银屑病患者骨髓CD34^+细胞RUNX1及其靶基因SLC9A3R1的研究

目的:研究转录调节因子RUNX1及其靶基因SLC9A3R1在银屑病患者骨髓CD34+细胞中的表达及SLC9A3R1与NAT9之间RUNX1的连接位点,以揭示银屑病患者造血干细胞的活性,为深入阐明银屑病患者免疫异常的根源及造血细胞在其中的作用提供理论依据。方法:采用免疫磁珠法分离CD34+细胞,RT-PCR法分别检测RUNX1和SLC9A3R1的mRNA表达,直接测序法检测PCR产物中SLC9A3R1与NAT9之间RUNX1连接位点DNA序列。结果:银屑病患者骨髓CD34+细胞RUNX1表达阳性率低于正常对照组(P<0.05);银屑病患者骨髓CD34+细胞SLC9A3R1表达水平明显高于正常对照组(P<0.05),且与PASI评分正相关(r=0.48,P<0.05);在SLC9A3R1与NAT9之间未发现RUNX1连接位点的突变。结论:决定银屑病患者骨髓CD34+细胞分化的关键基因RUNX1存在异常;银屑病患者骨髓RUNX1和SLC9A3R1可能通过对骨髓造血微环镜和造血干细胞的异常调节参与银屑病的发病。

IL-6/sIL-6R对人脐血CD34^+细胞体外扩增的作用

背景和目的:造血干细胞具有自我更新、多向分化与重建长期造血的潜能,因此,造血干细胞广泛应用于干细胞移植、免疫治疗、基因治疗等领域。胎儿脐带血中富含造血干细胞,但单份脐带血中造血干细胞的数量有限,不能充分满足临床和科研需要,因此在体外培养使脐带血干/祖细胞数量扩增的研究日益受到重视。已知一些细胞因子可以在体外培养中使脐血干/祖细胞大量扩增。新近发现IL-6/sIL-6R(可溶性IL-6受体)或其融合蛋白可促使脐带血CD34+细胞中CD34+gp130+IL-6R-细胞亚群在体外培养中大量扩增。本实验旨在观察IL-6/sIL-6R在脐带血CD34+细胞体外扩增中的作用,并探讨合适细胞因子组合。方法:脐血CD34+细胞用MiniMACS分离,然后在含有不同细胞因子组合的液体培养基中体外培养7天或14天,培养前后分别进行有核细胞计数、用FCM(流式细胞术)测定CD34+细胞比例计算CD34+细胞总数及进行CFU-GM集落培养。根据不同细胞因子组合分为空白对照组,SCF组,SCF+IL-6/sIL-6R组,SCF+FL+IL-6/sIL-6R组,SCF+FL组。结果:空白对照组和SCF组CD34+细胞数量在培养7天或14天后明显下降。SCF+IL-6/sIL-6R组培养7、14天分别使有核细胞及CD34+细胞绝对数扩增(7.1±2.4)倍、(39.0±14.0)倍及(1.8±0.7)倍、(4.8±2.4)倍;SCF+FL+IL-6/sIL-6R组(16.

白细胞介素-34/集落刺激因子-1R在转化生长因子-β1诱导A549细胞上皮-间质转化中的表达

目的探讨白细胞介素-34/集落刺激因子-1受体(IL-34/CSF-1R)在转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导A549细胞发生上皮-间质转化(EMT)中的表达。方法体外培养A549细胞;CCK 8法检测不同浓度TGF-β1在不同时间点对A549细胞增殖的影响;选用5μg/L TGF-β1刺激A549细胞(0、12、24、48h),提取细胞蛋白和RNA,Western blotting法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、E-钙黏连蛋白(E-Cad)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)蛋白的变化;Real-time PCR法检测IL-34、CSF-1R、MMP-2、MMP-9基因表达的变化。结果 TGF-β1对A549细胞的增殖无明显影响(P>0.05)。TGF-β1刺激A549细胞后,间质细胞标志性蛋白α-SMA表达升高,上皮细胞标志性蛋白E-Cad表达下降,纤维化相关的MMP-2蛋白表达升高,MMP-9蛋白表达先升高后下降,TIMP-1蛋白早期出现短暂性增高后,呈持续降低趋势(P<0.01)。IL-34mRNA表达逐渐升高,CSF-1R mRNA、MMP-2 mRNA、MMP-9 mRNA表达先升高后下降(P<0.01)。结论 TGF-β1诱导A549细胞的EMT过程中,存在IL-34/CSF-1R的动态表达。

青蒿鳖甲汤对MRD-L患者CD34+细胞源DC诱导过程中sTNFαR的影响

目的:观察青蒿鳖甲汤对髓系微小残留白血病(MRD-L)CD34+细胞源树突状细胞(DC)诱导过程中sTNFR的影响。方法:体外扩增从MRD-L患者骨髓单个核细胞(BMNCs)中分离的CD34+细胞,在高、中、低剂量青蒿鳖甲汤含药血清联合细胞因子的作用下诱导为DC,收集第3、6、9天上清液并观察DC形态,ELISA法测sTNFαR含量。结果:含药血清均能促进DC的诱导,降低sTNFαR含量,与正常兔血清组、细胞因子组有显著差异(P<0.05),且高剂量组效果更甚(P<0.05)。结论:青蒿鳖甲汤含药血清联合细胞因子能更好地诱导MRD-患者来源的CD34+细胞成为DC,降低sTNFαR含量。

sIL-6R,IL-6和SCF对人脐血CD34^+细胞的扩增作用

1995年,我们发现由于细胞因子(SCF)和白细胞介素6(IL-6)/可溶性白细胞介素6受体(sIL-6R)复合物同时激活c-kit和gp130信号系统,有利于CD34^+细胞的扩增。在此基础上,我们进一步研究了同时激活这两个信号系统对更原始的脐血长期培养启动细胞(long-term culture-initiating cell,LTC-IC)和混合造血细胞集落形成单位(CFU-Mix)的扩增作用。

混合工质R134a/R600a气相PVTx性质的实验研究

利用基于Burentt法搭建的高精度压力-体积-温度-组分(PVTx)试验台,测定了混合制冷剂R134a/R600a质量分数为80%/20%和75%/25%、温度为273 K^320 K的PVTx性质。根据测定的数据,拟合了不同质量配比的混合制冷剂相应的气态维里方程。首次研究了该工质的基础热物性,为进一步研究提供详实的数据。

上调miR-34b-5p通过抑制胰岛素样生长因子1受体干扰肾癌Caki-1细胞的增殖和侵袭

目的观察微小RNA-34b-5p(miR-34b-5p)对人肾癌细胞增殖和侵袭的影响及分子机制。方法 采用实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR, qRT-PCR)检测人肾癌细胞ACHN、Caki-1、OS-RC-2、786-O、A498和人正常肾小管上皮细胞HK-2中miR-34b-5p的表达量。以miR-34b-5p表达量最低的Caki-1细胞为转染对象,应用脂质体转染miR-34b-5p或微小RNA(miR-NC)。采用qRT-PCR检测各组细胞中miR-34b-5p的表达水平。MTT法和Transwell侵袭实验检测肾癌细胞的增殖和侵袭能力。生物信息学预测并采用双荧光素酶报告基因验证miR-34b-5p的潜在靶基因。qRT-PCR和Western blot法分别检测miR-34b-5p潜在靶基因及下游通路蛋白的表达。结果 肾癌细胞中miR-34b-5p的表达量低于正常肾小管上皮细胞。用脂质体转染miR-34b-5p后Caki-1细胞中miR-34b-5p的表达量明显高于miR-NC组,提示过表达成功。上调miR-34b-5p可抑制肾癌细胞的增殖能力和侵袭能力。生物信息学预测和双荧光素酶报告基因证实胰岛素样生长因子1受体(insulin like growth factor 1 receptor, IGF1R)为miR-34b-5p的靶基因。上调miR-34b-5p可降低肾癌Caki-1细胞中IGF1R基因及PI3K/Akt信号通路蛋白的表达量。结论 上调miR-34b-5p可抑制人肾癌Caki-1细胞的增殖和侵袭,其可能的分子机制为降低IGF1R基因及下游PI3K/Akt信号通路蛋白的表达。

经典干细胞标志物CD34、PDGF-βR、VEGF-R_2在早孕蜕膜组织中的表达研究

目的研究经典干细胞标志物CD34、PDGF-βR、VEGF-R_2在早孕6～8周蜕膜组织中的表达。方法提取6～8周早孕期人工流产术蜕膜组织(n=16),消化后选用CD34、PDGF-βR、VEGF-R_2单克隆抗体进行荧光染色,分别采用单染、双染及三染法,应用流式细胞仪技术分析上述经典干细胞标志物的表达及其相互关系。结果 6～8周早孕期蜕膜组织细胞中,(1)单染法证实CD34^+细胞为(0.81±1.07)%,PDGF-βR^+细胞为(9.94±7.36)%,VEGF-R_2^+细胞为(0.90±1.19)%;(2)双染法证实CD34^+/VEGFR2^-细胞(0.59±0.61)%,CD34^+/VEGF-R2^+细胞(0.16±0.10)%;(3)三染法证实CD34^+/VEGFR2^+/PDGF-βR^+细胞(0.09±0.06)%,CD34^+/VEGFR2^-/PDGF-βR^+细胞(0.15±0.13)%。结论早孕6～8周蜕膜组织中存在经典干细胞标志物CD34、PDGF-βR、VEGF-R_2阳性表达的细胞,存在少量的双阳性表达及三阳性表达的细胞。早孕蜕膜组织中存在干细胞参与其发育过程。

miR⁃34、VEGF⁃C及sIL⁃2R检测在乳腺癌淋巴结转移中的预测

目的探讨血清微小RNA(miR34)、血管内皮生长因子(VEGF⁃C)及可溶性白细胞介素⁃2受体(sIL⁃2R)水平与乳腺癌淋巴结转移的关系。方法选取2015年3月至2019年3月在本院就诊的97例乳腺癌患者,根据是否有淋巴结转移分为淋巴结转移组40例、无淋巴结转移组57例,选取同期在本院进行体检的97例健康者作为对照组。比较各组miR⁃34、VEGF⁃C、sIL⁃2R水平,绘制ROC曲线,分析三者单一检测及联合预测乳腺癌淋巴结转移的AUC、灵敏度、特异度。结果三组之间miR⁃34水平比较:对照组>无淋巴结转移组>淋巴结转移组,差异有统计学意义(P<0.05)。三组之间VEGF⁃C、sIL⁃2R水平比较:淋巴结转移组>无淋巴结转移组>对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。病理学分级为低、中分化的患者miR⁃34低于高分化的患者,VEGF⁃C、sIL⁃2R高于高分化的患者,差异均有统计学意义(P<0.05)。TNM分期为Ⅰ~Ⅱ期的患者miR⁃34高于Ⅲ~Ⅵ期的患者,VEGF⁃C、sIL⁃2R低于Ⅲ~Ⅵ期的患者,差异均有统计学意义(P<0.05)。有淋巴血管间隙浸润的患者miR⁃34低于无淋巴血管间隙浸润的患者,VEGF⁃C、sIL⁃2R高于无淋巴血管间隙浸润的患者,差异均有统计学意义(P<0.05)。miR⁃34、VEGF⁃C、sIL⁃2R及三者联合检测灵敏度、特异度分别为93.65%、94.23%,显著高于单一检测(P<0.05)。结论miR⁃34、VEGF⁃C、sIL⁃2R与乳腺癌淋巴结转移情况有关,联合三者检测对评估乳腺癌病情、预测淋巴结转移情况作用重大。

利拉鲁肽前体肽GLP-1(7-37)K34R在大肠埃希菌中的表达与优化

目的建立利拉鲁肽前体肽GLP-1(7-37)K34R基因工程表达体系,为推进利拉鲁肽生物类似药的产业化开发奠定基础。方法优化密码子并通过重叠PCR扩增获得GLP-1(7-37)K34R编码基因(glp1a),构建glp1a与GST、Ub、SUMO 3种标签蛋白在大肠埃希菌中融合表达,分别从诱导时机、诱导温度、诱导时间和IPTG浓度方面对三种标签蛋白的表达条件进行优化。通过镍柱亲和层析纯化,并由肠激酶切除标签,回收纯化目的蛋白,经SDS-PAGE和HPLC分析检测。结果 3种标签中,Ub融合的GLP-1(7-37)K34R蛋白表达量最高,高达130 mg·L^(-1)。将高表达的Ub-GLP-1(7-37)K34R蛋白经纯化酶切回收,获得的蛋白与标准蛋白比对分析显示所获得目的肽完全正确。结论成功利用大肠埃希菌表达出GLP-1(7-37)K34R蛋白,确定蛋白表达的最优条件和最佳融合标签,建立蛋白纯化体系得到含量和纯度较高的目的蛋白。

盛群电话通信产品微控制器系列推出HT95R34

HT95R34为盛群半导体新开发的8位电话通信产品微控制器，ROM为8KB×16、RAM为2112B、I／O为28口、Stack数目为8级、内建2个16位Timer、1个RTCTimer及4个外部中断触发等功能，在包装方面则提供48SSOP的封装型式。HT95R34内建拨号所需DTMF Generator，特别适合应用于通信相关产品，例如多功能电话、无线电话、录音机、家庭安防等。

蜡质芽孢杆菌34-16菌株对苏云金芽孢杆菌增效作用机制初步探讨

34-16菌株是一株对Bt具有明显增效作用的蜡质芽孢杆菌。对 34 16菌株的营养体和芽孢及其发酵上清液进行增效作用测定 ,结果表明 34 16菌株的芽孢有明显增效活性。用紫外线处理的 34 16菌株的死芽孢也具明显增效活性 ,推断此增效因子为细胞结构物质。将死芽孢用胃蛋白酶、胰蛋白酶处理后 ,不具增效活性 ,进一步推断增效物质为蛋白类物质。作者将该蛋白质暂命名为ProteinR。

海绵Ircinia Mutans Wilsion的化学成分

从中国南海海绵Ircinia mutans wilsion中首次分离得到的5个化合物,其结构确定为(32S,33R,34R)-Bacteriohopanetetrol(1),3-吲哚甲醛(2),3-羟基十一酸(3),胸腺嘧啶(4),对羟基苯甲酸乙酯(5)。

基于AR/SREBP-1/ACC1信号通路探讨雄激素诱导金黄地鼠皮脂代谢异常的发病机制

目的通过研究AR/SREBP-1/ACC1信号通路与雄激素诱导的皮脂代谢异常的关系来探讨痤疮的发病机制。方法采用天生具有雄激素依赖特性的雄性金黄地鼠为动物模型,设对照组和双氢睾酮(dihydrotesto-sterone,DHT)组,每组10只,两组金黄地鼠内耳廓分别用无水乙醇和0.1 mg/mL的DHT溶液进行干预。通过HE染色观察耳廓组织病理变化;油红O染色及比色法检测耳廓组织中游离脂肪酸(nonesterified free fatty acids,NEFA)、甘油三酯(TG)含量,分析金黄地鼠耳廓皮脂分泌情况;免疫组化和Western Blot检测金黄地鼠耳廓组织中雄激素受体(androgen receptor,AR)、胆固醇调节元件结合蛋白1(sterol regulatory element binding protein 1,SREBP-1)、乙酰辅酶A羟化酶1(acetyl coenzyme A carboxylase 1,ACC1)蛋白表达水平,探讨皮脂代谢与AR/SREBP-1/ACC1信号通路的关系。结果与对照组比较,DHT组耳廓皮脂腺组织腺叶增大,排列更加紧密,NEFA和TG分泌增多(均P<0.01),免疫组化结果显示AR、SREBP-1、ACC1阳性表达均升高(P<0.05,P<0.01),Western Blot结果显示AR、SREBP-1、ACC1蛋白表达均升高(均P<0.01)。结论雄激素通过AR/SREBP-1/ACC1信号通路的过度激活,使NEFA和TG分泌增多,其可能是痤疮形成的重要发病机制。

三七皂苷R1对乳腺癌组织血管生成的影响

目的探讨三七皂苷R1(NR1)对乳腺癌组织血管生成的影响。方法体外研究采用MTT实验检测NR1对乳腺癌细胞生长的影响;采用ELISA试剂盒检测血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)及NR1对乳腺癌细胞培养上清液中血管内皮生长因子(VEGF)浓度的影响;采用Western blotting技术检测AngⅡ和NR1对乳腺癌细胞CD34蛋白表达的影响。体内实验利用裸鼠移植瘤模型检测NR1对乳腺癌移植瘤生长的影响;并利用免疫组化技术检测NR1对移植瘤组织中CD34、VEGF蛋白表达的影响。结果AngⅡ剂量依赖性地上调乳腺癌细胞CD34蛋白的表达以及乳腺癌细胞培养上清液中VEGF的浓度,而NR1可以剂量依赖性地逆转该过程。体内实验结果显示,NR1可以抑制乳腺癌移植瘤小鼠肿瘤的生长,下调荷瘤裸鼠肿瘤组织中CD34、VEGF的表达。结论NR1可能通过下调乳腺癌细胞CD34蛋白的表达及VEGF的产生从而抑制乳腺癌血管的生成,该研究为乳腺癌治疗药物的研发提供了一定的理论依据。

涡旋压缩机HFC替代工质的研究

根据涡旋压缩机的热力过程，村６种ＨＦＣ纯工质和相应两组混合工质进行了制冷循环计算，指出适当比例混合的二元混合工质Ｒ３２／Ｒｌ３４ａ是替代Ｒ２２工质较理想的选择。

来源不同的恢复系对滇Ⅰ型不育系恢复力的探讨

通过调查云南农业大学自育的恢复系南34和分别从上海、辽宁引进的恢复系沪R378、C418与9个滇Ⅰ型不育系杂交共27个杂种F1的育性,以比较三个恢复系对滇I型不育系的恢复力。结果表明:恢复系南34对滇Ⅰ型不育系恢复力强,可在生产上广泛应用;沪R378和C418对滇Ⅰ型不育系具有一定的恢复能力,在生产上可有选择的使用,组配的杂种F1应进行生态适应性和抗性鉴定后,才能应用于生产。

凝血因子基因多态性与深静脉血栓形成的相关性探讨

目的探讨凝血因子基因多态性与深静脉血栓形成(DVT)的相关性。方法采用PCR-RFLP法对103例DVT患者(观察组)和250例健康人(对照组)进行FⅡ／G20210A、FⅦ／R353Q、F■／Val34LeuFⅦ基因多态性检测,并对基因型频率与等位基因频率作对比分析。结果观察组与对照组FⅡ／G20210A、FⅦ／R353Q、F ■／Val34Leu的基因型频率及等位基因频率差异无统计学意义,三种基因型频率的分布均符合Hardy-Weinberg平衡定律。结论FⅡ／G20210A、FⅦ／R353Q基因多态性可能不是深静脉血栓形成发病的遗传学风险因子;F■／Val34Leu多态性可能不是深静脉血栓形成发病的遗传保护因子。三种基因多态性均存在种族和地域差异。

沉默LncRNA OIP5-AS1通过上调miR-34c-5p表达增加A549R细胞放射敏感性

目的探讨LncRNA OIP5-AS1对非小细胞肺癌放射抗拒细胞A549R的放射敏感性影响及作用机制。方法X射线6Gy照射5次A549细胞建立放射抗拒细胞A549R。qRT-PCR检测A549、A549R细胞OIP5-AS1和miR-34c-5p表达水平。转染OIP5-AS1抑制剂或miR-34c-5p模拟物至A549R细胞,OIP5-AS1过表达质粒至A549细胞。流式细胞仪检测细胞凋亡,克隆形成实验检测细胞放射敏感性,蛋白印记检测p-Chk2和p-ATM蛋白表达水平。双荧光素酶实验验证OIP5-AS1与miR-34c-5p之间关系。结果与A549细胞比,A549R细胞中OIP5-AS1表达上调(1.97±0.11︰1.01±0.05,P<0.05),miR-34c-5p表达下调(0.43±0.02︰1.02±0.06,P<0.05)。沉默OIP5-AS1+6Gy组A549R细胞中p-Chk2和p-ATM蛋白水平低于沉默对照+6Gy组(0.43±0.03︰1.39±0.15和0.51±0.05︰1.21±0.11,P<0.05),但凋亡率增加[(13.29±1.25)%︰(28.47±2.31)%,P<0.05]。过表达OIP5-AS1+6Gy组A549细胞中p-Chk2和p-ATM蛋白水平高于过表达对照+6Gy组(1.23±0.13︰0.75±0.06和1.08±0.11︰0.59±0.04,P<0.05)。抑制miR-34c-5p表达逆转了沉默OIP5-AS1对A549R细胞存活分数影响,增敏比为1.42。OIP5-AS1负调控miR-34c-5p表达。结论沉默OIP5-AS1通过上调miR-34c-5p表达增强A549R细胞放射敏感性,为放疗提供潜在的靶点。