啤酒废酵母超声破壁提取食源性β-1,3-D-葡聚糖

以啤酒废酵母为原料,采用Box-Behnken正交析因素试验优化超声破壁工艺,得出破壁参数理想条件为酵母质量浓度200 g/L,超声功率800 W,超声时间80 min,超声温度50℃;制得的酵母β-1,3-D-葡聚糖不含甘露聚糖,纯度达90.63%,得率达10.31%。

酵母β-1,3-D-葡聚糖提取酶解工艺的研究

采用酶-碱法提取酵母β-1,3-D-葡聚糖,着重研究了提取的酶解工艺,并通过正交实验得出最佳酶解工艺条件为:酶添加量为1600IU/g,酶解时间3h,pH8,温度60℃。沉淀物用2%氢氧化钠在75℃恒温处理6h,即可得到成品葡聚糖,经紫外光谱法和纸层析法进行糖分分析,成品为高纯度的酵母β-1,3-D-葡聚糖。

啤酒酵母中(1→3)-β-D-葡聚糖的提取及其机理研究

分别采用酸法、酸碱法来提取啤酒酵母中的(1→3) β D 葡聚糖,然后对其产品进行多糖成分和紫外光谱分析。结果发现,在用c(CH3COOH)=0 5mol/L的水溶液提取啤酒酵母中的(1→3) β D 葡聚糖时,其产品中除含有葡聚糖外,还含有一定量的甘露聚糖和蛋白质这两种成分。但先用c(NaOH)=1 0mol/L的水溶液提取,再用w(CH3COOH)=4%的醋酸溶液处理时,产品为高纯度的(1→3) β D 葡聚糖。此结论由傅立叶红外光谱和核磁共振碳谱得到进一步的证实。接着从其水解机理上阐述了产生上述两种不同结果的原因,从而说明了酸碱法是从啤酒酵母中提取(1→3) β D 葡聚糖的理想途径。

支气管肺泡灌洗液(1-3)β-D-葡聚糖定量检测对侵袭性肺部真菌感染的诊断

目的评价支气管肺泡灌洗液(BALF)(1-3)β-D-葡聚糖定量检测(G试验)对侵袭性肺部真菌感染(IPFI)的诊断价值,探讨其最佳诊断阈值。方法将ICU内具有侵袭性肺部真菌感染(IPFI)高危因素的214例肺部感染患者纳入研究。所有患者在入住ICU当天行支气管肺泡灌洗术检查,留取BALF标本行真菌涂片染色、真菌培养及G试验检测,同时留取血液标本行血浆G试验、血液真菌培养;依据IPFI诊断标准及检查结果将IPFI诊断分为确诊、临床诊断、拟诊3个层次并进行针对性治疗;将确诊、临床诊断及治疗有效的拟诊认定为IPFI真阳性,将治疗无效的拟诊及不能诊断认定为IPFI真阴性,测算并比较血浆G试验、BALF普通病原学检查及BALF G试验对IPFI诊断准确性上的差异。结果共155例患者可至少拟诊为IPFI,结合治疗效果,共112例患者最终诊断为IPFI;与其他病原学检测方式相比,以>30 ng/L作为检验阈值水平的BALF G试验为最优微生物依据诊断方法,经比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论 BALF G试验可为临床医师提供IPFI的诊断依据,但检验阈值水平需进一步验证。

药用真菌β-(1,3)-D-葡聚糖构效关系及检测方法研究进展

β-(1,3)-D-葡聚糖是许多活性真菌多糖的核心结构,由于具有免疫调节、抗肿瘤等多种生物活性,已成为研究热点。本文从β-(1,3)-D-葡聚糖的主链、支链分支度、支链基团、分子量及空间结构等方面介绍了结构与生物活性之间的关系,并对目前该类多糖的定性方法及鲎G因子、半乳糖神经酰胺ELISA等定量检测方法进行了综述。

啤酒废酵母中RNA和β-(1,3)-D-葡聚糖的综合提取

为实现RNA和β-(1,3)-D-葡聚糖的综合提取,通过碱-酶提取法和优化稀碱提取条件,研究了温度、NaOH质量分数对RNA提取的影响.结果表明:温度为100℃,NaOH质量分数为4%时,提取率为7.65%,纯度为70.24%.进一步比较中性蛋白酶和碱性蛋白酶对β-(1,3)-D-葡聚糖提取的影响,发现中性蛋白酶得到的产物较多,纯度较高.实验结果为进一步的工业化生产奠定了基础.

检测(1,3)-β-D-葡聚糖在老年肺癌侵袭性肺部真菌感染中的临床价值

目的探讨血浆(1,3)-β-D-葡聚糖(BG)在老年肺癌侵袭性肺部真菌感染(IPFI)中的临床价值。方法老年肺癌合并感染患者65例,根据诊断分3组:侵袭性肺部真菌感染20例(A组)、混合性肺部感染(真菌+细菌)22例(B组)、细菌性肺部感染23例(C组),另设健康对照组20例(D组)。A、B、C组患者于入院第1、3天采集静脉血,A、B组患者于抗真菌治疗第3、7、10、14、17、21、24天采集静脉血,D组采集静脉血1次,检测和分析各组的BG浓度。结果 A组和B组患者中感染白假丝酵母菌26例(61.91%);IPFI感染组(A组、B组)的BG含量均显著高于非IPFI感染组和健康组(C组、D组)(P<0.01);双份血浆标本BG试验阳性在A组和B组患者中的敏感性及阴性预测值均较单份血浆标本BG试验阳性下降,但其特异性及B组患者中的阳性预测值则有所升高。与治疗前比较,A组治疗第10、14、17、21、24天血浆的BG含量均显著降低(P<0.05),B组治疗第14、17、21、24天血浆的BG含量均显著降低(P<0.01)。结论血浆BG检测对于老年肺癌IPFI患者具有早期、快速诊断和动态监测治疗效果的价值。

检测血浆(1→3)-β-D-葡聚糖对深部真菌感染诊断的研究

目的研究检测临床患者血浆(1→3)-β-D-葡聚糖的含量,以便对危重病人深部真菌感染早发现、早治疗,降低死亡率。方法应用MB-80微生物动态快速检测系统,并以传统真菌培养方法作平行对照实验,分析比较深部真菌感染组和非深部真菌感染组血浆(1→3)-β-D-葡聚糖的水平。结果16例深部真菌感染组的(1→3)-β-D-葡聚糖水平为51.7±66.5 pg/mL,明显高于正常非深部真菌感染组8.6±25.2 pg/mL(P<0.05),且比传统培养方法快速、准确。结论血浆(1→3)-β-D-葡聚糖的含量检测用于临床诊断深部真菌感染,具有敏感性高、特异性强、快速准确等特点。

血浆(1,3)-β-D-葡聚糖检测对血液病患者侵袭性真菌病的诊断价值

目的：评价（1，3）-β-D-葡聚糖（BDG）检测（简称G试验）对恶性血液病患者侵袭性真菌病（IFD）的诊断价值。方法回顾性分析399例血液系统肿瘤患者每周2～3次的血浆G试验数据，以《血液病/恶性肿瘤患者侵袭性真菌感染的诊断标准与治疗原则（修订版）》中的标准作为判断标准，利用SPSS 11.5统计软件分析G试验对IFD的诊断价值。结果 G试验诊断IFD的敏感性为78.5%，特异性为79.8%，阳性预测值为75.0%，阴性预测值为82.7%。结论血浆BDG水平与IFD感染有直接联系，每周检测2～3次，结合影像学判断方法能帮助诊断和排除IFD，提高IFD临床诊治效果。

酵母(1→3)-β-D-葡聚糖制备及其化学衍生研究进展

免疫活性多糖(1→3)βD葡聚糖广泛存在于自然界中,是细菌、酵母、真菌、蘑菇、谷类和海藻的细胞壁组成型成分。本文综述了(1→3)βD葡聚糖生物学功能、制备方法和衍生化等方面的研究进展。较传统的酸碱提取法,诱导自溶结合次氯酸钠氧化可以提高(1→3)βD葡聚糖收率。使用硫酸和正丙醇的非均相体系可以制备β葡聚糖硫酸酯,产品完全溶于水,得率约37.4%(w/w),非均相体系磺化具有产物分离容易,产物纯度高,磺化反应体系正丙醇硫酸酯反应液可重复使用等优点。

(1-3)β-D-葡聚糖水平对侵袭性肺部真菌感染的诊断效能分析

目的:探讨(1-3)β-D-葡聚糖水平对侵袭性肺部真菌感染的诊断效能。方法:选取本院2013年1月-2015年1月呼吸内科侵袭性肺部真菌感染患者119例作为真菌感染组,同期选取肺部细菌感染患者116例作为细菌感染组、健康体检者115例作为对照组,采用免疫比浊法检测支气管肺泡灌洗液(BALF)和血浆(1-3)β-D-葡聚糖(G试验),以真菌培养法作为IPFI的诊断金标准,分析BALF G试验、血浆G试验及联合两者G试验的诊断阳性率、阴性率、灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值和准确度。结果:真菌感染组BALF和血浆(1-3)β-D-葡聚糖水平均明显高于细菌感染组和对照组,组间比较差异均有统计学意义(P<0.05),其中细菌感染组与对照组BALF和血浆(1-3)β-D-葡聚糖水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。真菌培养阳性99例,真菌培养阴性20例,其中真菌培养阳性者BALF和和血浆(1-3)β-D-葡聚糖水平分别为(18.45±5.01)ng/L、(90.26±6.25)ng/L;明显高于真菌培养阴性者的(2.03±0.02)ng/L、(77.94±5.01)ng/L,两者比较差异均有统计学意义(t=14.61、8.28,P<0.001)。BALF+血浆G试验对IPFI的诊断阳性率、灵敏度、阴性预测值和准确度均明显高于单独BALF G试验和血浆G试验,比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:BALF联合血浆(1-3)β-D-葡聚糖水平检测操作简便、快速,且显著提高对侵袭性肺部真菌感染的诊断阳性率、灵敏度和准确度,值得临床推广应用。

抗烯醇化酶抗体与(1-3)-β-D-葡聚糖检测诊断侵袭性念珠菌病的临床比较

目的比较抗烯醇化酶抗体(抗-Eno)检测与(1-3)-β-D-葡聚糖(BG)检测对侵袭性念珠菌病(invasive candidiasis,IC)的诊断价值。方法留取临床为诊断IC而送检BG测定的患者血样,用ELISA法测定抗-Eno抗体,以真菌培养结果为基础,分析比较两种血清学方法诊断IC的效能。结果 210例患者为研究对象。15例患者经念珠菌培养确诊IC,确诊感染率7.1%;BG阳性54例,阳性率为25.7%;抗-Eno阳性33例,检出阳性率为15.7%。抗-Eno和G试验诊断IC感染的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值分别为46.7%、86.7%、21.2%、95.5%和33.3%、74.9%、9.3%、93.6%。两种血清学方法联合检测,敏感性提高至66.7%。结论抗-Eno对IC的诊断性能优于G试验;联合两种血清学方法,能有效提高敏感性。

血浆 (1→3)-β-D-葡聚糖动态检测在深部真菌感染的诊断和药物疗效评价中的价值

目的探讨血浆(1→3)-β-D-葡聚糖动态检测在深部真菌感染的诊断和药物疗效评价中的价值。方法应用MB-80微生物动态快速检测系统及GKT-5M Set动态真菌检测试剂盒定量检测血浆(1→3)-β-D-葡聚糖的含量。并与真菌培养法相比较。结果当54例患者血浆(1→3)-β-D-葡聚糖水平均大于或等于50pg/ml时,即G试验均为阳性时,真菌培养法25例阳性,阳性率为46.3%;54例中30例血浆(1→3)-β-D-葡聚糖水平逐渐下降,14例逐渐升高。结论血浆(1→3)-β-D-葡聚糖检测在诊断深部真菌感染方面明显优于真菌培养法,是有效评价抗真菌药物疗效的指标。

联合检测血浆及支气管肺泡灌洗液(1-3)β-D-葡聚糖对侵袭性肺部真菌感染的临床诊治价值

目的:探讨联合检测血浆及支气管肺泡灌洗液(BALF)(1-3)β-D-葡聚糖对侵袭性肺部真菌感染的临床诊治价值。方法:选取2014年6月-2016年5月期间本院确诊治疗的侵袭性肺部感染患者100例作为感染组,依据病原菌性质分为真菌组42例和细菌组58例,同期选取体检中心健康人员30例作为健康组。采用乳胶增强免疫比浊法检测(1-3)β-D-葡聚糖水平(G试验),ROC曲线分析血浆及BALF的G试验对侵袭性肺部真菌感染的诊断价值,统计分析所有研究对象血浆、BALF的G试验情况。结果:真菌组患者血浆、BALF的G试验水平明显高于健康组和细菌组,比较差异均有统计学意义(P<0.05)。ROC曲线分析显示,BALF的G试验以10 ng/L为临界值时,诊断侵袭性肺部真菌感染的敏感度、特异度、准确度分别为76.83%、89.73%、84.59%;血浆G试验以20 ng/L为临界值时,其诊断敏感度、特异度、准确度分别为78.47%、91.68%、84.43%;两者联合时,其诊断敏感度、特异度、准确度分别为85.92%、96.41%、93.28%。在诊断敏感度、特异度、准确度方面比较,BALF的G试验<血浆G试验<两者联合,比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:血浆及BALF的G试验水平变化与侵袭性肺部真菌感染有关,联合检测其水平对侵袭性肺部真菌感染具有更为良好的敏感性、特异性和准确性,值得临床作进一步推广。

(1→3)-β-D-葡聚糖构象的理论分析

利用分子力学 (MM 2 )方法计算了 (1→ 3) β D 葡聚糖二糖结构单元全局最低能量构象 ,在此基础上搭建相对分子质量分别为 2 .0 5× 10 4 和 1.0 2 6× 10 5的 (1→ 3) β D 葡聚糖片段并进行分子几何全优化 .结果表明 ,(1→ 3) β D 葡聚糖的能量最低构象为单螺旋结构并且亲水性基团 (多羟基 )位于螺旋体的表面 ,从而认为这种构象可能是其具有刺激免疫和抗肿瘤活性的分子基础 .

非均相磺化反应体系制备(1→3)-β-D-葡聚糖硫酸酯

考察硫酸和正丙醇组成的非均相磺化反应体系制备(1→3)β--D-葡聚糖硫酸酯的可行性,利用元素分析、红外光谱、1H NMR、扫描电镜等技术对产物进行结构表征。结果表明,制备得到的(1→3β)--D-葡聚糖硫酸酯完全溶于水,质量收率约37.4%,经验式为(C6H10O5)25.9SO3.7H2O,红外谱图在1 240 cm-1、810 cm-1存在特征吸收带,1H NMR分析也支持产物为(1→3)-β-D-葡聚糖硫酸酯。

血浆(1-3)-β-D-葡聚糖检测对侵袭性肺部真菌感染的诊断价值

为评价(1-3)-β-D-葡聚糖检测(G试验)对侵袭性肺部真菌感染的诊断价值,对肺部感染患者130例行G试验,并将试验结果与病原学诊断结果相比较,计算G试验的灵敏度、特异性、阳性预测值、阴性预测值及准确性。结果表明:G试验对侵袭性肺部真菌感染的灵敏度为76.5%(13/17),特异性为80.7%(88/109),阳性预测值为38.2%(13/34),阴性预测值为95.7%(88/92),准确性为80.2%(101/126)。G试验是一项安全可靠的技术,对排除侵袭性肺部真菌感染有较高的价值,结合其它指标有可能提高诊断的准确性。

血浆(1→3)-β-D-葡聚糖动态检测对评价抗真菌药物疗效的价值

探讨血浆(1→3)-β-D-葡聚糖动态检测对评价深部真菌感染的抗真菌药物疗效的价值。应用MB-80微生物动态快速检测系统及GKT-5M Set动态真菌检测试剂盒定量检测血浆(1→3)-β-D-葡聚糖的含量。在48例深部真菌感染患者的血浆(1→3)-β-D-葡聚糖检测中,有35例患者血浆(1→3)-β-D-葡聚糖水平逐渐下降;有5例患者血浆(1→3)-β-D-葡聚糖水平先升高再降低,最后降至正常水平;且有8例患者血浆(1→3)-β-D-葡聚糖水平逐渐升高或处于高水平状态。患者血浆(1→3)-β-D-葡聚糖动态检测是有效评价抗真菌药物疗效的指标。

肺部念珠菌感染患者外周血1-3-β-D-葡聚糖水平分析

目的观察1-3-β-D-葡聚糖在肺部真菌感染患者体内表达水平,探讨1-3-β-D-葡聚糖对肺部真菌感染诊断及疗效监测价值。方法57例痰真菌培养阳性患者为实验组,30例健康体检人群为对照组,分析两组人群外周血浆1-3-β-D-葡聚糖水平;比较真菌培养不同阳性程度组之间1-3-β-D-葡聚糖水平。结果实验组外周血浆1-3-β-D-葡聚糖明显高于对照组(P【0.01);痰真菌培养阳性程度与外周血1-3-β-D-葡聚糖水平成正相关,真菌培养不同阳性程度组之间1-3-β-D-葡聚糖水平差异显著(P【0.01)。结论肺部念珠菌感染患者外周血浆1-3-β-D-葡聚糖水平明显增高,1-3-β-D-葡聚糖检测可以作为肺部念珠菌感染诊断及抗真菌疗效监测指标。