牛种布鲁氏菌31KD_a蛋白基因引物的PCR试验(Ⅰ)

目的 检查Ｂ．ａｂｏｒｔｕｓ３１ＫＤａ蛋白基因引物ＰＣＲ的特异性和敏感性。方法 用煮沸法和酚提法分别从６个种布鲁氏菌和耶氏菌Ｏ３、Ｏ９、大肠菌 Ｏ１５７．Ｈ７以及鼠伤寒沙门氏菌４７ ７２９中提取ＤＮＡ进行ＰＣＲ试验。结果３１ＫＤａ蛋白基因引物Ｂ４、Ｄ５对６个种布鲁氏菌ＤＮＡ均能扩增，对非布鲁氏菌ＤＮＡ呈阴性。该扩增反应与提取ＤＮＡ方法无关，与在一定范围内酶量关系不大。Ｂ４、Ｂ５引物的ＰＣＲ可查０．９５ｏｇ／μｌ的布鲁氏菌ＤＮＡ。结论Ｂ４、Ｂ５引物的ＰＣＲ具有良好的特异性和敏感性，可在现场中试用。

日本血吸虫31/32KDa蛋白质基因扩增及克隆

目的 克隆日本血吸虫 31/ 32 KDa蛋白质的编码基因 ,用于血吸虫病免疫诊断和预防。方法 以日本血吸虫成虫 RNA为模板逆转录合成 c DNA链 ,参照 S.m 31/ 32编码序列设计合成引物 ,用 PCR法扩增 31/ 32 KDa蛋白质基因编码序列 ,将其克隆入 p GEM- T载体 ,并用双酶切和以质粒为模板的 PCR进行鉴定。结果 RT- PCR扩增出一条约 12 70 bp大小的特异性条带 ,重组质粒的双酶切和以质粒为模板的 PCR均获得了一条与 RT- PCR扩增出的条带大小相同。结论 日本血吸虫 31/ 32 KDa蛋白质重组 p GEM- T克隆载体的成功构建 ,为进一步研究提供条件。