群体感应分子3-氧代癸酰基高丝氨酸内酯(3-oxo-C10-HSL)抑制脂多糖诱导的RAW264.7巨噬细胞炎症反应

目的探讨群体感应分子3-氧代癸酰基高丝氨酸内酯(3-oxo-C10-HSL)对脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7巨噬细胞炎症反应的调控作用。方法RAW264.7巨噬细胞分为实验组、对照组与空白组。实验组用不同浓度的3-oxo-C10-HSL与LPS共处理,对照组加入DMSO与LPS,空白组加入DMSO与PBS。刺激12 h后,实时定量PCR检测细胞白细胞介素6(IL-6)、IL-1β、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)的mRNA表达,ELISA检测上清液IL-6、TNF-α水平。以25μmol/L 3-oxo-C10-HSL与100 ng/mL LPS共刺激细胞15、30、60 min,Western blot法检测核因子κBp65(NF-κBp65)的磷酸化情况。结果3-oxo-C10-HSL能剂量依赖性地降低LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞的IL-6、IL-1β、TNF-α、MCP-1的mRNA水平以及IL-6、TNF-α蛋白水平。3-oxo-C10-HSL能抑制LPS诱导的NF-κBp65磷酸化。结论3-oxo-C10-HSL能通过抑制NF-κB信号通路活化减轻LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞炎症反应。

铜绿假单胞菌的信号分子3-oxo-C12-HSL促进小鼠MH-S肺泡巨噬细胞自噬

目的探讨3-oxo-C12-HSL对MH-S小鼠肺泡巨噬细胞自噬的影响。方法用Las I基因(3-oxo-C12-HSL合成基因)缺失型和野生型的铜绿假单胞菌(PA)菌株的培养物上清液以及化学合成的3-oxo-C12-HSL信号分子处理MH-S细胞,激光共聚焦荧光显微镜观察LC3-GFP荧光斑点以及Western blot检测LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值来监测自噬的形成,同时检测p62的降解以及氯喹对LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值的影响来监测自噬流(autophagic flux)的变化。结果野生型PA菌株的培养物上清液使MH-S细胞LC3-GFP荧光斑点增多(P<0.05),LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值增加(P<0.01),LasⅠ基因缺失型PA菌株不能引起上述自噬相关指标的改变。化学合成的3-oxo-C12-HSL信号分子能够明显增加自噬体数量,上调LC3Ⅱ的表达(P<0.01);自噬底物p62随着3-oxo-C12-HSL作用时间的延长而进行性降解,溶酶体抑制剂氯喹可增强3-oxoC12-HSL引起的LC3Ⅱ累积(P<0.05,P<0.01)。结论 3-oxo-C12-HSL可增加MH-S细胞的自噬水平。

AHLs群体感应信号分子强化固相反硝化系统脱氮性能研究

以聚羟基丁酸戊酸共聚酯(PHBV)作为载体和可生物降解碳源进行的固相反硝化(Solid-phasedenitrification,SPD)过程,以外源投加群体感应信号因子3-oxo-C14-HSL作为调控剂,从固相反硝化水质特征分析群体感应强化固相反硝化脱氮性能。结果表明:通过外源投加群体感应信号3-oxo-C14-HSL,可以有效的缩短反应器的启动时间。并在稳定运行阶段,缩短水利停留时间反硝化速率不变。在固相反硝化长期运行过程中,亚硝酸盐没有积累。本研究将为群体感应在固相反硝化生物脱氮领域的研究提供新思路和理论依据。

pvdQ基因在铜绿假单胞菌对白假丝酵母菌形态抑制作用中的功能

目的拟研究长链高丝氨酸内酯降解基因pvdQ在铜绿假单胞菌对白假丝酵母菌形态抑制作用中的功能。方法通过乙酸锂转化法构建CAI-4HWP1-LacZ菌株,使用X-gal平板显色法检测3-oxo-C12-HSL对白假丝酵母菌形态转换的影响;观察与铜绿假单胞菌pvdQ高表达株、野生株PAO1共同培养时,白假丝酵母菌的形态变化,了解pvdQ基因在铜绿假单胞菌对白假丝酵母菌形态抑制作用中的功能。结果 400μg 3-oxo-C12-HSL即可完全抑制白假丝酵母菌的形态转换。铜绿假单胞菌pvdQ高表达株和野生株PAO1均可抑制白假丝酵母菌菌丝形成。pvdQ高表达株对白假丝酵母菌的形态抑制作用较野生株PAO1减弱。结论铜绿假单胞菌通过分泌信号分子3-oxo-C12-HSL,可抑制白假丝酵母菌形态转换。随着pvdQ表达增加,铜绿假单胞菌对白假丝酵母菌的形态抑制作用减弱,即pvdQ基因在铜绿假单胞菌对白假丝酵母菌形态抑制作用中起负性调节作用。其作用机制可能与pvdQ基因对3-oxo-C12-HSL的水解作用有关。