SYBR Green实时定量PCR检测转基因大豆中外源基因拷贝数

采用SYBRGreen Ι real-time PCR方法检测转基因大豆中外源基因35S边界基因的拷贝数,以大豆凝集素基因(Lectin)作为内参照基因,以转基因大豆基因组DNA为内参照基因标准品,初始浓度为0.43μg·μL-1,进行5倍梯度稀释得到内参照基因CT值与起始模板量的相关性标准曲线:y=-2.9915x+22.3321,R2=0.996;以含35S边界序列的质粒DNA为目的基因为标准品,初始浓度为0.64μg·μL-1,同样进行5倍梯度稀释,建立目的基因CT与起始模板量的相关性标准曲线:y=-3.4021x+17.7219,R2=0.999。通过SYBR Green Ιreal-time PCR获得样本中目的基因和内参基因的CT值,将CT值分别代入标准曲线计算该样本中内参基因和目的基因起始模板量,目的基因与内参基因起始模板量比值即是目的基因在该转基因中的拷贝数。计算结果为4份样品中,2个拷贝的1个,3个拷贝的3个。