裂褶菌产内切β-1,3-葡聚糖酶的特性研究

对裂褶菌所产内切β-1,3-葡聚糖酶进行有效分离纯化并用电泳法对其纯度进行鉴定,进而研究其酶学特性。结果表明:经过DEAE-Sephadex A-50离子交换层析和Sephadex G-75凝胶过滤分离纯化得到电泳纯分子量约为45 kD的内切β-1,3-葡聚糖酶,其最适pH为5.0,最适温度为45℃;Fe2+、Ba2+、Cu2+对该酶有激活作用,Zn2+、K+、Ag+、Hg2+、Ca2+对该酶有一定抑制作用;该酶的米式常数Km为0.8813 mg/mL。由圆二色谱分析发现该酶二级结构中的含量分别为α-螺旋4.6%、β-折叠49.1%、β-转角8.7%、无规则卷曲37.5%,表明其为典型的β型结构。

裂褶菌产内切β-1,3-葡聚糖酶的分离纯化

采用不同饱和度的硫酸铵溶液对内切β-1,3-葡聚糖酶粗酶液进行分段盐析,以确定最佳盐析条件,将盐析处理后的酶液经透析浓缩、DEAE-Sephadex A-50离子交换层析、Sephadex G-75凝胶过滤层析等进一步分离纯化,浓缩纯化后的含酶组分,经过SDS-PAGE电泳分析其纯度并初步确定其分子量。结果显示:经过纯化后的内切β-1,3-葡聚糖酶的比活力由20.90U/mg提高到933.37U/mg,纯化倍数为44.7倍,酶活回收率为11.6%,电泳分析呈单一条带,分子量近似为45ku。

裂褶菌产内切β-1,3-葡聚糖酶培养基组成的优化研究

采用恒温摇床培养法培养裂褶菌,研究了裂褶菌产内切β-1,3-葡聚糖酶培养基组成中的碳源、氮源及各种无机盐的单因素参数,并采用四因素三水平正交实验对主要影响因素进行分析,从而确定最佳的产酶培养基配方为:葡萄糖2%,牛肉膏0.3%,NH4Cl0.1%,KH2PO40.05%,MgSO40.05%。

胶质细胞源性神经营养因子(△N39)-R9神经营养活性和透过血脑屏障的研究

为了研究胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)在中枢神经系统疾病中的治疗应用,运用基因突变、蛋白质融合表达和蛋白质纯化技术获得分子质量较小的GDNF(!N39)活性片段.将HIV-1Tat蛋白转导区(proteintransductiondomain,PTD)的9个碱性氨基酸49RKKRRQRRR57模拟物9个精氨酸(R9)与GDNF("N39)活性片段融合表达,获得纯度达95%以上的GDNF(#N39)-R9融合蛋白.将GDNF、GDNF($N39)、GDNF(%N39)-R9分别加入原代培养的中脑多巴胺能神经元和转染GDNF受体GFR&1和Ret的PC12细胞中,观察它们的神经营养活性和毒性.运用脑微血管内皮细胞株B-Endo3,观察GDNF(’N39)-R9蛋白穿越血管内皮细胞膜的功能;运用脑血管内皮细胞和Matrigel铺板模拟血脑屏障,Transwell法检测Tat-GDNF((N39)蛋白穿越脑血管内皮细胞和外周胶质膜的能力.结果显示:GDNF()N39)-R9蛋白具有类似GDNF的神经营养活性,促进原代培养的中脑多巴胺能神经元和稳定表达GFR*1和Ret受体的PC12-GFR+1-Ret细胞株的存活,没有显示毒性,并且能很好地穿过脑微血管内皮细胞层和模拟的血脑屏障.

以BHDA为单体的聚酰亚胺的合成及其性能

以降冰片烯二酸酐为原料,通过羰甲酯化反应,酯的水解,酸脱水最后生戍双环[2.2.1]庚烷-2-endo,3- endo,5-exo,6-exo-四羧酸2,3:5,6-二酸酐(BHDA);将制得的酸酐作为二酐单体与4种二胺单体在溶剂中高温溶液缩聚生成4种聚酰亚胺(PI),并对它们的性能进行了测试分析.此类聚酰亚胺具有易溶于强极性有机溶剂(2种含氟元素的也可溶于普通有机溶剂),颜色较浅,较高的热分解温度,玻璃化温度低,易于加工等特性.

三氯化铝催化体系合成金刚烷

用三氯化铝－助催化剂的催化体系进行了金刚烷合成的研究。在常压搅拌反应器中考察了助催化剂的种类、使用量、异构化反应温度、时间及反应介质等因素对金刚烷收率的影响，确定了异构化合成金刚烷的最佳工艺条件，建立了提高金刚烷合成收率的新工艺。该工艺具有设备简单、助催化剂价格低廉、金刚烷收率高并易于工业化等特点。在最佳的工艺条件下，金刚烷的收率达６２１％。

酶促立体有择反应条件优化的初探

具光学活性的内型－三环〔５，２，１，０２，６〕癸－８－烯－３，５－二醇－５－乙酸酯是合成光学活性天然产物的很有用的手性合成子。采用正交试验优选出目标化合物最佳合成条件后，按作者设计的条件进行实验，获得了（＋）内型－三环〔５，２，１，０２，６〕癸－８－烯－３，５－二醇－５－乙酸酯。其（＋）对映体过量百分率（％ｅ．ｅ）＞９８．３％，产率８１％。提示本文报道的优化条件对该酶促反应是适合的。

钯催化烯丙基磺酰胺的分子内胺氟化反应

报道了钯催化的非活性烯烃的胺氟化反应,在酸性添加剂HOAc的作用下,反应以较好的收率和区域选择性地得到6-endo环合产物,实现了氟代的环状磺胺类产物的有效合成.

急性脑梗死患者血清RBP、NLR、PTX3水平与颈动脉粥样硬化斑块稳定性的关系研究

目的:探讨急性脑梗死(ACI)患者血清视黄醇结合蛋白(RBP)、中性粒细胞与淋巴细胞比值(NLR)、内正五聚蛋白3(PTX3)水平与颈动脉粥样硬化斑块稳定性的关系。方法:收集我院2017年1月~2019年1月收治的300例ACI患者,根据颈动脉粥样硬化斑块超声结果分为稳定斑块组(n=173)和不稳定斑块组(n=127),另选同期在我院体检中心进行健康体检的志愿者100例为对照组。对ACI患者和对照组进行RBP、NLR、PTX3、血脂指标的检测,并进行组间统计学对比。采用Pearson检验对ACI患者的RBP、NLR、PTX3与血脂指标的相关性进行分析。结果:三组受试者性别、年龄、体质指数(BMI)、吸烟史、饮酒史等基础资料对比无显著性差异(P>0.05)。稳定斑块组、不稳定斑块组患者的RBP、NLR、PTX3水平均高于对照组,且不稳定斑块组上述指标水平高于稳定斑块组(P<0.05)。稳定斑块组、不稳定斑块组患者的总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C)、纤维蛋白原(FIB)水平均高于对照组,且不稳定斑块组上述指标水平高于稳定斑块组(P<0.05)。经Pearson检验分析,ACI患者的RBP、NLR、PTX3水平与TC、TG、LDL-C、FIB均呈正相关性(P<0.05)。结论:在ACI患者中RBP、NLR、PTX3水平较高,并与患者的颈动脉粥样硬化斑块的稳定性有紧密的关联性。初步推测RBP、NLR、PTX3可能参与颈动脉粥样硬化斑块的形成,进而影响ACI疾病的发生发展过程。

利用乳酸乳球菌AcmA表面展示β-1,3-1,4-葡聚糖酶

采用PCR扩增乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)MB191菌株的全长肽聚糖水解酶基因acmA,通过C-末端融合构建了与绿色荧光基因gfp的融合基因acmA-gfp,再连接于表达载体pMG36k上后得到可组成型表达AcmA-GFP融合蛋白的重组质粒pMB137,然后将该质粒电转化导入到乳酸乳球菌AS1.2829中获得重组菌MB137。经SDS-PAGE检测,重组菌MB137可表达预期的分子量约74kD的蛋白质。Western blotting、细胞分级分离组分的荧光活性测定和特异GFP二抗标记的流式细胞仪检测证实GFP被成功锚定在重组菌细胞表面,被锚定蛋白约占总表达融合蛋白的35%。进一步通过从枯草芽胞杆菌BF7658基因组中扩增去信号肽序列的β-1,3-1,4葡聚糖酶基因gls,来取代pMB137中的gfp,得到携带融合基因acmA-gls的重组质粒pMB138,经导入到乳酸乳球菌AS1.2829后得到重组菌MB138,其全细胞β-1,3-1,4-葡聚糖水解酶的活性约为12U/mL菌液,明显高于对照菌株。

连续温度变化对β-1,3-葡聚糖酶酶解酵母β-葡聚糖的影响

为了探索反应温度对产物组分的影响,利用自制连续变化的温度梯度实验装置,研究了22℃~60℃（±0.1℃）区间内温度对一内切β-1,3-葡聚糖酶酶解酵母β-葡聚糖的影响,获得了酶解过程多点温度特性数据。分析表明：该酶酶解酵母β-葡聚糖的活化能为84.17 kJ/mol;以产物积累表示的最适酶解温度随时间延长呈指数下降;酶解产物组分受温度的影响,低温较高温获得的寡糖链长,高温区大于46℃可以获得以昆布二糖、昆布三糖为主的组分,而低温区小于30℃可以获得昆布五糖及更大分子量的产物。研究结果可为寡糖生产提供精确的温度控制参数。

血管内皮生长因子受体3与膀胱癌淋巴转移的关系

目的探讨血管内皮生长因子-c（VEGF-C）、血管内皮生长因子受体3（VEGFR-3）在膀胱癌组织中的表达与肿瘤淋巴转移的关系。方法采用ElivisionTMPlus二步法检测膀胱癌组织中VEGF-C、VEG-FR．3的表达情况。结果在18例膀胱癌组织中，VEGF-C表达阳性率为72％，VEGFR-3表达阳性率为67％。VEGF-C在膀胱癌转移的淋巴结中的表达水平较未发生转移的淋巴结高。结论在膀胱癌组织及周围淋巴结中，VEGF-C、VEGFR-3的表达水平与淋巴转移密切相关，VEGF-C、VEGFR-3的表达强度可作为膀胱癌淋巴结转移的判断指标之一。

糖苷内切酶法合成带有均一糖链的糖蛋白和糖肽

糖基化作用是真核生物蛋白翻译后修饰的重要环节,糖链对于蛋白质的结构和功能有重要影响。目前,合成带有均一糖链的糖蛋白和糖肽的策略主要有:(1)利用糖基化的氨基酸进行固相或液相合成。(2)将氨基化的寡糖链直接与预先合成的带有糖基化位点的多肽相结合。(3)利用糖基转移酶和糖苷酶的化学酶法合成策略。以上三种方法,都有各自的优点和不足。相对而言,利用微生物来源的β-N-乙酰氨基葡萄糖苷内切酶(ENGase)合成策略是目前发展较快且更具实践意义的方法。糖苷内切酶法合成策略的研究进展包括:(1)ENGase催化机制的研究。(2)糖基供体的研究。(3)ENGase突变体的研究。(4)糖苷内切酶法的应用。

前交叉韧带单束重建股骨隧道定位方式的选择与CT三维模型评估

目的 比较前交叉韧带（ACL）单束重建术中股骨钩定位法与钻头直接定位法确定股骨隧道的特点,并对其应用CT三维模型进行分析。方法 回顾性分析自2011-02—2013-10关节镜下ACL单束重建术86例,应用股骨定位钩定位股骨隧道34例（股骨钩定位组）,应用钻头直接定位股骨隧道52例（钻头直接定位组）,术后行膝关节三维CT扫描并结合四分法、坐标轴法比较2组隧道长度以及隧道的位置。结果 钻头直接定位组隧道长度34-41（37.0±2.1）mm,股骨钩定位组隧道长度38-48（42.0±3.5）mm。在四分法4×4网格中,股骨钩定位组有31例股骨隧道位置落于1a中,3例落于2a中;钻头直接定位组有49例股骨隧道位置落于2b中,2例落于1b中,1例落于2a中。在t线上,股骨钩定位组股骨隧道位置与前内侧束（AM）位置差异无统计学意义（P=0.295）,与后外侧束（PL）位置差异有统计学意义（P〈0.001）;在h线上,股骨钩定位组股骨隧道位置与AM、PL位置差异均有统计学意义（P〈0.001）。在t线和h线上,钻头直接定位组股骨隧道位置与AM、PL位置差异均无统计学意义（P〉0.025）。结论 股骨钩定位法股骨隧道位置偏高、偏后,但长度较长;钻头直接定位法股骨隧道位置更接近解剖止点,但长度偏短。ACL单束重建术中股骨隧道定位方法可根据情况灵活选择。