日本血吸虫31／32kDa抗原纯化及诊断应用的研究(英文)

采用超凝胶柱层析结合超滤、透析、沉淀等方法分离纯化了日本血吸虫成虫３１／３２ｋＤａ抗原。经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、银染和免疫印迹分析，证明免疫及生化纯度。银染及ＰＡＳ证实此抗原是一种不含糖的多肽类组分。用于ＥＬＩＳＡ和ＩＨＡ诊断日本血吸虫病，与ＳＥＡ同样敏感，而特异性明显较优。

日本血吸虫成虫31/32 kDa蛋白的纯化及保护性免疫力的研究

本文采用制备型聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和电渗析方法分离纯化日本血吸虫成虫 31/32 kDa 蛋白(Sj 31/32蛋白)。SDS-PAGE、免疫印迹试验(EITB)和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测结果表明采用该方法分离纯化的 Sj 31/32 蛋白纯度高,且具有较高的活性。用纯化的 Sj 31/32 蛋白加福氏佐剂免疫的小鼠,不仅可减少虫负荷(减虫率 28.1％),还可降低血吸虫成虫的产卵量(减卵率 71.4％),抑制虫卵肉芽肿的形成。结果提示:Sj 31/32 蛋白具有较高的减卵率,可望作为混合多价疫苗候选组分。

日本血吸虫31/32kDa重组抗原对小鼠免疫保护性研究

目的 探讨日本血吸虫 31/ 32kDa重组抗原 (rSj31/ 32 )抗血吸虫感染的免疫效果。方法 日本血吸虫 31/32kDa单克隆抗体免疫筛选的阳性克隆 312经IPTG诱导表达 ,表达产物rSj31/ 32加福氏佐剂免疫小鼠后进行攻击感染实验。结果 与对照组相比较 ,rSj31/ 32可诱导小鼠产生 30 1%的减虫率 ,6 3 2 %的减卵率 (P <0 0 1) ,虫卵肉芽肿平均面积和周长均明显降低 ,rSj31/ 32免疫能诱导一定水平的抗血吸虫抗体。 结论 结果表明 ,rSj31/ 32可诱导小鼠产生一定程度的保护免疫力 ,有可能作为血吸虫疫苗候选抗原分子。

日本血吸虫31/32kDa抗体的检测及其在诊断中的作用

利用纯化日本血吸虫３１／３２ｋＤａ 抗原（Ｓｊ３１／３２） 与可溶性虫卵抗原（ＳＥＡ）ＥＬＩＳＡ方法检测急、慢性日本血吸虫病血清，以探讨其作为抗原诊断血吸虫病的特异性、敏感性及疗效考核价值。结果急、慢性血吸虫病人血清抗Ｓｊ３１／３２ 抗体检出率为１００％ 和９５％ ，与正常人、肝吸虫和肺吸虫病人血清未出现交叉反应；抗ＳＥＡ 抗体检出率为９７－４ ％ 和９０％ ，与正常人和肝、肺吸虫有不同程度的交叉反应。血吸虫病人治疗后３ 个月、半年和１ 年抗Ｓｊ３１／３２ 抗体的阴转率分别为５２－５％ 、７２－５％ 和８２－５ ％ ， 而抗ＳＥＡ 抗体的阴转率则分明别为１５－０％ 、３７－５ ％ 和５０－０ ％ 。提示Ｓｊ３１／３２ 抗原诊断血吸虫病敏感性高、特异性强，并且具有较好的疗效考核价值，可用于血吸虫病现场和临床应用。

纯化31/32kDa抗原和成虫粗抗原诊断日本血吸虫病的比较

用纯化的日本血吸虫成虫３１／３２ｋＤａ抗原（Ｓｊ３１／３２）与成虫粗抗原（ＡＷＡ）对不同类型日本血吸虫病患者血清抗体进行检测，结果３种不同类型（急性、慢性和晚期）血吸虫病患者血清抗Ｓｊ３１／３２抗体水平（ＯＤ值）分别为２．７７±０．２５、２．６７±０．３０和２．４６±０．１９（Ｐ＜０．０１），抗ＡＷＡ抗体水平分别为３．２７±０．１６、３．２８±０．１６和３．２０±０．１７（Ｐ＞０．０５）。慢性血吸虫病患者血清抗Ｓｊ３１／３２抗体与每克粪便虫卵数（ＥＰＧ）之间有高度的相关性（ｒ＝０．９３），明显高于抗ＡＷＡ抗体与ＥＰＧ的相关性（ｒ＝０．４５）。结果表明，利用纯化Ｓｊ３１／３２诊断血吸虫病能较好地区别不同的感染类型和感染度。

吡喹酮治疗对日本血吸虫31/32kDa抗体的影响

为探讨化疗对日本血吸虫 31/ 32 k Da抗体的影响 ,应用纯化日本血吸虫 31/ 32 k Da抗原 (Sj31/ 32 )和可溶性虫卵抗原 (SEA)对 94例经吡喹酮治疗后不同时期血吸虫病患者血清抗体进行检测。结果治疗后 3和 6个月血清31/ 32 k Da Ig G水平分别为 1.2 6± 0 .15和 0 .6 5± 0 .14(治疗前为 2 .0 3± 0 .2 0 ,P<0 .0 1) ,而 SEA Ig G水平则分别为 2 .87± 0 .19和 2 .30± 0 .2 0 (治疗前为 3.0 1± 0 .17,P>0 .0 5 )。各年龄组治疗前后血吸虫抗体水平均随治疗进展而降低 ,其中儿童和青少年 (3～ 2 0岁年龄组 ) Sj31/ 32 Ig G水平下降最快 ,治疗后 6个月时几乎接近正常值。治疗前Sj31/ 32 Ig G与 SEA Ig G水平之间高度相关 (r=0 .90 ) ,治疗后 3和 6个月两者之间的相关程度降低 (r分别为 0 .30和 0 .40 )。结果表明 ,吡喹酮治疗后患者血清中 Sj31/ 32 Ig G下降较快 ,Sj31/ 32 Ig

日本血吸虫31/32KDa蛋白质基因扩增及克隆

目的 克隆日本血吸虫 31/ 32 KDa蛋白质的编码基因 ,用于血吸虫病免疫诊断和预防。方法 以日本血吸虫成虫 RNA为模板逆转录合成 c DNA链 ,参照 S.m 31/ 32编码序列设计合成引物 ,用 PCR法扩增 31/ 32 KDa蛋白质基因编码序列 ,将其克隆入 p GEM- T载体 ,并用双酶切和以质粒为模板的 PCR进行鉴定。结果 RT- PCR扩增出一条约 12 70 bp大小的特异性条带 ,重组质粒的双酶切和以质粒为模板的 PCR均获得了一条与 RT- PCR扩增出的条带大小相同。结论 日本血吸虫 31/ 32 KDa蛋白质重组 p GEM- T克隆载体的成功构建 ,为进一步研究提供条件。

日本血吸虫31/32kDa抗体的检测及其在诊断中的作用

目的 :探讨纯化日本血吸虫 31 /32kDa抗原 (Sj31 /32 )诊断的特异性、敏感性及疗效考核价值。方法 :利用纯化Sj31 /32与可溶性虫卵抗原 (SEA)ELISA方法检测急、慢性日本血吸虫病患者血清。结果 :急、慢性血吸虫病患者血清抗Sj31 /32抗体检出率为 1 0 0 %和 95% ,与正常人、肝吸虫和肺吸虫病患者血清未出现交叉反应 ;抗SEA抗体检出率为 97.4 %和 90 % ,与正常人和肠道吸虫病患者有不同程度的交叉反应。血吸虫病人治疗后 3个月、半年和 1年抗Sj31 /32抗体的阴转率分别为 52 .5%、72 .5%和 82 .5% ,而抗SEA抗体的阴转率则分别为 1 5%、37.5%和 50 %。结论 :Sj31 /32抗原诊断血吸虫病敏感性高、特异性强 ,并且具有较好的疗效考核价值 。

佐剂对日本血吸虫31/32kDa蛋白保护性免疫力的影响

本实验用纯化的日本血吸虫３１／３２ｋ Ｄａ 蛋白（ Ｓｊ３１／３２ 蛋白）辅以ｐｏｌｙａｌｐｈａｏｌｅｆｉｎ（ Ｐ Ａ Ｏ）佐剂免疫小鼠，同时比较了 Ｓｊ３１／３２ 蛋白辅以福氏完全佐剂（ Ｆ Ｃ Ａ）对小鼠保护性免疫力的影响。 Ｓｊ３１／３２ 蛋白＋ Ｐ Ａ Ｏ 组小鼠减虫率为３７５５％ ，肝减卵率为６７０２％ ； Ｓｊ３１／３２ 蛋白组小鼠减虫率为２１１８％ ， 肝减卵率为 ４９０３％ ； Ｓｊ３１／３２ 蛋白＋ Ｆ Ｃ Ａ 组小鼠减虫率为 ２４０２％ ， 肝减卵率为５２２４％ 。结果提示， Ｓｊ３１／３２ 蛋白辅以 Ｐ Ａ Ｏ 佐剂的减虫作用优于 Ｓｊ３１／３２ 辅以 Ｆ Ｃ Ａ 的减虫作用（ Ｐ＜ ００５），且明显强于单纯 Ｓｊ３１／３２ｋ Ｄａ 蛋白的保护性免疫作用（ Ｐ＜ ００１）。

纯化31/32kDa抗原诊断日本血吸虫病的价值

目的：探讨纯化31／32kDa抗原（Sj31／32）诊断日本血吸虫病的价值。方法：以纯化Sj31／32包板，与成虫粗抗原（AWA）相比较，ELISA法检测不同类型日本血吸虫病患者血清抗体滴度。结果：急性、慢性和晚期血吸虫病患者血清平均抗Sj31／32抗体滴度分别为2．77±0．25、2．67±0．30和2．46±0．19（P＜0．01），抗AWA抗体滴度分别为3．27±0．16、3．28±0．16和3．20±0．17（P＞0．05）。慢性血吸虫病患者血清抗Sj31／32抗体滴度与EPG有高度的相关性（r＝0．93），明显高于抗AWA抗体与EPG的相关性（r＝0．45）。结论：利用纯化Sj31／32诊断血吸虫病能较好地区分各种感染类型和不同感染度。

旋毛虫成囊前期幼虫编码31kDa抗原基因的分子克隆及序列分析

目的 克隆旋毛虫河南株成囊前期幼虫编码 31kDa抗原基因 (TspE1)片段 ,并测定其基因序列 ,以了解该基因序列与已报道虫株的差异。方法 根据TspE1基因已知序列设计合成一对引物 ,采用RT -PCR技术获取旋毛虫成囊前期幼虫目的基因 ,PCR产物经纯化后用BamHⅠ、HindⅢ进行双酶切 ,定向克隆入pC18质粒 ,转化大肠杆菌JM10 9;重组质粒用BamHⅠ +HindⅢ酶切及PCR扩增鉴定。用Sanger双脱氧链终止法进行DNA序列测定 ,应用DNASIS软件进行同源性比较及预测抗原表位。结果 RT -PCR扩增获得成囊前期幼虫TspE1基因 (约 870bp) ,EcoRⅠ酶切鉴定正确 ;筛选出 7个阳性克隆 ,对目的基因的测序结果显示有 5种类型 ,但都与GenBank中的TspE1基因序列及由其推测的氨基酸序列有较高同源性 ,尤其是Ts HN3核苷酸及氨基酸序列同源性分别达 99 6 %和 98 9% ;TspE1基因中可能存在 7个抗原表位。 结论 应用RT -PCR技术扩增出旋毛虫河南株成囊前期幼虫编码 31kDa抗原结构基因 ,证实TspE1基因在成囊前期幼虫已有表达 ;

旋毛虫成囊前期幼虫抗原结构基因TspE1的克隆与表达

目的 克隆和表达旋毛虫河南地理株成囊前期幼虫编码 3 1kDa抗原的结构基因 (TspE1)。 方法 大鼠感染旋毛虫后第 17天收集成囊前期幼虫 ,提取虫体的总RNA。通过RT PCR特异性扩增目的基因 ,构建重组质粒pUC18 Ts HN3 ,将重组质粒 pUC18 Ts HN3中的目的基因亚克隆入原核表达载体pGEMEX 1,构建重组子 pGEMEX 1 Ts HN3 ,经IPTG诱导 ,在E .coliJM 10 9(DE3 )中表达。对表达产物进行SDS PAGE分析和Westernblotting鉴定。 结果 SDS PAGE显示目的基因在大肠杆菌中获得高效表达 ,重组蛋白的分子量为 3 1kDa ,以诱导 4h时表达量最多。薄层凝胶光密度扫描分析结果显示 ,表达的融合蛋白量约占细菌总蛋白的 2 6%。Westernblotting证实 ,融合蛋白条带能被感染旋毛虫的大鼠血清及旋毛虫病患者血清识别。 结论 旋毛虫河南地理株成囊前期幼虫抗原结构基因TspE1克隆和原核表达成功。

旋毛虫DNA疫苗诱导小鼠免疫应答的研究

目的 观察旋毛虫DNA疫苗在小鼠体内诱导的免疫应答。方法 将旋毛虫肌幼虫编码 31kDa抗原结构基因真核表达质粒pcDNA3-TspE1分别用肌肉注射和基因枪免疫BALB/c小鼠 ,免疫血清用旋毛虫肌幼虫冰冻切片及石蜡切片抗原进行IFAT检测 ,并用旋毛虫肌幼虫可溶性抗原进行Westernblot分析。结果 IFAT表明 pcDNA3-TspE1接种BALB/c小鼠后产生的免疫血清与旋毛虫肌幼虫可产生阳性反应 ,在肌幼虫冰冻及石蜡切片上均显示黄绿色荧光。Westernblot检测结果显示 ,pcDNA3-TspE1接种小鼠后产生的免疫血清只能识别旋毛虫肌幼虫可溶性抗原中的 31kDa抗原组分 ,而 pcDNA3质粒接种小鼠后的血清不能与旋毛虫肌幼虫可溶性抗原发生免疫反应。结论 旋毛虫DNA疫苗 pcDNA3-TspE1能够诱导小鼠产生特异性体液免疫应答。

重组日本血吸虫抗原诱导小鼠抗卵免疫的研究

目的 探讨重组日本血吸虫 31/ 32kDa抗原 (rSj31/ 32 )诱导小鼠产生抗卵免疫的效果。方法 采用rSj31/32抗原免疫小鼠 ,攻击感染后 4 2d ,定量检测粪卵、肝肠组织内虫卵及雌虫子宫内虫卵数。结果 与对照组比较 ,rSj31/ 32抗原免疫小鼠肝、肠组织内总卵数和粪卵数分别减少 4 6 0 % ,76 0 %和 83 0 % ,其中肝、肠组织内成熟虫卵数明显减少 (6 9 0 %和 91 0 % ) ,而肝组织内死亡虫卵数显著增加 (2 4 2 5 % )。此外 ,雌虫子宫内虫卵数亦明显下降(4 9 8% )。结论 rSj31/ 32抗原能诱导小鼠产生抗雌虫生殖和抗卵胚发育的免疫 ,可望作为抗卵疫苗的候选抗原。