优质食味粳稻香软米新品种云粳37号选育及功能基因优势等位基因型分析

云粳37号是以具有香味且表现高产稳产的粳稻品种云粳26号作母本,以持有低直链淀粉含量调控基因Wx^(y37)且稻米食味品质优异、耐寒性和抗病性强的粳稻软米品种银光作父本杂交育成,具有食味品质优异、高产、稳产、耐寒、抗病等优良性状。通过对云粳37号及双亲全基因组重测序和功能基因优势等位基因型分析发现,云粳37号遗传了双亲的多个优势等位基因,如香味基因Badh2、抗稻瘟病基因Pi35、调控低直链淀粉含量基因Wx^(y37)、耐冷基因CTB4a、抗旱基因OsPP15和抗白叶枯病基因Xa26等,是目前云南省影响较大的粳稻品种。

烟草NtPRR37基因克隆及功能分析

【目的】伪答应基因家族(pseudo response regulators,PRRs)是高等植物调控开花途径的重要基因。克隆烟草NtPRR37基因并分析其对不同光周期的应答及对开花的影响,为烟草开花调控提供靶标基因。【方法】利用同源克隆方法从普通烟草(Nicotiana tabacum L.)中克隆得到NtPRR37基因,并对其进行生物信息学分析,利用实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,RT-qPCR)分析其在不同组织中的表达及不同光照时长处理的表达模式。同时利用病毒诱导基因沉默(virus induced gene silence,VIGS)技术降低NtPRR37表达水平并观察表型变化及检测开花相关基因表达变化。【结果】NtPRR37基因全长2472 bp,编码823个氨基酸,相对分子质量90.16 kD,含有PRRs基因家族的典型保守结构域(REC和CCT结构域)。通过同源进化分析发现,烟草NtPRR37与绒毛烟草(Nicotiana tomentosiformis)、林烟草(Nicotiana sylvestris)及本氏烟草(Nicotiana benthamiana)的PRR37在进化上属于同一分支。采用RT-qPCR分析发现,该基因在盛花期烟草各个组织的表达特征存在差异性,在雌蕊中的表达量最高,在侧根的表达量最低;在不同光照时长处理下,NtPRR37随着光照时间的增加表达量呈上升趋势,全黑暗处理下表达量最低,且具有生物节律性;NtPRR37沉默植株中NtPRR37表达量明显下调且沉默植株开花期提前,这可能与诱导开花相关基因(NtFT4、NtAP1、NtCO、NtSOC1)表达量显著上调有关。【结论】NtPRR37的表达受到光周期的调控,且在烟草开花过程中NtPRR37作为开花抑制因子存在。

白介素37下调多药耐药基因-1逆转肺腺癌紫杉醇耐药的研究

目的 本研究旨在探究白介素37(IL-37)在抑制肺腺癌细胞多药耐药性方面的潜在作用,及其对于耐紫杉醇的A549/TAX细胞的影响。方法 通过细胞培养、处理程序、实时荧光定量PCR、Western blot分析和统计学分析等实验方法,系统研究了IL-37对耐紫杉醇A549/TAX细胞的影响。结果 紫杉醇明显抑制了A549和A549/TAX细胞的增殖,其中A549/TAX的耐药指数RI为16.88。100ng/mL的rhIL-37显著抑制了A549/TAX细胞的增殖。在紫杉醇和rhIL-37联合处理组,细胞增殖的抑制率显著高于仅用紫杉醇处理组(P<0.05)。此外,rhIL-37在24小时后显著抑制了A549/TAX细胞的迁移和侵袭。非细胞毒性浓度的rhIL-37也能显著抑制A549/TAX细胞的集落形成。经rhIL-37作用48小时后,A549/TAX细胞中MDR1的表达水平比对照组下降了约66%(P<0.05)。结论 IL-37与紫杉醇联合处理可有效抑制A549/TAX细胞的增殖、迁移和侵袭,同时通过降低MDR1基因的表达水平可能逆转细胞的耐药性,为IL-37在肺腺癌治疗中的潜在应用提供了实验依据。

20例ABO^(*)AW.37等位基因增强现象的分析

目的分析20例携带ABO^(*)AW.37等位基因的血清学和分子生物学特征,研究等位基因增强现象。方法采用血清学方法检测ABO表型,对ABO基因1~7外显子采用Sanger测序进行基因型检测。结果20例测序均存在ABO^(*)AW.37的特征性变异c.940A>G(p.Lys314Glu)。9例ABO^(*)AW.37与B等位基因同时遗传时正定型抗-A均有凝集,血清学表型均为A_(w)B。而11例ABO^(*)AW.37与O基因同时遗传时正定型抗-A均无凝集;吸收放散5例弱阳性,血清学表型为A_(el);6例吸收放散结果阴性,血清学表型为O型。结论ABO^(*)AW.37基因与B等位基因同时遗传时,存在等位基因增强现象。ABO^(*)AW.37基因与O等位基因同时遗传时,血清学表型为A_(el)或O型,血型鉴定时需注意避免误判。

陕西汉族人群细胞连接蛋白Cx37基因多态性分布

目的探讨心血管疾病相关的细胞连接蛋白37(Connexin37,Cx37)基因C1019T多态性在陕西汉族人群的分布。方法采用聚合酶链-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术,对116例无血缘关系的健康陕西汉族人的染色体进行检测,分析基因型频率、等位基因频率分布,并与其他种族进行比较。结果Cx37基因C1019T等位基因频率为:C=68.5%,T=31.5%;基因型频率为:C/C=63.8%,C/T=30.2%,G/G=6.0%;其中男性等位基因频率为:C=76.1%,T=23.9%;基因型频率为:C/C=59.2%,C/T=33.8%,G/G=7.0%;陕西汉族人Cx37基因C1019T基因型频率和等位基因频率在男女之间差异无统计学意义,与瑞典人群相比差异有统计学意义(P<0.05),而与日本、我国台湾人群相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论陕西汉族人Cx37基因C1019T基因型频率及等位基因频率与东方人种无差异,而有别于西方人种。

广东汉族人群Cx37基因C1019T多态性分布

目的研究心肌梗死风险基因——缝隙连接蛋白37(Cx37)基因C1019T遗传多态性在广东汉族人群中的分布。方法采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术和琼脂糖凝胶电泳,研究147名健康并无血缘关系的广东汉族人的Cx37 C1019T多态性位点的基因型与等位基因分布。结果CC、CT和TT基因型频率分别为65.31%、28.57%和6.12%,C和T等位基因频率分别为79.59%和20.41%,其中男性的CC、CT和TT基因型频率分别为64.04%、29.21%和6.74%,C和T等位基因频率分别为78.65%和21.35%,女性的CC、CT和TT基因型频率分别为67.24%、27.59%和5.17%,C和T等位基因频率分别为81.03%和18.97%。结论广东汉族人群Cx37基因C1019T多态性位点的等位基因频率分布与瑞士、瑞典、意大利、非籍美国人、欧籍美国人和日本人群存在显著差异,而与中国台湾人群比较差异无统计学意义。

脑卒中患者CX37基因I1297D多态性研究

目的探讨连接蛋白(CX37)基因I1297D多态性位点与脑卒中的关系。方法脑卒中组348例和对照组235例,采用限制性片段长度多态性分析技术检测CX37基因I1297D多态的分布并进行分析。根据诊断将脑卒中组又分为出血性脑卒中患者组116例(脑出血组)和缺血性脑卒中患者232例(脑缺血组),脑缺血组又分为脑梗死组、脑栓塞组、腔隙性脑梗死组。结果与对照组比较,脑卒中组SBP、DBP和TG水平升高、有吸烟史者比例高(P<0.05)。CX37基因I1297D多态性,各组中均以Ⅱ基因型和I等位基因为主。脑出血组、脑缺血组及其各亚组与对照组比较,基因型(Ⅱ型、ID型、DD型)、Ⅰ和D等位基因分布频率均无统计学差异(P均>0.05)。结论CX37基因I1297D的多态性与出血性脑卒中和缺血性脑卒中遗传易感性无关。

CX37基因I1297D多态性与缺血性脑卒中及临床分型的关系探讨

目的探讨连接蛋白37(connexins37,CX37)基因I1297D多态性位点与缺血性脑卒中及其亚型的关系。方法采用限制性片段长度多态性分析技术,检测缺血性脑卒中组232例(根据诊断分为动脉粥样硬化性血栓性脑梗死组115例,脑栓塞组31例,腔隙性脑梗死组86例)和健康对照组235例CX37基因I1297D多态的分布。结果 CX37基因I1297D多态性,缺血性脑卒中组和对照组中均以II基因型和I等位基因为主。基因型(II型I、D型、DD型)I、和D等位基因分布频率在缺血性脑卒中组分别为46.56%、39.22%、14.22%、66.16%和33.84%,对照组分别为47.66%、43.40%、8.94%、69.36%和30.64%,2组比较差异无统计学意义(P>0.05),且其基因型、等位基因分布频率在缺血性脑卒中各亚型之间与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 CX37基因I1297D的多态性与缺血性脑卒中易感性无关。

CX37基因1019C/T多态性与腰椎间盘突出症及临床分型的关系

目的探讨间隙性连接蛋白37基因1019C/T多态性位点与腰椎间盘突出症及临床分型的关系。方法采用基因测序技术,检测腰椎间盘突出症组191例(根据影像学表现分为A组:膨出型64例,B组:突出型98例,C组:脱出型29例)和健康对照组187例CX37基因1019C/T多态性分布。结果腰椎间盘突出症组和对照组均存在CX37基因1019C/T多态性,2组均以C等位基因为主。突出型组、脱出型组的CC基因型和C等位基因(CC+CT)分布频率明显高于对照组(P<0.05)。在性别亚分组分析比较中,男性人群的CC基因型和C等位基因频率在突出型组和脱出型组中明显高于对照组,而女性在3组中均未发现上述明显差异。另外在膨出型组和对照组基因型、等位基因频率分析比较中未发现差异有统计学意义。结论 CX37等位基因可能与腰椎间盘突出症相关。

新疆哈萨克、汉族原发性高血压与Cx37基因多态性相关性研究

目的探讨新疆哈萨克族(哈族)、汉族人群缝隙连接蛋白(Cx)37基因多态性与原发性高血压(EHT)的相关性。方法新疆地区EHT患者(EHT组)500例,哈、汉族各250例;同期健康体检者(NT组)500例,其中哈、汉族各250例。比较2族EHT组与NT组人群年龄、体质量指数(BMI)、收缩压(SBP)及舒张压(DBP)等一般临床特征情况。Cx37基因rs1630310、rs697372、rs705193的单核苷酸多态性(SNP)位点基因多态性,对疾病人群进行Hardy-Weinberg平衡检测,计算各组哈族和汉族各位点基因型频率及基因频率差异。结果哈族、汉族EHT组与NT组BMI、SBP、DBP、载脂蛋白比值及同型半胱氨酸差异均有统计学意义(P<0.05)。EHT组与NT组rs705193位点基因型频率和基因频率差异均无统计学意义(P>0.05)。哈族rs1630310位点基因型频率及基因频率差异均有统计学意义(P<0.01);哈族rs697372位点基因型频率差异无统计学意义(P>0.05),但基因频率差异有统计学意义(P<0.05),汉族2组rs1630310、rs697372位点基因型频率及基因频率差异均无统计学意义。结论 Cx37基因多态性与新疆哈族EHT的发生有关,rs1630310及rs697372位点多态性可能与哈族EHT的发生有关。

FabHLH37调控草莓抗灰霉病的功能分析

[目的]本文旨在通过验证草莓bHLH(basic/helix-loop-helix)家族转录因子FabHLH37的功能,解析其调控草莓抗灰霉病的机制,为草莓的抗病育种提供新的基因资源。[方法]以栽培草莓品种‘红颜’为试验材料,提取灰霉菌侵染后的草莓果实总RNA并反转录为cDNA,克隆FabHLH37编码区序列,并使用在线软件对其进行生物信息学分析;利用实时荧光定量PCR(qPCR)分别检测该基因在草莓不同组织及果实接种灰霉菌后的相对表达量;利用烟草瞬时表达系统研究该基因的亚细胞定位;通过草莓果实瞬时表达系统研究FabHLH37抗灰霉病功能。[结果]FabHLH37基因CDS全长789 bp,编码262个氨基酸,理论等电点(pI)为6.61,相对分子质量为2.9×10^(5)。进化分析显示FabHLH37与月季、苹果等蔷薇科植物bHLH37蛋白同源关系较近。亚细胞定位分析显示FabHLH37特异性定位于细胞核。qPCR分析表明FabHLH37在草莓根中表达量最高,叶次之,灰霉病菌侵染可以显著诱导FabHLH37基因的表达。草莓果实瞬时表达结果显示,与对照相比,过表达FabHLH37的草莓果实接种灰霉菌后感病程度轻,而沉默FabHLH37的草莓果实相反。进一步的qPCR检测发现,在草莓果实瞬时表达体系中,FaPR1/4/5-1、FaBG2-1、FaCHI3-1、FaSOD、FaPAL等多个防御基因的表达量与FabHLH37的表达量呈正相关,即过量表达FabHLH37可显著提高这些基因的表达量,而沉默FabHLH37则显著降低这些基因的表达量。[结论]FabHLH37可通过诱导防御基因的表达从而正向调控草莓灰霉病。

黄淮麦区小麦品种Lr37-Yr17-Sr38基因簇的分子检测

【目的】在分子水平上评价黄淮麦区小麦品种中抗病基因簇Lr37-Yr17-Sr38的存在状况,为培育抗病新品种及抗病品种合理布局提供材料和依据。【方法】利用N基因组特异标记和CAPS标记,结合品种系谱对黄淮麦区126个小麦品种(系)进行分析。【结果】12个小麦品种(系)(兰考906、郑2062、西农739、陕872、小偃216、陕538、陕515、大唐991、户麦928、0020-332、2871和378)中含有Lr37-Yr17-Sr38。【结论】Lr37-Yr17-Sr38在黄淮麦区小麦中有一定分布,初步推测兰考906可能是我国小麦品种中Lr37-Yr17-Sr38抗源的主要传播途径之一。

结核分枝杆菌国际标准无毒株H37Ra菌株基因组DNA抗结核免疫效应的初步研究

目的:探讨小鼠皮内注射结核分枝杆菌国际标准无毒株H37Ra菌株基因组DNA后,小鼠腹腔巨噬细胞是否被激活以及激活后氮氧化物的产生、抗结核细胞因子的表达,比较研究结核分枝杆菌国际标准无毒株H37Ra菌株基因组DNA和卡介苗菌激活小鼠腹腔巨噬细胞的抗结核免疫应答过程及免疫效应。方法:用结核分枝杆菌国际标准无毒株H37Ra菌株基因组DNA、卡介苗菌和生理盐水分别皮内注射小鼠第30d、60d后,分别采用Griess法、化学法、ELISA法检测小鼠腹腔巨噬细胞产生的NO、H2O2以及IL-12、TNF-α的表达。结果:结核分枝杆菌国际标准无毒株H37Ra菌株基因组DNA皮内接种小鼠后能显著诱导小鼠腹腔巨噬细胞分泌表达IL-12和TNF-α,与卡介苗菌组相比较无明显差异;与生理盐水组比较差异显著(P<0.05)。结核分枝杆菌国际标准无毒株H37Ra菌株基因组DNA皮内接种小鼠后也能诱导小鼠腹腔巨噬细胞产生NO、H2O2,与卡介苗菌组相比较无明显差异,与未免疫组比较差异显著(P<0.05)。结论:结核分枝杆菌国际标准无毒株H37Ra菌株基因组DNA小鼠皮内接种后,能诱导小鼠腹腔巨噬细胞活化并产生较强的抗结核免疫效应,且该效应与卡介苗菌无明显差异。

人绒毛膜促性腺激素β亚基羧基端37肽四聚体基因在E.Coli中的表达

人绒毛膜促性腺激素β亚基 (h CGβ)羧基端 1 0 9～ 1 45残基组成的 3 7肽 (h CGβ-CTP3 7)是 h CG分子所特有的片段 ,并存在 h CG的特异表位 (抗原决定簇 )。为提高h CGβ-CTP3 7肽的免疫原性 ,本研究构建 h CGβ-CTP3 7四聚体 c DNA,克隆入载体p QE60 ,获得含 (h CGβ-CTP3 7) 4 c DNA的表达质粒 p QE60 -(h CGβ-CTP3 7) 4 ,在大肠杆菌X-Blue中进行表达 ,得到 h CGβ-CTP3 7四聚体。Western blotting结果表明 ,该四聚体分子量约为 2 0 k Da,并能与抗 h CG抗体结合 ,且结合能力比 h CGβ-CTP3 7二聚体强。因此 ,我们设想 h CGβ-CTP3

甜菜夜蛾核多角体病毒(SeMNPV)gp37基因的克隆及序列分析

通过鸟枪法克隆了甜菜夜蛾核多角体病毒 (SeMNPV)基因组DNAEcoRⅠ酶切的 2 2kb片段 .序列分析表明 ,该片段含有gp37基因 .SeMNPVgp37基因的开放阅读框为 80 1个核苷酸 ,编码 2 6 8个氨基酸 ,预测蛋白质相对分子质量为 30 40 0 .在gp37基因起始密码子上游有一典型的杆状病毒晚期基因启动子序列ATAAG .同其它昆虫杆状病毒和昆虫痘病毒GP37/Fusolin蛋白的比较结果表明 ,SeMNPVGP37与已知gp37/fusolin基因的氨基酸序列同源性较高 (5 0 %～ 6 8% ) ,在其蛋白序列内存在类似的保守区和可能的N_连接糖基化位点 .在SeMNPVgp37基因下游存在一个完整阅读框和部分egt基因序列 .

连接蛋白37基因I1297D多态性与中国北方汉族人群早发冠心病的相关性

目的探讨连接蛋白37基因I1297D多态性与早发冠心病的关系。方法采用聚合酶链反应—限制片长多态性技术,对196例经冠状动脉造影证实的早发冠心病患者和218例健康对照者进行检测,分析连接蛋白37基因I1297D多态性的基因型和等位基因频率分布情况。结果连接蛋白37基因I1297D多态性在冠心病组以ID基因型为主,对照组以II基因型为主,两组中均以DD基因型和D等位基因为少见型。基因型（II型,ID型和DD型）分布频率在早发冠心病组分别为44.39%、47.45%和8.16%,在对照组分别为47.71%、44.04%和8.25%,两组间比较差异无统计学意义（χ^2=0.51,P=0.77）。等位基因分布在人群中以I等位基因为主,两组间分布频率相似（68.11%比69.72%,P=0.62,OR=0.93,95%可信区间为0.70-1.24）;D等位基因携带者（ID＋DD）在冠心病组和对照组分别为55.61%和52.29%,与II纯合子相比,冠心病的患病风险在两组间差异无统计学意义（χ^2=0.46,P=0.50,OR=0.87,95%可信区间=0.58-1.30）。对心肌梗死患者分层分析显示,I1297D基因型和等位基因分布频率在心肌梗死组和对照组间差异无统计学意义（χ^2=0.24,P=0.89;χ^2=0.13,P=0.72）。Logistic回归校正性别、年龄、体重指数、吸烟、高血压、高脂血症、糖尿病等冠心病易患因素后,I1297D多态性在病例组和对照组差异无统计学意义（P〉0.05）。结论连接蛋白37基因I1297D多态性与中国北方汉族人群早发冠心病易感性无明显关联。

IL-37b基因克隆及其真核的表达载体构建

目的克隆IL-37b编码区基因,并构建其真核表达载体。方法通过RT-PCR扩增IL-37b编码区基因,DNA测序鉴定后,将阳性克隆提取质粒,通过酶切连接将目的片段定向克隆至真核表达载体pcDNA 3.1,通过菌落PCR和DNA测序等进行鉴定。结果凝胶电泳显示RT-PCR扩增出1条大小约650 bp特异条带,DNA测序结果显示获取了大小为654 bp的IL-37b编码区基因。PCR和DNA测序对所构建的真核表达载体鉴定结果表明IL-37b编码区基因正确插入真核表达载体pcDNA3.1。结论成功克隆了IL-37b编码区基因,并成功构建其真核表达载体,为下一步IL-37b生物学作用的深入研究奠定了基础。

丙型肝炎病毒非结构蛋白5A结合蛋白37小鼠同源基因的克隆化及结构分析

目的:克隆丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白5A(NS5A)结合蛋白37(NS5ABP37)的小鼠同源基因,为阐明小鼠NS5ABP37基因的生物学功能奠定基础,探索HCVNS5A蛋白与NS5ABP37蛋白之间的结合在慢性丙型肝炎的发病机制中可能的作用.方法:利用酵母双杂交系统3,以HCVNS5A蛋白作为诱饵,筛选肝细胞cDNA文库,首先获得HCVNS5A结合的人肝细胞蛋白的新的编码基因.利用生物信息学(bioinformatics)技术确定NS5ABP37的小鼠同源基因序列.利用GenBank在线分析软件,对小鼠NS5ABP37蛋白一级结构特点进行分析.结果:通过酵母双杂交技术获得了人NS5ABP37的编码基因.利用生物信息学技术确定了小鼠NS5ABP37的基因序列.利用分子生物学技术获得了小鼠的NS5ABP37的基因克隆,小鼠NSSABP37基因开放读码框架(ORF)为1488nt,编码产物由495aa组成.计算分子量为54583.67道尔顿,预测等电点(pI)为4.70.小鼠NS5ABP37与白细胞抗原相关(leukocyteantigenrelated,EAR)蛋白前体蛋白(LARproteinprecursor)同源.小鼠HCVNS5ABP37基因序列被美国核苷酸数据库GenBank收录,收录号为AY234860.结论:成功确定、克隆了小鼠的NS5ABP37基因序列,并证实与白细胞抗原相关蛋白前体蛋白具有一定的同源性.这一结果,为进一步阐明小鼠的NS5ABP37基因的功能,阐明HCV感染的发病机制奠定了坚实的基础.

胃癌患者间隙性连接蛋白37基因C1019T多态性与幽门螺杆菌感染的相关性

目的研究胃癌患者间隙性连接蛋白（Connexin）37基因C1019T多态性与幽门螺杆菌（Hp）感染的相关性。方法选取胃癌患者388例（胃癌组）及慢性浅表性胃炎患者204例（对照组）。胃黏膜活检组织切片染色法检测Hp感染情况，基因测序技术检测Connexin37基因C1019T多态性。比较基因型及等位基因分布频率。结果（1）Connexin37基因共有CC型、TC型、TT型3种基因型，在两组中的分布均符合Hardy—Weinberg遗传平衡规律。（2）胃癌组C等位基因分布频率显著高于对照组（P〈0．01）。与TT纯合子相比，CC＋TC基因型胃癌患病风险显著增加（OR=2．47、95％CI=1．68～361，P〈0．01）。（3）分层分析提示Hp阳性是男性患者发生胃癌的一个危险因素，且男性Hp阳性者发生胃癌风险明显高于女性。剔除性别影响后，Hp阳性与胃癌密切相关（OR=8．82、95％CI=5．45～14．28，P〈0．01）。（4）胃癌组中Hp感染者C等位基因分布频率显著高于非感染者（P〈0．01）。与TT纯合子相比，CC＋TC基因型胃癌患病风险显著增加（OR=2．96、95％CI=1．76～2．99，P〈0．01）。结论胃癌患者Connexin37基因T等位基因与胃癌的发生有关，且与Hp感染相关。

6株T4类噬菌体尾丝蛋白gp37基因密码子特性比较

利用多种生物信息学软件对本实验室分离的1株T4类多价烈性噬菌体Bp7尾丝蛋白gp37基因与其他5株T4类噬菌体gp37基因进行密码子特征的分析比较。结果显示:Bp7与其他5株T4类噬菌体gp37基因密码子使用模式基本一致;Bp7尾丝蛋白gp37基因密码子偏好性较低,且偏爱使用以A或U为结尾的密码子;除AUG(Met)和JGG(Trp)外,确定了17种高频密码子;6株菌体gp37之间密码子偏好性比较发现,Bp7与JS98密码子使用最相近,与T4和T4T相对较远;gp37基因密码子的使用模式可能受中性突变和选择压力的共同作用。gp37基因密码子的分析结果将为Bp7尾丝蛋白的基因改造,以进一步拓宽其裂解谱及提高表达水平提供理论指导。