TGF-β3对PLGA支架3-D培养兔髓核细胞影响的体外研究

目的评价转化生长因子β3(transforming growth factor-β,TGF-β3)对兔髓核细胞在聚乳酸-羟基乙酸共聚物(polylacticco-glycolic acid,PLGA)支架3-D培养的影响。方法应用粒子沥滤法制备多孔PLGA支架培养兔髓核细胞(1×106/PLGA),分为100ng/m L TGF-β3/PLGA,500 ng/m L TGF-β3/PLGA,1μg/m L TGF-β3/PLGA,PLGA对照组。通过MTT分析细胞增殖分化,1,9-二甲基亚甲蓝(DMMB)法检测糖胺多糖(GAG),q PCR检测Ⅱ型胶原(COLⅡ)、Aggrean差异,组织学观察TGF-β3对兔髓核细胞在PLGA支架微孔环境生长形态学改变。结果培养7、14、21 d后TGF-β3/PLGA组的髓核细胞活性、GAG产量、COL II及Aggrecan mRNA表达均高于PLGA对照组(P<0.05)。随着TGF-β3浓度递增,细胞活性及基质表达有显著增加(P<0.05)。21 d组织学HE染色显示TGF-β3/PLGA组较PLGA对照组中微孔支架吸附、积聚更多髓核细胞生长。结论 TGF-β3对PLGA三维培养髓核细胞更好提高分化增殖能力,促进细胞基质分泌。TGF-β3/PLGA支架可作为生物学治疗退变椎间盘病变潜在选择方法。

3-D成球培养MSCs的研究进展及临床应用前景

目的总结近年来3-D成球培养MSCs的研究进展及临床应用前景。方法广泛查阅国内外3-D成球培养MSCs的相关研究,重点关注3-D培养模式下MSCs细胞球的形成机制,3-D培养的MSCs细胞球与传统贴壁培养的MSCs在生物功能上存在的差异,以及造成这些差异的生物学机制,探讨MSCs细胞球的临床应用前景。结果与传统贴壁培养的MSCs相比,3-D培养的MSCs细胞球在抗凋亡、多向分化、旁分泌、抗炎等多项生物功能上明显增强,其机制与细胞骨架的改变、细胞接触的增加和低氧微环境的刺激有关,在动物实验中对于难愈性创面的修复、缺血组织的修复、组织重塑具有显著治疗效果,有广阔临床应用前景。结论 3-D培养的MSCs细胞球较传统贴壁培养的MSCs具有更强的生物功能和治疗效果,可成为临床上优化干细胞疗法、提高其治疗效果的一种手段。

Transwell 3-D联合共培养促使人羊水克隆样细胞来源干细胞向肝样细胞分化的研究

目的 探讨Transwell 3-D联合共培养促使人羊水克隆样细胞来源干细胞向肝样细胞分化的可能性.方法 利用克隆杯,从人孕中期羊水标本中分离获得人羊水克隆样细胞来源干细胞,培养扩增后,通过流式细胞仪检测表面抗原进行鉴定.利用Transwell小室联合共培养肝细胞诱导其向肝样细胞分化,观察诱导后细胞形态的变化,利用细胞免疫荧光检测甲胎蛋白（AFP）、白蛋白（ALB）和细胞角蛋白-18（CK-18）在诱导后细胞中的表达,反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测肝细胞相关基因的表达.结果 利用克隆杯分离出的人羊水克隆样细胞来源干细胞CD44和CD90表达阳性,CD10、CD14、CD34、CD45和人类白细胞抗原DR基因（HLA-DR）表达阴性.诱导2～4周后,肝样细胞出现,检测证实这些细胞表达AFP、ALB、CK-18、GATA结合蛋白-4（GATA4）、肝细胞核因子（HNF）-1α和细胞色素20A（CYP20A）等肝细胞相关标志和基因.结论 Transwell 3-D联合共培养可以促使人羊水克隆样细胞来源干细胞向肝样细胞分化.