灯盏花素对大鼠佐剂性关节炎的治疗作用及其对滑膜MMP-3、TIMP-1表达的影响

目的观察灯盏花素(BRE)对佐剂性关节炎大鼠的治疗作用及其对滑膜基质金属蛋白酶-3(MMP-3)、金属蛋白酶组织抑制物-1(TIMP-1)表达的影响。方法将50只雄性Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、BRE组、来氟米特(LEF)组和联合用药(BRE+LEF)组,采用弗氏完全佐剂造模,观察治疗前后各组大鼠的足爪容积及关节炎指数;免疫组织化学方法检测MMP-3、TIMP-1在关节滑膜组织中的表达。结果与治疗前比较,BRE组、LEF组及BRE+LEF组治疗后大鼠的足爪容积及关节炎指数显著降低(P<0.05),联合用药组的效果更明显(P<0.01);与模型组比较,各用药组的MMP-3表达显著减少(P<0.05),TIMP-1表达均有所增加(P<0.05),联合用药组较单一用药组效果更明显(P<0.05)。结论BRE对大鼠佐剂性关节炎具有显著治疗作用,并可下调滑膜MMP-3表达、上调TIMP-1表达;BRE与LEF联合应用具有增效作用,为临床应用活血化瘀药联合治疗RA提供了实验依据。

小剂量来氟米特配合甲氨蝶呤治疗老年类风湿关节炎患者的效果

目的探讨小剂量来氟米特配合甲氨蝶呤治疗老年首发类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者的效果。方法选取2020年2月至2023年2月西安市第五医院收治的120例老年首发RA患者进行随机对照试验。采用随机数字表法将其分为配合组及参考组,各60例。配合组男37例,女23例,年龄(70.22±5.29)岁,体质量指数(body mass index,BMI)(22.87±1.55)kg/m^(2),病程(4.76±0.85)年。参考组男38例,女22例,年龄(70.31±5.34)岁,BMI(22.94±1.58)kg/m^(2),病程(4.82±0.87)年。参考组采用甲氨蝶呤治疗,配合组则于参考组的基础上采用小剂量来氟米特治疗。两组均治疗90 d。对比两组临床疗效,临床症状改善情况,治疗前后骨代谢指标水平和血清壳多糖酶3样蛋白1(chitinase 3-like protein1,CHI3L1)、可溶性基质裂解素2(soluble suppression of tumorigenicity 2,sST2)、白细胞介素-32(interleukin-32,IL-32)水平,不良反应。采用χ^(2)检验和t检验。结果配合组总有效率高于参考组[96.67%(58/60)比83.33%(50/60)](χ^(2)=5.926,P=0.015)。配合组关节压痛数目、关节肿胀数目分别为(5.23±1.05)个、(4.18±0.66)个,均少于参考组的(7.45±1.36)个、(6.39±0.82)个,晨僵时长为(34.58±4.68)min,短于参考组的(50.40±8.21)min,双手握力为(14.03±2.55)kPa,高于参考组的(11.28±2.09)kPa(t=10.008、16.263、12.967、6.461,均P<0.001)。治疗后,配合组骨钙素(bone gla protein,BGP)、骨保护素(osteoprotectin,OPG)及总Ⅰ型胶原氨基端延长肽(total type I collagen amino terminal extension peptide,T-PⅠNP)水平分别为(27.48±5.02)ng/L、(5.02±0.74)ng/L、(43.17±8.59)μg/L,均高于参考组的(24.16±4.19)ng/L、(4.45±0.66)ng/L、(36.92±7.33)μg/L(t=3.933、4.453、4.287,均P<0.001)。治疗后,配合组血清CHI3L1、sST2、IL-32水平分别为(50.82±6.12)μg/L、(28.45±4.11)μg/L、(14.32±2.01)ng/L,均低于参考组的(78.45±8.39)μg/L、(33.05±5.24)μg/L、(16.85±2.77)ng/L(t=20.609、5.350、5.726,均P<0.001)。两组不良反应发生率对比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论小剂量来氟米特配合甲氨蝶呤应用于老年首发RA患者中的效果较佳,可改善患者骨代谢指标及血清CHI3L1、sST2、IL-32水平。

来氟米特3-甲基异构体急性毒性试验

目的观察来氟米特3-甲基异构体经口给药的急性毒性试验(LD50的测定)。方法给小鼠灌服不同浓度来氟米特3-甲基异构体混悬液,通过观察小鼠的活动和毒性反应,记录小鼠的死亡数,用Bliss法计算LD50。结果动物给药后不同时间内很快表现为兴奋,继而动物出现抽搐,后精神差,静伏少动,步态蹒跚,濒死时精神极差,呼吸频率加快、张口呼吸、鼻翼扇动等中毒症状。LD50=1537mg.kg-1,95%的可信限=1252.3～1879.8mg.kg-1,LD5=646.99mg.kg-1,LD95=3651.3mg.kg-1。结论来氟米特3-甲基异构体急性毒性很小。

来氟米特3-甲基异构体的制备及结构确证

来氟米特3-甲基异构体(2)是一个有毒副作用的杂质,需定量分析。提供了一种制备来氟米特3-甲基异构体的方法,纯度99.5%,结构经IR、NMR、MS等光谱确证,可以作为控制来氟米特质量的杂质标准品。

益气理顽汤联合西药治疗寒热错杂类风湿关节炎随机平行对照研究

[目的]观察益气理顽汤联合西药治疗寒热错杂类风湿关节炎疗效。[方法]使用随机平行对照方法,将60例门诊患者按病志号抽签方法简单随机分两组;钙尔奇,0.6g/次,1次/d。对照组30例来氟米特,10mg/次,1次/d;醋氯芬酸,0.1mg/次,2次/d。治疗组30例益气理顽汤(黄芪30g,白术、鸡血藤、牛大力各20g,独活、海风藤、乌梢蛇、路路通、威灵仙、杜仲、桑寄生、当归、鸡内金、防风各15g,红花10g,全蝎3g),1剂/d,水煎250m L,早晚口服;西药治疗同对照组。连续治疗30d为1疗程。观测临床症状、晨僵、MMP-3、CRP、ESR、RF、不良反应。连续治疗2疗程,判定疗效。[结果]治疗组显效11例,有效17例,无效2例,总有效率93.33%;对照组显效9例,有效15例,无效6例,总有效率80.00%;治疗组疗效优于对照组(P<0.05)。MMP-3、CRP、ESR、RF、寒热错杂证候积分两组均有明显改善(P<0.01),治疗组改善优于对照组(P<0.01)。[结论]益气理顽汤联合西药治疗寒热错杂类风湿关节炎,疗效满意,无严重不良反应,值得推广。

来氟米特对类风湿关节炎滑膜细胞焦亡的调控作用

目的:探讨来氟米特调控CASP-1/3/IL-1β信号通路抑制人类风湿关节炎滑膜成纤维细胞焦亡的作用机制。方法:组织块法培养人类风湿关节炎滑膜成纤维细胞(human rheumatoid arthritis synovial fibroblast, HFLS-RA)予来氟米特及实验相关试剂干预。HE染色和免疫组化鉴定细胞,流式细胞术检测细胞周期,ELISA、RT-qPCR和Western blot法检测信号通路中焦亡相关炎性蛋白IL-1β、IL-18、Caspase-1、Caspase-3、NLRP3和GSDMD表达量。结果:组织块法培养的细胞鉴定为HFLS-RA。细胞周期结果,在G1期,与阳性对照组比较,来氟米特组细胞DNA生成量升高(P<0.05);在G2、S期,与阳性对照组比较,来氟米特组细胞DNA生成量降低(P<0.05)。ELISA结果显示,与阳性对照组比较,来氟米特组IL-1β、IL-18、Caspase-1、Caspase-3的分泌量降低(P<0.05)。RT-qPCR结果显示,与阳性对照组比较,来氟米特组IL-1β、IL-18、Caspase-1、Caspase-3、NLRP3和GSDMD的mRNA表达降低(P<0.05)。Western blot结果显示,与阳性对照组比较,来氟米特组IL-1β、IL-18、Caspase-1、Caspase-3、NLRP3和GSDMD蛋白表达量降低(P<0.05)。结论:来氟米特调控CASP-1/3/IL-1β信号通路中多个焦亡相关蛋白。通过抑制中上游的NLRP3、Caspase-1合成炎小体,减少GSDMD蛋白表达而抑制通路下游IL-1β、IL-18等炎症因子生成及释放,在细胞周期G0/G1起阻滞作用,可能是来氟米特治疗RA的机制之一。

来氟米特3-甲基异构体对小鼠的致突变实验

目的:观察来氟米特3-甲基异构体的致突变作用。方法:取小鼠分为空白对照组、溶剂对照组、阳性对照组和来氟米特3-甲基异构体受试药不同剂量组;分别采用Ames实验观察每皿回变菌落数、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核实验观察微核率、小鼠精子畸变实验观察精子畸变率。结果:Ames实验中受试药各剂量组回变菌落数均未超过溶剂对照组回变菌落数的2倍,实验结果为阴性;小鼠骨髓嗜多染红细胞微核实验及小鼠精子畸变实验中受试药各剂量组与空白对照组比较,微核率及精子畸变率无明显差异(P>0.05)。结论:在本次实验条件下,来氟米特3-甲基异构体未显示有致突变作用。

来氟米特联合甲氨蝶呤治疗幼年特发性关节炎的疗效

目的探讨来氟米特联合甲氨蝶呤对幼年特发性关节炎患儿免疫功能及血清基质金属蛋白酶-3(MMP-3)、白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平的影响。方法选取2018年10月至2019年10月首都儿科研究所附属儿童医院收治的70例幼年特发性关节炎患儿。纳入6~16周岁患儿,没有甲氨蝶呤和氟米特过敏史,排除免疫系统缺陷疾病、合并全身感染性疾病、肝肾功能或凝血功能不全及临床资料不完整等。按随机数字表法将其分为对照组、研究组,各35例。对照组给予甲氨蝶呤片进行治疗,研究组在对照组的基础上给予来氟米特片进行治疗,两组均治疗6个月。比较两组治疗前、治疗6个月后的临床症状及体征改善情况、免疫功能指标、血清细胞因子水平;统计两组治疗期间的不良反应发生率。计数资料采用卡方检验分析;计量资料采用t检验分析。结果与治疗前比较,治疗6个月后,两组幼年关节炎疾病活动性评分表(JADAS27)总分及血清免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白M(IgM)、MMP-3、IL-1β、TNF-α水平均降低,且治疗6个月后,研究组均低于对照组(t=21.789、14.927、7.133、3.611、4.209、3.480、4.760,均为P<0.05)。治疗期间,研究组不良反应发生率(11.43%)与对照组(28.57%)相比,差异不具有统计学意义(P>0.05)。结论来氟米特联合甲氨蝶呤治疗幼年特发性关节炎,可明显降低患儿血清MMP-3、IL-1β、TNF-α水平,减轻机体炎症反应,同时可改善患儿免疫功能,改善临床症状及体征,且安全性良好。

来氟米特联合依那西普对佐剂性关节炎大鼠免疫功能的影响

目的:研究来氟米特和依那西普联合使用对佐剂性关节炎(AA)大鼠的治疗作用及其可能的作用机制。方法:建立AA大鼠关节炎模型,分为正常对照组、模型组、来氟米特组、依那西普组、来氟米特联合依那西普配伍组;采用关节炎指数评分法评价大鼠关节炎症程度,半定量RT-PCR和放射免疫法检测滑膜组织及血清中IL-1β、TNF-α表达水平,免疫组化方法检测滑膜组织中MMP-3含量。结果:①相较于AA模型组,来氟米特组、依那西普组和配伍组中大鼠的AI评分均显著下降(P<0.01),其中以配伍组关节炎指数为最低(P<0.05)。②模型组大鼠血清及滑膜组织的IL-1β和TNF-α水平明显高于正常对照组(P<0.01),用药后各组的IL-1β和TNF-α水平均有所下降,并以配伍组降低最为明显(P<0.01或P<0.05);③模型组大鼠滑膜组织MMP-3表达阳性密度显著高于正常对照组(P<0.01),用药后各组的MMP-3阳性密度降低(P<0.01),其中配伍组下降程度明显高于来氟米特组和依那西普组(P<0.01)。结论:来氟米特和依那西普联合使用可明显减轻AA大鼠的关节炎症,降低血清和滑膜组织中IL-1β和TNF-α水平,减少滑膜中MMP-3的表达,疗效优于单独使用来氟米特或依那西普。

托法替布联合来氟米特治疗类风湿关节炎疗效及对血清Janus激酶/信号转导和转录激活因子信号通路相关蛋白和基质金属蛋白酶水平的影响

目的探讨托法替布联合来氟米特治疗RA的临床疗效及其对患者血清Janus激酶(JAK)/信号转导和转录激活因子(STAT)信号通路相关蛋白和MMPs水平的影响。方法本研究为前瞻性病例对照研究。筛选2020年3月至2021年9月我院收治的80例RA患者纳入研究。按随机数字表法分成观察组40例与对照组40例。观察组采取托法替布联合来氟米特治疗,对照组单用来氟米特治疗。连续治疗12周后观察2组疗效。比较治疗前后2组典型临床表现[关节疼痛视觉模拟量表(VAS)评分、压痛关节数、肿胀关节数、晨僵时间]、DAS28评分、36项健康调查简表(SF-36)总分及血清JAK3、STAT3、IL-6、IL-17、MMPs水平;并统计2组药物不良反应情况。统计学处理采用χ^(2)检验、配对样本t检验、独立样本t检验、Fisher确切概率法。结果治疗4、8、12周后,观察组ACR20达标率分别为37.5%(15/40),62.5%(25/40),80.0%(32/40),均高于同期对照组[17.5%(7/40)、37.5%(15/40)、57.5%(23/40);χ^(2)=4.01,P=0.045,χ^(2)=5.00,P=0.025,χ^(2)=4.71,P=0.030]。治疗8、12周后,观察组ACR50达标率分别为35.0%(14/40)、47.5%(19/40),均高于同期对照组[15.0%(6/40),20.0%(8/40);χ^(2)=4.27,P=0.039,χ^(2)=6.76,P=0.009]。治疗后,观察组关节疼痛VAS评分、压痛关节数、肿胀关节数、DAS28评分、SF-36总分均低于对照组(t=5.55,P<0.001;t=9.98,P<0.001;t=11.77,P<0.001;t=4.50,P<0.001;t=5.28,P<0.001),晨僵时间均短于对照组(t=4.76,P<0.001)。治疗后,观察组血清JAK3、STAT3、IL-6、IL-17、MMP-3、MMP-9及MMP-13水平分别为(2354±476)pg/ml,(1.04±0.17)ng/ml,(12.4±2.8)pg/ml,(30±5)pg/ml,(65±14)μg/L,(76±12)μg/L,(11.5±1.8)μg/L,均低于对照组[(2715±584)pg/ml,(1.22±0.29)ng/ml,(16.8±3.6)pg/ml,(40±7)pg/ml,(98±15)μg/L,(123±20)μg/L,(14.9±2.8)μg/L,t=3.03,P<0.05;t=3.39,P<0.05;t=6.10,P<0.05;t=7.35,P<0.05;t=10.17,P<0.05;t=12.74,P<0.05;t=6.46,P<0.05]。观察组不良反应率[35.0%(14/40)]较对照组[27.5%(11/40)]差异无统计学意义(χ^(2)=0.52,P=0.469)。结论托法替布联合来氟米特治疗RA的总体疗效满意,是改善患者临床表现、疾病活动度及生活质量的安全有效途径,其作用可能与其显著下调血清JAK/STAT信号通路相关蛋白和MMPs的表达水平有关。