石英晶体的375℃热释光峰特性

石英375℃热释光峰存在灵敏度的变化,其变化因所接受的辐照剂量不同而不同。本工作采用多片技术测定了石英375℃热释光峰灵敏度与不同辐射类型(α和β)、辐照剂量的关系。结果表明,将石英作为剂量计利用其375℃峰测量辐射源强度时,应先将石英进行大剂量辐照,β辐射剂量不低于4 500 Gy,α辐射剂量不低于6 000 Gy,保证所标定的放射源强度的准确性。此外,在利用375℃高温峰测定地质样品的年龄时,也应根据灵敏度的变化对所测定的等效剂量予以适当的校正,以保证测定年龄的精确程度。

血清miR-375、miR-155与原发性肝癌临床分期及预后的关系

目的探讨原发性肝癌患者血清miR-375、miR-155与其临床分期及预后的关系。方法回顾性分析86例原发性肝癌患者资料,比较不同临床分期患者血清miR-375、miR-155表达水平,应用Spearman相关系数分析相关性;将患者以肝外转移分成转移组、非转移组,比较两组患者血清miR-375、miR-155差异,应用受试者曲线(ROC)分析两者诊断临床分期效能;随访1年内生存情况,应用Kaplan-Meier法、COX比例风险模型进行生存分析。结果不同临床分期患者血清miR-375、miR-155表达水平比较差异有统计学意义(P<0.05);血清miR-375表达水平与肿瘤临床分期呈负相关(P<0.05),miR-155表达水平与临床分期呈正相关(P<0.05);转移组血清miR-375表达水平低于非转移组,miR-155表达水平高于非转移组,差异有统计学意义(P<0.05);血清miR-375、miR-155及联合诊断肿瘤转移的AUC分为0.898、0.847、0.941;miR-375高表达患者平均生存时间均长于miR-375低表达患者,miR-155高表达患者平均生存时间均短于miR-155低表达患者,差异有统计学意义(P<0.05);血清miR-375、miR-155表达水平是患者预后独立影响因素(P<0.05)。结论血清miR-375、miR-155与患者临床分期密切相关,是预后独立影响因素指标,可作为原发性肝癌肿瘤转移的重要标志物,对临床诊疗提供参考与指导。

原发性肝癌血清miR-375、miR-25水平变化及其与患者预后关系的研究

目的 探究原发性肝癌(HCC)患者血清miR-375、miR-25水平变化情况及其i与预后的关系。方法 选取2020年3月至2021年3月本院收治的50例HCC患者为观察组,另选取同期30例健康体检者为对照组,采用RT-qPCR检测血清miR-375、miR-25水平,探究HCC患者治疗前后miR-375、miR-25水平变化及其在HC患者预后.诊断中的价值,并分析HCC患者1年生存期的独立影响因素。结果 治疗前,观察组HCC患者miR-375水平低于对照组,其miR-25水平高于对照组(P<0.05);治疗1个月后,观察组HCC患者miR-375水平高于治疗前,其miR-25水平低于治疗前(P<0.05),且其miR-375低于对照组,miR-25高于对照组(P<0.05)。50例HCC患者均接受TACE治疗,其1年生存率为82.00%(41/50)。miR-375诊断HCC患者1年生存期的AUC、灵敏度和特异度分别为0.736(0.626-0.828)、84.00%和63.33%(P<0.05);miR-25诊断HCC的AUC、灵敏度和特异度分别为0.782(0.676-0.867)、80.00%和66.67%(P<0.05)。病灶大小、miR-375、miR-25表达量是HCC患者预后的独立影响因素(P<0.05)。结论 miR-375、miR-25在HCC患者中表达异常,在治疗后miR-375升高,miR-25降低,病灶小、miR-375、miR-25表达量是HCC患者预后的影响因素。

CircAGFG1通过miR-375/USP22轴调节食管鳞癌细胞的放射敏感性研究

目的研究环状带有FG重复序列1(CircAGFG1)通过miR-375/泛素特异性蛋白酶22(USP22)轴对食管鳞癌(ESCC)细胞放射敏感性的影响。方法采用实时荧光定量PCR和免疫印迹法检测人ESCC细胞株KYSE150及人ESCC放射性抵抗细胞KYSE150-R中CircAGFG1、miR-375、USP22表达。将体外培养的KYSE150-R细胞随机分为对照组、辐照组、辐照+阴性对照组、辐照+CircAGFG1敲低组、辐照+CircAGFG1敲低+miR-375 inhibitor组,分组转染后,4Gy 6MV-X线辐照后24 h采用实时荧光定量PCR和免疫印迹法检测各组KYSE150-R细胞中CircAGFG1、miR-375、USP22表达;采用CCK-8法和平板集落形成实验检测各组KYSE150-R细胞增殖;采用流式细胞术检测各组KYSE150-R细胞凋亡;采用免疫荧光染色检测各组KYSE150-R细胞凋亡相关蛋白Bax与Bcl-2比值(Bax/Bcl-2)。将各组细胞接种在裸鼠右后肢腋下来构建ESCC移植瘤模型,饲养3周后检测各组裸鼠肿瘤体积及重量。采用双荧光素酶报告基因实验检测KYSE150-R中CircAGFG1对miR-375的靶向调节与miR-375对USP22的靶向调节。结果与KYSE150细胞相比,KYSE150-R细胞中CircAGFG1 mRNA表达、USP22 mRNA与蛋白表达升高(P<0.05),miR-375 mRNA表达降低(P<0.05)。与对照组相比,辐照+CircAGFG1敲低组CircAGFG1 mRNA表达、USP22 mRNA及蛋白表达、细胞增殖率、集落生成率、裸鼠肿瘤体积与肿瘤重量降低(P<0.05),细胞凋亡率、Bax/Bcl-2、miR-375 mRNA表达升高(P<0.05);辐照组、辐照+阴性对照组细胞各指标比较无明显差异(P>0.05)。与辐照组相比,辐照+CircAGFG1敲低组CircAGFG1 mRNA、USP22 mRNA及蛋白表达、细胞增殖率、集落生成率、裸鼠肿瘤体积与肿瘤重量降低(P<0.05),细胞凋亡率、Bax/Bcl-2、miR-375 mRNA表达升高(P<0.05)。与辐照+CircAGFG1敲低组相比,辐照+CircAGFG1敲低+miR-375 inhibitor组USP22 mRNA及蛋白表达、细胞增殖率、集落生成率、裸鼠肿瘤体积与肿瘤重量升高(P<0.05),细胞凋亡率、Bax/Bcl-2、miR-375 mRNA表达降低(P<0.05);辐照+阴性对照组与对照组细胞各指标无明显变化(P>0.05)。CircAGFG1可靶向下调KYSE150-R细胞miR-375表达,而miR-375可靶向下调KYSE150-R细胞USP22表达。结论敲低CircAGFG1可通过上调miR-375来减弱USP22表达,从而增强ESCC细胞的放射敏感性,提升放射性对ESCC细胞的杀伤力,并促使其凋亡。

miR-375靶向PI3K/AKT通路在高糖诱导的人视网膜内皮细胞增殖和血管生成中的作用

目的探讨miR-375靶向磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)通路对高糖诱导的人视网膜内皮细胞(hRECs)增殖和血管生成的影响机制。方法体外培养hRECs,对hRECs进行转染及双荧光素酶检测。hRECs分为对照组、高糖组、高糖+miR-375组、高糖+miR-375+LM22B-10组。采用CCK-8实验检测细胞增殖能力,采用血管形成实验检测细胞血管形成能力,采用RT-qPCR检测hRECs内miR-375和PI3K mRNA的表达情况,采用Western blot检测hRECs内PI3K、p-AKT/AKT蛋白表达的情况。结果与对照组比较,高糖组、高糖+miR-375组、高糖+miR-375+LM22B-10组培养48 h和72 h时hRECs增殖活力、PI3K和p-AKT/AKT的蛋白表达水平、血管形成能力和PI3K mRNA表达均显著升高,而miR-375表达降低(均为P<0.05);与高糖组比较,高糖+miR-375组培养48 h和72 h时hRECs增殖活力、PI3K mRNA和蛋白以及p-AKT/AKT的蛋白表达水平、血管形成能力均降低,而miR-375表达升高(均为P<0.05);与高糖+miR-375组比较,高糖+miR-375+LM22B-10组培养48 h和72 h时hRECs增殖活力、血管形成能力和p-AKT/AKT蛋白表达水平均升高(均为P<0.05),而miR-375、PI3K mRNA差异均无统计学意义(均为P>0.05)。转染miR-375模拟物和PI3K野生型载体后,hRECs中相对荧光素酶活性分别较转染miR-375阴性对照、转染PI3K突变型载体后显著降低(均为P<0.05)。结论miR-375靶向抑制PI3K/AKT通路可抑制高糖诱导的hRECs增殖和血管生成,进而缓解DR。

miR-375靶向MMP13抑制骨肉瘤细胞的迁移和侵袭

目的为了探究miR-375是否通过影响基质金属蛋白酶13(MMP13)的表达来调控骨肉瘤(osteosarcoma,OS)恶性特征。方法用Lipofectamine 3000试剂盒将质粒、miRNA转染至骨肉瘤细胞和HEK293细胞中。实时定量聚合酶链反应(real-time quantitative PCR,RT-qPCR)检测OS患者和OS细胞中miR-375和MMP13的表达。蛋白质印迹法(Western blot)分析OS患者和OS细胞中MMP13蛋白的表达。双荧光素酶法分析miR-375与MMP13的靶向关系。伤口愈合和transwell实验分别分析OS细胞的迁移和侵袭。结果OS组织中miR-375的表达低于正常组织。MMP13在OS组织中表达上调。在OS患者中,MMP13的表达与miR-375呈负相关。与转染miRNA对照的OS细胞相比,转染miR-375模拟物OS细胞的迁移和侵袭明显被抑制。MMP13能部分逆转miR-375对OS细胞迁移和侵袭的抑制作用。结论在OS细胞中,过表达miR-375通过调控MMP13的表达抑制细胞的迁移和侵袭。

LncRNA SBF2⁃AS1靶向miR⁃375对胃癌细胞免疫逃逸及mTOR1信号通路的影响

目的探究LncRNA SBF2⁃AS1靶向miR⁃375对胃癌细胞免疫逃逸及mTOR1信号通路的影响。方法Real⁃time PCR法检测正常胃上皮细胞及4种胃癌细胞系中LncRNA SBF2⁃AS1、miR⁃375表达水平,取胃癌细胞将其分为胃癌细胞(GC)组、胃癌细胞+LncRNA SBF2⁃AS1⁃NC(SN)组、胃癌细胞+LncRNA SBF2⁃AS1激动剂(SM)组、胃癌细胞+LncRNA SBF2⁃AS1抑制剂(SI)组、胃癌细胞+miR⁃375⁃NC(MN)组、胃癌细胞+miR⁃375抑制剂(MI)组、胃癌细胞+miR⁃375激动剂(MM)组、胃癌细胞+LncRNA SBF2⁃AS1抑制剂+miR⁃375激动剂(IM)组,免疫印迹法检测免疫逃逸相关因子及mTOR1信号通路蛋白表达,双荧光素酶报告实验证实LncRNA SBF2⁃AS1和miR⁃375的相互作用。结果胃癌细胞系中的LncRNA SBF2⁃AS1 mRNA表达量显著高于正常胃上皮细胞系NGEC(P<0.05),miR⁃375 mRNA表达量显著低于正常胃上皮细胞系NGEC(P<0.05)其中HGC⁃27细胞的LncRNA SBF2⁃AS1、miR⁃375 mRNA值变化最大(P<0.05),因此选取其作为此次实验细胞;GC组、SN组、MN组,PD⁃1、PD⁃L1、mTOR1、p70S6K、4EBP1蛋白表达基本无差异(P>0.05),与与SN组、MN组相比,SM组、MI组PD⁃1、PD⁃L1、mTOR1、p70S6K、4EBP1蛋白表达明显升高(P<0.05),与SM组、MI组相比,SI组、MM组PD⁃1、PD⁃L1、mTOR1、p70S6K、4EBP1蛋白表达明显降低(P<0.05),与SI组、MM组相比,IM组PD⁃1、PD⁃L1、mTOR1、p70S6K、4EBP1蛋白表达明显降低(P<0.05);双荧光素酶报告结果显示,转染LncRNA SBF2⁃AS1后可显著降低miR⁃375⁃3′⁃UTR⁃WT的荧光素酶活性(P<0.05),但对突变基因无显著影响(P>0.05)。结论抑制LncRNA SBF2⁃AS1可有效抑制胃癌细胞免疫逃逸,并抑制mTOR1信号通路表达,其作用机制可能与靶向激活miR⁃375有关。

CCAT1靶向抑制miR-375-3p通过线粒体途径诱导的人口腔癌SAS细胞凋亡

目的:探究长链非编码RNA(lncRNA)结肠癌相关转录因子1(CCAT1)靶向miR-375-3p通过线粒体途径诱导人口腔癌SAS细胞凋亡的作用。方法:人口腔癌SAS细胞随机分为空白组、CCAT1下调组、CCAT1上调组、CCAT1下调对照组、CCAT1上调对照组、miR-375-3p下调组、miR-375-3p上调组、miR-375-3p下调对照组和miR-375-3p上调对照组。转染48 h后,流式细胞术检测细胞凋亡;RT-qPCR检测miR-375-3p表达、线粒体凋亡通路相关的基因半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶3(caspase-3)、半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶9(caspase-9)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)的mRNA表达;免疫印迹检测caspase-3、caspase-9、Bcl-2、Bax蛋白表达;双荧光素酶报告实验分析CCAT1与miR-375-3p的靶向关系。结果:与空白组和CCAT1下调对照组比较,CCAT1下调组细胞凋亡率、miR-375-3p表达、caspase-3、caspase-9、Bax mRNA及蛋白表达升高,Bcl-2 mRNA及蛋白表达降低;与空白组和CCAT1上调对照组比,CCAT1上调组细胞凋亡率、miR-375-3p表达、caspase-3、caspase-9、Bax mRNA及蛋白表达降低,Bcl-2 mRNA及蛋白表达升高;与空白组和miR-375-3p下调对照组比较,miR-375-3p下调组细胞凋亡率、miR-375-3p表达、caspase-3、caspase-9、Bax mRNA及蛋白表达降低,Bcl-2 mRNA及蛋白表达升高;与空白组和miR-375-3p上调对照组比较,miR-375-3p上调组细胞凋亡率、miR-375-3p表达、caspase-3、caspase-9、Bax mRNA及蛋白表达升高,Bcl-2 mRNA及蛋白表达降低。双荧光素酶实验结果提示CCAT1可靶向调控miR-375-3p。结论:CCAT1可抑制人口腔癌SAS细胞凋亡,推测是通过靶向抑制miR-375-3p的表达,调控线粒体凋亡通路相关基因及蛋白的表达来实现的。

长链非编码RNA IGF2BP2-AS1通过调控miR-375表达对喉癌细胞迁移及增殖的影响

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)胰岛素样生长因子2 mRNA结合蛋白2(IGF2BP2)-AS1通过调控微RNA-375(miR-375)表达对喉癌细胞迁移和增殖的影响。方法研究时间为2022年1月至2023年11月,研究地点为郑州大学附属洛阳中心医院中心实验室,研究类型为基础研究。实时荧光定量PCR(qPCR)检测喉癌细胞系AMC-NH-8、TU159、TU138、TU686和支气管上皮细胞系16HBE中IGF2BP2-AS1的表达。以TU686细胞为研究对象,将TU686细胞分为si-NC组和si-IGF2BP2-AS1组,采用IGF2BP2-AS1小干扰RNA下调IGF2BP2-AS1表达水平。划痕愈合实验和CCK-8法分析敲降IGF2BP2-AS1对TU686细胞迁移及增殖的影响。双荧光素酶报告基因实验验证IGF2BP2-AS1与miR-375的靶向关系。qPCR检测敲降IGF2BP2-AS1对miR-375表达的影响。Western blotting检测细胞中迁移蛋白N-钙黏着蛋白(N-Cadherin)、叉头框蛋白C2(FOXC2)和增殖蛋白CDK2、细胞周期蛋白A(Cyclin A)的表达。统计学方法采用单因素方差分析、t检验。结果与16HBE细胞相比,IGF2BP2-AS1在喉癌细胞系中均高表达(F=37.42,P<0.01)。si-IGF2BP2-AS1组TU686细胞划痕愈合率低于si-NC组[(28.16±6.13)%比(65.08±3.82)%],差异有统计学意义(t=5.11,P<0.01)。在铺板后第2、3、4、5天,si-IGF2BP2-AS1组TU686细胞增殖能力均低于si-NC组(t=3.83、3.17、3.02、6.31,均P<0.01)。IGF2BP2-AS1-Wt中,miR-375组相对荧光素酶活性低于miR-NC组(t=8.95,P<0.01)。si-IGF2BP2-AS1组TU686细胞中miR-375表达高于si-NC组[(4.95±0.49)比(1.02±0.40)],差异有统计学意义(t=6.23,P<0.01)。敲降IGF2BP2-AS1后TU686细胞中迁移蛋白N-Cadherin、FOXC2表达与增殖蛋白CDK2、Cyclin A表达均低于si-NC组。结论IGF2BP2-AS1在喉癌细胞系中呈高表达,敲降IGF2BP2-AS1通过调控miR-375表达抑制喉癌TU686细胞的迁移及增殖能力。

胃癌患者血清中miR-375和miR-665的表达变化及临床价值

目的 观察胃癌患者血清中微小RNA-375(miR-375)和微小RNA-665(miR-665)的表达变化,并探讨二者表达变化与临床病理特征及预后的关系。方法 选取该院2018年1月至2020年1月确诊的85例胃癌患者作为胃癌组,85例慢性胃炎患者作为胃炎组,根据胃癌患者3年内死亡情况分为生存组(48例)和死亡组(37例)。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测血清中miR-375和miR-665相对表达水平,并分析其表达与患者临床病理特征之间的关系;采用Kaplan-Meier法分析miR-375及miR-665表达与胃癌患者3年生存率的关系;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-375和miR-665相对表达水平对患者死亡的预测价值。结果 胃癌组血清中miR-375及miR-665相对表达水平均低于胃炎组(t=28.183、22.361,P<0.001)。存活组血清中miR-375及miR-665相对表达水平均高于死亡组(t=8.094、8.330,P<0.001)。肿瘤浸润深度为T3+T4、TNM分期Ⅲ~Ⅳ期、组织分级Ⅲ级及有淋巴结转移的胃癌患者血清中miR-375及miR-665相对表达水平均低于肿瘤浸润深度T1+T2、TNM分期Ⅰ~Ⅱ期、组织分级Ⅰ、Ⅱ级及无淋巴结转移的胃癌患者(P<0.05)。miR-375高表达患者3年累积生存率为84.44%,高于miR-375低表达患者的25.00%(χ^(2)=30.442,P<0.05)。miR-665高表达患者3年累积生存率为74.47%,高于miR-375低表达患者的34.21%(χ^(2)=13.853,P<0.05)。血清miR-375、miR-665及联合预测胃癌患者死亡的曲线下面积分别为0.913、0.902和0.971,灵敏度分别为86.49%、67.57%和94.59%,特异度分别为83.33%、97.92%和91.67%。结论 血清中miR-375和miR-665的低表达可能与胃癌的发生发展及患者的不良预后有重要关系。

敲低miR-375对子痫前期模型滋养细胞增殖、凋亡的影响及机制

目的探讨敲低miR-375对子痫前期(PE)滋养细胞模型增殖、凋亡的影响及作用机制。方法取人绒毛膜滋养细胞株HTR-8/Svneo,随机分为常氧对照组、PE模型组、miR-NC组和miR-375 inhibitor组。其中,miR-NC组和miR-375 inhibitor组细胞分别转染miR-NC和miR-375 inhibitor;常氧对照组细胞在常氧环境下培养,其余3组细胞均在缺氧条件下培养以建立PE滋养细胞模型。采用RT-PCR检测miR-375的表达,EdU荧光染色、CCK-8实验检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blot检测YAP1蛋白及凋亡相关蛋白(Bcl-2、caspase-3及Bax蛋白)的表达。双荧光素酶基因实验检测miR-375与YAP1的靶向调控关系。结果与常氧对照组比较,PE模型组细胞miR-375表达升高(P<0.05),EdU阳性细胞百分比下降(P<0.05),细胞增殖能力降低(P<0.05),细胞凋亡率升高(P<0.05),Bax、caspase-3蛋白表达水平升高(P<0.05),YAP1、Bcl-2蛋白表达水平降低(P<0.05)。PE模型组和miR-NC组细胞上述各项指标比较差异均无统计学意义(P>0.05)。与miR-NC组比较,miR-375 inhibitor组细胞miR-375表达降低(P<0.05),EdU阳性细胞百分比升高(P<0.05),细胞增殖能力增强(P<0.05),细胞凋亡率降低(P<0.05),Bax、caspase-3蛋白表达降低(P<0.05),YAP1、Bcl-2蛋白表达升高(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验显示,miR-375对YAP1具有靶向调控作用(P<0.05)。结论敲低miR-375可促进PE滋养细胞增殖并抑制细胞凋亡,其作用机制可能与其对YAP1基因的靶向调控有关。

产前超声联合血清miR-148b、miR-375检测在胎儿先天性心脏病诊断中的应用价值

目的 探讨微小RNA(miR)-148b、miR-375在胎儿先天性心脏病孕妇血清中的水平,及其联合产前超声在胎儿先天性心脏病诊断中的价值。方法 收集2019年1月至2023年1月进行产前筛查的疑似胎儿先天性心脏病的106例孕妇作为研究对象,根据产后随访结果将其分为病例组(先天性心脏病,n=80)和对照组(均无先天性心脏病,n=26)。比较2组血清miR-148b、miR-375水平;ROC曲线分析血清miR-148b、miR-375对胎儿先天性心脏病的诊断效能;四表格法分析产前超声联合血清miR-148b、miR-375水平对胎儿先天性心脏病的诊断效能。结果 与对照组比较,病例组血清miR-148b水平显著降低,血清miR-375水平显著升高(P<0.05)。产前超声联合血清miR-148b、miR-375诊断胎儿先天性心脏病的准确率为93.40%,敏感性为92.50%,特异性为96.15%。其中,三项联合诊断的敏感性高于血清miR-148b、miR-375单独诊断(P<0.05),三项联合诊断的准确率和特异性高于产前超声、血清miR-148b、miR-375单独诊断(P<0.05)。结论 胎儿先天性心脏病的孕妇血清miR-148b水平显著降低,血清miR-375水平显著升高,产前超声联合血清miR-148b、miR-375对胎儿先天性心脏病具有较高的诊断价值。

微RNA-375-5p对心力衰竭大鼠的保护作用及机制

目的探讨微RNA(miR)-375-5p对心力衰竭(HF)大鼠的保护作用及相关机制。方法将50只雄性Sprague Dawley大鼠随机分为假手术组、HF组、miR-NC组、miR-375-5p组、miR-375-5p+Compound C(CC)组,每组10只。HF组、miR-NC组、miR-375-5p组、miR-375-5p+CC组大鼠腹腔注射阿霉素溶液制备HF模型,假手术组大鼠腹腔注射等量的NaCl溶液。造模结束后次日,miR-375-5p组大鼠经尾静脉注射miR-375-5p mimics 100μL,miR-NC组大鼠经尾静脉注射miR-NC mimics 100μL,假手术组和HF组大鼠经尾静脉注射等量生理盐水,miR-375-5p+CC组大鼠经尾静脉注射miR-375-5p mimics 100μL和腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)抑制剂CC(0.2 mg·kg^(-1));各组大鼠均每日给药1次,连续给药4周。使用彩色多普勒超声仪检测各组大鼠心功能指标,反转录聚合酶链反应检测各组大鼠心肌组织中miR-375-5p表达,酶联免疫吸附试验检测各组大鼠血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6、IL-1β、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)水平,苏木精-伊红染色观察各组大鼠心肌组织病理学变化,末端脱氧核苷酸转移酶介导的末端标记法检测各组大鼠心肌细胞凋亡情况,蛋白质印迹检测各组大鼠心肌组织中磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(p-AMPK)、AMPK、沉默信息调节因子3(SIRT3)蛋白的相对表达量。结果与假手术组比较,HF组、miR-NC组和miR-375-5p组大鼠的左心室射血分数(LVEF)、左心室短轴缩短率(LVFS)、血清中SOD活性、GSH水平及心肌组织中p-AMPK/AMPK、miR-375-5p表达量和SIRT3蛋白相对表达量显著降低,左心室舒张末期内径(LVEDD)、左心室收缩末期内径(LVESD)、心肌细胞凋亡率及血清中TNF-α、IL-6、IL-1β、MDA水平显著升高(P<0.05)。miR-NC组与HF组大鼠LVEF、LVFS、LVEDD、LVESD、心肌细胞凋亡率、血清中TNF-α、IL-6、IL-1β、MDA、GSH水平、SOD活性、心肌组织中p-AMPK/AMPK、miR-375-5p表达量及SIRT3蛋白相对表达量比较差异无统计学意义(P>0.05)。与HF组相比,miR-375-5p组大鼠LVEF、LVFS、血清中SOD活性、GSH水平、心肌组织中p-AMPK/AMPK及miR-375-5p表达量和SIRT3蛋白相对表达量显著升高,LVEDD、LVESD、心肌细胞凋亡率及血清中TNF-α、IL-6、IL-1β、MDA水平显著降低(P<0.05)。与miR-375-5p组相比,miR-375-5p+CC组大鼠LVEF、LVFS、血清中SOD活性、GSH水平及心肌组织中p-AMPK/AMPK、miR-375-5p表达量和SIRT3蛋白相对表达量显著降低,LVEDD、LVESD、心肌细胞凋亡率及血清中TNF-α、IL-6、IL-1β、MDA水平显著升高(P<0.05)。假手术组大鼠心肌细胞规律排列,细胞核明显且无炎症细胞浸润;HF组大鼠心肌细胞形态发生明显改变,排列紊乱,细胞间隙变大,染色变浅,且出现心肌纤维化,有大量的炎症细胞浸润,HF组和miR-NC组大鼠心肌组织病理学变化无明显差异;与HF组相比,miR-375-5p组大鼠心肌细胞排列明显有序,细胞坏死程度和范围明显减少;miR-375-5p+CC组与HF组大鼠心肌组织病理学变化相似。结论miR-375-5p能抑制HF大鼠心肌细胞凋亡,进而对HF大鼠发挥保护作用,其机制可能与激活AMPK/SIRT3信号通路有关。

芦笋提取液抑制恶性黑色素瘤A_(375)细胞增殖的研究

目的 :探讨芦笋提取液对人恶性黑色素瘤A3 75细胞增殖的抑制作用以及对其凋亡的诱导作用。方法 :用四甲基噻唑氮蓝比色法测定A3 75细胞活力 ;流式细胞术 (FCM)检测A3 75细胞的凋亡诱导及杀伤作用 (P <0 .0 1 )。结果 :芦笋提取液与人恶性黑色素瘤细胞株A3 75细胞生长抑制率之间有明显的浓度依赖关系 ,浓度分别为 2 0 0mg/ml、4 0 0mg/ml、6 0 0mg/ml和80 0mg/ml时 ,A3 75细胞的凋亡率及坏死率分别为 2 .39%、8.85 %、8.71 %、5 .1 6 %和 1 .6 5 %、1 .5 1 %、2 2 .1 0 %、82 .80 %。结论 :芦笋提取液能显著抑制恶性黑色素瘤A3 75细胞的增殖 ,且诱导A3 75细胞总的凋亡率和坏死率与其浓度之间存在着依赖关系。

三氧化二砷诱导恶性黑色素瘤A_(375)和B_(16)细胞凋亡的研究

目的 :研究不同浓度的三氧化二砷 (As2 O3 )对恶性黑色素瘤人A3 75细胞和小鼠B16细胞的凋亡诱导作用 ,为As2 O3 治疗恶性黑色素瘤提供新的理论和实验依据。方法 :用流式细胞术 (FCM )检测A3 75细胞和B16细胞的凋亡诱导及杀伤作用 :用不同剂量的As2 O3 (0 .1mmol·L-1、0 .2 5mmol·L-1和 0 .5mmol/L-1) ,对小鼠进行腹腔注射 (10ml·kg-1,连续注射 10d后 ,检测小鼠血清与心、肝、肾有关的生化指标。结果 :As2 O3 浓度分别为 5 μmol·L-1、10 μmol·L-1和 2 0 μmol·L-1时 ,A3 75和B16细胞的凋亡率分别为 11.85 %、5 5 .5 1%、5 4 .90 %和 9.81%、2 6 .4 5 %、9.93% :As2 O3 诱导A3 75和B16细胞总的凋亡和坏死率分别为11.90 %、5 5 .71%、5 7.4 0 %和 12 .96 %、2 6 .99%、87.13% ;不同剂量的As2 O3 (0 .1mmol·L-1～ 0 .5mmol·L-1)对小鼠肝、肾和心肌等功能无明显影响 ,与对照组各项指标无显著性差异 (P >0 .0 5 )。结论 :不同浓度的As2 O3 能明显诱导恶性黑色素瘤A3 75及B16细胞凋亡和坏死 ,对A3 75细胞的凋亡诱导作用强于B16细胞。As2 O3 (0 .1mmol·L-1～ 0 .5mmol·L-1)对小鼠肝。

miR-145、miR-375在乳腺浸润性导管癌中的表达及临床意义

目的探讨miR-145、miR-375在乳腺浸润性导管癌患者中的表达情况,并做出相应的临床分析。方法取经病理证实的乳腺浸润性导管癌患者的乳腺癌组织标本及其正常组织各41例,行荧光定量PCR检测其中miR-145、miR-375的表达量,结合临床资料,用SPSS软件分析其阳性表达对临床指导的意义。结果乳腺癌患者乳腺癌组织中miR-145及miR-375表达明显低于正常组织(P<0.01),miR-145在乳腺癌中的表达异常与病理分期、淋巴结转移、肿瘤大小相关(P<0.01),miR-145的表达与ER、PR无明显相关性,而miR-375的表达与病理分期、肿瘤大小相关(P<0.01),淋巴结转移、PR相关(P<0.05),与ER无明显相关性。结论 miR-145、miR-375在乳腺癌患者中异常表达,癌组织中的表达低于正常组织,这可能是miR-375肿瘤发生过程中担任了抑癌基因的角色,一定程度上可以衡量肿瘤的恶性程度。

miR-375靶向YAP1调控上皮-间质转化参与乳腺癌细胞曲妥珠单抗的耐药

背景与目的:曲妥珠单抗作为人表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor 2,HER2)常用靶向抗体药物,其耐药问题日益凸显。探讨miR-375靶向Yes相关蛋白1(Yes-associated protein 1,YAP1)介导上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)参与乳腺癌细胞曲妥珠单抗的耐药。方法:建立HER2阳性乳腺癌曲妥珠单抗耐药的细胞株,转染miR-375 mimic来上调其表达,采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)检测miR-375的表达情况,采用蛋白质印迹法(Western blot)检测其EMT标志蛋白波形蛋白(vimentin)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)的表达变化情况。采用MTT实验和平板克隆实验检测其药物敏感性及增殖能力的变化。双荧光素酶报告基因实验验证miR-375与YAP13’-UTR的靶向关系,采用RTFQ-PCR检测临床水平上两者的相关性。对细胞株共转染miR-375 mimic和YAP1-MUT载体后,采用Western blot检测其EMT蛋白表达的恢复情况,采用MTT实验和平板克隆形成实验检测其药物敏感性和增殖能力的恢复情况。结果:与NC组比较,miR-375 mimic组的药物敏感性、平板克隆形成能力均下调(P均<0.01),其EMT标志蛋白vimentin、E-cadherin表达也发生逆转(P均<0.05)。双荧光素酶报告基因实验结果证实,YAP1是miR-375的靶基因,miR-375与YAP1在乳腺癌患者肿瘤组织中呈负相关(r=-0.5868,P=0.0028)。miR-375 mimic组同时过表达YAP1后可恢复其药物敏感性(P<0.01)、克隆形成能力(P<0.05)和EMT标志蛋白vimentin、E-cadherin表达情况(P均<0.05)。结论:miR-375通过靶向YAP1在曲妥珠单抗耐药细胞株中介导EMT,进而调控曲妥珠单抗耐药细胞株的药物敏感性。

初诊2型糖尿病患者血清中miR-29a和miR-375表达变化及其与糖、脂标志物相关性研究

目的探讨miR-375和miR-29a在初诊2型糖尿病(DM)患者血清中的表达水平,及其表达变化与糖、脂标志物的相关性。方法排除既往已诊断DM的健康体检者,所有研究对象均行75克葡萄糖耐量(OGTT)实验,根据1999年WHO的DM诊断标准,将研究对象分为糖代谢正常组(38例)和DM组(48例)。以RNU6B作为内参基因,采用实时荧光定量PCR的方法检测血清中miR-29a和miR-375的相对表达水平。结果 DM患者血清中的miR-29a和miR-375表达量皆显著高于对照组。血清中miR-29a和miR-375的表达量与FPG、2hPG和糖化血红蛋白皆呈显著正相关(P<0.05),与血脂各指标无显著相关性(P>0.05)。血清miR-29a和miR-375表达量间呈显著正相关性。结论 miR-29a和miR-375在血清中表达变化有可能作为诊断2型糖尿病的分子标志物。miR-29a和miR-375两者在2型糖尿病的发生、发展中可能具有协同调控作用。

miR-375在原发性肝癌血清中的表达与患者预后的关系

目的探讨血清中miR-375作为在肝细胞癌(HCC)预后评估生物标志的可能。方法采用qRT-PCR的方法 ,检测2011至2012年间接受过肿瘤切除术的65例被确诊为HCC的患者血清中miR-375的表达水平,并经随访统计各位患者生存期情况。用X^2检验来比较miR-375的表达差异,用Kaplan Meier分析其生存状态,用多因素Cox回归分析预后情况。结果 40例(61.5%)HCC患者血清中miR-375的表达较高,其余25例(38.5%)表达则较低,且其在高分化、Ⅲ或Ⅳ期的患者中均显著增高。miR-375高表达患者的总生存期及无病生存期长于较低表达的患者。结论 miR-375可能与HCC的发生、发展及预后有关,或可作判断HCC预后及治疗的一个新的生物标志物。

miRNA-375靶向磷脂酰肌醇激酶-3催化亚单位α对宫颈癌细胞增殖和迁移的影响

目的探讨miRNA-375靶向磷脂酰肌醇激酶-3催化亚单位α(PIK3CA)对宫颈癌细胞增殖和迁移的影响。方法选取宫颈癌细胞系Si Ha,分别转染mi RNA-375模拟基因、mi RNA-375抑制剂、对照模拟基因及对照抑制剂,采用RT-PCR法检测mi RNA-375表达,Western blot检测PIK3CA蛋白表达,MTT法检测细胞增殖活性,划痕实验检测细胞迁移能力。双荧光素酶报告基因实验验证mi RNA-375与PIK3CA的靶向关系。结果转染miRNA-375模拟基因后miRNA-375表达上调,PIK3CA蛋白表达降低(P<0.05);转染miRNA-375抑制剂后miRNA-375表达降低,PIK3CA蛋白表达增强(P<0.05)。转染miRNA-375模拟基因后SiHa细胞增殖活性、迁移能力降低(P<0.05);转染miRNA-375抑制剂后SiHa细胞增殖活性、迁移能力增强(P <0.05)。miRNA靶基因预测软件检测结果显示,miRNA-375能作用于PIK3CA 3'-UTR。与转染对照模拟基因比较,共转染miRNA-375模拟基因与PIK3CA-WT可使SiHa荧光素酶活性降低(P <0.05)。结论 miRNA-375可抑制宫颈癌细胞增殖及迁移,其机制可能与靶向调控PIK3CA有关。