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Signal transducer and activator of transcription 3 promotes the Warburg effect possibly by inducing pyruvate kinase M2 phosphorylation in liver precancerous lesions 被引量:8
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作者 Yang-Hui Bi Wen-Qi Han +4 位作者 Ruo-Fei Li Yun-Jiao Wang Zun-Shu Du Xue-Jiang Wang Ying Jiang 《World Journal of Gastroenterology》 SCIE CAS 2019年第16期1936-1949,共14页
BACKGROUND Study shows that signal transducer and activator of transcription 3(STAT3) can increase the Warburg effect by stimulating hexokinase 2 in breast cancer and upregulate lactate dehydrogenase A and pyruvate de... BACKGROUND Study shows that signal transducer and activator of transcription 3(STAT3) can increase the Warburg effect by stimulating hexokinase 2 in breast cancer and upregulate lactate dehydrogenase A and pyruvate dehydrogenase kinase 1 in myeloma. STAT3 and pyruvate kinase M2(PKM2) can also be activated and enhance the Warburg effect in hepatocellular carcinoma. Precancerous lesions are critical to human and rodent hepatocarcinogenesis. However, the underlying molecular mechanism for the development of liver precancerous lesions remains unknown. We hypothesized that STAT3 promotes the Warburg effect possibly by upregulating p-PKM2 in liver precancerous lesions in rats.AIM To investigate the mechanism of the Warburg effect in liver precancerous lesions in rats.METHODS A model of liver precancerous lesions was established by a modified Solt-Farber method. The liver pathological changes were observed by HE staining and immunohistochemistry. The transformation of WB-F344 cells induced with Nmethyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine and hydrogen peroxide was evaluated by the soft agar assay and aneuploidy. The levels of glucose and lactate in the tissue and culture medium were detected with a spectrophotometer. The protein levels of glutathione S-transferase-π, proliferating cell nuclear antigen(PCNA), STAT3,and PKM2 were examined by Western blot and immunofluorescence.RESULTS We found that the Warburg effect was increased in liver precancerous lesions in rats. PKM2 and p-STAT3 were upregulated in activated oval cells in liverprecancerous lesions in rats. The Warburg effect, p-PKM2, and p-STAT3 expression were also increased in transformed WB-F344 cells. STAT3 activation promoted the clonal formation rate, aneuploidy, alpha-fetoprotein expression,PCNA expression, G1/S phase transition, the Warburg effect, PKM2 phosphorylation, and nuclear translocation in transformed WB-F344 cells.Moreover, the Warburg effect was inhibited by stattic, a specific inhibitor of STAT3, and further reduced in transformed WB-F344 cells after the intervention for PKM2.CONCLUSION The Warburg effect is initiated in liver precancerous lesions in rats. STAT3 activation promotes the Warburg effect by enhancing the phosphorylation of PKM2 in transformed WB-F344 cells. 展开更多
关键词 WARBURG effect Hepatic PROGENITOR cell Signal transducer and activator of transcription 3 pyruvate kinase M2 LIVER PRECANCEROUS lesion
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EXPERIMENTAL STUDIES ON A NEW CHEMICAL OSCILLATING REACTION SYSTEM OF PYRUVIC ACID-BrO_3 ̄--H_2SO_4-[CuL] ̄(2+)
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《Chinese Chemical Letters》 SCIE CAS CSCD 1995年第11期991-994,共4页
In this paper a new chemical oscillating reaction in the pyruvic acid-BrO-H2SO4 - [CuL](ClO4)2 system, where L is 5, 7, 12, 14-tetraethyl-7, 14-dimethyl-1, 4, 8, 11 -tetraazacyclotetradeca-4, 11-diene, is reported. Th... In this paper a new chemical oscillating reaction in the pyruvic acid-BrO-H2SO4 - [CuL](ClO4)2 system, where L is 5, 7, 12, 14-tetraethyl-7, 14-dimethyl-1, 4, 8, 11 -tetraazacyclotetradeca-4, 11-diene, is reported. The features of the oscillations are studied in detail. The effects of Ag+,Hg2+,CCl4, Vc, H2O2, acrylonitrile, and temperature on the oscillation system are also discussed. 展开更多
关键词 ACID pyruvIC SO BrO3
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Effect of Pyruvate on Polyol Pathway and Lens Epithelial Cells Apoptosis in Diabetic Rats
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作者 Yanxiu Qi Jisong Zhang 《眼科学报》 2006年第4期259-264,共6页
Purpose: To investigate the effect of polyol pathway on lens epithelial cells apoptosis and the activity of caspase-3 and its reversal by pyruvate in diabetic rats. Methods: 220 Wister rats were divided into 3 groups:... Purpose: To investigate the effect of polyol pathway on lens epithelial cells apoptosis and the activity of caspase-3 and its reversal by pyruvate in diabetic rats. Methods: 220 Wister rats were divided into 3 groups: control group, model group and treatment group. After streptozotocin (STZ) induced cataract, the treatment group received 2% pyruvate in the diet and drinking. The opacification of lens was detected by microscope every 2 weeks. On 4W, 8W and 12W of the experiment, glucose and sorbitol in the lens were quantified by high-performance liquid chromatography. The percentage of lens epithelial cells undergoing apoptosis was measured by Annexin Ⅴ/PI staining. The activity of caspase-3 was analyzed by Western-blot. Results: Studies show that there was significant increase of glucose, sorbitol in lens of model group, the apoptosis rate and caspase-3 activity of lens epithelial cells were also gradually increase. Pyruvate treatment decreased the levels of sotbitol, glucose, lens epithelial cells apoptosis and caspase-3 activity. The progress of cataract was also significantly delayed. Conclusions: Polyol pathway, possibly through regulation of the activity of caspase-3, can induce apoptosis of lens epithelial cell. Pyruvate ingested orally can effective inhibit diabetic cataractogenesis in rats through inhibit polyol pathway. 展开更多
关键词 Diabetes mellitus LENS Epithelial cells Polyol pathway APOPTOSIS CASPASE-3 pyruvate
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BASIC HYDROLYSIS OF ETHYL OXAL-ACETATE AND SOME CHEMICAL CHARACTERS OF 3-ETHOXY CAEBONYL PYRUVIC ACID
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作者 Yun Zhen JIANG, Dong WEI and Zhi Zhong ZHAO Institute of Materia Medica Chinese Academy of Medical Sciences Beijing 100050 《Chinese Chemical Letters》 SCIE CAS CSCD 1992年第3期171-172,共2页
The products of basic hydrolysis of ethyl oxal-acetate and the preparation of 3-ethoxy carbonyl pyruvic acid 1 are reported.Esterification reaction of 1 with unhindered alcohols could be carried out smoothly, but it w... The products of basic hydrolysis of ethyl oxal-acetate and the preparation of 3-ethoxy carbonyl pyruvic acid 1 are reported.Esterification reaction of 1 with unhindered alcohols could be carried out smoothly, but it was unsuccessful with hindered alcohols. 展开更多
关键词 BASIC HYDROLYSIS OF ETHYL OXAL-ACETATE AND SOME CHEMICAL CHARACTERS OF 3-ETHOXY CAEBONYL pyruvIC ACID HO OC ACID
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丙酮酸对肺炎克雷伯氏菌微氧发酵甘油产1,3-丙二醇的影响 被引量:4
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作者 王晓楠 王凤寰 +1 位作者 吴家鑫 谭天伟 《生物加工过程》 CAS CSCD 2010年第3期23-27,共5页
微氧条件下,考察肺炎克雷伯氏菌发酵生产1,3-丙二醇过程中柠檬酸和丙酮酸对发酵过程的影响。摇瓶实验结果表明:添加柠檬酸能抑制菌体生长和1,3-丙二醇合成;丙酮酸对菌体生长和1,3-丙二醇合成有一定的促进作用。5 L发酵罐批式发酵表明:... 微氧条件下,考察肺炎克雷伯氏菌发酵生产1,3-丙二醇过程中柠檬酸和丙酮酸对发酵过程的影响。摇瓶实验结果表明:添加柠檬酸能抑制菌体生长和1,3-丙二醇合成;丙酮酸对菌体生长和1,3-丙二醇合成有一定的促进作用。5 L发酵罐批式发酵表明:补料培养基中加入8 g/L丙酮酸,1,3-丙二醇的产量提高了约10.8%,转化率提高了约4.4%,比生长速率提高了约10.8%。上述结果初步表明,强化能量的产生能够有效促进1,3-丙二醇的合成,可以利用分子生物学手段强化丙酮酸的产生以促进1,3-丙二醇的合成。 展开更多
关键词 丙酮酸 1 3-丙二醇 微氧发酵
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固定床反应器中丙酮酸乙酯在Pt/γ-Al_2O_3催化剂上的不对称加氢反应 被引量:7
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作者 李晓红 尤欣 +4 位作者 梁长海 张遂之 魏昭彬 李绪渊 李灿 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2000年第12期1900-1903,共4页
采用固定床反应器对辛可尼定修饰的 Pt/γ-Al2 O3 催化剂上丙酮酸乙酯的多相不对称加氢体系进行了研究 ,同时用高压釜反应器进行了对比 ,分别取得 60 %和 90 %的 e.e.值 .在两种不同的反应器中 ,溶剂对反应结果的影响不同 ,在高压釜反... 采用固定床反应器对辛可尼定修饰的 Pt/γ-Al2 O3 催化剂上丙酮酸乙酯的多相不对称加氢体系进行了研究 ,同时用高压釜反应器进行了对比 ,分别取得 60 %和 90 %的 e.e.值 .在两种不同的反应器中 ,溶剂对反应结果的影响不同 ,在高压釜反应器中乙酸的效果好于乙醇 ,而在固定床反应器中则相反 ,推测在固定床反应器中催化表面反应机理与所用溶剂的介电常数或其极性有关 .以 CO探针分子对辛可尼定在催化剂表面的吸附行为进行了红外光谱研究 。 展开更多
关键词 Pt/γ-Al2O3催化剂 丙酮酸乙酯 不对称加氢
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丙酮酸乙酯对大鼠缺血再灌注心肌Bcl-2、Bax和caspase-3表达的影响 被引量:1
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作者 胡志伟 郭家龙 张凯伦 《山东医药》 CAS 北大核心 2007年第8期21-22,共2页
目的探讨丙酮酸乙酯(EP)对缺血再灌注(I/R)心肌细胞凋亡的可能机制。方法将24只雄性SD大鼠随机分为对照组、I/R组和EP组各8只,均建立Langendorff离体心脏模型,对照组K-H液持续灌流180 min;I/R组平衡灌流30 min,全心停灌30 min,再灌120 m... 目的探讨丙酮酸乙酯(EP)对缺血再灌注(I/R)心肌细胞凋亡的可能机制。方法将24只雄性SD大鼠随机分为对照组、I/R组和EP组各8只,均建立Langendorff离体心脏模型,对照组K-H液持续灌流180 min;I/R组平衡灌流30 min,全心停灌30 min,再灌120 min;EP组试验程序与I/R组相同,平衡15 min后和再灌注期间使用含2 mmol/L EP的K-H液。分别以缺口末端标记法及免疫组化法检测各组心肌细胞凋亡指数(AI)及Bcl-2、Bax和caspase-3蛋白表达。结果I/R组AI和Bcl-2、Bax、caspase-3表达水平均明显高于对照组;与I/R组相比,EP组AI和Bax、caspase-3表达水平明显降低,而Bcl-2表达水平明显升高。结论EP可抑制离体大鼠I/R损伤过程中的心肌细胞凋亡,其机制可能为下调Bax、caspase-3表达,上调Bcl-2表达。 展开更多
关键词 丙酮酸乙酯 细胞凋亡 BCL-2 BAX CASPASE-3
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3-溴丙酮酸对人结肠癌SWⅢ-C细胞增值和凋亡的影响 被引量:1
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作者 刘晓红 王绍志 +4 位作者 刘晓梅 何福海 郭丛娟 侯林中 郑学仿 《肿瘤药学》 CAS 2012年第6期417-421,共5页
目的研究3-溴丙酮酸对SWⅢ-C细胞增殖和凋亡的影响。方法利用透射电镜、MTT法、流式细胞术、免疫组化等方法检测3-溴丙酮酸作用于SWⅢ-C细胞后,其细胞形态、超微结构的改变;细胞增殖、细胞周期分布和细胞凋亡率的变化以及Bcl-2、c-myc和... 目的研究3-溴丙酮酸对SWⅢ-C细胞增殖和凋亡的影响。方法利用透射电镜、MTT法、流式细胞术、免疫组化等方法检测3-溴丙酮酸作用于SWⅢ-C细胞后,其细胞形态、超微结构的改变;细胞增殖、细胞周期分布和细胞凋亡率的变化以及Bcl-2、c-myc和mtp53蛋白表达的变化。结果 3-溴丙酮酸可抑制SWⅢ-C细胞的增殖,浓度为25μg·mL-1时抑制作用最明显;3-溴丙酮酸可有效诱导SWⅢ-C细胞凋亡,浓度为25μg·mL-1效果最明显;3-溴丙酮酸可下调SWⅢ-C细胞Bcl-2、c-myc和mtp53蛋白的表达。结论 3-溴丙酮酸可抑制SWⅢ-C细胞增殖并诱导其凋亡,其机制可能与下调Bcl-2、c-myc和mtp53的表达有关。 展开更多
关键词 3-溴丙酮酸 细胞增殖 SWIII-C细胞 细胞凋亡
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丙酮酸对体外循环术后狗心肌细胞凋亡的影响及其对fas、fasL和bcl-2家族蛋白及caspase-3活性的影响
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作者 张顺业 张小龙 张小平 《山西医科大学学报》 CAS 2006年第2期125-129,共5页
目的观察丙酮酸对常规体外循环术后狗心肌细胞凋亡和fas、fasL、bcl-2、bcl-xl、bax、以及bad蛋白表达和caspase-3活性的影响。方法10条拟进行常规体外循环(CPB)的成年家狗被随机分为对照组(n=5)和丙酮酸处理组(n=5)。CPB术前、术后和术... 目的观察丙酮酸对常规体外循环术后狗心肌细胞凋亡和fas、fasL、bcl-2、bcl-xl、bax、以及bad蛋白表达和caspase-3活性的影响。方法10条拟进行常规体外循环(CPB)的成年家狗被随机分为对照组(n=5)和丙酮酸处理组(n=5)。CPB术前、术后和术后3 h分别留取左心室(LV)标本。用原位TUNEL技术检测凋亡的心肌细胞。用免疫组化方法和流式细胞仪测定fas、fasL、bcl-2、bcl-xl、bax和bad蛋白表达。分别用Z-DEVD-AMC底物分解法和TBARS法测定caspase-3活动度和丙二醛(MDA)含量。结果两组中各参数CPB术前与术中在组间和组内均无显著性差异。CPB后,两组的心肌细胞凋亡数明显增高、fas、fasL、bax和bad蛋白表达、caspase-3活性及MDA含量也均较术前和术中明显增高,而丙酮酸(pyruvate)处理组的心肌细胞凋亡数、fas、fasL、bax和bad蛋白表达、caspase-3活性及MDA含量均明显低于对照组。两组bcl-2和bcl-xl表达在CPB术前、术中和术后均无显著性变化。结论pyruvate可以抑制常规CPB术后心肌细胞凋亡,下调fas、fasL、bax和bad蛋白表达,降低caspase-3活性及心肌氧化应激反应。 展开更多
关键词 丙酮酸 心肌 细胞凋亡 体外循环 基因 bcl-2 caspase-3
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4-氯-3-乙基-1-甲基-5-吡唑甲酸的合成工艺研究
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作者 杨桂秋 候浩元 +1 位作者 王曦跃 吴娜 《沈阳化工大学学报》 CAS 2016年第3期227-230,共4页
4-氯-3-乙基-1-甲基-5-吡唑甲酸是合成吡螨胺和唑虫酰胺的重要中间体.以草酸二乙酯和丁酮为原料,经Claisen反应不经分离直接与水合肼环合得到3-乙基-5-吡唑甲酸乙酯;再经甲基化,氯化,水解,酸化得到4-氯-3-乙基-1-甲基-5-吡唑甲酸.探讨... 4-氯-3-乙基-1-甲基-5-吡唑甲酸是合成吡螨胺和唑虫酰胺的重要中间体.以草酸二乙酯和丁酮为原料,经Claisen反应不经分离直接与水合肼环合得到3-乙基-5-吡唑甲酸乙酯;再经甲基化,氯化,水解,酸化得到4-氯-3-乙基-1-甲基-5-吡唑甲酸.探讨了合成工艺条件,考察反应温度、原料配比及溶剂对收率的影响;在水解过程中,研究氢氧化钠的浓度对反应的影响,确定最佳反应条件.总收率达到80.0%. 展开更多
关键词 丙酰丙酮酸乙酯 3-乙基-5-吡唑甲酸乙酯 合成工艺
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电针联合游泳训练对脊髓全横断大鼠脊髓神经营养因子-3及血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶的影响 被引量:4
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作者 杨燕兴 李灵玲 +2 位作者 刘鹏民 王良 周达岸 《中国康复医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期641-646,共6页
目的:探讨电针联合游泳训练对脊髓全横断大鼠脊髓神经营养因子-3(NT-3)及血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)的影响。方法:雌性成年SD大鼠180只,随机分为6个组(正常组,假手术组,损伤组,游泳组,电针组,联合组),每组30只。制作脊髓T10... 目的:探讨电针联合游泳训练对脊髓全横断大鼠脊髓神经营养因子-3(NT-3)及血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)的影响。方法:雌性成年SD大鼠180只,随机分为6个组(正常组,假手术组,损伤组,游泳组,电针组,联合组),每组30只。制作脊髓T10全横断损伤模型。术后第5天开始电针及游泳训练(电针每天30min,电流1m A,频率为2/100Hz,波型为疏密波。游泳第1周游一组,以后每周加一组,一组时间为4min。每周治疗7次)。对照组不进行治疗。术后7d、14d、21d、28d、35d进行运动功能评估(BBB评分),治疗结束时取材。用免疫组化及生化来检测相关因子的表达。结果:(1)各治疗组的运动功能评分较损伤组均有提高(除第1周(P>0.05)),并随时间的延长效果更为明显;在各干预组中,联合组运动功能的恢复最为突出(P<0.01)。(2)治疗组大鼠脊髓损伤区NT-3表达较损伤组均有提高(P<0.05),并随时间的延长而提高,治疗组之间联合组NT-3的表达更为突出(P<0.01)。(3)各治疗组中血清ALT、AST的表达水平较损伤组均有下降(P<0.05),联合组下降最为明显(P<0.01)。结论:游泳训练及电针能够促进脊髓损伤后运动功能的恢复,将两者联合应用效果更为明显。 展开更多
关键词 督脉电针 游泳训练 脊髓全横断 神经营养因子-3 丙转氨酶 谷草转氨酶
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丙酮酸乙酯对缺氧缺血性脑损伤仔鼠海马区caspase-3表达及学习记忆能力影响 被引量:1
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作者 曹阳 张丽华 《中国康复理论与实践》 CSCD 北大核心 2016年第4期409-412,共4页
目的探讨丙酮酸乙酯(EP)对新生大鼠缺氧缺血脑损伤(HIBD)后海马区caspase-3表达及学习记忆能力影响。方法 7日龄Wistar大鼠90只随机分假手术组(n=15)、HIBD组(n=15)、EP1组(n=15,10 ml/kg)、EP2组(n=15,30 mg/kg)、EP3组(n=15,50 mg/kg)... 目的探讨丙酮酸乙酯(EP)对新生大鼠缺氧缺血脑损伤(HIBD)后海马区caspase-3表达及学习记忆能力影响。方法 7日龄Wistar大鼠90只随机分假手术组(n=15)、HIBD组(n=15)、EP1组(n=15,10 ml/kg)、EP2组(n=15,30 mg/kg)、EP3组(n=15,50 mg/kg)和EP4组(n=15,100 mg/kg)。采用经典Rice法制备模型。EP各组于术前30 min及术后每24小时腹腔注射相应剂量EP,共2周。免疫组化染色观察caspase-3阳性细胞数,Morris水迷宫评测逃避潜伏时间和穿过目标象限次数。结果除EP1组caspase-3阳性细胞数与HIBD组无显著性差异(P>0.05)外,其余EP各组较HIBD组均明显减少(P<0.01),EP3组最少(P<0.01)。Morris水迷宫测试:除EP1组逃避潜伏期、穿过目标象限次数与HIBD组无显著性差异(P>0.05)外,其余EP各组均优于HIBD组(P<0.01),EP3组最佳(P<0.01)。结论 EP可以减少HIBD大鼠海马区caspase-3的表达,改善HIBD引起的远期学习记忆能力障碍。 展开更多
关键词 缺氧缺血性脑损伤 丙酮酸乙酯 CASPASE-3 学习记忆能力 大鼠
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丙酮酸激酶M2通过活化信号转导和转录激活因子3影响皮肤鳞状细胞癌上皮间质转化过程 被引量:1
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作者 刘念念 缪旭 +3 位作者 施健 张冬梅 张俐 陈赛 《临床皮肤科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第11期652-660,共9页
目的:检测丙酮酸激酶(PK)M2和磷酸化信号转导和转录激活因子(p-STAT)3在皮肤鳞状细胞癌(CSCC)中的表达情况,初步探讨其在CSCC A431细胞系上皮间质转化过程中的作用机制。方法:选取经组织病理检查确诊的30例CSCC患者肿瘤组织和10例行皮... 目的:检测丙酮酸激酶(PK)M2和磷酸化信号转导和转录激活因子(p-STAT)3在皮肤鳞状细胞癌(CSCC)中的表达情况,初步探讨其在CSCC A431细胞系上皮间质转化过程中的作用机制。方法:选取经组织病理检查确诊的30例CSCC患者肿瘤组织和10例行皮肤美容手术患者术中修整切除的正常皮肤组织,通过免疫组化SP法比较PKM2和p-STAT3在两种组织中的表达情况。分析CSCC中PKM2和p-STAT3表达水平与临床病理资料的相关性。采用慢病毒感染法构建靶向敲低PKM2基因的CSCC A431细胞模型,采用免疫印迹(Western blot)法验证敲低模型的构建效果。通过Transwell实验和细胞划痕实验探讨PKM2对A431细胞迁移能力的影响。采用Western blot法检测STAT3、p-STAT3(Tyr705)、N-cadherin、Vimentin和Slug蛋白的表达。结果:PKM2和p-STAT3在CSCC中均高表达,且两者表达水平之间呈正相关。PKM2和p-STAT3在CSCC中的表达与肿瘤分化程度相关。在A431细胞中敲低PKM2基因后,p-STAT3(Tyr705)、N-cadherin和Slug表达下降,差异有统计学意义(P<0.05),而STAT3和Vimentin表达变化差异无统计学意义。结论:PKM2和p-STAT3的高表达可能参与了CSCC的发生及发展,且PKM2可能通过活化STAT3促进CSCC上皮间质转化过程。 展开更多
关键词 丙酮酸激酶M2 皮肤鳞状细胞癌 上皮间质转化 信号转导和转录激活因子3
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胶质母细胞瘤FGFR3-TACC3融合基因介导丙酮酸激酶M2入核促进DNA损伤修复基础研究 被引量:1
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作者 任修德 李涛 +3 位作者 范吉康 王希森 贾晓丹 杨学军 《中国现代神经疾病杂志》 CAS 北大核心 2023年第8期745-757,共13页
目的探讨胶质母细胞瘤FGFR3-TACC3(F3-T3)融合基因介导丙酮酸激酶M2(PKM2)入核激活DNA损伤修复致替莫唑胺(TMZ)耐药的作用机制。方法慢病毒转染构建稳定表达F3-T3融合基因和空载体的胶质母细胞瘤细胞系U87MG和U251MG,构建稳定表达F3-T3... 目的探讨胶质母细胞瘤FGFR3-TACC3(F3-T3)融合基因介导丙酮酸激酶M2(PKM2)入核激活DNA损伤修复致替莫唑胺(TMZ)耐药的作用机制。方法慢病毒转染构建稳定表达F3-T3融合基因和空载体的胶质母细胞瘤细胞系U87MG和U251MG,构建稳定表达F3-T3融合基因的胶质母细胞瘤裸鼠模型,小动物活体成像系统观察荷瘤鼠肿瘤荧光信号强度;采用生物信息学分析基因芯片转录组数据分析F3-T3融合基因的生物学功能,并分析肿瘤基因组学图谱计划(TCGA)数据库中胶质瘤患者生存期与PKM2基因表达的关系;瞬时转染小干扰RNA(siRNA)敲低PKM2基因表达;CCK-8细胞增殖实验观察经梯度浓度替莫唑胺处理后、转染siRNA后、替莫唑胺联合PKM2抑制剂Compound 3k处理后U87MG和U251MG细胞增殖活性;提取核质蛋白并观察经替莫唑胺处理后总蛋白提取物、胞质提取物和胞核提取物PKM2蛋白表达情况;Western blotting法检测稳定表达F3-T3融合基因的U87MG和U251MG细胞PKM2蛋白相对表达量、磷酸化组蛋白H2AX(p-H2AX)相对表达量、siRNA敲低PKM2基因p-H2AX相对表达量。结果(1)CCK-8细胞增殖实验显示,经替莫唑胺640、320、160、80、40μmol/L处理后F3-T3转染组的U87MG细胞存活率均高于空载体转染组(P=0.000,0.000,0.000,0.004,0.010),经替莫唑胺640、320、160、80、40、20、5μmol/L处理后F3-T3转染组的U251MG细胞存活率亦均高于空载体转染组(P=0.000,0.000,0.000,0.000,0.002,0.001,0.002);然而,经替莫唑胺640、320、160、80、40、20、10、5和2.50μmol/L处理后si-PKM2-1009转染组的U87MG细胞存活率均低于F3-T3转染组(P=0.000,0.000,0.000,0.012,0.006,0.030,0.000,0.007,0.025),经替莫唑胺640、320、160、80、40、20、5μmol/L处理后si-PKM2-1377转染组U251MG细胞存活率亦低于F3-T3转染组(P=0.000,0.000,0.002,0.000,0.002,0.048,0.042);经替莫唑胺640、320、160、80、40、20μmol/L处理后TMZ+Compound 3k组U87MG细胞存活率低于TMZ组(P=0.000,0.000,0.000,0.000,0.001,0.002),经高浓度(640、320、160、80、40μmol/L)替莫唑胺处理后TMZ+Compound 3k组U251MG细胞存活率亦低于TMZ组(P=0.000,0.000,0.000,0.000,0.003),而经低浓度(10、5、2.50μmol/L)替莫唑胺处理后TMZ+Compound 3k组U251MG细胞存活率高于TMZ组(P=0.000,0.000,0.006)。(2)胶质母细胞瘤动物模型显示,荷瘤鼠存在替莫唑胺耐药。(3)生物信息学分析,F3-T3融合蛋白的生物学功能显著富集于DNA修复通路(P=0.000)。TCGA数据库中胶质瘤患者PKM2基因高表达组生存率和总生存期均低于低表达组(P<0.05)。(4)Western blotting法显示,经替莫唑胺处理48 h再更换培养基后24、36和48 h,F3-T3转染组U87MG(P=0.000,0.000,0.004)和U251MG(P=0.000,0.007,0.005)细胞p-H2AX蛋白相对表达量均低于空载体转染组;经替莫唑胺处理后F3-T3转染组U87MG和U251MG细胞均可见明显的PKM2入核,而空载体转染组细胞均未见这一现象;si-PKM2-1009和si-PKM2-1377分别敲低U87MG(P=0.000,0.001,0.006)和U251MG(P=0.000,0.000,0.000)细胞PKM2基因表达的效果最显著。结论F3-T3融合基因可促进PKM2入核,激活DNA损伤修复相关通路,进而介导胶质母细胞瘤对替莫唑胺耐药,不同细胞株对替莫唑胺的耐药浓度不一致,PKM2抑制剂可逆转这种耐药。 展开更多
关键词 胶质母细胞瘤 受体 成纤维细胞生长因子 3 基因融合 丙酮酸激酶 DNA修复 替莫唑胺 抗药性 肿瘤 细胞增殖 免疫印迹法 肿瘤细胞 培养的 疾病模型 动物
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紫草素通过抑制PKM2/PHD3/HIF-1α通路诱导肝癌细胞凋亡 被引量:4
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作者 张换换 陈卓 +2 位作者 赵想弟 霍强 程秀 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期92-98,共7页
目的探讨紫草素诱导人肝癌细胞SMMC-7721死亡的可能机制。方法体外培养人肝癌细胞(SMMC-7721)和正常肝细胞(L-02),实验分为对照组和紫草素给药组(4、8、16μmol/L)。采用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐3-(4,5-二甲基噻唑-2-... 目的探讨紫草素诱导人肝癌细胞SMMC-7721死亡的可能机制。方法体外培养人肝癌细胞(SMMC-7721)和正常肝细胞(L-02),实验分为对照组和紫草素给药组(4、8、16μmol/L)。采用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐3-(4,5-二甲基噻唑-2-yl)-2,5-二苯基四氮唑溴盐,MTT法检测细胞活力,试剂盒检测三磷酸腺苷(ATP)和乳酸水平,免疫共沉淀和免疫荧光双染实验明确M2型丙酮酸激酶(PKM2)、脯氨酰酸羟化酶3(PHD3)、缺氧诱导因子1α(HIF-1α)三者之间的作用关系及蛋白表达情况;Annexin V/PI检测细胞凋亡;Western blot观察PKM2、PHD3、HIF-1α及凋亡蛋白Bax、cleaved caspase-3、Bcl-2表达水平;采用小干扰核糖核酸(siRNA)干扰法建立PKM2低表达的人肝癌SMMC-7721细胞,Western blot检测PKM2低表达对人肝癌SMMC-7721细胞中的PHD3、HIF-1α蛋白表达水平的影响。结果紫草素对SMMC-7721和L-02细胞的半抑制浓度(IC50)分别是8.041μmol/L与31.75μmol/L,与对照组相比紫草素能抑制肝癌SMMC-7721细胞中PKM2、HIF-1α和PHD3蛋白表达及PKM2、HIF-1α入核(P<0.05)。免疫共沉淀和免疫荧光双染实验证实,紫草素可以抑制PKM2/PHD3/HIF-1α复合体形成(P<0.05),并且抑制有氧糖酵解产物乳酸和ATP含量(P<0.05)。与对照组相比,PKM2敲低后PHD3和HIF-1α表达明显降低(P<0.05);与未处理组相比,紫草素处理后凋亡率明显升高且凋亡蛋白Bax和cleaved caspase-3表达升高,Bcl-2表达下降(P<0.05)。结论紫草素靶向PKM2调控PHD3/HIF-1α复合物,从而抑制肝癌细胞的有氧糖酵解,破坏其供能途径,导致肝癌细胞凋亡。 展开更多
关键词 肝细胞癌 紫草素 M2型丙酮酸激酶 脯氨酰酸羟化酶3 缺氧诱导因子1Α 凋亡
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丙酮酸乙酯对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠海马神经元凋亡及PI3- K/Akt信号通路的影响 被引量:10
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作者 周一博 苏军 《中西医结合心脑血管病杂志》 2019年第4期519-524,共6页
目的探讨丙酮酸乙酯(EP)对缺氧缺血性脑损伤(HIBI)新生大鼠海马神经元凋亡及磷脂酰肌醇3-激酶(PI3-K)/蛋白激酶(Akt)信号通路的影响。方法将7 d龄Wistar大鼠随机分为假手术组(sham组)、模型组(HIBI组)、丙酮酸乙酯处理组(EP组,于缺血缺... 目的探讨丙酮酸乙酯(EP)对缺氧缺血性脑损伤(HIBI)新生大鼠海马神经元凋亡及磷脂酰肌醇3-激酶(PI3-K)/蛋白激酶(Akt)信号通路的影响。方法将7 d龄Wistar大鼠随机分为假手术组(sham组)、模型组(HIBI组)、丙酮酸乙酯处理组(EP组,于缺血缺氧前30 min行3 mg/kg EP腹膜内注射)。采用Rice法制备HIBI模型,透射电子显微镜下观察新生大鼠海马区神经元变化;2,3,5-三苯基四氮唑-水合物(TTC)染色法检测缺氧缺血脑组织损伤情况;TUNEL法和双重免疫荧光染色法检测海马神经元凋亡情况;免疫组织化学法和蛋白免疫印迹法检测海马组织p-Akt和Bcl-2蛋白表达情况。结果模型制备24 h后,sham组神经元结构基本正常,HIBI组神经元呈气蚀性改变,EP组神经元气蚀性变化减少,神经元受损情况改善。模型制备48 h后,与sham组比较,HIBI组梗死面积显著增加(P<0.05);与HIBI组比较,EP组梗死面积显著降低(P<0.05)。sham组TUNEL阳性染色细胞少,而HIBI组TUNEL阳性细胞显著高于sham组(P<0.05);EP组TUNEL阳性细胞数显著降低(P<0.05)。HIBI组双标记阳性细胞比例显著高于sham组(P<0.05);与HIBI组比较,EP组双标记阳性细胞比例显著降低(P<0.05)。与HIBI组比较,EP组p-Akt和Bcl-2的平均光密度值显著高于HIBI组(P<0.05);EP组p-Akt和Bcl-2蛋白表达水平显著增加(P<0.05)。结论 EP处理通过激活PI3K/Akt信号通路,促进Bcl-2表达,缓解HIBI引起的神经元凋亡,从而发挥脑保护作用。 展开更多
关键词 缺血缺氧性脑损伤 大鼠 丙酮酸乙酯 海马神经元 细胞凋亡 PI3-K/Akt信号通路
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通过抑制PDHK3的表达降低乳酸水平增加CHO细胞抗体表达量
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作者 李鹃 蔡洁行 +1 位作者 张峥 朱焕章 《生物化工》 2020年第3期28-31,共4页
目的:通过抑制乳酸产生相关基因丙酮酸脱氢酶激酶3(PDHK3)的表达,降低CHO细胞系的乳酸表达,增加CHO细胞系蛋白表达量。方法:针对PDHK3序列设计特定的shRNA质粒,在CHO细胞系构建过程中将含有此shRNA的质粒与表达抗体蛋白的质粒一同转染... 目的:通过抑制乳酸产生相关基因丙酮酸脱氢酶激酶3(PDHK3)的表达,降低CHO细胞系的乳酸表达,增加CHO细胞系蛋白表达量。方法:针对PDHK3序列设计特定的shRNA质粒,在CHO细胞系构建过程中将含有此shRNA的质粒与表达抗体蛋白的质粒一同转染至宿主细胞中,经过抗生素筛选后进行批次补料生产抗体蛋白。测定乳酸及蛋白产量,同时检测PDHK3基因的mRNA表达水平及shRNA质粒中的neomycin基因拷贝数。结果:利用此方法分别转染的不同抗体蛋白分子,PDHK3基因的mRNA水平降低了65.0%~76.0%,批次补料过程乳酸含量显著降低,同时相应的抗体蛋白表达量提升了18.6%~233.0%。结论:利用shRNA方法抑制乳酸相关的PDHK3基因的表达,可以有效降低乳酸表达,同时提高目的蛋白的表达。 展开更多
关键词 SHRNA CHO细胞 乳酸 丙酮酸脱氢酶激酶3(PDHK3) 抗体
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甘蓝型油菜G3PDH和PK基因对氮肥的响应
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作者 周晓婴 付三雄 《中国农学通报》 2019年第18期110-114,共5页
为了研究氮肥施用量对油菜含油量以及相关基因表达水平的影响,本研究以甘蓝型油菜‘宁油22号’作为材料,在0 kg/hm^2、320 kg/hm^2、640 kg/hm^2氮肥水平下分别测定‘宁油22号’种子和角果皮的含油量,同时检测G3PDH和PK基因在不同氮肥... 为了研究氮肥施用量对油菜含油量以及相关基因表达水平的影响,本研究以甘蓝型油菜‘宁油22号’作为材料,在0 kg/hm^2、320 kg/hm^2、640 kg/hm^2氮肥水平下分别测定‘宁油22号’种子和角果皮的含油量,同时检测G3PDH和PK基因在不同氮肥水平下以及不同组织中的表达含量。结果发现,随着施氮量的增加,‘宁油22号’含油量下降,在0 kg/hm^2和320 kg/hm^2水平时下降不明显,在640 kg/hm^2水平时下降明显,并且随着施氮量的增加,G3PDH和PK基因表达量均增强。本研究还分别分析了在种子和角果皮中G3PDH和PK基因的比值,以及开花30天后跟开花15天后的表达比,结果表明二者均在640 kg/hm^2水平下达到最高;PK基因在种子与角果皮中的比值在640 kg/hm^2水平时达到最高,在开花30天后跟15天后的表达比在0 kg/hm^2水平时达到最高。 展开更多
关键词 氮肥水平 甘蓝型油菜 含油量 丙酮酸激酶 甘油-3-磷酸脱氢酶 RNA提取 荧光定量PCR 油脂合成基因
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Effect of artemether on glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,phosphogly-cerate kinase,and pyruvate kinase of Schistosoma japonicum harbored in mice 被引量:12
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作者 肖树华 尤纪青 +4 位作者 郭惠芳 焦佩英 梅静艳 姚民一 冯正 《中国药理学报》 CSCD 1998年第3期279-281,共3页
目的:研究蒿甲醚(Art)对日本血吸虫3磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)、磷酸甘油酸激酶(PGK)和丙酮酸激酶(PK)的影响.方法:小鼠感染血吸虫尾蚴32-38d后igArt100-300mg·kg-1,24-7... 目的:研究蒿甲醚(Art)对日本血吸虫3磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)、磷酸甘油酸激酶(PGK)和丙酮酸激酶(PK)的影响.方法:小鼠感染血吸虫尾蚴32-38d后igArt100-300mg·kg-1,24-72h后取虫测定上述3种酶和乳酸含量.结果:小鼠igArt300mg·kg-1后24-48h,血吸虫♀、♂虫的PGK和PK活力被抑制27%-48%;♀虫的GAPDH对Art亦较敏感,♂虫则否.给药后72h,♀虫乳酸含量降低72%,♂虫的降低49%.结论:Art对血吸虫的PGK和PK活力有明显抑制作用,♀虫的GAPDH对Art亦较敏感。 展开更多
关键词 日本血吸虫 蒿甲醚 磷酸甘油酸 激酶 丙酮酸
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碳酸钙促进丙酮酸发酵过程中α-酮戊二酸的形成 被引量:19
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作者 刘立明 李寅 +1 位作者 堵国成 陈坚 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期745-749,共5页
在多重维生素营养缺陷型菌株光滑球拟酵母CCTCCM2 0 2 0 19发酵生产丙酮酸的摇瓶和发酵罐实验中发现 ,CaCO3的添加对发酵液中α 酮戊二酸 (α KG)的积累有重要影响。在维生素浓度不变且供氧充分的前提下 ,延迟CaCO3添加时间可明显抑制α... 在多重维生素营养缺陷型菌株光滑球拟酵母CCTCCM2 0 2 0 19发酵生产丙酮酸的摇瓶和发酵罐实验中发现 ,CaCO3的添加对发酵液中α 酮戊二酸 (α KG)的积累有重要影响。在维生素浓度不变且供氧充分的前提下 ,延迟CaCO3添加时间可明显抑制α KG的产生 ,并提高丙酮酸与α KG的碳摩尔比 (CPYR Cα KG) ;而增加培养基中的CaCO3浓度会导致α KG积累的增加。用不同物质调节发酵液中pH的实验证实 :在丙酮酸发酵过程中 ,Ca2 + 对α KG的积累起主要作用 ,CO32 - 起辅助作用 ,两者对α KG的积累具有协同效应。维持培养基中CaCO3浓度不变 ,改变培养基中硫胺素的浓度 ,对α KG的积累 ,特别是对CPYR Cα KG值没有影响 ;而增加培养基中生物素的浓度 ,则导致α KG的浓度不断上升且CPYR Cα KG 值不断下降。当有Ca2 + 存在时 ,胞内丙酮酸羧化酶的活性最高可提高 4 0 % ,而丙酮酸脱氢酶系的活性没有明显变化。结果表明 ,丙酮酸发酵过程中α KG的形成是由于CaCO3促进了丙酮酸羧化反应 ,其中Ca2 + 可显著提高丙酮酸羧化酶的活性 ,而CO32 - 则有可能作为丙酮酸羧化反应的底物。 展开更多
关键词 光滑球拟酵母 a-酮戊二酸 碳酸钙 丙酮酸羧化酶 丙酮酸 发酵
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