线粒体DNA3243A > G突变糖尿病外周血单个核细胞生物力学变化特征

目的探索线粒体DNA3243A>G(mt.3243A>G)突变糖尿病患者和正常对照外周血单个核细胞(PBMC)表面形貌和力学性能差异。方法采集5例mt.3243A>G突变糖尿病患者和5例年龄、性别匹配的正常对照外周血2ml,然后利用聚蔗糖-泛影葡胺(Ficoll-hypaque)密度梯度离心法分离出PBMC。应用原子力显微镜(AFM)对突变患者和正常对照的PBMC进行表面形貌和力学性能测量。结果运用AFM测量和分析发现,在表面形貌方面,mt.3243A>G突变糖尿病患者的PBMC高度(0.73±0.24μm vs 2.49±1.17μm,P=0.011)低于正常对照组;但其表面粗糙度(Ra:161.8±33.2nm vs 66.4±16.3nm,P=0.000;Rq:202.2±40.9nm vs 85.4±17.1nm,P=0.000)高于正常对照组。在力学性能方面,mt.3243A>G突变糖尿病患者PBMC黏附力约比正常对照组高3倍(779.6±190.0p N vs 161.1±83.1p N,P=0.000)。与正常对照组相比,mt.3243A>G突变糖尿病患者PBMC杨氏模量(138.3±77.2k Pa vs 421.4±140.0k Pa,P<0.01)显著增加,病变细胞表面硬度增加。结论本研究利用AFM从单细胞水平上揭示了mt.3243A>G突变糖尿病患者PBMC的表面形貌和力学性能变化,有助于加深对该疾病病理生理机制的理解。

应用高分辨率熔解曲线分析和焦磷酸测序快速筛查线粒体糖尿病MT3243处〉G突变

目的建立快速、准确、无创、低成本的线粒体糖尿病MT3243A：〉G位点突变的筛查方法。方法采集上海市儿童医院和上海市第六人民医院确诊的6例线粒体糖尿病患者及50名正常对照的血液、唾液及尿沉渣样本，用焦磷酸测序法进行检测，并比较不同来源样本中MT3243A〉G突变位点的杂合度水平；应用高分辨率熔解曲线（highresolutionmeltingcurveanalysis，HRM）对来自上海市4个社区的1070例糖尿病患者尿沉渣样本中的MT3243A〉G突变位点进行快速筛查，阳性样本进一步采用焦磷酸测序技术进行验证，并定量检测突变位点的杂合度水平。结果对比实验发现，6例线粒体糖尿病患者尿沉渣中MT3243A〉G突变位点的杂合度均高于唾液和血液2～7倍，唾液中突变的杂合度略高于血液；在50名正常对照的血液、唾液及尿沉渣样本中均未检出MT3243A〉G位点突变。在1070例糖尿病尿沉渣样本的筛查实验中，用HRM筛查出2例疑似MT3243A〉G位点突变的样本，经焦磷酸测序验证后确认为MT3243A〉G位点突变，两例患者尿沉渣样本中MT3243A〉G位点杂合度分别为33．32％和14．67％。结论尿沉渣样本取材方便、无创、突变杂合度高，可作为人群中MT3243A〉G位点突变筛查的首选样本。HRM技术使用成本低，可实现点突变的快速筛查。焦磷酸测序技术检测灵敏度高、定量精确。我们将两者的优势相结合，建立了用两步法快速筛查检测线粒体糖尿病MT3243A〉G位点突变的新方法。

周围神经病、共济失调、视网膜色素变性综合征的临床和病理学特点(附1例报告)

目的探讨表现为周围神经病、共济失调、视网膜色素变性综合征(NARP)的线粒体病的临床、病理及基因突变特点。方法回顾性分析一个线粒体病家系中表现为NARP综合征患者的临床、病理及基因检测资料。结果该患者首发症状为多饮多尿、记忆减退,客观检查发现腱反射消失和小脑体征。头颅MRI提示明显的小脑萎缩。EMG提示运动感觉神经传导速度减慢、诱发电位波幅降低。眼底荧光造影见到"胡椒与盐"样改变。肌肉活检Gomori染色可见破碎红纤维。全基因测序提示线粒体基因3243A>G杂合突变。结论线粒体基因3243A>G突变也可表现糖尿病和NARP综合征,临床上早期识别至关重要。