上皮细胞转化序列2通过调控p33生长抑制因子1表达影响食管鳞状细胞癌细胞的体外转移活性

目的探讨上皮细胞转化序列2(ECT2)与p33生长抑制因子1(p33ING1)的表达水平对食管鳞状细胞癌(ESCC)细胞转移活性的影响。方法采用免疫组织化学法和免疫印迹法检测食管鳞癌组织和癌旁组织中ECT2和p33ING1的表达情况。将人食管鳞癌细胞系KYSE140细胞分为4组:空白组、阴性对照组(pcDNA 3.1 NC)组、过表达组(pcDNA 3.1 ECT2)和抑制表达组(si ECT2)。采用MTT法和细胞集落形成实验研究细胞的增殖和生长能力,Transwell实验和划痕实验研究细胞的侵袭和迁移能力,并用流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期,Western blotting检测ECT2对p33ING1蛋白的影响。结果在食管鳞癌组织中ECT2表达增加,p33ING1表达降低。过表达ECT2能够显著增加KYSE140细胞的生长、集落形成、迁移以及侵袭能力,并能降低KYSE140细胞的凋亡率和p33ING1的表达;此外,抑制ECT2表达后能够逆转上述变化。结论ECT2高表达能够促进食管鳞癌KYSE140细胞的生长、转移,并抑制其凋亡,其机制可能与ECT2能够抑制p33ING1表达相关。

妊娠期糖尿病患者血清LncRNA DANCR和miR-33a-5p水平表达对妊娠结局预测价值研究

目的 探讨妊娠期糖尿病(gestational diabetes mellitus,GDM)患者血清长链非编码核糖核酸分化拮抗非蛋白编码RNA (long noncoding RNA differentiation antagonizing nonprotein coding RNA,LncRNA DANCR)、微小RNA-33a-5p (miR-33a-5p)水平表达对妊娠结局的预测价值。方法 选取2021年8月~2023年2月于衡水市第四人民医院产检和分娩的154例GDM患者为GDM组,并根据妊娠结局分为良好结局组(n=115)和不良结局组(n=39);同期收集24周葡萄糖耐量试验正常的149例健康孕产妇作为对照组。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测血清LncRNA DANCR和miR-33a-5p水平;采用受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线分析血清LncRNA DANCR和miR-33a-5p预测GDM患者不良妊娠结局的价值;采用Pearson相关性分析GDM不良妊娠结局患者血清LncRNA DANCR,miR-33a-5p与空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS)、稳态模式评估法计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)的相关性;Logistic回归分析GDM患者不良妊娠结局的影响因素。结果 GDM组血清LncRNA DANCR水平(0.69±0.15)显著低于对照组(1.01±0.22),miR-33a-5p (1.59±0.40)及不良妊娠结局总发生率(25.34%)显著高于对照组(1.02±0.23,5.36%),差异具有统计学意义(t/χ^(2)=14.835,15.140,23.011,均P<0.05)。不良妊娠结局组血清LncRNADANCR水平(0.50±0.14)显著低于良好结局组(0.75±0.18),miR-33a-5p (2.00±0.58),FBG (8.97±0.66mmol/L),FINS (18.63±1.31pmol/ml)和HOMAIR (7.42±0.98)显著高于良好结局组(1.45±0.26,8.01±0.59mmol/L,14.32±1.29pmol/ml,5.10±0.86),差异具有统计学意义(t=7.895~17.961,均P<0.05)。LncRNA DANCR,miR-33a-5p单独及二者联合预测GDM患者不良妊娠结局的曲线下面积(area under curve,AUC)分别为0.820,0.819和0.897。GDM不良妊娠结局患者血清LncRNA DANCR与FBG,FINS,HOMA-IR呈负相关(r=-0.498,-0.513,-0.509,均P<0.05),miR-33a-5p与FBG,FINS,HOMA-IR呈正相关(r=0.517,0.494,0.507,均P<0.05)。LncRNA DANCR是影响GDM患者不良妊娠结局的保护因素(OR=0.804,95%CI:0.693~0.933,P=0.004),miR-33a-5p是影响GDM患者不良妊娠结局的危险因素(OR=2.747,95%CI:1.444~5.225,P=0.002)。结论 GDM不良妊娠结局患者LncRNADANCR降低,miR-33a-5p升高,二者均是不良妊娠结局的影响因素。

miR-33a-5p靶基因分析验证及对人肺腺癌A549细胞增殖的影响

目的研究miR-33a-5p过表达对人肺腺癌A549细胞增殖的影响及探索其可能的机制。方法在A549细胞中瞬时转染miR-33a-5p mimics,CCK-8和BrdU实验检测细胞增殖能力,转录组测序(RNA-seq)检测mRNA表达水平,targetscan(8.0)、miRDB(2020)、miRWalk(release_2022_01)和ENCORI(starbase,v2.0)联合筛选miR-33a-5p的潜在靶基因,并与RNA-seq的下调表达的基因取交集,RT-qPCR进行基因表达验证。结果RT-qPCR结果显示,miR-33a-5p在A549细胞中高表达(P<0.05);CCK-8实验和BrdU实验结果显示,细胞增殖能力受到抑制(P均<0.05);RNA-seq结果显示,差异基因共494个,其中上调266个,下调228个;GO功能富集主要在细胞外区组成、质膜的组成、受体复合物、细胞外泌体、细胞外基质结构组成、钙离子结合等,KEGG富集主要在补体和凝血途径、胰岛素抵抗、ABC转运途径、IL-17途径、NOD样受体途径和NF-κB信号通路等;靶基因预测分析和RT-qPCR表达验证显示,MTHFD2、OSBPL6、HADHB、HMGCLL1、GUCY1A2和DEPTOR是miR-33a-5p的潜在靶基因(P均<0.05)。结论miR-33a-5p可能通过调控MTHFD2、OSBPL6、HADHB、HMGCLL1、GUCY1A2和DEPTOR基因转录后表达水平来抑制A549细胞的增殖。

血清miR-33a-5p、SMAD7水平与视网膜静脉阻塞患者视力预后的关系

目的观察视网膜静脉阻塞患者血清微小核糖核酸-33a-5p(miR-33a-5p)、SMAD同源物7(SMAD7)水平变化,并探讨二者与视力预后的关系。方法选择视网膜静脉阻塞患者108例(观察组),同期体检健康的志愿者108例(对照组),采集所有研究对象清晨空腹外周静脉血,离心留取血清,采用实时荧光定量聚合酶链式反应检测血清miR-33a-5p,采用ELISA法检测血清SMAD7。比较两组血清miR-33a-5p、SMAD7水平,分析视网膜静脉阻塞患者血清miR-33a-5p、SMAD7水平的关系。所有视网膜静脉阻塞患者予雷珠单抗玻璃体腔内注射治疗。治疗3个月,评估视力,其中预后不良57例、预后良好51例。采用多因素Logistic回归模型分析视网膜静脉阻塞患者视力预后不良的危险因素。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-33a-5p、SMAD7水平对视网膜静脉阻塞患者视力预后不良的预测价值。结果观察组血清miR-33a-5p水平低于对照组,血清SMAD7水平高于对照组(t分别为13.362、38.657,P均<0.01)。Pearson相关分析显示,视网膜静脉阻塞患者血清miR-33a-5p水平与血清SMAD7水平呈负相关(r=-0.649,P<0.05)。单因素分析显示,视网膜静脉阻塞患者视力预后不良者合并高血压、高血脂比例和有并发症比例以及血清SMAD7水平均高于其预后良好者(χ^(2)/t分别为13.412、7.342、10.095、6.394,P均<0.05),血清miR-33a-5p水平低于其预后良好者(t=7.373,P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,血清miR-33a-5p水平降低、血清SMAD7水平升高和合并高血压、高血脂以及有并发症是视网膜静脉阻塞患者视力预后不良的独立危险因素(OR分别为0.683、3.843、2.146、1.463、2.773,P均<0.05)。血清miR-33a-5p、SMAD7水平预测视网膜静脉阻塞患者视力预后不良的曲线下面积(AUC)分别为0.870、0.869,二者联合预测视网膜静脉阻塞患者视力预后不良的AUC为0.938。血清miR-33a-5p、SMAD7水平联合预测视网膜静脉阻塞患者视力预后不良的AUC高于二者单独(Z分别为2.419、2.422,P均<0.05)。结论视网膜静脉阻塞患者血清miR-33a-5p水平降低、血清SMAD7水平升高;血清miR-33a-5p水平降低、血清SMAD7水平升高是视网膜静脉阻塞患者视力预后不良的独立危险因素;血清miR-33a-5p、SMAD7水平对视网膜静脉阻塞患者视力预后不良均有一定预测价值,二者联合预测价值更高。

血清microRNA-33a-5p在结直肠癌患者中的表达及生存预后的关系研究

目的检测结直肠癌(CRC)患者血清中microRNA-33a-5p(miR-33a-5p)的相对表达水平,探讨其辅助诊断价值及与生存预后的关系。方法收集CRC 134例、结直肠息肉69例及同期匹配的健康对照69例血清标本,检测所有标本miR-33a-5p的相对含量及CRC患者术后miR-33a-5p的相对含量。分析CRC血清miR-33a-5p的相对表达水平在不同年龄、性别、肿瘤大小、肿瘤位置和临床TNM分期的差异以及与CEA及CA199的相关性。利用二元Logistic回归和ROC曲线评估各项指标的诊断效能,评价其对CRC的辅助诊断价值。Kaplan-Meier及Cox回归分析其在预后中的临床价值。结果CRC组miR-33a-5p的相对含量低于结直肠息肉组和健康对照组,差异有统计学意义(P<0.001);CRC组患者手术前后相比较,差异有统计学意义(P<0.001)。CRC组患者miR-33a-5p的相对含量在肿瘤大小及临床TNM分期,差异有统计学意义(P<0.001)。CRC患者血清中miR-33a-5p的相对含量与CEA及CA199之间无相关性(P>0.05)。CRC组与健康对照组比较,曲线下面积(AUC)为0.805,三者联合AUC达0.831,敏感度达97.8%。miR-33a-5p低表达组的总生存时间明显低于miR-33a-5p高表达组(P<0.05)。单因素分析临床TNM分期及miR-33a-5p表达水平与患者预后相关(P<0.05),Cox回归多因素分析发现临床TNM分期和miR-33a-5p低表达是患者预后的独立危险因素。结论miR-33a-5p在CRC患者血清中低表达,与临床TNM分期有关,其表达水平与CRC的进展与预后有关;miR-33a-5p联合CEA和CA199可提高诊断敏感度,其有望成为筛查CRC的生物学指标。

长链非编码RNA GHRLOS2在结直肠癌中的表达及作用机制

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)GHRLOS2在结直肠癌组织和细胞中的表达及作用机制。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测结直肠癌组织或细胞中GHRLOS2、微小RNA-33b-5p(miR-33b-5p)表达水平。构建过表达GHRLOS2的结直肠癌细胞系HCT116、SW480,通过划痕实验、Transwell实验检测过表达GHRLOS2对HCT116、SW480细胞迁移和侵袭能力的影响;使用葡萄糖检测试剂盒检测过表达GHRLOS2细胞及对照细胞内的葡萄糖含量;采用蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞中PCK1蛋白表达水平;基于生物信息学方法预测miR-33b-5p与PCK1的靶向结合关系。结果qRT-PCR检测结果显示,结直肠癌组织样本中的GHRLOS2表达水平低于癌旁组织,结直肠癌细胞中的GHRLOS2表达水平低于正常结肠上皮细胞,差异有统计学意义(P<0.05);GHRLOS2表达与Grade分级、Stage分期、淋巴结转移均相关(P<0.05)。结直肠癌组织的miR-33b-5p表达水平高于对应癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.001)。划痕实验、Transwell实验、葡萄糖含量检测结果显示,过表达GHRLOS2可显著抑制结直肠癌细胞的侵袭、迁移和葡萄糖代谢。过表达GHRLOS2可抑制miR-33b-5p表达水平;GHRLOS2是miR-33b-5p的分子海绵,PCK1是miR-33b-5p的靶标;过表达GHRLOS2可竞争性结合miR-33b-5p,促进PCK1表达增加。结论GHRLOS2在结直肠癌组织和细胞中表达下调,其可能通过miR-33b-5p/PCK1途径调节结直肠癌细胞的侵袭、迁移及葡萄糖代谢能力,GHRLOS2有望成为结直肠癌靶向治疗的潜在生物靶点。

miR-107、miR-33a-3p表达与胃癌临床病理特征及预后的关系

目的 探究胃癌组织中miR-107、miR-33a-3p的表达及与其临床病理特征和预后的关系。方法 选取胃癌患者100例。收集患者临床资料,RT-PCR检测miR-107、miR-33a-3p水平,分析其与临床病理特征的关系,应用多因素回归模型分析影响胃癌预后的独立因素。结果 miR-107和miR-133a-3p表达与患者年龄、性别等无关(P>0.05),与肿瘤最大直径、肿瘤分化程度、肿瘤分期、淋巴结远处转移等有关(P<0.05)。单因素分析发现,分化程度、淋巴结远处转移、miR-107和miR-133a-3p表达是影响胃癌预后的因素(P<0.05)。多因素分析显示:肿瘤分化程度、淋巴结远处转移、miR-107和miR-133a-3p表达是影响胃癌患者预后的独立危险因素(P<0.05)。结论 胃癌组织中miR-107、miR-33a-3p与临床病理特征有关,miR-107、miR-33a-3p表达可作为预测胃癌患者预后的生物标志物。

牛支原体贵州分离株P33基因的克隆及遗传进化分析

为了解牛支原体贵州分离株的遗传进化情况,对其P33基因进行PCR扩增,扩增产物克隆至pMD19-T载体,筛选阳性克隆质粒进行基因序列和同源性分析,构建遗传进化树。结果:牛支原体贵州株P33基因PCR产物长度约690 bp(命名为GZ-Mb),与湖北株HB0801、Hubei-1同源性为99.6%,且在同一进化分支。结论:牛支原体贵州株P33基因与湖北株同源性最高,亲缘关系最近。

磷同位素示踪技术在生态与资源环境科学研究中的新进展

同位素示踪技术广泛应用于土壤-植物-动物生产-环境系统中磷的活化、形态转化、吸收利用、迁移规律等方面的研究,极大地推动了生态、资源环境科学的发展。本文介绍了几种利用同位素示踪技术研究磷在土壤-植物-动物生产-环境系统中动态行为方法的进展,其中放射性同位素磷稀释技术已应用于盆栽和大田试验的研究,主要包括直接标记水溶性磷肥磷或土壤易交换性磷、间接标记难溶性磷和难溶性磷酸盐通过中子堆照活化3种方法。磷酸盐中氧稳定性同位素示踪技术是新近发展起来、并不断完善的方法,为磷从农田到水体环境迁移过程的定量研究提供了可能,但该技术在土壤-植物系统中的应用还存在一定的局限性,有待技术与理论上的进一步完善。核磁共振技术为生态系统中磷形态变化,尤其是有机磷形态的定性与定量研究提供新的研究手段。

超低水平液闪谱仪测定雨水、海水中的宇生核素^(32)P和^(33)P

本研究旨在建立用超低水平液闪谱仪测定雨水、海水中的宇生核素32P3、3P的方法.通过对液闪谱仪的主要性能与技术参数进行优化设置,对液闪谱仪的效率及能量进行刻度,建立淬灭校正曲线,探讨影响测量本底的因素,实现液闪谱仪对样品的优化测量.并通过液闪谱仪对厦门沿岸地区雨水及厦门湾海水进行测量,得到2004年3月至2005年2月雨水中32P3、3P的月平均比活度分别为0.30×10-2~3.18×10-2、0.28×10-2~3.05×10-2Bq/dm3,33P/32P)A.R.月平均值介于0.74~0.96之间,平均为0.87±0.03;厦门湾海水中32P、33P的比活度分别为1.52×10-2~4.62×10-2、1.28×10-2~3.72×10-2Bq/m3,33P/32P)A.R.为0.81~0.91.

天然放射性核素^(32)P和^(33)P在海洋生物地球化学中的示踪研究概况

磷(P)是海洋生物生长和繁殖必需的元素，长期以来，氮被认为是绝大多数海区浮游植物生长的限制因子 [1]，然而最近有关资料指出，在较长的地质时间尺度上（>1 000 a），对全球海洋生物生产力起控制作用的可能是磷而不是氮 [2]。

CRNDE介导miR-33a-5p/CDK6轴影响细胞周期调控人体肝癌细胞增殖的实验研究

目的探讨CRNDE介导miR-33a-5p/CDK6轴影响细胞周期,调控人体肝癌细胞增殖的作用机制。方法运用细胞转染技术构建稳定干扰CRNDE/低表达CRNDE的人体肝癌细胞模型shRNA-CRNDE-HuH-7;RT-qPCR及Western blotting技术检测HL-7702人体肝细胞株、HuH-7人体肝癌细胞株及shRNA-CRNDE-HuH-7细胞株中CRNDE、miR-33a-5p及CDK6的表达情况,评估其相关性及miR-33a-5p/CDK6轴随CRNDE表达量变化的相关程度;对上述三组细胞株进行细胞增殖实验(CCK8)、细胞凋亡检测、细胞侵袭测试及细胞周期检测,评估在不同CRNDE表达情况下三组细胞株的增殖、凋亡、侵袭能力及细胞周期的变化。结果RT-qPCR及Western blotting技术检测shRNA-CRNDE-HuH-7细胞株中CRNDE表达低于HuH-7人体肝癌细胞株(P<0.05);当控制位点为CDK6时,三组细胞株中CRNDE表达量与其呈正相关(r=0.856,P<0.05);当控制位点为miR-33a-5p时,三组细胞株中miR-33a-5p表达量与CDK6及CRNDE均呈负相关(r=-0.883,P<0.05;r=-0.937,P<0.05);在三组细胞株中,随CRNDE表达下调,细胞增殖、侵袭能力及细胞周期均受到抑制(P<0.05),shRNA-CRNDE-HuH-7细胞株中肿瘤细胞凋亡高于HuH-7细胞株(P<0.05)。结论CRNDE与miR-33a-5p存在靶向关系,CRNDE以靶向调节作用抑制miR-33a-5p的表达,进而介导CDK6的升高,通过miR-33a-5p/CDK6轴促进肝细胞肝癌的增殖,其可能成为肝细胞肝癌的新肿瘤标志物和分子生物治疗靶点。

黄海、东海上层海水磷循环的同位素示踪研究

采用超低本底液闪β计数的方法,测定了春季黄海、东海海水中溶解态、悬浮物、筛绢颗粒物和雨水中天然32P和33P的比活度.结果显示,上层海水各相33P,32P的比活度相当低,其中TDP的32P,33P比活度的浓度最高,悬浮物次之,筛绢颗粒物最低.海水各相中33P与32P活度比值从TDP到悬浮物、筛绢颗粒物逐渐增大,反映出食物链传递过程中磷的年龄逐渐增加.根据稳态模式的估算结果,海水各相中磷的停留时间具有明显的区域变化特征,其中近岸和内陆架溶解磷的停留时间比外陆架短,仅为3~4 d,意味着近岸和内陆架海区低浓度的磷也可能维持高生物生产力的运转.利用稳态模式还估算出浮游植物的碳同化通量为189~814 mg/(m2.d),浮游动物的碳摄食通量为10~161 mg/(m2.d).此外,通过比较雨水32P,33P的输入通量和海水32P,33P积存量,利用质量平衡方法估算出上层海水POC输出通量为102~972 mg/(m2.d).

胰腺癌中p33^(ING1b)基因变化及其表达研究

目的 检测胰腺癌中p33ING1b蛋白表达及基因变化情况,以了解p33ING1b在肿瘤发生过程中的作用。方法 采用免疫组化、聚合酶链反应单链构象多态性技术(PCR SSCP)和杂合型缺失(LOH)技术,检测胰腺癌中p33ING1b表达及p33ING1b基因变化情况。结果 ING1b蛋白的阳性表达率为85% (34/40),SSCP显示在40例病例中仅1例突变,LOH率为60.9% (14/23)。结论 突变与缺失表达并不是p33ING1b的主要失活形式,染色体改变可能导致p33ING1b功能下降,从而引发肿瘤发生。

牛瑟氏泰勒虫P33表面蛋白基因的克隆与序列分析

为分析吉林省流行的牛瑟氏泰勒虫基因序列,根据GenBank上发表的牛瑟氏泰勒虫P33表面蛋白基因序列设计合成一对引物,用PCR方法扩增出牛瑟氏泰勒虫的基因片段,并成功地将该基因纯化后克隆到pGEM-TEasy载体上,将经EcoRⅠ酶切鉴定和PCR鉴定为阳性的重组质粒进行测序。结果表明克隆的基因片段长度为868bp,编码283个氨基酸,有2个潜在的糖基化位点。核苷酸同源性分析表明,该基因片段与韩国株(AF521557)、日本株(AB016280)、俄罗斯株(AB016279)的核苷酸序列同源性分别为99.4%、88.0%、88.1%。

p33^(ING1b)增强骨肉瘤细胞U2OS对足叶乙甙的敏感性

背景与目的:作为一个新的抑癌基因,ING1与p53有许多相似的生物学功能,如细胞生长抑制、DNA修复、凋亡和化疗敏感性等。本实验目的在于研究p33ING1b对骨肉瘤细胞药物敏感性的影响并探讨其作用机制。方法:瞬时转染p33ING1b进入骨肉瘤细胞株U2OS后,用足叶乙甙(etoposide,VP-16)处理24h,然后采用台盼蓝拒染法计数活细胞数并计算细胞生长抑制率,流式细胞仪、DAPI染色等方法检测细胞凋亡率,Westernblot技术检测p53、p21WAF1、MDM2和Bax蛋白的表达。结果:台盼蓝染色结果表明,瞬时转染p33ING1b进入骨肉瘤细胞株U2OS后,再用VP-16处理24h,细胞生长抑制率明显增加(63.1±5.1)%。流式细胞计数和DAPI染色检测结果表明,细胞凋亡率明显增加(62.7%)。Westernblot检测结果显示,外源性p33ING1b高表达明显提高了p53及其下游基因p21WAF1和Bax蛋白的表达水平,转染p33ING1b进入骨肉瘤细胞株U2OS后,再用VP-16处理24h,p53、p21和Bax蛋白表达增加。在各实验组中,MDM2的蛋白表达没有明显变化。结论:p33ING1b能够上调p53蛋白,并上调p53下游因子——p21WAF1和Bax的表达水平,通过p53依赖性凋亡信号通路,提高骨肉瘤细胞U2OS对VP-16的敏感性。

牛瑟氏泰勒虫P33-P23核酸疫苗研究

根据牛瑟氏泰勒虫主要表面蛋白基因p23和p33的已知序列,设计特异性引物,将克隆产物与pVAX1表达载体连接,得到真核重组表达质粒pVAX1-p33-p23,脂质体介导其转染Hela细胞后进行表达产物的鉴定,最后进行BALB/c小鼠免疫试验。结果,目的基因在真核细胞内得到正确表达,动物免疫试验pVAX1-p33-p23核酸疫苗能够提高小鼠的细胞免疫和体液免疫水平,并且pVAX1-p33-p23免疫组的免疫效果均高于pVAX1-P33和pVAX1-P23免疫组(P<0.05)。从而证明,牛瑟氏泰勒虫的重组pVAX1-p33-p23核酸疫苗成功构建。