Synthesis and Crystal Structure of (Z)-Ethyl-4-(4-methoxy)benzylidene-2-(3,5-dimethoxypheny-tetrahydrofuran-3,3-dicarboxylate

The title compound （Z）-ethyl-4-（4-methoxy）benzylidene-2-（3,5-dimethoxyphenyl）- tetrahydrofuran-3,3-dicarboxylate has been synthesized, and its crystal structure was characterized by X-ray single-crystal diffraction. The crystal belongs to triclinic, space group P1, with a = 8.140（3）, b = 11.966（4）, c = 13.771（5）Aα= 67.366（4）, β= 85.165（5）, γ= 75.806（4）°, V = 1200.1（7） A3, Z = 2, C26H3008, Mr = 470.50, Dc = 1.302 g/cm^3, F（000） = 500,λ（MoKa） = 0.71073 A, μ= 0.096 mm^-1, R = 0.0659 and wR = 0.1841 for 3080 observed reflections （I 〉 2σ（I））. As a key intermediate of HIV-1 integrase inhibitor, the synthesis and structure confirmation of the title compound are important for further studies.

异甘草素和3-甲氧基异甘草素对人肝癌Bel-7402细胞的抗癌活性

肝癌多药耐药（ MDR）不仅限制了化疗效果,也是导致肝癌复发转移的重要原因,如何逆转多药耐药性已是肿瘤药物干预研究的热点。人肝癌Bel-7402细胞株作为一种体外模型,在新型抗癌候选药物研究中较为常用。国内学者利用此种模型从天然药物中筛选出了对肝癌Bel-7402细胞具有明显抑制活性的黄芩苷、虫草素、蜂毒素、蛇葡萄素、川芎嗪等天然活性成分,并探讨其在肝癌的辅助治疗、逆转耐药性等方面的应用价值[1-4]。本课题组研究发现,甘草查耳酮成分异甘草素（ isoliquiritigenin, ILG）对人宫颈癌SiHa细胞具有明显的抑制增殖和促进凋亡活性,并对正常细胞的毒性低,从而显示较好的先导化合物的潜力[5]。本研究参照前期研究方法[6]对天然化合物ILG及其衍生物3-甲氧基异甘草素（3-OM-ILG）进行人工合成制备,并应用人肝癌 Bel-7402细胞为体外模型,用MTT法和流式细胞仪法对两种化合物的抗肝癌活性及促进癌细胞凋亡作用进行对比研究。

3-甲氧基异甘草素的合成及其对宫颈癌细胞的影响

目的以异甘草素（ILG）为先导化合物进行化学合成其衍生物3-甲氧基异甘草素（3-MO-ILG）,探讨其体外抗宫颈癌活性。方法采用硼酸催化高温法、羟基保护法、微波辅助碱催化法3种方法进行羟醛缩合反应而制备目标化合物;以人宫颈癌Si Ha细胞为体外模型,用3-（4,5-二甲基噻唑-2）-2,5-二苯基四氮唑溴盐（MTT）法测定对癌细胞增长的抑制率;用流式细胞仪测定促进癌细胞凋亡作用,以顺铂作为阳性对照组。结果用硼酸催化高温法、羟基保护法、微波辅助碱催化法3种方法所得到的3-甲氧基异甘草素产率分别为8.9%、9.27%和57.60%。3-甲氧基异甘草素对Si Ha细胞具有较强抑制增殖作用,当药物浓度为20～150μg/mL、作用时间为24 h时,其抑制率可达93.5%;当作用时间达到72 h时,抑制率最强。3-甲氧基异甘草素在100μg/mL时,对Si Ha细胞早期凋亡率为38.6%,晚期凋亡率为1.4%,具有明显的促细胞凋亡作用。结论微波辅助碱催化方法在查尔酮类化合物的合成中具有产率较高的方法。3-甲氧基异甘草素对Si Ha细胞具有较强抑制增殖作用,并且具有明显浓度和时间依赖性;同时对Si Ha细胞具有明显的促细胞凋亡作用。

异甘草素通过PI3K/Akt通路诱导人胃癌SGC7901细胞凋亡

目的:初步研究异甘草素(isoliquiritigenin ISL)对人胃癌SGC7901细胞凋亡诱导作用的影响,并探讨信号通路中蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶(protein kinase B,Akt)、磷酸化Akt(PAkt)及下游凋亡蛋白Bax表达水平的变化.方法:取对数生长期人胃癌SGC7901细胞分为对照组、ISL实验组,培养24、48、72 h后采用MTT实验检测ISL对细胞生长的抑制情况,摸索后续实验药物浓度和作用时间;应用流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况;应用Western blot法检测凋亡调节蛋白Bax、Ak和P-Akt的表达.结果:10mmol/L ISL不能抑制胃癌细胞株SGC7901的生长,而25、50、100mm o l/LISL可明显抑制其生长,且呈时间和浓度依赖性.与对照组凋亡率3.23%±0.45%相比,25mmol/L组(6.13%±0.61%)、50mmol/L组(11.70%±0.75%)、100mmol/L组(26.60%±1.51%)凋亡率逐渐增高(P<0.05)随ISL浓度的增加,P-Akt蛋白表达水平逐渐降低,凋亡蛋白Bax表达水平逐渐增加(均P<0.05),各组间A k t蛋白水平差异无统计学意义.结论:ISL能够诱导SGC7901细胞凋亡,其机制可能与下调PI3K/AKT信号转导通路蛋白的表达以及上调其下游的凋亡蛋白Bax有关.

异甘草素通过抑制PI3K/PKB通路降低胃癌细胞的顺铂耐药性

目的 探讨异甘草素(ISL)对胃癌细胞顺铂(DDP)耐药的作用及其对磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(PKB)通路的调控作用。方法 胃癌细胞系SGC-7901建立DDP耐药细胞模型SGC-7901/DDP,MTT法检测细胞活力筛选出ISL、DDP合适作用浓度,检测ISL对SGC-7901/DDP顺铂敏感性的影响以及ISL与DDP联合处理协同作用。SGC-7901/DDP细胞分对照组、DDP组、ISL+DDP组、胰岛素样生长因子1(IGF-1)组(PI3K/PKB激动剂)。流式细胞术检测细胞凋亡率,划痕实验和Transwell侵袭实验检测各组细胞迁移、侵袭能力,Western Blot检测细胞PI3K/PKB通路相关蛋白表达。裸鼠移植瘤模型检测ISL与DDP对体内移植瘤生长的影响。结果 DDP和ISL均以浓度依赖方式降低SGC-7901和SGC-7901/DDP细胞的存活率,20μmol/L浓度ISL可增强DDP对SGC-7901/DDP细胞活力的抑制作用,且ISL与DDP具协同作用,10μmol/L DDP与20μmol/L ISL联合协同作用最优。与DDP组相比,ISL+DDP组胃癌细胞SGC-7901的增殖、迁移与侵袭显著降低,SGC-7901凋亡明显增加(P<0.05)。ISL+DDP组细胞p-PI3K/PI3K、p-PKB/PKB、磷酸化-雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)/mTOR的比值显著低于DDP组(P<0.05)。且IGF-1可明显减弱ISL对DDP耐药胃癌细胞SGC-7901增殖、迁移和侵袭的抑制作用。ISL与DDP联合给药能明显抑制裸鼠移植瘤的生长,而IGF-1明显逆转ISL与DDP联合给药对裸鼠移植瘤生长的抑制作用。结论 ISL可改善胃癌细胞SGC-7901对DDP耐药性,且ISL介导DDP敏感性增强可能与促进细胞凋亡及抑制PI3K/PKB通路有关。

异甘草素对实验性自身免疫性神经炎大鼠模型的影响及机制研究

目的:观察异甘草素(ISL)对大鼠实验性自身免疫性神经炎(EAN)的影响并探讨机制。方法:足底注射P257-81多肽建立EAN大鼠模型,免疫后1 h,每天腹腔注射ISL(60 mg/kg)溶液,共14 d。观测大鼠发病情况,运用HE染色及透射电镜观察坐骨神经结构,ELISA法检测血清中炎症因子水平,Western blot检测脾脏单核巨噬细胞中诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和精氨酸酶1(Arg1)、信号转导及转录激活因子3(STAT3)包括t⁃STAT3和p⁃STAT3的蛋白表达。结果:与EAN组比较,EAN+ISL组大鼠行为评分显著降低,体重明显增加,坐骨神经中炎症细胞浸润数明显减少,坐骨神经的脱髓鞘现象明显减少,血清中白介素⁃1β(IL⁃1β)、肿瘤坏死因子⁃α(TNF⁃α)、白介素⁃6(IL⁃6)和干扰素⁃γ(IFN⁃γ)水平明显降低,脾脏单核巨噬细胞中iNOS蛋白表达显著下调,Arg1表达显著上调,p⁃STAT3蛋白表达及p⁃STAT3/t⁃STAT3比值均明显降低(P<0.05)。结论:ISL对EAN具有抑制作用,其机制可能与调控STAT3⁃巨噬细胞极化途径有关。

基于VSIG4/NLRP3炎症复合通路探讨异甘草素对中性粒细胞性哮喘小鼠气道炎症的影响

目的探讨异甘草素对中性粒细胞性哮喘小鼠气道炎症的影响及其可能的作用机制。方法用卵清蛋白建立中性粒细胞性哮喘小鼠模型。将Balb/c小鼠随机分为对照组(给予等量的0.9%NaCl处理)、模型组(卵清蛋白建模)、地塞米松组(腹腔注射4 mg·kg^(-1)的地塞米松)、低剂量实验组(腹腔注射100 mg·kg^(-1)的异甘草素)、高剂量实验组(腹腔注射200 mg·kg^(-1)的异甘草素),每组11只。在最后1次雾化激发后的24 h内,检测各组小鼠气道阻力后处死小鼠取支气管肺泡灌洗液及肺组织。用细胞计数板进行总细胞计数;用瑞氏-吉姆萨染色法进行细胞分类计数;用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测支气管肺泡灌洗液炎性因子水平;用蛋白质印迹法检测肺组织蛋白表达水平。结果对照组、模型组、地塞米松组、低剂量实验组、高剂量实验组的气道阻力值分别为(0.84±0.08)、(3.34±0.34)、(1.23±0.15)、(2.47±0.19)和(1.54±0.18)cmH_(2)O·s^(-1),白细胞总数分别为(15.03±0.11)、(331.20±26.64)、(38.73±3.28)、(180.35±16.89)和(82.74±10.51)×10^(4)·mL^(-1),白细胞介素17(IL-17)水平分别为(4.79±0.58)、(19.21±2.39)、(6.35±0.81)、(15.96±1.10)和(9.04±0.65)pg·mL^(-1),含V型集和免疫球蛋白结构域4(VSIG4)蛋白表达水平分别为0.67±0.04、0.24±0.04、0.59±0.06、0.37±0.04和0.53±0.05,NOD样受体家族热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)蛋白表达水平分别为0.24±0.02、0.74±0.07、0.35±0.04、0.65±0.08和0.44±0.03。模型组的上述指标与对照组比较,地塞米松组、低剂量实验组、高剂量实验组的上述指标与模型组比较,在统计学上差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论异甘草素可能通过调节VSIG4/NLRP3复合炎性通路,降低气道阻力、抑制炎性介质的释放改善中性粒细胞哮喘小鼠气道炎性。

朝鲜淫羊藿的化学成分

从朝鲜淫羊藿地上部分分到六个成分(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ),经UV,IR,~1HNMR,^(13)C-NMR等方法鉴定了它们的结构,分别是异甘草素(isoliquiritigenin,Ⅰ)、对羟基本甲酸(p-hydroxy benzoic acid,Ⅱ)、宝藿甙-Ⅲ(baohuoside-Ⅱ,Ⅲ)、山奈素3-O-β-D-半乳糖甙(kaempferol-3-O-β-D-galactoside,Ⅳ)、木樨草素(luteolin,Ⅴ)、2,4-二羟基苯甲酸(2,4-dihydroxy benzoic acid,Ⅵ),均为首次从该植物中获得。

HPLC法同时测定白芍、甘草药对提取物中9种有效成分

目的建立反向高效液相色谱法,同时测定白芍甘草药对提取物中芍药内酯苷、芍药苷、甘草苷、1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖、芹糖基异甘草苷、异甘草苷、苯甲酰芍药苷、甘草酸、异甘草素9种成分。方法采用Dikma Technologies-C18(200mm×4.6mm,5μm),流动相为乙腈(A)-0.1%磷酸(B),梯度洗脱,体积流量1.0mL/min,检测波长为267nm(0～13min)、258 nm(13～17min)、230 nm(17～27min)、276 nm(27～42min)、360 nm(42～46 min)、276nm(46～50min)、230nm(50～53min)、275nm(53～55min)、250nm(55～90min),柱温30℃。结果在色谱条件下,芍药内酯苷、芍药苷、甘草苷、1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖、芹糖基异甘草苷、异甘草苷、苯甲酰芍药苷、甘草酸、异甘草素的进样量分别在0.004 476～0.044 76μg,0.014 67～0.146 7μg,0.004 975～0.049 75μg,0.001 031～0.010 31μg,0.005 813～0.058 13μg,0.001 744～0.017 44μg,0.000 982～0.009 82μg,0.018 20～0.182 0μg,0.000 098～0.000 98μg范围内与色谱峰面积呈良好的线性关系;加样回收率(n=5)均在96.3%～103.4%,RSD均小于2.5%。结论本法快速、准确,重复性好,可更好地控制白芍炙甘草药对提取物的质量。

异甘草素增加人脑胶质瘤干细胞放射敏感性的实验研究

目的:研究异甘草素对胶质瘤干细胞(glioma stem cells,GSCs)放射敏感性的影响及作用机制。方法:无血清培养法提取SHG44人脑GSCs。检测异甘草素和X射线联合运用下GSCs活性和干细胞球形成情况。检测Notch1信号通路、NF-κB和caspase-3的表达情况。结果:采用10μM异甘草素在8 Gy较高剂量X射线存在的情况下,能够抑制GSCs球的数目和直径(P<0.05)。20μM异甘草素杀伤GSCs的作用明显,且在4、8 Gy的X射线下联合杀伤GSCs的能力依次增强(P<0.05)。异甘草素干作用48 h后Notch1的表达下调(P<0.05)。4 Gy的X射线照射后,分别于6、24 h,异甘草素干预组P-NF-κB表达逐渐增高(P<0.05),而cleaved caspase-3的表达在X射线照射后的24 h开始升高(P<0.05)。结论:异甘草素能够增加GSCs的放射敏感性,抑制Noch1信号通路,上调NF-κB和caspase-3的表达,参与X射线对GSCs的损伤过程。

异甘草素抗肿瘤作用及促凋亡机制研究

目的研究异甘草素(ISL)抗肿瘤作用及促凋亡机制。方法建立H22小鼠肝癌实体瘤模型,抑瘤率、脾脏指数及胸腺指数等指标检测ISL抑瘤作用及对免疫器官的影响;TUNEL法检测肿瘤组织细胞凋亡情况。免疫组织化学法检测ISL对肿瘤组织中凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Cyt-c和Caspase-3表达的影响。以不同浓度ISL处理人乳腺癌MDA-MB-231细胞,倒置显微镜下观察ISL对MDA-MB-231形态学的影响;荧光显微镜和流式细胞术Annexin V-FITC/PI双染检测细胞凋亡率。结果 ISL高、低剂量给药组H22肝癌荷瘤小鼠的瘤重与模型组相比显著降低,ISL高、低剂量给药组小鼠肝癌H22实体瘤组织TUNEL阳性细胞核数量与模型组相比明显增多。与模型组相比,ISL高、低剂量给药组的促凋亡蛋白Bax、Cyt-c和Caspase-3的表达上调,抑凋亡蛋白Bcl-2的表达下调。MDA-MB-231细胞经ISL作用后出现细胞回缩、胞体变圆和体积变小等形态学变化。MDA-MB-231细胞早期细胞凋亡率和晚期细胞凋亡率均显著升高,且呈浓度依赖性。荧光显微镜下观察到随着ISL浓度的增加呈绿色荧光或红色荧光的细胞均随之增多,提示早期凋亡或晚期凋亡细胞均显著增加。结论 ISL在小鼠H22肝癌荷瘤模型中具有诱导肝癌细胞凋亡的作用,其机制与上调Bax,下调Bcl-2表达,增加Cyt-c从而导致Caspase-3活化有关;ISL可以诱导人乳腺癌细胞的凋亡。

A new phenanthraquinone from the roots of Peucedanum praeruptorum

A new compound,9,10-dihydrophenanthrinic acid,9,10-dione-3,4-methylenedioxy-8-methoxy（1） was isolated from the roots of Peucedanum praeruptorum Dunn on the basis of spectral evidences.

异甘草素对人肾透明细胞癌786-O细胞抗癌作用及分子机制

目的:研究异甘草素(isoliquiritigenin,ISL)对人肾透明细胞癌786-O细胞的抗癌作用,并探讨其可能存在的分子机制。方法:通过噻唑蓝(thiazolyl blue tetrazolium bromide,MTT)比色法检测ISL(0,10,25,50,75,100μmol·L^(-1))对786-O细胞增殖的作用;细胞划痕和Transwell实验检测ISL对786-O细胞迁移、侵袭能力的影响;吖啶橙染色,Ad-GFP-LC3转染实验观察细胞自噬状态;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测自噬相关蛋白的表达,并分析磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphatidylinositol-3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)/哺乳动物雷帕霉素蛋白(mammalian target of rapamycin,m TOR)信号通路变化,探讨其可能的作用机制。结果:MTT比色法结果显示,与空白组比较,ISL能够明显抑制786-O细胞的增殖,且呈时间-剂量依赖性(P<0.05);划痕和Transwell实验结果表明,与空白组比较,ISL能够抑制785-O细胞的迁移和侵袭(P<0.05);吖啶橙染色和Ad-GFP-LC3转染实验表明ISL能够诱导786-O细胞发生自噬。此外,与空白组比较,ISL能够诱导细胞内自噬标志物-Ⅱ(LC3-Ⅱ),自噬相关蛋白Beclin1,Atg5蛋白表达(P<0.05),并显著下调p62蛋白表达(P<0.05),当加入自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)可逆转上述现象(P<0.05);同时ISL能够抑制Akt,m TOR的磷酸化水平(P<0.05),加入抑制剂LY294002和雷帕霉素(rapamycin,Rap),LC3-Ⅱ,Beclin1,Atg5蛋白表达明显上调(P<0.05),p62蛋白表达明显下调(P<0.05)。结论:ISL能够抑制肾透明细胞癌786-O细胞的增殖、迁移和侵袭,并通过抑制PI3K/Akt/m TOR信号通路诱导细胞发生自噬。

基于网络药理学的黄精抗肿瘤成分筛选研究

目的探讨黄精抗肿瘤的药效物质基础及分子作用机制。方法采用中药网络药理学数据库和分析平台(TCMSP)对黄精的化学成分进行收集,借助计算机辅助预测吸收、分布、代谢和排泄(ADME)性质并结合obioavail 1.1和pre-Caco-2预测模型对活性成分群进行初筛;对所有潜在活性成分进行靶点识别;采用Cytoscape3.6.1软件进行"活性成分-靶标"网络的构建,并利用"network analyzer"插件对网络的拓扑性质进行分析;采用在线分析工具DAVID进行KEGG通路富集分析。结果黄精中已鉴定的39个化合物,其中18个具有良好的ADME性质的化合物,这些潜在的活性成分中,共有14个活性成分及其对应的19靶标与黄精抗肿瘤的活性密切相关。通过构建"活性成分-靶点"网络及对网络进行分析,共获得个4关键化合物:黄芩素、3’-甲氧基大豆苷元、异甘草素、(2R)-7-羟基-2-(4-羟苯基)-4-苯丙二氢呋喃;2个关键靶标:前列腺素G/H合酶2、热休克蛋白90AA1。在对靶点进行KEGG通路分析时,共获得12条与抗肿瘤相关的通路。结论黄精可通过多成分、多靶点及多通路的作用机制发挥其抗肿瘤活性。