miR-381-3p对口腔癌细胞增殖、侵袭和迁移能力的调控作用及其机制

目的 观察微小RNA(miR)-381-3p对口腔癌细胞增殖、侵袭、迁移能力的调控作用,并基于甲基转移酶SETDB1基因调控探讨相关机制。方法 采用RT-PCR法检测口腔癌细胞系CAL-27和正常口腔黏膜上皮细胞系ATCC中的miR-381-3p。培养CAL-27细胞,分为模拟物组、阴性对照组和未转染组,模拟物组和阴性对照组分别转染miR-381-3p模拟物和miR-381-3p阴性对照,未转染组不进行转染;采用CCK-8法检测细胞增殖能力,Transwell小室实验检测细胞侵袭能力,划痕愈合实验检测细胞迁移能力。采用TargetScan(http://www. targetscan. org/vert_80/)预测miR-381-3p与SETDB1结合位点,应用双荧光素酶报告基因分析进行验证;采用RT-PCR法检测CAL-27细胞和ATCC细胞中的SETDB1 mRNA,Western blotting法检测SETDB1蛋白;将CAL-27细胞分为模拟物组、阴性对照组和未转染组,模拟物组、阴性对照组分别转染miR-381-3p模拟物和阴性对照,未转染组不进行转染,采用RT-PCR法检测SETDB1 mRNA。结果 CAL-27细胞中miR-381-3p表达低于ATCC细胞(P<0.05)。模拟物组在培养12、24、36、48 h时细胞增殖能力低于阴性对照组和未转染组(P均<0.05)。模拟物组细胞迁移距离、穿膜细胞数均低于阴性对照组和未转染组(P均<0.05)。SETDB1存在连续的、可以与miR-381-3p互补的核苷酸序列;共转染SETDB1-WT和miR-381-3p质粒的CAL-27细胞相对荧光素酶活性低于其他组细胞(P均<0.05);CAL-27细胞中SETDB1mRNA和蛋白表达高于ATCC细胞(P均<0.05);模拟物组SETDB1 mRNA表达低于阴性对照组和未转染组(P均<0.05)。结论 miR-381-3p能够抑制口腔癌细胞的增殖、侵袭和迁移能力,其作用机制可能与调节SETDB1表达有关。

不同认知障碍程度和疗效青少年抑郁症患者miR-381-3p、miR-124检测的临床意义

目的探讨不同认知障碍程度和疗效的青少年抑郁症患者miR-381-3p、miR-124检测的临床意义。方法选取2020年1月至2022年4月绍兴市第七人民医院收治的86例青少年抑郁症患者为研究对象,其中存在认知障碍31例,包括轻度14例、中度12例和重度5例;无认知障碍55例。所有患者接受心理干预、认知疗法、重复经颅磁刺激疗法联合草酸艾司西酞普兰、奥氮平口服治疗3个月,治疗前采用简易精神状态检查量表评估认知障碍程度,并检测miR-381-3p、miR-124相对表达量;治疗3个月后采用汉密尔顿焦虑量表和汉密尔顿抑郁量表评估疗效。比较认知障碍组与无认知障碍组、不同程度认知障碍以及不同疗效患者miR-381-3p、miR-124相对表达量,采用ROC曲线分析miR-381-3p、miR-124单独或联合检测对临床疗效的预测效能。结果认知障碍组患者miR-381-3p相对表达量明显低于无认知障碍组(P<0.05),miR-124相对表达量则明显高于无认知障碍组(P<0.05)。不同程度认知障碍患者miR-381-3p、miR-124相对表达量比较,差异均有统计学意义(均P<0.05),其中miR-381-3p相对表达量为轻度>中度>重度(均P<0.05),miR-124相对表达量为重度>中度>轻度(均P<0.05)。治疗3个月后疗效良好66例,疗效不佳20例。疗效不佳组miR-381-3p相对表达量明显低于疗效良好组(P<0.05),miR-124相对表达量则明显高于疗效良好组(P<0.05)。miR-381-3p、miR-124单独预测患者临床疗效的AUC分别为0.719、0.695,两者联合预测的AUC为0.782,两者联合检测的效能明显高于单独检测(均P<0.05)。结论miR-381-3p与miR-124联合检测有助于青少年抑郁症患者认知障碍严重程度的评估和临床疗效预测。

基于国际原子能机构277和381报告对直线加速器双模式光子线和电子线输出量校准研究

目的:基于国际原子能机构(IAEA)TRS 277和TRS 381《高能电子束和光子束中使用平行电离室的国际剂量测定操作规范》报告,校准加速器配置的不同档能量射线水中的吸收剂量,确保临床放疗中直线加速器输出剂量的精确性。方法:采用Elekta Infinity直线加速器,光子线能量6 MV分别为均整(FF)模式和非均整(FFF)模式;电子线能量分别为4、6、8、10、12和15 MeV。根据IAEATRS277和TRS381报告,使用PTW剂量仪、PTW30013指型电离室和PTW34001平行板电离室分别进行光子线和电子线水中输出剂量的校准,对各步骤的误差进行分析,对比采用不同标准对直线加速器的输出量水中校准的准确性。结果:6 MV的FF模式和FFF模式光子线在水中最大剂量点处的输出量分别为1.003和1.008 cGy/MU;4、6、8、10、12和15 MeV的电子线每档能量在水中最大剂量点处的输出量分别为1.003、1.002、0.998、0.999、1.000和1.003 cGy/MU。每档能量的射线在水中最大剂量点处的输出量校准为1 MU对应1 cCy,误差<1%。结论:根据IAEA TRS277号和TRS381号报告对直线加速器的输出剂量在水中进行校准,可以保证直线加速器的输出剂量的准确性。

circ_HIPK3靶向miR-381-3p/ZNF217轴调控Aβ诱导的海马神经元功能和形态

目的分析环状RNA同源结构域相互作用蛋白激酶3(circ_HIPK3)靶向miR-381-3p/锌指蛋白217 ZNF217)轴对β淀粉样蛋白(Aβ)诱导的海马神经元功能和形态的影响。方法制备新生大鼠海马神经元,分为对照组、Aβ组、si NC1组、si HIPK3组、si HIPK3+inhibitor NC组、si HIPK3+miR-381-3p inhibitor组、si HIPK3+miR-381-3p inhibitor+si NC2组、si HIPK3+miR-381-3p inhibitor+si ZNF217组,除对照组外其余组均通过40μmol/L Aβ1~42诱导。qRT-PCR法测定海马神经元circ_HIPK3、miR-381-3p、ZNF217 mRNA表达,透射电镜观察细胞形态,CCK-8法测定海马神经元存活率,Hochesst 33342法测定海马神经元凋亡,流式细胞仪检测海马神经元内Ca^(2+)荧光强度,Western blot法测定海马神经元磷酸化Tau蛋白(P-Tau)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、胱天蛋白酶-3(Caspase-3)、ZNF217蛋白表达,双萤光素酶报告基因分析miR-381-3p与circ_HIPK3、ZNF217靶向关系。结果对照组海马神经元结构正常,胞核形态正常,线粒体、内质网无病理改变;Aβ组海马神经元呈退行性改变,核形态异常,膜内陷,可见大量线粒体肿胀,胞浆内含大量脂滴空泡;与Aβ组相比,si HIPK3组海马神经元结构部分恢复;与si HIPK3组相比,si HIPK3+miR-381-3p inhibitor组海马神经元结构损伤严重;与si HIPK3+miR-381-3p inhibitor组相比,si HIPK3+miR-381-3p inhibitor+si ZNF217组海马神经元结构损伤减轻。与对照组相比,Aβ组海马神经元circ_HIPK3、ZNF217 mRNA和蛋白表达、凋亡率、Ca^(2+)荧光强度、P-Tau、Bax、Caspase-3蛋白表达升高,miR-381-3p表达、存活率、Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05);与Aβ组相比,si HIPK3组海马神经元circ_HIPK3、ZNF217 mRNA和蛋白表达、凋亡率、Ca^(2+)荧光强度、P-Tau、Bax、Caspase-3蛋白表达降低,miR-381-3p表达、存活率、Bcl-2蛋白表达升高(P<0.05);与si HIPK3组相比,si HIPK3+miR-381-3p inhibitor组海马神经元circ_HIPK3、ZNF217 mRNA和蛋白表达、凋亡率、Ca^(2+)荧光强度、P-Tau、Bax、Caspase-3蛋白表达升高,miR-381-3p水平、存活率、Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05);与si HIPK3+miR-381-3p inhibitor组相比,si HIPK3+miR-381-3p inhibitor+si ZNF217组海马神经元ZNF217 mRNA和蛋白表达水平、凋亡率、Ca^(2+)荧光强度、P-Tau、Bax、Caspase-3蛋白表达降低,存活率、Bcl-2蛋白表达升高(P<0.05);miR-381-3p与circ_HIPK3、ZNF217均靶向结合。结论circ_HIPK3沉默可能通过调控miR-381-3p/ZNF217轴改善Aβ诱导的海马神经元结构功能损伤。

CircCSNK1G1调节miR-381-3p/Skp2轴对胃癌细胞增殖、凋亡和迁移的研究

目的探究CircCSNK1G1调节miR-381-3p/S期激酶相关蛋白2(Skp2)轴对胃癌(GC)细胞增殖、凋亡和迁移的影响。方法将HGC-27细胞分为未转染组、si-NC组、si-CircCSNK1G1组、si-CircCSNK1G1+anti-miR-NC组、si-CircCSNK1G1+anti-miR-381-3p组。qRT-PCR分别检测GC肿瘤组织和GC不同细胞系中CircCSNK1G1、miR-381-3p、Skp2 mRNA的表达;MTT法检测细胞增殖;克隆形成实验检测细胞克隆数量;流式细胞术检测细胞凋亡;Transwell小室法测定细胞迁移和侵袭能力;Western Blot检测EMT相关蛋白E-cadherin、Vimentin的表达;双荧光素酶实验验证CircCSNK1G1、miR-381-3p、Skp2三者的靶向关系。结果与癌旁组织和人正常胃黏膜上皮细胞GES-1相比,GC肿瘤组织和GC细胞系中的CircCSNK1G1、Skp2 mRNA高表达,miR-381-3p低表达(P<0.05),且HGC-27细胞中miR-381-3p表达水平最低,CircCSNK1G1、Skp2 mRNA表达最高,因此后续选用HGC-27细胞并敲低CircCSNK1G1进行实验。与未转染组和si-CircCSNK1G1-NC组相比,转染si-CircCSNK1G1能够降低HGC-27细胞中CircCSNK1G1、Skp2 mRNA表达、细胞增殖活性、细胞迁移数以及Vimentin蛋白表达(P<0.05),提高miR-381-3p的表达、细胞凋亡率和E-cadherin蛋白表达(P<0.05)。双荧光素酶实验验证了CircCSNK1G1、Skp2均与miR-381-3p存在靶向关系,而且CircCSNK1G1可作为miR-381-3p的海绵RNA,进一步调节Skp2的表达和活性。结论敲低CircCSNK1G1能够靶向上调miR-381-3p表达,抑制Skp2表达,进而促进GC细胞凋亡,抑制其增殖和迁移。

miR-381-3p在炎性环境下对人牙周膜干细胞成骨分化的调节作用及机制

目的探讨miR-381-3p对炎性环境下人牙周膜干细胞(hPDLSCs)成骨分化的促进作用及机制。方法体外分离和培养hPDLSCs细胞,用流式细胞法对hPDLSCs细胞进行鉴定。对hPDLSCs细胞进行miR-381-3p转染并用双萤光素酶检测试剂分析miR-381-3p的目的基因。将hPDLSCs细胞分为对照组、miR-NC组、miR-NC+LPS组、miR-381-3p抑制物组、miR-381-3p抑制物+LPS组、miR-381-3p模拟物组和miR-381-3p模拟物+LPS组。干预后检测hPDLSCs成骨分化能力及hPDLSCs细胞中ALP、miR-381-3p、TLR4、NF-κB和Runx2 mRNA的表达水平。结果分离的细胞符合间充质干细胞特征;miR-381-3p对TLR4有潜在的结合位点,存在靶向调节作用;与对照组比较,LPS组hPDLSCs细胞中miR-381-3p、TLR4和NF-κB mRNA表达增加,ALP、矿化结节形成量和Runx2 mRNA表达降低(P<0.05);与miR-NC组和miR-NC+LPS组比较,miR-381-3p抑制物组和miR-381-3p抑制物+LPS组hPDLSCs细胞中miR-381-3p、TLR4和NF-κB mRNA表达降低,ALP、矿化结节形成量和Runx2 mRNA表达增加,miR-381-3p抑制物组变化更显著(P<0.05);与其他组比较,miR-381-3p模拟物组和miR-381-3p模拟物+LPS组hPDLSCs细胞中miR-381-3p、TLR4和NF-κB mRNA表达增加,ALP、矿化结节形成量和Runx2 mRNA表达降低,miR-381-3p模拟物+LPS组变化更显著(P<0.05)。结论在炎性环境下,hPDLSCs细胞中miR-381-3p表达增加。转染miR-381-3p抑制物可以抑制TLR4/NF-κB信号通路的激活,促进hPDLSCs细胞成骨分化。

miR-381-3p调控PD-L1对卵巢癌细胞卡铂化疗耐药的影响

目的:探讨miR-381-3p调控PD-L1对卵巢癌细胞卡铂化疗耐药的影响。方法:采用实时荧光定量PCR检测比较SKOV3细胞及SKOV3/CBP细胞中PD-L1、miR-381-3p的表达情况。细胞转染miR-381-3p模拟物和抑制物,分组如下:SKOV3/CBP miR-381-3p阴性对照组,SKOV3/CBP miR-381-3p模拟物组,SKOV3 miR-381-3p阴性对照组,SKOV3 miR-381-3p抑制物组,实时荧光定量PCR检测卵巢癌卡铂耐药细胞中miR-381-3p对PD-L1表达的影响。细胞转染miR-381-3p模拟物和PD-L1过表达质粒卡铂干预处理,分组如下:miR-381-3p阴性干预组,miR-381-3p模拟物干预组,共转染miR-381-3p模拟物PD-L1空载体干预组,共转染miR-381-3p模拟物与PD-L1过表达质粒干预组,流式细胞术检测miR-381-3p调控PD-L1表达对细胞周期和凋亡变化,蛋白质印迹法检测miR-381-3p调控PD-L1表达对MDR1、Cyclin D1和cleaved-caspase-3的表达变化。结果:卵巢癌卡铂耐药SKOV3细胞组中PD-L1表达水平高于卵巢癌SKOV3组,而miR-381-3p表达水平低于卵巢癌SKOV3组(P<0.05);SKOV3 miR-381-3p抑制物组中PD-L1的表达高于SKOV3 miR-381-3p阴性对照组,SKOV3/CBP miR-381-3p模拟物组中PD-L1的表达低于SKOV3/CBP miR-381-3p阴性对照组(P<0.05);共转染miR-381-3p模拟物与PD-L1过表达质粒干预组的G1期细胞比例高于共转染miR-381-3p模拟物PD-L1空载体干预组,而S期细胞比例低于共转染miR-381-3p模拟物PD-L1空载体干预组(P<0.05)。miR-381-3p模拟物干预组细胞凋亡率高于miR-381-3p阴性干预组,共转染miR-381-3p模拟物与PD-L1过表达质粒干预组细胞凋亡率低于共转染miR-381-3p模拟物PD-L1空载体干预组(P<0.05)。miR-381-3p模拟物干预组中PD-L1、MDR1、Cyclin D1蛋白表达低于miR-381-3p阴性干预组,而其cleaved-caspase-3蛋白表达高于miR-381-3p阴性干预组(P<0.05)。共转染miR-381-3p模拟物与PD-L1过表达质粒干预组中cleaved-caspase-3蛋白表达低于共转染miR-381-3p模拟物PD-L1空载体干预组(P<0.05)。结论:miR-381-3p通过调控PD-L1参与对卵巢癌细胞的卡铂耐药,为卵巢癌耐药治疗提供参考依据。

血清miR-126、miR-381在脓毒症患者中的表达水平及预测价值

目的 通过检测微小RNA 126(miR-126)、微小RNA 381(miR-381)在脓毒症患者血清中的表达,评估二者对脓毒症的预测价值。方法 选取2019年6月至2021年12月189例德阳市人民医院已确诊收治的脓毒症患者,按照严重程度分为79例脓毒症组、65例严重脓毒症组和45例脓毒性休克组,并选取180名健康者作为对照组;受试者工作特征曲线(ROC)分析血清中TNF-α、IL-6、miR-126、miR-381表达水平对脓毒症的预测价值;Logistic回归分析影响脓毒症发生的影响因素。结果 与对照组相比,脓毒症组、严重脓毒症组、脓毒性休克组白细胞计数(WBC)、降钙素原(PCT)、C反应蛋白(CRP)、乳酸(Lac)、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)水平依次显著增加,差异有统计学意义(F=203.191,655.528,565.808,468.356,497.532,97.385,62.398,P<0.05);miR-126、miR-381表达水平在脓毒症组、严重脓毒症组、脓毒性休克组中均显著低于对照组,并随着病情严重程度的增加而显著降低,差异有统计学意义(F=41.349,40.802,P<0.05);多因素分析发现,PCT、CRP、Lac、WBC、HMGB1、TNF-α、IL-6、miR-126和miR-381均是影响脓毒症发生危险因素(P<0.05);miR-126、miR-381联合预测脓毒症发生的AUC显著高于TNF-α、IL-6、miR-126单独预测,差异有统计学意义(Z=1.985,P=0.047;Z=2.121,P=0.034;Z=2.218,P=0.027)。结论 脓毒症患者血清中miR-126、miR-381表达显著降低,二者联合对脓毒症发生具有一定的预测价值。

miR-381-3p在宫颈癌中靶基因及信号通路的分析

目的:分析miR-381-3p在宫颈癌组织中的表达情况,并探索其可能的靶基因及分子调控机制,为宫颈癌的防治提供思路。方法:本研究通过TCGA数据库了解miR-381-3p在宫颈癌与宫颈癌旁组织中的表达,采用miRWalk、miRDB和miRTarBase获取下游靶基因,并用DAVID对下游靶基因行GO功能注释及KEGG富集分析,再构建蛋白与蛋白相互作用网络并找出关键基因,最后验证关键基因的表达。结果:成熟的miR-381-3p在多个物种间的序列有高度保守性,TCGA数据库显示:相比癌旁组织,宫颈癌组织中的miR-381-3p表达下调。GO功能注释参与RNA聚合酶Ⅱ启动子转录进行正向调节的生物学过程、细胞核等细胞组分、蛋白质结合等分子功能。KEGG表明靶基因富集于癌症通路、乳腺癌、胃癌、Hippo、MAPK等信号通路。ESR1、LEF1、PBX1、CCND2、FGFR2、CADM1、TCF3、MPP6、PVRL1、UBE3A是miR-381-3p的关键基因,还发现ESR1、PBX1、CCND2在宫颈癌的表达水平低于正常组织。结论:miR-381-3p在宫颈癌中呈低表达,其可能作为抑癌基因对宫颈癌的生物学过程起一定的作用,有望成为宫颈癌诊治的新靶点。

苦参碱通过lncRNA CASC11/miR-381-3p轴调控宫颈癌细胞的恶性生物学行为的研究

目的探讨苦参碱是否通过调控lncRNA CASC11/miR-381-3p的表达,调控宫颈癌细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭。方法宫颈癌细胞SiHa分别转染pcDNA3.1空载体、pcDNA3.1-lncRNA CASC11、mimics阴性对照和miR-381-3p mimics,经不同质量浓度(25、50和100 mg·L^(-1))的苦参碱处理后,采用qRT-PCR试验检测细胞中lncRNA CASC11和miR-381-3p表达,CCK-8试验检测细胞存活率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Transwell小室试验检测细胞迁移和侵袭,双荧光素酶试验验证lncRNA CASC11和miR-381-3p的靶向关系,Western blot试验检测增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)、Cleaved-caspase3、E-cadherin和N-cadherin蛋白表达。结果lncRNA CASC11在宫颈癌细胞中高表达,miR-381-3p在宫颈癌细胞中低表达;不同质量浓度的苦参碱均能抑制SiHa细胞增殖、迁移和侵袭,并促进细胞凋亡,且具有浓度依赖性;不同质量浓度的苦参碱均能抑制SiHa细胞中lncRNA CASC11表达,促进细胞中miR-381-3p的表达,且具有浓度依赖性;SiHa细胞中lncRNA CASC11靶向负调控miR-381-3p的表达;过表达lncRNA CASC11能够逆转苦参碱对SiHa细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的作用,而同时过表达miR-381-3p则能逆转lncRNA CASC11对苦参碱的回复作用。结论苦参碱通过抑制lncRNA CASC11的表达,进而上调miR-381-3p的表达,发挥对宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用,并促进细胞凋亡。

miR-381-3p在急性髓系白血病中的表达及对白血病细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨miR-381-3p在急性髓系白血病(AML)中的表达、临床意义、进展与预后,以及对AML细胞增殖和凋亡的影响,为治疗AML提供理论依据。方法利用生物信息学分析寻找差异性表达的miRNAs,收集AML患者的临床资料和血液样本,测定纳入患者骨髓液中miRNA的表达水平,进一步阐明miRNA与AML的关系,并对纳入患者进行随访,计算总生存期(OS)和无病生存期(DFS);体外培养AML细胞,构建miR-381-3p的质粒,使AML过表达miR-381-3p和敲低miR-381-3p,分为control、miR-381 mimics、mimics NC、miR-381 inhibitor、inhibitor NC五组,采用CCK-8及流式细胞术检测AML细胞的增殖及凋亡情况。结果使用生物信息学分析发现差异性表达的miRNAs并最终确定miR-381-3p为研究分子,纳入AML患者共90例,AML患者miR-381表达水平低于对照组,且各FAB分型患者均低于正常组;miR-381表达水平的高低与AML患者的年龄、性别、外周血白细胞、淋巴细胞、FAB分型均无关系,且高表达的miR-381患者OS及DFS显著延长,差异有统计学意义(P<0.05);体外实验表明敲低miR-381后,可抑制AML细胞的凋亡,促进增殖,当过表达miR-381后,可促进AML细胞的凋亡,抑制增殖。结论miR-381-3p在AML患者中低表达,其过表达患者可显著延长OS和DFS,miR-381-3p可以促进AML细胞的凋亡,抑制增殖,有望成为治疗AML的靶向分子。

CircCSNK1G1调节miR-381-3p/BRD4轴对喉癌细胞恶性生物学行为的影响

目的:探讨CircCSNK1G1调节miR-381-3p/溴结构域蛋白4(BRD4)轴对喉癌(laryngeal cancer,LC)细胞恶性生物学行为的影响。方法:实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、western blot分别检测60例LC患者癌组织、癌旁组织及喉上皮细胞NP69及人LC细胞Hep-2、Tu212、M4E中CircCSNK1G1、miR-381-3p、BRD4蛋白表达;将人喉癌Hep-2细胞分为:control组(正常培养)、si-NC组(转染si-NC)、si-CircCSNK1G1组(转染si-CircCSNK1G1)、si-CircCSNK1G1+inhibitor-NC组(si-CircCSNK1G1和inhibitor-NC共转染)、si-CircCSNK1G1+miR-381-3p inhibitor组(si-CircCSNK1G1和miR-381-3p inhibitor共转染);RT-qPCR检测Hep-2细胞中CircCSNK1G1、miR-381-3p的表达水平;MTT法检测Hep-2细胞增殖;划痕实验检测Hep-2细胞迁移;Transwell小室检测Hep-2细胞侵袭;流式细胞仪检测Hep-2细胞凋亡;western blot方法检测增殖细胞核抗原(PCNA)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、细胞抗凋亡因子B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)及BRD4蛋白的表达;双荧光素酶报告基因实验分别验证CircCSNK1G1和miR-381-3p、miR-381-3p和BRD4的关系。结果:在LC组织和LC细胞中,CircCSNK1G1、BRD4蛋白高表达,miR-381-3p低表达,且在Hep-2细胞中CircCSNK1G1、BRD4蛋白水平最高,miR-381-3p表达最低(P<0.05),因此,选择Hep-2细胞进行转染;与control组、si-NC组比较,si-CircCSNK1G1组Hep-2细胞中CircCSNK1G1表达、OD490值、划痕愈合率、侵袭数、PCNA、MMP-2、Bcl-2、BRD4蛋白表达显著降低,miR-381-3p、凋亡率、Bax蛋白表达显著升高(P<0.05);与si-CircCSNK1G1组、si-CircCSNK1G1+inhibitor-NC组比较,si-CircCSNK1G1+miR-381-3p inhibitor组Hep-2细胞中OD490值、划痕愈合率、侵袭数、PCNA、MMP-2、Bcl-2、BRD4蛋白表达显著升高,miR-381-3p、凋亡率、Bax蛋白表达显著降低(P<0.05);CircCSNK1G1靶向调控miR-381-3p表达,miR-381-3p靶向负调控BRD4表达。结论:敲低CircCSNK1G1可能通过靶向miR-381-3p来下调BRD4表达,进而抑制Hep-2细胞增殖、迁移、侵袭,促进其凋亡。

宫颈癌患者血清微小核糖核酸-381、微小核糖核酸-145水平变化及与临床病理参数相关性分析

目的:探讨宫颈癌(CC)患者血清微小核糖核酸-381(miRNA-381)、微小核糖核酸-145(miRNA-145)水平的变化及与临床病理参数的关系。方法:选取CC患者80例作为观察组,并于同期健康女性体检者选取68例作为对照组。采用定量聚合酶链反应法(QRT-PCR)检测两组血清miRNA-381、miRNA-145表达水平,同时收集其临床病理资料,探究血清表达水平与临床病理参数的关系。结果:观察组血清miRNA-381、miRNA-145水平低于对照组(均P<0.05);CC患者血清miRNA-381、miRNA-145表达水平与患者年龄、乳头瘤病毒感染、肿瘤直径、病理分期等因素无关(均P>0.05);与病理类型、组织分化程度、浸润深度、脉管浸润、淋巴结转移有关(均P<0.05)。结论:CC患者中血清miRNA-381、miRNA-145呈低表达,其表达水平与病理类型、组织分化程度、浸润深度、脉管浸润、淋巴结转移有关。

丙戊酸钠联合喹硫平对双相情感障碍合并抑郁症患者疗效及BDNF、miR-381-3p、TXA2表达的影响

目的:研究丙戊酸钠联合喹硫平对双相情感障碍合并抑郁症患者疗效及脑源性神经营养因子(BDNF)、miR-381-3p、血栓素A2(TXA2)表达的影响。方法:选择医院从2019年1月—2021年1月收治的84例双相情感障碍合并抑郁症患者,以单双数字法将其分为研究组及对照组各42例。对照组予以丙戊酸钠治疗,研究组则与对照组基础上增用喹硫平治疗。分析两组临床疗效,治疗前后抑郁情况,BDNF、miR-381-3p、TXA2表达水平,不良反应发生情况等方面的差异。结果:在治疗总有效率方面对比,研究组高于对照组(P<0.05)。治疗1周后、2周后以及4周后研究组HAMD-17评分分别相较于对照组更低(均P<0.05)。治疗后研究组BDNF、miR-381-3p表达水平分别相较于对照组更高;而TXA2水平相较于对照组更低(均P<0.05)。两组手抖、便秘、口干以及腹泻发生率对比均不明显(均P>0.05)。结论:丙戊酸钠与喹硫平联用治疗双相情感障碍合并抑郁症患者的效果显著,可改善BDNF、miR-381-3p、TXA2表达。

miR-381在多囊卵巢综合征颗粒细胞中的表达及其对高迁移率蛋白1的影响

目的探讨miR-381在多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)颗粒细胞中的表达及其对高迁移率蛋白1(high-mobility group box 1,HMGB1)的影响。方法纳入35例健康女性(正常对照组)和64例PCOS患者。按照体重指数(BMI)将PCOS患者分为高BMI-PCOS组(30例)和正常BMI-PCOS组(34例)2种亚型。RT-qPCR验证PCOS亚型组和正常对照组血清中HMGB1 mRNA的表达,取miRNA芯片筛选正常对照组与高BMI-PCOS组患者之间血清中差异表达的miRNA。RT-qPCR验证PCOS亚型组和正常对照组血清中miR-381 mRNA的表达并分析其相关性。人正常卵巢上皮细胞IOSE80和人卵巢颗粒细胞KGN中检测miR-381、HMGB1 mRNA和蛋白表达。双荧光素酶报告基因实验验证miR-381和HMGB1的靶向关系。人卵巢颗粒细胞KGN中转染miR-381 mimic和inhibitor,检测RIP3的表达以及克隆增殖情况。结果与对照组相比,正常BMI-PCOS组血清中HMGB1的mRNA表达无差异,高BMI-PCOS组血清中HMGB1 mRNA表达较对照组显著上升(P<0.01)。miRNA结果分析显示高BMI-PCOS组血清中miR-381、miR-141、miR-15b等miRNA表达与对照组相比显著下调,其中miR-381的下调程度最高(P<0.01)。与对照组相比,正常BMI-PCOS组血清中miR-381的mRNA表达无差异,高BMI-PCOS组血清中miR-381的mRNA表达差异较对照组显著降低,并且两者呈负相关(P<0.05)。人卵巢颗粒细胞KGN miR-381 mRNA表达水平低于人正常卵巢上皮细胞IOSE80,HMGB1mRNA和蛋白表达趋势相反(P<0.01)。过表达miR-381增加细胞凋亡水平,抑制细胞克隆和增殖能力(P<0.05),抑制miR-381,结果相反。结论miR-381在高BMI-PCOS组血清中表达下降,抑制miR-381的表达能够促进HMGB1表达升高,降低卵巢颗粒细胞凋亡,提高克隆和增殖能力。

基于生物信息学筛选和验证头颈部鳞状细胞癌的诊断标志物microRNA-381-3p

目的筛选并验证头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)的microRNA(miRNA)诊断标志物,为HNSCC的早期临床诊断提供新的生物标志物。方法提取基因表达综合数据库和癌症基因组图谱(TCGA)数据库的miRNA表达数据,分为训练集和验证集。在训练集中利用Limma R软件包筛选HNSCC组织和正常组织中差异表达的miRNA,并确定miR-381-3p为研究目标。使用实时荧光定量聚合酶链反应验证miR-381-3p的表达水平。利用受试者操作特征(ROC)曲线的曲线下面积(AUC)评估miR-381-3p的诊断效能。使用在线网站筛选miR-381-3p的靶基因并利用ClusterProfile包对靶基因进行京都基因与基因组数据库(KEGG)富集分析。使用蛋白质—蛋白质相互作用网络和Cytoscape软件进一步筛选靶基因中的核心基因。结果miR-381-3p的表达水平在HNSCC组织中下调。ROC分析表明miR-381-3p在不同的数据集中具有稳定的诊断能力(AUC>0.700)。临床分析显示miR-381-3p表达水平与HNSCC患者的T分期和临床分期显著相关。进一步的KEGG分析显示miR-381-3p的靶基因富集到丝裂原激活蛋白激酶相关信号通路和其他HNSCC相关信号通路。结论miR-381-3p可以区分HNSCC患者和健康人群,是HNSCC的潜在诊断标志物。

miR-381在HCC患者肿瘤组织、外周血中表达及过表达对巨噬细胞极化模式调节作用

目的观察miR-381在肝细胞癌(HCC)患者肿瘤组织、外周血和体外培养巨噬细胞中的表达变化,并探讨miR-381过表达对巨噬细胞极化模式的调节作用。方法HCC患者40例,术中留取肿瘤组织与癌旁组织,采用RT-PCR法检测miR-381、一氧化氮合酶(iNOS,M1型巨噬细胞标记物)mRNA、精氨酸酶1(Arg-1,M2型巨噬细胞标记物)mRNA,采用Western Blotting法检测iNOS、Arg-1蛋白。抽取HCC患者和健康志愿者外周静脉血,采用RT-PCR法检测miR-381、CD86(M1型巨噬细胞标记物)mRNA、CD163(M2型巨噬细胞标记物)mRNA,采用流式细胞法检测CD86、CD163蛋白。取人髓系白血病单核细胞THP-1,分别诱导分化成M0型巨噬细胞(M0组)、M2型巨噬细胞(M2组)、肿瘤相关巨噬细胞(TAMs,CM组),采用RT-PCR法检测各组细胞miR-381、iNOS mRNA、Arg-1 mRNA、CD86 mRNA、CD163 mRNA,采用Western Blotting法和流式细胞法检测iNOS、Arg-1、CD86、CD163蛋白。取M0型巨噬细胞,分别转染miR-381模拟物(miR-381 mimic)、对照模拟物(mimic NC),记为miR-381 mimic组、mimic NC组,建立miR-381过表达细胞模型,采用RT-PCR法检测各组细胞miR-381、iNOS mRNA、Arg-1 mRNA、CD86 mRNA、CD163 mRNA,采用Western Blotting法和流式细胞法检测iNOS、Arg-1、CD86、CD163蛋白。结果HCC患者肿瘤组织中miR-381、iNOS mRNA和蛋白相对表达量低于癌旁组织,Arg-1 mRNA和蛋白相对表达量高于癌旁组织(P均<0.05)。HCC患者外周血巨噬细胞中miR-381、CD86 mRNA和蛋白表达水平低于健康志愿者,CD163 mRNA和蛋白表达水平高于健康志愿者(P均<0.05)。CM组巨噬细胞中miR-381、iNOS mRNA、Arg-1 mRNA、CD86 mRNA、CD163 mRNA和蛋白相对表达量介于M0组、M2组之间(P均<0.05)。miR-381 mimic组巨噬细胞中miR-381、iN-OS mRNA、CD86 mRNA和蛋白表达水平均升高,而Arg-1 mRNA、CD163 mRNA和蛋白表达水平均降低(P均<0.05)。结论miR-381在HCC患者肿瘤组织、外周血和体外培养巨噬细胞中均呈低表达,过表达miR-381可以使巨噬细胞由M2型极化转化为M1型极化。

miR-331-3p、miR-381-3p表达水平与乳腺癌组织上皮间质转化相关标志物和预后的关系研究

目的研究微小核糖核酸(miR)-331-3p、miR-381-3p的表达水平与乳腺癌组织上皮间质转化指标及临床病理特征的关系,探讨两者的临床预后价值。方法选取2017年1月至2019年1月在该院诊治的乳腺癌患者153例为研究对象。应用实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)检测癌及癌旁组织中miR-331-3p、miR-381-3p表达水平及上皮间质转化标志物E-钙黏素(E-cad)、N-钙黏素(N-cad)及波形蛋白(Vim)信使RNA(mRNA)的表达水平。Pearson相关性分析miR-331-3p、miR-381-3p表达水平与E-cad、N-cad及Vim mRNA表达水平的相关性。比较miR-331-3p、miR-381-3p表达水平与临床病理特征的关系。Kaplan-Meier生存分析miR-331-3p、miR-381-3p表达水平与临床预后的关系。单因素及多因素COX回归分析影响乳腺癌患者预后的因素。结果与癌旁组织相比,乳腺癌组织中miR-331-3p、miR-381-3p及E-cad mRNA表达水平显著较低,而N-cad mRNA及Vim mRNA表达水平显著较高,差异有统计学意义(均P<0.05)。乳腺癌癌组织中miR-331-3p、miR-381-3p表达水平与E-cad mRNA呈正相关,与N-cad mRNA、Vim mRNA呈负相关(均P<0.05)。乳腺癌组织中miR-331-3p、miR-381-3p表达水平与肿瘤TNM分期、分化程度有关(均P<0.05)。miR-331-3p、miR-381-3p低表达水平组的3年生存率低于高表达水平组患者,差异有统计学意义(P<0.05)。乳腺癌组织中miR-331-3p低表达、miR-381-3p低表达、肿瘤分期较高、低中分化程度是影响乳腺癌生存预后的独立危险因素(均P<0.05)。结论乳腺癌组织中miR-331-3p、miR-381-3p表达水平下调,两者表达水平与上皮间质转化标志物及临床病理特征有关,是影响乳腺癌患者不良生存预后独立危险因素。

lncRNA UNC5B-AS1和miR-381在非小细胞肺癌组织中的表达及临床意义

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)非协调性分子5同源蛋白B-反义RNA1(UNC5B-AS1)和miR-381在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达及临床意义。方法采用实时荧光定量PCR(qPCR)检测NSCLC患者肿瘤组织(实验组)和肺良性肿瘤组织(对照组)lncRNA UNC5B-AS1和miR-381的表达差异;分析lncRNA UNC5B-AS1和miR-381的表达与NSCLC临床病理特征之间的关系;采用受试者工作特征(ROC)曲线评估lncRNA UNC5B-AS1和miR-381对NSCLC的诊断价值。采用多因素Cox回归模型分析影响NSCLC患者预后的独立因素。结果实验组lncRNA UNC5B-AS1的表达明显高于对照组(P<0001),而miR-381的表达明显低于对照组(P<0001)。lncRNA UNC5B-AS1和miR-381的表达呈明显负相关(r=-0352,P=0001)。lncRNA UNC5B-AS1、miR-381及两者联合诊断NSCLC的曲线下面积(AUC)分别为0860、0850和0924。LncRNA UNC5B-AS1与NSCLC患者的TNM分期、淋巴结转移及分化程度有关(P<005);miR-381与与NSCLC患者的肿瘤大小、淋巴结转移及分化程度有关(P<005)。lncRNA UNC5B-AS1高表达组患者的中位OS为269个月,明显低于低表达组的410个月(P<005);miR-381低表达组患者的中位OS为255个月,明显低于高表达组的420个月(P<005)。Cox多因素回归分析显示,肿瘤大小、TNM分期、淋巴结转移、lncRNA UNC5B-AS1表达及miR-381表达是影响NSCLC患者预后的独立因素(P<005)。结论在NSCLC组织中lncRNA UNC5B-AS1表达升高,而miR-381表达下降,两者对NSCLC有一定的诊断和预后预测价值。

牙龈卟啉菌381对纯钛及钛75合金种植体表面失泽的腐蚀

目的 研究牙龈卟啉菌 381对纯钛及钛 75合金种植体表面失泽腐蚀 .方法 将纯钛 (TA 2 )、钛 75合金机加工成10 mm× 10 m m× 1m m板片 ,数量分别为 30片和 6 0片 ,取钛75合金试件 30片与纯钛试件分别进行化学钝化处理 .将每组试件 30片随机分空白对照组、培养基对照组、实验组各 10片 .厌氧环境中将牙龈卟啉菌 381接种到改良 GAM培养基上 ,将试件贴附表面 ,每周转换传递 1次 ,共 10 wk. 0 .5 m L· L- 1戊二醛消灭细菌 ,清洗 ,2 wk后 ,用 MINOL TA CR- 10 0型色度计观察 .结果 肉眼观察纯钛 (钝化 )、钛 75合金 (钝化、非钝化 )实验组试件表面颜色由银灰色变成淡黄色 .Bartlett方差齐性检验知纯钛 (钝化 )、钛 75合金 (钝化 )和钛75合金 (非钝化 )的空白对照组与培养基对照组的 L* ,a* ,b*值无显著差异 (P>0 .0 5 ) ;纯钛 (钝化 )、钛 75合金 (钝化 )、钛75合金 (非钝化 )的实验组分别与空白组、培养基组的 L,a,b值有明显差异 (P<0 .0 5 ) .结论 牙龈卟啉菌 381对纯钛 (钝化 )、钛 75合金 (钝化、非钝化 )发生肉眼可见的表面失泽 ,且不受钛 75合金表面钝化膜形成方式不同影响 .色度计分析知三种类型试件表面颜色由绿黄区域向红黄区域移动 .