3-羟基-3甲基戊二酰辅酶A裂解酶缺乏症临床特点及基因变异分析

目的了解3-羟基-3甲基戊二酰辅酶A裂解酶缺乏症的临床特点及基因变异情况。方法分析6例3-羟基-3甲基戊二酰辅酶A裂解酶缺乏症患儿的临床资料及基因检测结果。结果6例患儿,男性3例,女性3例。1例家族史阳性。3例患儿当地医院行新生儿筛查提示该疾病,2例患儿为发病后临床诊断,1例患儿至今未发病。5例患儿发病年龄10天~5岁。初诊年龄为1个月~7岁,发病时均有不同程度的代谢危象、低血糖和高乳酸血症等表现。2例患儿死亡。血串联质谱显示3-羟基异戊酰肉碱升高,部分患儿伴有己二酰肉碱升高;尿有机酸分析提示3-羟基-3-甲基戊二酸显著升高,伴3-甲基戊烯二酸、3-羟基异戊酸等增高。4例患儿基因检测均发现HMGCL基因变异:2例c.122G>A(p.R41Q)纯合;1例c.697C>T(p.H233Y)纯合;1例c.145-2A>G和c.590G>A(p.C197Y)复合杂合。其中,c.697C>T(p.H 233Y)、c.145-2A>G和c.590G>A(p.C 197Y)变异均为首次报道,蛋白结构预测均为可能有害,ACMG评级为可能致病。另2例患儿未行基因检测。结论3-羟基-3甲基戊二酰辅酶A裂解酶缺乏症临床表型多样,结合血串联质谱、尿有机酸分析及基因诊断可确诊。对3-羟基-3甲基戊二酰辅酶A裂解酶缺乏症的筛查有助于早期确诊及合理治疗。

氯化3-氰-2-羟丙基三甲铵的拆分

研究了利用N-乙酰-L-谷氨酸为拆分试剂,成功的对氯化3-氰-2-羟丙基三甲胺进行光学拆分,一次拆分光学纯度为92%,产率为37%;二次拆分光学纯度达95%,产率为29.1%。

左卡尼汀调控钙调神经磷酸酶表达抑制过氧化氢诱导心肌细胞凋亡作用

目的研究钙调神经磷酸酶(CaN)是否参与左卡尼汀对过氧化氢(H2O2)诱导心肌细胞凋亡的抑制作用。方法将新生乳鼠心肌细胞体外培养进行实验,实验分为对照组、H2O2组、左卡尼汀+H2O2组、环孢素A(CsA)+H2O2组。对照组采用生理盐水;H2O2组加入200μmol·L-1H2O2孵育12 h;左卡尼汀+H2O2组、CsA+H2O2组分别给予1.2mmol·L-1左卡尼汀1 h或1μmol·L-1CsA 30 min预处理,再分别加入H2O2继续孵育12 h。通过流式细胞仪检测细胞凋亡率,蛋白质免疫印迹法检测cleaved caspase-3、Bcl-2和Bax等凋亡相关蛋白及CaN的表达。结果与对照组相比,H2O2组心肌细胞凋亡率、促凋亡蛋白cleaved caspase-3及Bax的表达均明显增加,而其抗凋亡蛋白Bcl-2的表达明显降低,左卡尼汀及CaN特异性抑制剂CsA可明显改善上述指标。而且,左卡尼汀还可抑制H2O2刺激下CaN的过表达。结论左卡尼汀可通过调控钙调神经磷酸酶表达抑制H2O2诱导的心肌细胞凋亡。

左旋卡尼汀对大鼠缺血心肌细胞凋亡相关蛋白表达的影响

目的观察左旋卡尼汀对大鼠缺血心肌细胞凋亡相关蛋白Bcl-2和Caspase-3表达的影响。方法将SD大鼠随机分成3组:空白对照组、缺血组和左旋卡尼汀组。缺血组及左旋卡尼汀组给予异丙肾上腺素建立心肌缺血模型,左旋卡尼汀组提前经腹腔注射左旋卡尼汀。原位末端标记(TUNEL)法测定凋亡的心肌细胞,免疫组化法测定Bcl-2及Caspase-3蛋白的表达。结果左旋卡尼汀组与缺血组相比,心肌组织Bcl-2蛋白表达率显著升高,细胞凋亡率和Caspase-3蛋白表达率显著降低。结论左旋卡尼汀在异丙肾上腺素所致的心肌缺血大鼠模型中,对缺血缺氧心肌有保护作用,其机制可能是通过调节Bcl-2和Cas-pase-3介导的细胞凋亡而实现的。

新生儿筛查发现4例MCCD患儿的临床和基因分析

目的对4例经由新生儿筛查发现的不同临床类型的3-甲基巴豆酰辅酶A羧化酶缺乏症(3-methylcrotonyl-coenzyme A carboxylase deficiency,MCCD)患儿,用尿气相色谱质谱和基因分析证实其诊断。方法对新生儿筛查中C4DC+C5OH>0.6μmol/L的新生儿召回复查,同时检测其母亲的C4DC+C5OH浓度。用尿气相色谱质谱分析对MCCD疑诊病例进行临床诊断,再通过基因分析进一步证实。结果通过基因诊断确诊MCCD 3例,包括MCCD患儿1例,父源性MCCD 1例,母源性MCCD 1例。另有1例临床诊断的MCCD患儿经基因检测仅找到1个致病位点。结论对新生儿筛查中发现的C4DC+C5OH增高的新生儿家系(包括母亲和父亲)应行MS/MS检测。疑似MCCD患者基因检测仅发现1个致病位点时不要轻易否定MCCD的诊断,建议定期随访。

氯化D,L-肉碱腈的制备和拆分研究

对用氯化3 氯 2 羟丙基三甲胺(CHPTMA)制备氯化D,L 肉碱腈的工艺条件进行了研究,最佳的反应条件是:反应温度40～45℃,反应时间1.5h,物料CHPTMA与氰化钠的摩尔比为1∶1.05。在此条件下,产率为78.8%。研究了利用N 乙酰 L 谷氨酸为拆分试剂对氯化D,L 肉碱腈进行拆分,氯化L 肉碱腈的一次拆分光学纯度为92%,产率为37%;二次拆分光学纯度达95%。

生育力正常男性精浆中一些附睾功能性指标相关性的研究

我们对50例生育力正常男性精浆中甘油-3-磷酸胆碱(GPC)、肉毒碱含量及α,1-4糖苷酶活力依次进行测定,结果显示:精浆中 GPC 与肉毒碱含量及α,1-4糖苷酶活力分别为2.32±0.65mmol/L、233.95±85.69μmol/L 及41.17±21.27IU/L,三者均呈显著正相关(P<0.01)。总量及总活力分别为7.35±3.04μmol/总毫升数、741.77±301.52nmol/总毫升数及133.93±88.35mIU/总毫升数(±s)。GPC、肉毒碱及α,1-4糖苷酶与精子在附睾内发育成熟均存在密切的联系,作为附睾重要的功能性指标,精浆中 GPC、肉毒碱含量及α,1-4糖苷酶活力的测定对附睾疾病的诊断与治疗都具有十分重要的意义。

左旋卡尼汀与盐酸曲美他嗪对异丙肾上腺素所致大鼠心肌细胞凋亡的影响

目的:观察左旋卡尼汀(肉碱)及盐酸曲美他嗪(万爽力)对异丙肾上腺素所致大鼠心肌细胞凋亡的影响。方法:将60只SD大鼠随机分成3组,对照组、肉碱组、万爽力组,每组各20只。肉碱组大鼠每只予肉碱200 mg/(kg·d)腹腔注射,每日1次,连用42 d;万爽力组大鼠每只予万爽力5 mg/(kg·d)腹腔注射,每日1次,连用42 d;对照组大鼠在另2组使用肉碱、盐酸曲美他嗪时以等量的生理盐水腹腔注射。所有大鼠在第43天、44天后均予异丙肾上腺素制造心肌缺血模型,观察心肌细胞凋亡相关蛋白Bcl-2及Caspase-3的表达及病理损害程度。结果:肉碱组Bcl-2蛋白阳性表达指数高于万爽力组;肉碱组和万爽力组Bcl-2蛋白阳性表达指数高于对照组:肉碱组Caspase-3蛋白阳性表达指数低于万爽力组;肉碱组和万爽力组Caspase-3蛋白阳性表达指数低于对照组,所有差异均有统计学意义(P均<0.05)。肉碱组及万爽力组病理检查见大部分病灶组织为小灶性坏死;对照组的坏死灶已融合,心肌损伤明显加重。结论:肉碱在异丙肾上腺素所致的心肌缺血模型上具抗缺血、缺氧损伤作用,与盐酸曲美他嗪相比对缺血心肌有更明显的保护作用,其机制可能是通过调节Bcl-2和Caspase-3介导的细胞凋亡实现。.

左卡尼汀治疗慢性心力衰竭患者的疗效及安全性

目的探讨左卡尼汀(左旋肉毒碱)治疗慢性心力衰竭(CHF)的疗效及安全性。方法将120例CHF患者随机分为对照组(n=60)与观察组(n=60),对照组予以常规抗CHF药物治疗,观察组在对照组基础上加用左卡尼丁注射液治疗,2组均连续治疗14 d。比较2组临床疗效、血清N末端脑钠肽前体(NT-proBNP)、半乳糖凝集素-3(Gal-3)、糖类抗原125(CA125)水平及左心室射血分数(LVEF)、左心室内径(LVID)、6 min步行试验最大距离(6MWT)。记录2组不良反应发生情况。结果观察组总有效率为91.67%,显著高于对照组的71.67%(P<0.05)。治疗后,观察组血清NT-pro BNP、Gal-3、CA125水平及LVID水平低于对照组,LVEF、6MWT高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。观察组不良反应发生率为21.67%,与对照组的16.67%相比无显著差异(P>0.05)。结论左卡尼汀治疗CHF疗效显著,能够有效降低血清NT-proBNP、Gal-3、CA125表达水平,改善心功能,且安全性良好。

超高效液相色谱-质谱法测定血浆和尿液中3-羟基异戊酰基肉碱

目的为建立生物素营养状况有效判断指标,利用超高效液相色谱-质谱联用仪开展血浆、尿样中3-羟基异戊酰基肉碱(3HIA-肉碱)含量测定方法的研究。方法取血浆、尿液样品3000×g高速冷冻离心10 min,采用MCX固相萃取柱进行分离纯化,经淋洗、洗脱、氮吹、复溶过程后测定。使用Waters Acquity UPLC BEH C_(18)(2.1 mm×50 mm,1.7μm)柱进行分离,以0.1%甲酸水溶液和甲醇为流动相进行梯度洗脱,在电喷雾正离子源(ESI^+)和多反应监测模式(MRM)下进行测定。采用同位素内标进行3HIA-肉碱的定性定量,并对所建立的方法进行精密度和准确度评价。结果血浆和尿液中3HIA-肉碱在0.1~20.0μg/L、5.0~200μg/L范围内呈良好的线性关系,R^2>0.99。3水平加标回收率78.6%~115.6%。血浆、尿液的RSD分别为4.80%、5.70%(n=6)。血浆中3HIA-肉碱检出限为0.04μg/L,定量限为0.10μg/L;尿液中3HIA-肉碱检出限为0.03μg/L,定量限为0.08μg/L。按该法测定人体尿液中3HIA-肉碱水平,其含量范围为55.50~313μg/L。结论本方法简便快捷,灵敏度和准确度较高,可满足研究生物体内血浆和尿液中3HIA-肉碱的需要。

桑叶调节PI3K/Akt/PPARα/CPT-1通路改善2型糖尿病大鼠肝脏糖脂代谢紊乱机制

目的:基于磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/过氧化物酶体增殖物激活受体α/肉毒碱棕榈酰基转移酶-1(PI3K/Akt/PPARα/CPT-1)信号通路探讨桑叶水提物对2型糖尿病(T2DM)大鼠肝脏糖脂代谢紊乱的作用及其机制。方法:高脂喂养联合腹腔注射链脲佐菌素(STZ)方法制备T2DM模型,按血糖、体质量将造模成功大鼠随机分为模型组、二甲双胍(0.2 g·kg^(-1))组和桑叶水提物(含生药4.0 g·kg^(-1))组,连续给药8周,每周相同时间测定空腹血糖。苏木素-伊红(HE)染色、油红O染色观察肝脏组织形态学和脂肪变化;生化分析法测定血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天冬氨基酸氨基转移酶(AST)水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肝脏磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(p-PI3K)、PI3K、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、Akt、PPAR-α、CPT-1蛋白表达。结果:给药8周后,与正常组比较,模型组大鼠血糖显著升高(P<0.01);与模型组比较,桑叶水提物组大鼠血糖显著降低(P<0.01)。HE染色显示,正常组大鼠肝组织结构完整,肝细胞以中央静脉为中心呈放射状排列;模型组大鼠肝细胞损伤明显;与模型组比较,桑叶水提物组大鼠空泡变性程度显著降低,未见小胆管增生等病变。油红O染色显示,正常组大鼠肝细胞无明显脂肪变性、坏死,肝细胞几乎无脂滴;模型组大鼠肝内脂滴较正常组明显增加;桑叶给药可明显减少大鼠肝脏脂滴。模型组大鼠TC、TG、LDL-C、AST、ALT水平较正常组显著升高(P<0.01);桑叶水提物组大鼠TC、TG、LDL-C、AST、ALT水平较模型组明显降低(P<0.05,P<0.01)。Western blot结果显示,与正常组比较,模型组大鼠p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、PPARα和CPT-1的蛋白表达显著降低(P<0.01);与模型组比较,桑叶水提物能明显增加p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、PPARα和CPT-1的蛋白表达(P<0.05,P<0.01)。结论:桑叶水提物可改善T2DM大鼠肝脏糖代谢紊乱,降糖机制可能与调控PI3K/Akt/PPAR-α/CPT-1信号通路有关。

The potential value of CDV3 in the prognosis evaluation in Hepatocellular carcinoma

CDV3 is correlated with tumorigenesis and may affect some biological process in cancer.In this study,we explore the role of CDV3 in HCC.According to the TCGA data base,CDV3 is over-expressed in HCC tissues.Up-regulation of CDV3 is correlated with lower over-all survival rate in HCC patients.In HCC samples from our hospital,CDV3 is also enriched in cancer tissues and CDV3 expression associated with HCC pathological T stage.What is more,higher CDV3 expression could forecast poor survival rate in HCC patients.In conclusion,CDV3 is a biomarker of HCC and could be a potential therapeutic target.

左卡尼汀对慢性心力衰竭患者心功能的影响

目的:探讨左卡尼汀辅助治疗慢性心力衰竭的疗效及其安全性。方法:选取我科慢性心力衰竭住院患者60例,随机分为左卡尼汀治疗组和对照组。两组均接受利尿剂、洋地黄等常规抗心衰治疗,左卡尼汀治疗组在常规治疗基础上加用左卡尼汀3g/次,每天一次,连续静脉注射7 d。治疗前后测定和比较两组患者的血清半乳糖凝集素3和脑钠尿肽(BNP)水平、6 min最大步行距离(6MWT)、左室射血分数(LVEF)及心功能。结果:治疗前,两组Galectin-3、BNP水平、LVEF、6 min最大步行距离比较均无统计学差异(P>0.05)。治疗后,两组Galectin-3、BNP水平均分别显著低于治疗前,而LVEF、6 min最大步行距离均分别显著高于治疗前,差异均有统计学意义(P<0.05),且左卡尼汀治疗组Galectin-3、BNP水平显著低于对照组,而LVEF、6 min最大步行距离显著高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。治疗后,左卡尼汀治疗组和对照组的治疗总有效率分别为96.7%和80%,左卡尼汀治疗组显著高于对照组(P<0.05)。两组不良反应的发生情况比较无明显统计学差异(P>0.05)。结论:常规治疗的基础上联合左卡尼汀可以显著改善心衰患者的心功能,增加其运动耐量,改善患者的预后,且无明显不良反应,值得在临床上推广应用。

β-羟丁酸对体外培养牛肝细胞肉碱脂酰基转移酶-Ⅰ转录和翻译水平的影响

目的检测不同浓度β-羟丁酸(β-hydroxy butyrate,BHBA)对体外培养牛肝细胞肉碱脂酰基转移酶Ⅰ(Carnitine palmityl transferase-Ⅰ,CPT-Ⅰ)转录及翻译水平的影响。方法分别采用荧光定量PCR法和ELISA法,检测不同浓度BHBA(0、0.3、0.6、1.2、2.4、4.8mmol/L)对体外培养牛肝细胞CPT-I基因和蛋白表达的影响。结果随着BHBA浓度的增加,肝细胞CPT-Ⅰ的转录和翻译水平均下降。当BHBA浓度大于1.2mmol/L时,肝细胞CPT-I的转录和翻译水平下降更显著。结论高浓度的BHBA可显著抑制体外培养牛肝细胞CPT-I的表达,可能减少肝细胞脂肪酸氧化代谢。