mRNA表达水平均低于对照组(P<0.05)。A组LCHAD基因-899、-853、-727、-615及-579位点甲基化水平与mRNA表达水平均呈负相关关系(P<0.05);B组LCHAD基因-899、-853及-615位点甲基化水平与mRNA表达水平均呈负相关关系(P<0.05);C组和对照组LCHAD基因全部位点甲基化水平与mRNA表达水平均无明显相关关系(P>0.05)。结论:合并早发重度子痫前期和HELLP综合征孕妇LCHAD基因甲基化修饰处于高水平,且与mRNA表达密切相关。

雷公藤内酯醇药物血清对体外培养的大鼠肾上腺皮质细胞分泌功能的影响

目的:研究雷公藤内酯醇药物血清对体外培养的大鼠肾上腺皮质细胞分泌功能的影响。方法:将SD大鼠30只随机分成对照组、泼尼松组和低、中、高剂量雷公藤内酯醇组,相应药物灌胃7d制备药物血清。分离正常大鼠肾上腺皮质细胞,分别加入药物血清常规培养48h后,采用免疫组织化学法观察增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)的表达,并计算PCNA阳性细胞数;透射电子显微镜观察肾上腺皮质细胞的超微结构;酶联免疫吸附测定法检测细胞培养上清液中皮质酮水平;实时荧光定量聚合酶链式反应法检测肾上腺皮质细胞3β-羟基类固醇脱氢酶(3β-hydroxysteroi ddehydrogenase,3β-HSD)mRNA表达水平。结果:各个浓度雷公藤内酯醇药物血清组肾上腺皮质细胞培养上清液中皮质酮水平及细胞中3β-HSDmRNA表达水平较对照组明显升高;中、高剂量雷公藤内酯醇组PCNA阳性细胞比率高于对照组(P<0.05),泼尼松组上清液中皮质酮水平、细胞中3β-HSDmRNA表达水平和PCNA阳性细胞比率均低于对照组(P<0.05)。结论:雷公藤内酯醇对体外培养的大鼠肾上腺皮质细胞有刺激作用,可以促使肾上腺皮质细胞分泌皮质酮。

妊娠合并HELLP综合征发病机理的新进展

HELLP综合征是产科严重并发症之一 ,它可能是一种独立的疾病 ,也可能是先兆子痫的严重并发症形式 ,其发病机理目前尚不清楚。现将HELLP综合征发生的有关因素进行综述 。

ABAD/HADH Ⅱ在喉鳞状细胞癌与声带息肉组织中的表达

目的：检测喉癌组织中ABAD／HADHⅡ的表达，探讨ABAD／HADHⅡ在喉鳞状细胞癌增殖中的作用。方法：选用福建医科大学附属第一医院2002—2005年的27例喉癌手术标本及12例声带息肉手术标本，采用免疫组化检测ABAD／HADHⅡ的表达及分布情况。结果：ABAD／HADHⅡ主要表达在鳞状细胞癌的细胞浆，在生长活跃的细胞表达较高；ABAD／HADHⅡ在喉鳞状细胞癌组织中的表达比在息肉组织中的表达高（P〈0．05）。结论：ABAD／HADHⅡ在喉癌组织中表达较正常组织高，与喉鳞状细胞癌的增殖有一定的关系。

HELLP综合征的研究进展

HELLP综合征是妊娠期高血压疾病的严重并发症,常危及母婴生命,是导致孕产妇及围生儿死亡的原因之一。近年来,国内外学者对其发病机制进行了大量研究,有母胎免疫失衡,血小板聚集与消耗,血管内皮功能障碍及先天性固有脂肪酸氧化失调等学说,但其发病机制目前尚未阐明,可能是子痫前期或子痫的严重并发症,也可能是一种独立的疾病。

子痫前期对滋养细胞脂肪酸氧化的影响及其与p38MAPK信号通路的相关性

目的 探讨重度子痫前期对胎盘滋养细胞线粒体长链脂肪酸氧化酶——长链三羟基酰基辅酶A脱氢酶（LCHAD）表达的影响及其与p38丝裂原活化蛋白激酶（p38 MAPK）信号通路的相关性.方法 体外培养胎盘滋养细胞,分别用早发型重度子痫前期、晚发型重度子痫前期、重度子痫前期伴发HELLP综合征及正常妊娠妇女的血清刺激胎盘滋养细胞（分别命名为早发组、晚发组、HELLP组、正常对照组）,每组再分别加入DMEM/F12培养基、还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶抑制剂（NADPH-Ⅰ）和p38MAPK抑制剂（p38-Ⅰ）处理细胞.采用实时荧光定量PCR技术和蛋白印迹法检测各组滋养细胞LCHAD mRNA和蛋白的表达.结果 （1）LCHAD mRNA的表达：正常对照组＋培养基、早发组＋培养基、早发组＋ NADPH-Ⅰ、早发组＋p38-Ⅰ、晚发组＋培养基、晚发组＋NADPH-Ⅰ、晚发组＋p38-Ⅰ、HELLP组＋培养基、HELLP组＋NADPH-Ⅰ、HELLP组＋p38-Ⅰ滋养细胞LCHAD mRNA的相对表达量分别为1.00±0.03、0.14±0.08、0.95±0.20、1.43±1.02、0.37±0.18、1.51 ±0.36、1.60±0.31、0.10 ±0.04、0.49 ±0.10、0.44±0.21.早发组＋培养基、晚发组＋培养基、HELLP组＋培养基与正常对照组＋培养基比较,LCHAD mRNA的相对表达量均明显降低,分别比较,差异均有统计学意义（P＜0.05）;与正常对照组比较,晚发组＋ NADPH-Ⅰ、晚发组＋p38-Ⅰ LCHADmRNA的相对表达量均有明显升高,差异均有统计学意义（P＜0.05）,而HELLP组LCHAD mRNA的相对表达量均有明显降低,差异也有统计学意义（P＜0.05）.（2） LCHAD蛋白的表达：正常对照组＋培养基、早发组＋培养基、早发组＋ NADPH-Ⅰ、早发组＋p38-Ⅰ、晚发组＋培养基、晚发组＋NADPH-Ⅰ、晚发组＋ p38-Ⅰ、HELLP组＋培养基、HELLP组＋NADPH-Ⅰ、HELLP组＋p38-Ⅰ组LCHAD蛋白的相对表达量分别为19.4±2.2、10.7±1.1、17.9±3.3、19.1 ±2.9、16.4±2.3、20.3±2.3、20.9 ±4.3、12.4±2.3、17.6±2.6、17.7 ±2.0.与正常对照组比较,早发组＋培养基、晚发组＋培养基及HELLP组LCHAD蛋白的相对表达量均明显降低,分别比较,差异均有统计学意义（P＜0.05）,而早发组＋NADPH-Ⅰ、早发组＋p38-Ⅰ、晚发组＋NADPH-Ⅰ、晚发组＋p38-Ⅰ LCHAD蛋白的相对表达量无明显变化（P＞0.05）.早发组、晚发组、HELLP组中,NADPH-Ⅰ亚组、p38-Ⅰ亚组与培养基亚组比较,LCHAD蛋白的相对表达量均有明显升高,差异均有统计学意义（P＜0.05）.结论 重度子痫前期对胎盘滋养细胞中的脂肪酸氧化代谢有一定的影响,尤其以HELLP综合征最为明显.NADPH-Ⅰ、p38-Ⅰ能缓解早、晚发型重度子痫前期和HELLP综合征中的脂肪酸氧化代谢障碍,p38MAPK信号通路可能参与了该过程.

低氧对雄性大鼠睾酮分泌及其合成相关蛋白和酶表达的影响

目的研究低氧对雄性大鼠睾酮分泌及其合成相关蛋白和酶表达的影响。方法36只雄性Wistar大鼠随机分为常氧、低氧5 d、低氧15 d和低氧30 d组。运用放射免疫测定法和反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法,研究了模拟海拔5000 m高度低氧5 d、15 d、30 d对雄性Wistar大鼠血中睾酮浓度的影响,以及对睾丸组织中睾酮合成相关的类固醇急性调节蛋白(STAR)、胆固醇侧链裂解酶(P450scc)以及3β-羟甾脱氢酶(3β-HSD)mRNA表达的影响。结果模拟海拔5000 m高度低氧15 d,大鼠血中睾酮浓度显著高于常氧组(P＜0．05),低氧30 d,大鼠血中睾酮浓度显著低于对照组(P＜0．05);低氧不引起雄性大鼠睾丸组织StAR mRNA表达改变;低氧15 d、30 d,大鼠睾丸组织P450scc mRNA和3β-HSD mRNA表达分别显著低于常氧组(P＜0．05)。结论慢性低氧抑制了睾酮的分泌,并抑制了睾丸组织睾酮合成相关酶P450scc mRNA和3β-HSD mRNA的表达。低氧15 d大鼠血中睾酮浓度升高的机制需进一步研究。

运动对ApoE基因敲除小鼠骨骼肌脂代谢及PPAR-α mRNA表达的影响

目的 观察运动对胰岛素抵抗小鼠骨骼肌过氧化物酶体增殖物激活受体-α（PPAR-α）及靶基因脂酰辅酶A氧化酶（ACO）、烯酰辅酶A水解酶/L-3羟-CoA脱氢酶（EHHADH）mRNA表达的影响,并初步探讨运动改善脂代谢的可能机制.方法 将20只雄性ApoE基因敲除小鼠随机分为高脂组及运动组,高脂组小鼠给予高脂饮食喂养,运动组小鼠在高脂饮食基础上增加游泳训练,另选取C57BL/6J小鼠作为对照组.经干预12周后,测定各组小鼠空腹血脂、血糖及胰岛素浓度,并计算胰岛素抵抗指数;同时取各组小鼠腓肠肌进行电镜超微结构观察,采用RT-PCR方法检测各组小鼠骨骼肌中PPAR-α、ACO及EHHADH mRNA水平.结果 通过电镜观察发现,高脂组可见肌细胞线粒体水肿、肌膜下水肿、肌原纤维间水肿,伴有肌溶解灶,该组小鼠血脂（总胆固醇、低密度脂蛋白、游离脂肪酸）、空腹血糖、空腹胰岛素及胰岛素抵抗指数均较对照组明显升高（均P ＜0.05）,骨骼肌中PPAR-α、ACO及EHHADH mRNA表达均较对照组明显下调（均P＜0.05）.运动组小鼠经游泳干预后,发现其肌细胞肌原纤维间有轻度水肿,肌纤维排列整齐,未见肌溶解及肌膜下水肿;血脂水平较高脂组明显降低（均P＜0.05）,高密度脂蛋白较高脂组明显升高（P＜0.05）;空腹血糖、空腹胰岛素及胰岛素抵抗指数较高脂组明显降低（均P＜0.05）,骨骼肌中PPAR-α、ACO及EHHADH mRNA表达较高脂组明显上调（均P＜0.05）.结论 游泳运动可显著改善ApoE基因敲除小鼠脂代谢紊乱及胰岛素抵抗,其治疗机制可能与上调骨骼肌中PPAR-α,进一步激活其下游靶基因ACO及EHHADH,从而提高脂肪酸氧化代谢能力有关.

普伐他汀对子痫前期样小鼠模型中长链脂肪酸氧化酶的调节作用

目的探讨普伐他汀（Pra）对子痫前期（PE）样小鼠模型中长链3-羟基酰基辅酶A脱氢酶（LCHAD）的调节作用。方法将32只C57BL／6J小鼠随机于孕7—18d每天注射亚硝基左旋精氨酸甲酯以建立PE样模型（即PE），或同期注射等剂量生理盐水为正常对照（即Con），再分别于孕8d始每天Pra灌胃（PE＋Pra、Con＋Pra组）或生理盐水灌胃（PE＋N、Con＋N组）；孕鼠共4组，每组各8只。于孕18d时收集孕鼠的肝脏及胎盘组织。通过蛋白印迹法、实时荧光定量PCR技术、免疫组化法检测，并比较LCHAD在各组孕鼠肝脏及胎盘中的表达。结果（1）PE＋N组孕鼠的动脉压自孕8d至孕18d逐渐升高，而PE＋Pra组孕鼠自孕10d始开始下降；PE＋N组孕鼠孕18d时的24h尿蛋白量[（1494±201）μg]明显高于Con＋N组[（935±128）μg]，两组比较，差异有统计学意义，（P〈0．01），也明显高于PE＋Pra组孕鼠[（981±116）μg，P〈0．01]。（2）蛋白印迹法：PE＋N组孕鼠的肝脏及胎盘LCHAD蛋白的表达水平（肝脏：0．64±0．11，胎盘：0．48±0．06）明显低于Con＋N组（肝脏：1．06±0．10，胎盘：0．60±0．10；P均〈0．01），也明显低于PE＋Pra组（肝脏：0．99±0．04，胎盘：0．60±0．08；P均〈0．01）。（3）实时荧光定量PCR技术：PE＋N组孕鼠的肝脏及胎盘LCHADmRNA的表达水平（肝脏：0．621±O．128，胎盘：0．646±0．129）明显低于Con＋N组（肝脏：1.007±0．130，胎盘：1．004±0．103；P均〈0．01），而与PE＋Pra组（肝脏：0．693±0．678，胎盘：0．662±0．183）比较，差异无统计学意义（P均〉0．05）。（4）免疫组化法：4组孕鼠肝脏组织中均有LCHAD蛋白的广泛表达，在胎盘组织中以迷路滋养层绒毛干外层绒毛滋养细胞及合体滋养细胞中表达最多。LCHAD蛋白在PE＋N组孕鼠的表达水平（肝脏：0．062±0．016，胎盘：0．147±0．018）明显低于Con＋N组（肝脏：0．126±0．013，胎盘：0．183±0．024；P均〈0．05），也明显低于PE＋Pra组（肝脏：0．111±0．017，胎盘：0．174±0．027；P均〈0．05）。结论Pra可上调PE样模型孕鼠肝脏及胎盘LCHAD蛋白的表达水平，其可能为调节PE临床表现的机制。

线虫β-氧化循环的结构生物学研究

β-氧化循环是生物体脂肪酸的氧化分解的主要途径。在真核细胞内脂肪酸经过活化生成脂酰CoA,而后在线粒体基质中进入β氧化循环被逐步氧化分解。

红色红曲菌M7的丝衣霉酸基因簇及其功能研究

【目的】明确红色红曲菌(Monascus ruber) M7的基因组中是否存在丝衣霉酸(byssochlamic acid, BA)基因簇,并探讨BA基因簇中聚酮合酶基因mr-Bys及3-羟酰基辅酶A脱氢酶基因mr-hdh对BA产生的影响。【方法】采用生物信息学方法对M7基因组进行分析,以确定BA候选基因簇;以基因敲除及过表达方法研究mr-Bys和mr-hdh对BA产生的影响;以超高效液相色谱(ultra-performance liquid chromatography, UPLC)和质谱(mass spectrometry, MS)方法分析BA。【结果】在红色红曲菌M7基因组中发现了BA基因簇,敲除mr-Bys后,BA消失,而敲除和过表达mr-hdh均可影响BA的产生。【结论】红色红曲菌M7基因组中存在BA基因簇,可产生BA。研究结果不仅丰富了红曲菌次生代谢产物及其合成途径的相关研究,也为以红曲菌为菌种开发新产品奠定了基础。