miR-301b对山羊肌内脂肪细胞分化的调控作用

旨在明确miR-301b对山羊肌内脂肪细胞分化的调控作用,探讨其发挥调控作用的可能机制。利用化学合成的miR-301b mimics和miR-301b siRNA,通过脂质体转染法在山羊肌内脂肪细胞过表达和干扰miR-301b,并通过油红O染色、qPCR和生物信息学分析等方法,从细胞形态学和mRNA水平明确miR-301b对山羊肌内脂肪细胞分化的调控作用,并初步探究其可能的作用机制。结果表明,过表达miR-301b效率约29290倍,细胞形态学结果显示,过表达miR-301b后山羊肌内脂肪细胞脂滴积聚减少,甘油三酯合成降低。qPCR结果显示,过表达miR-301b后成脂标志基因CEBPα、PPARγ、SREBP1、LPL表达水平极显著下调(P<0.01)。miR-301b干扰效率约60%,干扰miR-301b表达后,细胞形态学结果显示,山羊肌内脂肪细胞脂滴积聚增加,甘油三酯合成升高。qPCR结果显示,干扰miR-301b后成脂标志基因AP2、CEBPα、CEBPβ、PPARγ、SREBP1、LPL表达水平极显著上调(P<0.01)。通过对miR-301b生物信息学分析,推测KLF3为miR-301b的靶标基因,qPCR验证发现过表达miR-301b后显著抑制KLF3的mRNA表达水平(P<0.05),干扰miR-301b后显著促进KLF3的表达水平(P<0.05)。过表达miR-301b抑制山羊肌内前体脂肪细胞分化,同时KLF3表达水平下调;干扰miR-301b促进山羊肌内前体脂肪细胞分化,KLF3表达水平上调,推测miR-301b可能通过KLF3抑制山羊肌内脂肪细胞分化。

高表达的miR-301b和miR-769-5p对非小细胞肺癌A549细胞生长的影响

目的:探讨高表达的miR-301b和miR-769-5p对非小细胞肺癌A549细胞生长的影响。方法:采用实对荧光定量聚合酶链反应检测A549细胞中miR-301b和miR-769-5p的表达;使用qRT-PCR检测增殖相关基因miRNA表达的变化,并将实验组miR-301b和miR-769-5p表达量上调(与阴性对照组比较);采用MTT法检测并对比A549细胞增殖的改变;采用流式细胞仪检测并对比A549细胞周期以及凋亡的改变。结果:qRT-PCR结果表明,浸染了miR-301b和miR-769-5p过表达载体的A549细胞中miR-301b和miR-769-5p水平明显高于阴性对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。miR-301b过表达使G0/G1期的A549细胞增加,S和G2/M期的细胞减少;miR-769-5p过表达使G0/G1和G2/M期细胞增加,S期细胞减少。结论:miR-301b对靶基因FOXF2具有调控作用,miR-769-5p对靶基因ARID1A具有调控作用。miR-301b和miR-769-5p的过表达对肺癌A549细胞的细胞周期产生了明显影响,但没有影响细胞增殖和凋亡,miR-301b和miR-769-5p有可能成为肺癌分子靶向治疗调控效应靶点,可以进一步探索研究。

宫颈癌细胞通过下调miR-301b表达促进基因组DNA损伤修复

目的 通过研究miR-301b、C末端结合蛋白作用蛋白(Ctip)基因表达在DNA损伤修复过程中的作用以及miR-301b影响Ctip基因表达的作用机制,揭示宫颈癌细胞修复DNA损伤的新机制。方法 (1)Siha细胞经肿瘤坏死因子-α(TNF-α)处理、miR-301b模拟物、抑制物转染以及pcDNA3.1/Ctip与miR-301b模拟物共转染后,利用流式细胞术检测平台和彗星实验测定细胞内DNA损伤标志物γ-H2AX蛋白平均表达水平和DNA彗星状尾距;(2)采用实时定量聚合酶链式反应(PCR)检测DNA损伤修复过程中细胞内miR-301b、Ctip mRNA的水平以及转染miR-301b模拟物、抑制物后细胞内Ctip mRNA的水平;(3)采用Western-blot蛋白印迹试验检测转染miR-301b模拟物、抑制物后细胞内Ctip蛋白的水平;(4)应用生物信息学预测miR-301b在Ctip mRNA上的靶定位点;(5)应用荧光报告实验检测转染miR-301b模拟物、抑制物后细胞内mRNA上存在miR-301b靶定位点的报告基因的表达水平。结果 (1)与对照相比,刺激1.5和3 h后,肿瘤坏死因子-α(TNF-α)使细胞内γ-H2AX蛋白平均水平和DNA平均尾距升高,刺激6 h后,TNF-α对胞内γ-H2AX蛋白平均水平以及DNA平均尾距无影响;转染miR-301b模拟物升高γ-H2AX蛋白平均水平和DNA尾距,转染miR-301b抑制物降低γ-H2AX蛋白平均水平和DNA平均尾距;与miR-301b模拟物共转染的pcDNA3.1/Ctip降低细胞内γ-H2AX蛋白平均水平和DNA平均尾距;(2)TNF-α刺激使细胞内miR-301b水平降低,Ctip mRNA水平升高;转染miR-301b模拟物降低Ctip mRNA水平,转染miR-301b抑制物升高Ctip mRNA水平;(3)转染miR-301b模拟物降低Ctip蛋白水平,转染miR-301b抑制物升高Ctip蛋白水平;(4)miR-301b靶定Ctip mRNA的3208至3214核苷酸位点;(5)mRNA上存在miR-301b靶定位点的报告基因的表达水平在miR-301b模拟物转染后降低,在miR-301b抑制物转染后升高。结论 Siha细胞通过下调miR-301b表达增强Ctip基因表达促进基因组DNA的损伤修复。

结直肠癌中miR-301b的表达及其临床意义

目的探讨microRNA-301b(miR-301b)在结直肠癌组织中的表达及临床意义。方法采用实时定量PCR法检测28例结直肠癌标本中miR-301b的表达,分析其与临床病理特征的关系。结果 miR-301b在结直肠癌组织(中位数6. 564)中的相对表达量显著高于切缘无瘤组织(中位数0. 935)(P=0. 0061)。miR-301b表达在低分化、远处转移及CA724> 6. 9 ng/m L患者中表达增高(P均<0. 05)。结论 miR-301b可能与促进结直肠癌的恶性侵袭行为有关。

基于TCGA数据库卵巢癌患者的miR-301b表达量与生存状况生物信息学分析

目的研究肿瘤基因图谱(the cancer genome atlas,TCGA)数据库中microRNA-301b(miR-301b)在478例卵巢癌患者中的表达量与卵巢癌患者生存状况的关系。方法对TCGA数据库中478例卵巢癌患者的miR-301b表达量与生存状况进行分析,预测其靶基因及生物学活性。结果miR-301b高表达患者具有更长的生存时间,是卵巢癌患者预后的保护因素(OS:P<0.001,DFS:P<0.05),综合3个靶基因数据库的预测结果得到12个靶基因,编码的蛋白多数与肿瘤的发生发展有关,其中靶基因TEA结构域家族成员1(TEA domain family member 1,TEAD1)与胞质多糖基化元件结合蛋白4(cytoplasmic polyadenylation element binding protein 4,CPEB4)的表达量与卵巢癌患者的预后相关(TEAD1:P<0.05,CPEB4:P<0.05)。结论miR-301b表达对卵巢癌患者的预后具有重要的意义,表现出抑癌因子的作用,对卵巢癌的预后评估和治疗具有重要的指导意义。

微小RNA-301b-3p靶向第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源物对骨肉瘤细胞增殖、凋亡的影响

目的探讨微小RNA-301b-3p(miR-301b-3p)对骨肉瘤细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制。方法本研究起止时间为2019年3—9月。人成骨细胞(hFOB)和骨肉瘤细胞U2OS、MG63购自美国菌种保藏中心。U2OS细胞分为miRNA抑制物阴性对照(anti-miR-NC)组、miR-301b-3p抑制物(anti-miR-301b-3p)组、anti-miR-301b-3p+小干扰RNA阴性对照(si-NC)组、anti-miR-301b-3p+第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源物(PTEN)小干扰RNA(si-PTEN)组;实时荧光定量PCR(RT-qP-CR)检测miR-301b-3p表达水平;四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞活性;流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光素酶报告实验检测miR-301b-3p和PTEN的靶向关系。结果与h FOB细胞相比,U2OS、MG63中miR-301b-3p表达水平[(0.89±0.09),(0.70±0.07)比(0.20±0.02)]显著升高。与anti-miR-NC组比较,anti-miR-301b-3p组U2OS细胞活性[(0.59±0.06)比(1.33±0.13)]显著降低,而凋亡率[(22.06±2.31)%比(7.48±0.78)%]、PTEN蛋白表达[(0.69±0.07)比(0.35±0.03)]显著升高。PTEN是miR-301b-3p的直接靶基因。与anti-miR-301b-3p+si-NC组比较,anti-miR-301b-3p+si-PTEN组U2OS细胞活性[(1.16±0.12)比(0.56±0.06)]显著升高,而凋亡率[(10.28±1.16)比(22.12±2.34)]显著降低。结论抑制miR-301b-3p表达可通过调控PTEN抑制骨肉瘤细胞增殖,促进细胞凋亡。

D301B型自动缫丝机分离机传动结构的改进

针对Ｄ３０１Ｂ型自动缫丝机分离机变速传动机构复杂且又易磨损的情况，提出了可行的改进方案，改进后的结构达到了工艺要求。

发挥D301B自动缫丝机优质、高效、低耗的技术措施

在工艺条件与工艺管理、设备管理及操作管理等方面采取行之有效的措施， 充分发挥Ｄ３０１Ｂ 型自动缫丝机的效能， 实现优质高效的总体目标。

D301B型自动缫丝机的新结构及特性

Ｄ３０１Ｂ型自动缫丝机是在Ｄ３０１Ａ基础上，改进了由探索、感知、给茧等组成的纤度控制系统，达到了高精度的检测和可靠的执行效果，进一步提高了生丝均匀度。新设计的丝道机构和丝故障防止装置，能有效地降低缫丝张力，并解决了丝故障停 时张力瞬时增大的问题，有利于自动缫生丝内在质量的提高。该机型还在全机的自动化程度上及全机设置部件的适应性、可靠性、耐用性等方面作了较太改进，大大减少了缫丝用工。

高碳铬磨球钢301B生产工艺实践

301B是一种具有良好的性价比及工艺性能的高碳铬磨球钢,主要作为生产制造矿山选矿用磨球机中的易损件磨球。该钢种碳含量高、应力大,对纯净度、内部质量等指标要求严格。韶钢根据301B的成分、产品特性及自身生产工艺装备,设计了“转炉→LF精炼→RH真空处理→大方坯连铸→轧制→检验、入库”生产工艺流程,通过转炉高拉碳操作、出钢渣洗预脱氧、LF高碱度渣精炼、RH长时间高真空脱气、连铸弱冷等工艺措施,成功开发出各项性能均能满足客户要求的301B圆钢产品。

miR-301b在调节脂肪细胞分化中的作用

目的研究miR-301b在调节间充质干细胞向脂肪细胞分化过程中的作用。方法对小鼠骨髓基质细胞ST2进行脂肪细胞诱导分化,并利用qRT-PCR检测细胞分化过程中成脂分化诱导组相对于阴性对照组的miR-301b表达变化。对ST2细胞转染miR-301b mimics并进行成脂诱导分化,利用qRT-PCR和Western blot技术检测miR-301b mimics转染组和阴性对照片段(NC)转染组细胞的脂肪特异性基因和蛋白表达水平的变化。结果成脂分化诱导组miR-301b相对表达水平(0.219±0.021)较对照组(1.000±0.425)减少(P<0.05)。miR-301b mimics转染组的脂肪细胞特异性转录因子过氧化物酶体增殖物激活受体(PPARγ)、CCAAT增强子结合蛋白(C/EBPα)和脂肪型脂肪酸结合蛋白(aP2)的相对表达量均较NC转染组降低(P<0.05)。miR-310b mimics转染组与NC转染组相比,标志基因aP2、转录因子PPARγ和C/EBPα蛋白的表达量均减少(P<0.05)。结论 miR-301b可抑制脂肪细胞分化。

“飞宇”新奉献──D301B型自动缫丝机

“飞宇”新奉献──Ｄ３０１Ｂ型自动缫丝机杭州纺织机械总厂陈华“岁月如逝沧海桑田”，我国作为世界第一制丝大国，在二十一世纪即将来临之际，中国工业面临新的挑战—设备陈旧、用工多、工本费高、效益低下，加上宏观紧缩、丝价低迷，制丝工业陷入了低谷。如何使中国丝...

“飞宇”新奉献——D301B型自动缫丝机的特点

岁月如逝沧海桑田',我国作为世界第一制丝大困,在二十一世纪即将来临之际,中国制丝业面临新的挑战——设备陈旧,用工多,工本费高、效益低下,加上宏观紧缩,丝价低迷,制丝业陷入了低谷。如何使中国丝绸这朵古老文明的奇葩更加绚丽多彩,雄风当年。

立缫机技改为D301B型自缫机的技术要点及效果

废弃落后的立缫机 ,换装先进的自动缫丝机 ,并在设备、工艺、操作等管理上力求科学严细 ,以充分发挥自动缫的优越性。文中介绍了立缫机改为D3 0 1B型自动缫丝机所展开的主要技术工作及带来的经济效果。

D301B型自动缫丝机主传动机构及特性

Ｄ３０１Ｂ型自动缫丝机主传动机构及特性陈华杭州纺织机械总厂研制开发的Ｄ３０１Ｂ型自动缫丝机，综合技术性能又在Ｄ３０１Ａ型基础上上了一个新台阶。改进后的主传动机构，性能更可靠，维修更方便，结构更合理，更有利于各种原料的适应性。一、Ｄ３０１Ｂ型自动缫丝机...

D301B型自动缫生产实绩情况

Ｄ３０１Ｂ型自动缫生产实绩情况青神县缫丝厂我厂自１９９６年１月１５日正式投产使用４组Ｄ３０ｌＢ型自动缫丝机至今，通过自动缫全体员工的共同努力，设备运转正常，生产一、原料茧性能情况稳定，各项经济技术指标均达到或超过设计要求。下面简介我厂生产实绩情况：二...

D301B型自动缫丝机使用情况

Ｄ３０１Ｂ型自动缫丝机使用情况海宁丝业有限公司谈志康海宁市丝绸公司为了探索丝绸行业技术进步和体制改革，于１９９３年８月筹建海宁丝业有限公司，第一期工程投产１２００万元，规模为５组Ｄ３０１Ａ型自动缫丝机，于１９９４年６月１８日开业，当年生产白厂丝９０吨...

D301B型自动缫丝机的技术改造

本文剖析了D301B型自动缫丝机在使用过程中发现的问题,并针对这些问题参照最新型自动缫丝机的优点提出了D301B型自动缫丝机技术改造的必要性、可行性和改造方案,以供D301B机型的用户参考。