miR-384靶向PFKFB3调控小胶质细胞糖酵解及神经炎症的机制探讨

目的分析miR-384调控小胶质细胞炎症的分子机制。方法100 ng/mL LPS处理小鼠小胶质细胞(BV2)24 h,建立小胶质细胞神经炎症体外模型。miR-384 mimics与mimic NC转染BV2细胞,RT-qPCR检测6-磷酸果糖-2-激酶/果糖-2,6-二磷酸酶3(PFKFB3)、己糖激酶2(HK2)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)的mRNA表达水平。miRDB数据库预测miR-384的潜在靶点,双荧光素酶报告基因实验验证miR-384与PFKFB3的靶向关系。过表达miR-384后,免疫印迹检测HK2、PFKFB3的蛋白表达水平。结果LPS诱导了BV2细胞炎症基因IL-6和IL-1β的表达,同时LPS上调了细胞上清乳酸水平。过表达miR-384抑制了LPS诱导的乳酸增加。过表达miR-384抑制了LPS诱导的糖酵解基因PFKFB3的上调;而抑制miR-384进一步增加了PFKFB3的表达。miR-384对糖酵解基因HK2无显著影响。双荧光素酶报告基因实验结果显示PFKFB3是miR-384的下游靶分子。进一步,过表达miR-384抑制了IL-1β和IL-6的表达,而抑制miR-384产生相反的结果。结论miR-384直接靶向糖酵解基因PFKFB3,能调控LPS诱导的糖酵解和神经炎症反应。

血清miR-384、PTBP3水平与妊娠期高血压疾病患者不良妊娠结局的关系

目的检测妊娠期高血压疾病(HDCP)患者血清微RNA(miR)-384、多聚嘧啶区结合蛋白3(PTBP3)表达水平,研究miR-384、PTBP3与患者不良妊娠结局的关系。方法回顾性选取2020年7月至2021年7月沧州市人民医院收治的100例HDCP患者作为观察组,另选取同期本院的健康孕妇50名作为对照组。根据观察组患者妊娠结局情况分为妊娠结局不良组(n=47),妊娠结局良好组(n=53)。比较各组临床资料,检测对比各组血清miR-384、PTBP3水平。采用Pearson相关性分析法分析受试者血清miR-384、PTBP3表达水平相关性;采用受试者操作特征(ROC)曲线评估二者对HDCP患者不良妊娠结局的预测价值;采用多因素Logistic回归分析对患者不良妊娠结局的影响因素进行分析。结果妊娠结局不良组的收缩压和舒张压分别为(162.34±14.95)、(108.11±10.01)mmHg,均高于妊娠结局良好组[(138.78±13.11)、(99.35±6.03)mmHg]和对照组[(115.25±10.22)、(73.56±4.66)mmHg],差异均有统计学意义(P<0.05)。妊娠结局不良组miR-384水平为1.56±0.14,高于妊娠结局良好组(1.23±0.11)和对照组(1.01±0.15),差异均有统计学意义(P<0.05)。妊娠结局不良组PTBP3水平为(0.67±0.23)ng/mL,低于妊娠结局良好组[(1.21±0.33)ng/mL]和对照组[(1.53±0.45)ng/mL],差异均有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,观察组患者血清miR-384、PTBP3表达呈负相关(r=-0.472,P=0.001)。血清miR-384、PTBP3联合预测患者发生不良妊娠结局的曲线下面积(AUC)大于血清miR-384、PTBP3单独预测的AUC(P<0.05)。患者血清miR-384高表达是患者发生不良妊娠结局的危险因素,PTBP3高表达是患者发生不良妊娠结局的保护因素(P<0.05)。结论HDCP患者血清miR-384表达升高,PTBP3表达降低,二者均与患者发生不良妊娠结局有关。

CircR-ZC3HC1 mediates MiR-384-5p/SIRT1 axis to promote neuronal autophagy and relieves ischemic stroke

Objective:Circular RNAs(circRNAs)have been shown to involve in pathological processes of ischemic stroke(IS),including autophagy.This study was designed to explore the effect of circR-ZC3HC1 on neuronal autophagy in IS and the related mechanisms.Methods:Expression of circR-ZC3HC1 in blood samples of IS patients and healthy controls was detected.Hippocampal neurons were treated with oxygen and glucose deprivation(OGD)to establish IS in vitro model.The expression of LC3 and p62 and the number of autophagosomes were examined to evaluate the autophagy level of OGD induced neurons using western blotting and transmission electron microscope.Cell apoptosis rate and the expression of cleaved caspase-3,Bax,and Bcl-2 were assessed byflow cytometry and western blotting.The binding relationships among circR-ZC3HC1,miR-384-5p,and SIRT1 were predicted and verified.Results:Low expression of circR-ZC3HC1 was found in blood samples of IS patients and OGD-treated neurons.Overexpressed circR-ZC3HC1 or inhibited miR-384-5p expression promoted autophagy and inhibited apoptosis of OGD-treated neurons,which could be reversed by further 3-MA treatment.Mechanistically,circR-ZC3HC1 targeted miR-384-5p to mediate SIRT1 expression.miR-384-5p overexpression or SIRT1 knockdown in the presence of circR-ZC3HC1 overexpression in OGD-treated neurons lead to reduced autophagy and enhanced apoptosis.Conclusion:Collectively,circR-ZC3HC1 promoted neuronal autophagy to attenuate IS via miR-384-5p/SIRT1 axis.

miR-384靶向HMGA2对肝癌细胞生物学行为的影响及其机制

目的 探讨miR-384靶向高迁移率蛋白A2(HMGA2)对肝癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其机制。方法 对数生长期HUH7细胞分为对照组、miR-384 NC组和miR-384 mimic组,qRT-PCR法检测miR-384表达情况,MTT法检测细胞增殖情况,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,双荧光素酶基因报告法检测靶向关系,蛋白印迹法检测HMGA2、上皮钙粘蛋白(E-cad)、神经钙粘蛋白(N-cad)和波形蛋白(Vimentin)相对表达量。结果 人肝癌细胞HEP3 B、BEL-7402和HUH7中miR-384表达水平低于人肝脏正常上皮细胞THLE3中miR-384表达水平。对照组和miR-384 NC组miR-384表达水平、细胞存活率、迁移和侵袭细胞数以及HMGA2、E-cad、N-cad和Vimentin蛋白相对表达量比较,差异均无统计学意义(P>0.05);与miR-384 NC组比较,miR-384 mimic组miR-384表达水平升高,细胞存活率降低,迁移和侵袭细胞数减少,HMGA2、N-cad和Vimentin蛋白相对表达量降低,E-cad蛋白相对表达量升高(P<0.05)。结论 miR-384过表达可抑制肝癌HUH7细胞增殖,降低癌细胞迁移和侵袭能力,其可能是通过降低HMGA2表达,调节上皮间质转化(EMT)相关蛋白表达发挥作用。

384孔PCR仪温度参数校准方法探讨

PCR技术作为一项革命性的分子生物学工具,在基因分析、病原体检测、药物研发、遗传学研究等领域发挥着重要作用。384孔PCR仪作为高通量PCR仪的代表,具备一次性处理多个样本的能力。由于现有的校准规范主要针对96孔,使用384孔时存在校准困难和准确性较差的问题。因此,本文通过对两者进行对比,提出了384孔PCR仪的校准布点方式,并进行试验验证。结果表明:采用该校准布点方式具有有效性。

木犀草素上调miR-384对胶质瘤细胞增殖、侵袭和凋亡的影响

目的研究木犀草素(luteolin)对胶质瘤细胞增殖、侵袭和凋亡的作用及机制。方法以质量浓度2.5、25和50μmol·L^(-1)Luteolin1处理U251和U87细胞。分别以克隆形成实验、流式细胞术、Transwell实验检测细胞克隆形成、凋亡和侵袭。采用Lipofectamine 2000将antagomir-NC、miR-384 antagomir转染胶质瘤细胞U251。以RT-qPCR检测胶质瘤细胞中miR-384的表达水平。转染miR-384 antagomir后用质量浓度50μmol·L^(-1)的luteolin处理,以蛋白免疫印迹法(western blot)检测各组细胞中Ki67、p21、VEGF、Bax、Bcl-2和N-cadherin蛋白相对表达水平。结果结果表明CCK-8浓度>25μmol·L^(-1)时luteolin可显著降低U251和U87细胞活力;与对照组相比,以质量浓度25和50μmol·L^(-1)luteolin处理可明显降低细胞克隆形成率和侵袭率、提升细胞凋亡率。与miR-384 antagomir对胶质瘤细胞增殖、侵袭和凋亡的影响转染组比较,miR-384 antagomir+luteolin(50μmol·L^(-1))处理可显著下调Ki67、VEGF、Bcl-2和N-cadherin蛋白表达水平,上调p21和Bax蛋白表达水平。结论木犀草素可通过上调miR-384水平抑制胶质瘤细胞增殖和侵袭能力并诱导其凋亡。

新生儿缺氧缺血性脑病血清miR-384与炎症反应、神经行为的相关分析

目的 探讨新生儿缺氧缺血性脑病(HIE)血清微小分子核糖核酸-384(miR-384)表达水平与炎症反应、辅助性T细胞17/调节性T细胞(Th17/Treg)失衡及神经行为的相关性。方法 选择2015年10月至2020年10月唐山市妇幼保健院收治的106例HIE患儿为HIE组,另选取同期同院产科分娩的90例健康新生儿为对照组。参考HIE分度标准将患儿分成轻、中、重度组,比较各组血清miR-384、白介素-6(IL-6)、C反应蛋白(CRP)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、Treg、Th17、Th17/Treg与新生儿神经行为量表(NBNA)评分。经Pearson线性相关分析HIE患儿血清miR-384与炎症因子、Treg、Th17、Th17/Treg、NBNA评分的相关性。结果 HIE组血清miR-384、Treg水平及NBNA评分低于对照组,Th17、Th17/Treg、IL-6、CRP、TNF-α水平高于对照组,差异均有统计学意义(t值介于-21.533~30.802之间,P<0.05);HIE轻、中、重度组血清miR-384、Treg水平及NBNA评分均依次降低,Th17、Th17/Treg、IL-6、CRP、TNF-α水平均依次升高,差异有统计学意义(F值介于82.368~513.891之间,P<0.05);HIE患儿血清miR-384与IL-6、CRP、TNF-α、Th17、Th17/Treg呈负相关(r值介于-0.867~-0.406之间,P<0.05),与Treg、NBNA评分呈正相关(r值分别为0.671、0.776,P<0.05)。结论 HIE患儿病情越重,miR-384水平下降越明显;miR-384表达与患儿的炎症反应、Th17/Treg免疫平衡及神经行为能力密切相关。

LncRNA SNHG17通过miR-384靶向AEG1对非小细胞肺癌细胞生物学行为的调控作用

目的:研究长链非编码RNA小核仁RNA宿主基因17(lncRNA SNHG17)对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞生物学行为的影响,并阐明其作用机制。方法:培养人NSCLC A549细胞和H1299细胞,细胞按照分组要求分别转染pcDNA3.1-NC、SNHG17过表达质粒(pcDNA3.1-SNHG17)、si-NC、SNHG17小干扰RNA(si-SNHG17)、mimics NC、微小RNA-384模拟物(miR-384mimics)、inhibitor NC、miR-384抑制剂(miR-384 inhibitor)、pcDNA3.1-星形细胞上调基因1(AEG1)和si-AEG1。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测A549细胞和H1299细胞及各组转染后细胞中lncRNA SNHG17、miR-384和AEG1 mRNA表达水平;ENCORI和TargetScan数据库预测lncRNA SNHG17与miR-384、miR-384与AEG1 mRNA之间的靶向结合作用。A549细胞分为si-NC组、si-SNHG17组、inhibitor NC组、miR-384 inhibitor组、si-NC+inhibitor NC组、si-SNHG17+inhibitor NC组、si-SNHG17+miR-384 inhibitor组、si-AEG1组、inhibitor NC+si-NC组、miR-384inhibitor+si-NC组和miR-384 inhibitor+si-AEG1组。H1299细胞分为pcDNA3.1-NC组、pcDNA3.1-SNHG17组、mimics NC组、miR-384 mimics组、pcDNA3.1-NC+mimics NC组、pcDNA3.1-SNHG17+mimics NC组、pcDNA3.1-SNHG17+miR-384 mimics组、pcDNA3.1-AEG1组、mimics NC+pcDNA3.1-NC组、miR-384 mimics+pcDNA3.1-NC组和miR-384 mimics+pcDNA3.1-AEG1组。采用CCK-8法检测各组细胞活力,Transwell法检测各组细胞中迁移细胞数和侵袭细胞数,Western blotting法检测各组细胞中AEG1蛋白表达水平。结果果:H1299细胞中lncRNA SNHG17表达水平明显低于A549细胞(P<0.01)。在A549细胞中,与si-NC组比较,si-SNHG17组细胞中SNHG17表达水平明显降低(P<0.01),细胞活力、迁移细胞数和侵袭细胞数明显降低(P<0.01);在H1299细胞中,与pcDNA3.1-NC组比较,pcDNA3.1-SNHG17组细胞中SNHG17表达水平明显升高(P<0.01),细胞活力、迁移细胞数和侵袭细胞数明显升高(P<0.01)。在A549细胞中,与si-NC组比较,si-SNHG17组细胞中miR-384表达水平明显升高(P<0.01),AEG1 mRNA表达水平明显降低(P<0.01);在H1299细胞中,与pcDNA3.1-NC组比较,pcDNA3.1-SNHG17组细胞中miR-384表达水平明显降低(P<0.01),AEG1 mRNA表达水平明显升高(P<0.01)。ENCORI数据库预测SNHG17与miR-384有2个结合位点。在A549细胞中,与si-NC+inhibitor NC组比较,si-SNHG17+inhibitor NC组细胞中AEG1蛋白表达水平和细胞活力明显降低(P<0.01),迁移细胞数和侵袭细胞数明显减少(P<0.01);与si-SNHG17+inhibitor NC组比较,si-SNHG17+miR-384inhibitor组细胞中AEG1蛋白表达水平和细胞活力明显升高(P<0.01),迁移细胞数和侵袭细胞数明显增加(P<0.01)。在H1299细胞中,与pcDNA3.1-NC+mimics NC组比较,pcDNA3.1-SNHG17+mimics NC组细胞中AEG1蛋白表达水平和细胞活力明显升高(P<0.01),迁移细胞数和侵袭细胞数明显增加(P<0.01);与pcDNA3.1-SNHG17+mimics NC组比较,pcDNA3.1-SNHG17+miR-384 mimics组细胞中AEG1蛋白表达水平和细胞活力明显降低(P<0.01),迁移细胞数和侵袭细胞数明显减少(P<0.01)。在A549细胞中,与si-NC组比较,si-AEG1组细胞中AEG1蛋白表达水平和细胞活力明显降低(P<0.01),迁移细胞数和侵袭细胞数明显减少(P<0.01);在H1299细胞中,与pcDNA3.1-NC组比较,pcDNA3.1-AEG1组细胞中AEG1蛋白表达水平和细胞活力明显升高(P<0.01),迁移细胞数和侵袭细胞数明显增加(P<0.01)。ENCORI数据库预测miR-384与AEG1有1个结合位点。在A549细胞中,与inhibitor NC+si-NC组比较,miR-384inhibitor+si-NC组细胞中细胞活力明显升高(P<0.01),迁移细胞数和侵袭细胞数明显增加(P<0.01);与miR-384 inhibitor+si-NC组比较,miR-384 inhibitor+si-AEG1组细胞中细胞活力明显降低(P<0.01),迁移细胞数和侵袭细胞数明显减少(P<0.01)。在H1299细胞中,与mimics NC+pcDNA3.1-NC组比较,miR-384 mimics+pcDNA3.1-NC组细胞中细胞活力明显降低(P<0.01)、迁移细胞数和侵袭细胞数明显减少(P<0.01);与miR-384 mimics+pcDNA3.1-NC组比较,miR-384mimics+pcDNA3.1-AEG1组细胞中细胞活力明显升高(P<0.01),迁移细胞数和侵袭细胞数明显增加(P<0.01)。结论:lncRNA SNHG17通过miR-384靶向AEG1调控NSCLC细胞的增殖、迁移和侵袭。

ZNF384调控GCLM对肝细胞癌转移的机制研究

目的探讨ZNF384通过调控GCLM对肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)增殖和转移的影响及具体调控机制。方法分别在HCC细胞系HepG2和HuH7中转染si-ZNF384和pcDNA-GCLM。Western blot检测ZNF384和GCLM蛋白表达以及上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)标志物Ncadherin、Vimentin、E-cadherin的表达,CCK-8检测细胞增殖活力,Transwell检测细胞迁移。双荧光素酶报告基因实验验证ZNF384和GCLM结合关系。荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)技术检测ZNF384和GCLM在HepG2细胞中的定位。结果ZNF384和GCLM在HepG2和HuH7细胞中表达升高(P<0.05),敲降ZNF384抑制HepG2和HuH7细胞增殖(P<0.001)、迁移(P<0.001)以及间质标志物N-cadherin(P<0.01)和Vimentin(P<0.01)的表达,促进上皮标志物E-cadherin的表达(P<0.01)。数据库以及双荧光素酶实验证实ZNF384与GCLM启动子结合。过表达GCLM逆转敲降ZNF384对HepG2和HuH7细胞增殖、迁移以及EMT的抑制作用(P<0.05)。结论敲降ZNF384通过抑制GCLM,抑制HCC细胞增殖和转移。

MicroRNA-384在脑胶质瘤细胞株中的表达以及临床意义

目的:探究MicroRNA-384在脑胶质瘤细胞株中表达变化以及临床意义。方法:选取购买于中国科学院上海细胞生物所的低分级脑胶质瘤细胞株(3例)、高分级脑胶质瘤细胞株(5例)、正常脑组织细胞株(7例)为研究样本。采用体外瞬间转染法过表达或抑制U251细胞中MicroRNA-384,应用Transwell侵袭实验测定U251细胞系表达以及U251细胞系增殖以及侵袭能力的影响,应用实时荧光定量PCR技术(Q-PCR)测定U251中MicroRNA-384的含量、不同病理分级脑胶质瘤细胞株中MicroRNA-384表达水平变化情况。结果:脑胶质瘤细胞株中MicroRNA-384的含量明显低于胶质瘤组织旁正常细胞株的含量,差异有统计学有意义(t=3.418,P<0.05)。MicroRNA-384的含量随着脑胶质瘤病理分级的升高而降低,差异有统计学有意义(t=2.847,P<0.05)。与正常脑组织细胞株比较,转染MicroRNA-384组的U251细胞增殖抑制率更高,MicroRNA-384表达受到抑制,且随着培养时间延长其促进或抑制效果更明显,差异有统计学有意义(t=3.707、4.684、5.682、7.311、7.139,P<0.05)。结论:MicroRNA-384在脑胶质瘤中呈低表达,且随着病理分级程度的升高而降低,脑胶质瘤细胞株中MicroRNA-384表达受到抑制,随之培养时间延长其促进或抑制效果更明显,且不同时间MicroRNA-384组的U251细胞增殖抑制率高于正常细胞组,其含量的测定可评估脑胶质瘤分化程度,为临床靶向治疗提供新思路。

微小RNA-384靶向NK细胞表面受体NKG2A及STAT3蛋白对胃癌细胞生物学行为的作用机制

目的:探究微小RNA-384靶向NK细胞表面受体NKG2A及STAT3表达对胃癌细胞生物学行为的作用机制。方法:选取滕州市中心人民医院2017年4月至2020年3月已确诊的46例胃癌患者癌组织与癌旁组织标本进行研究。胃癌细胞分为胃癌组(胃癌细胞组)、对照组(转染NC组)、转染组(转染miRNA-384组)。PT-PCR检测胃癌细胞miR-384、NKG2A mRNA水平。MTT检测细胞增殖。流式细胞仪检测细胞凋亡。Western blot检测STAT3、Survivin蛋白水平。双荧光酶报告检测miR-384、NKG2A靶向关系。结果:与癌旁组织相比,胃癌组织中miR-384表达降低、NKG2A表达升高(P<0.05)。与转染miR-384-NC组相比,转染miR-384组NK细胞增殖率随着时间延长而升高,CD16+、CD56+阳性率显著升高(P<0.05),提示转染miR-384后,可促进NK细胞增殖。胃癌组与对照组相比各指标差异均无统计学意义(P>0.05)。与对照组相比,转染组miR-384、凋亡率升高,NKG2A表达、增殖率、STAT3、Survivin表达降低(P<0.05)。NKG2A与STAT3表达呈正相关(r=0.327,P=0.003);NKG2A与Survivin表达呈正相关(r=0.415,P<0.001);STAT3与Survivin呈正相关(r=0.351,P=0.001)。转染miR-384后野生型胃癌细胞中NKG2A活性及STAT3表达降低(P<0.05),突变型胃癌细胞中NKG2A及STAT3表达无明显变化(P>0.05),表明NKG2A及STAT3是miR-384的靶基因。结论:miR-384通过靶向NK细胞表面受体NKG2A及STAT3表达,降低Survivin活性,促进胃癌细胞凋亡并抑制其增殖。

急性白血病患者外周血lncRNACRNDE、miR-384表达及其临床意义

目的分析急性白血病患者外周血中长链非编码RNA(lncRNA)结直肠肿瘤差异表达基因(CRNDE)、微小RNA-384(miR-384)的相对表达量,并探讨其临床价值。方法选取2017年3月—2019年4月河北北方学院附属第二医院急性髓系白血病(AML)患者106例(AML组),以同期健康体检志愿者100名作为正常对照组。采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测AML组和正常对照组血清lncRNA CRNDE、miR-384相对表达量。采用Pearson相关分析评价AML患者血清lncRNA CRNDE与miR-384相对表达量的相关性。采用Kaplan-Meier生存曲线分析lncRNA CRNDE、miR-384与AML患者预后的关系。采用Cox回归分析评价影响AML患者预后的危险因素。结果AML组血清lncRNA CRNDE相对表达量明显高于正常对照组(P<0.001),miR-384相对表达量明显低于正常对照组(P<0.001)。AML患者血清lncRNA CRNDE、miR-384相对表达量均与白细胞(WBC)计数、血小板(PLT)计数、骨髓原始细胞比例、美国国立综合癌症网络(NCCN)危险分层、髓外浸润有关(P<0.05)。AML患者血清lncRNA CRNDE与miR-384相对表达量呈显著负相关(r=-0.635,P<0.001)。lncRNA CRNDE低表达(<1.72)患者总生存率、无事件生存率均显著高于lncRNA CRNDE高表达(≥1.72)患者(χ^(2)值分别为27.316、18.056,P<0.001);miR-384高表达(≥0.65)患者总生存率、无事件生存率均显著高于miR-384低表达(<0.65)患者(χ^(2)=8.454,P=0.004;χ^(2)=5.333,P=0.021)。多因素Cox回归分析结果显示,lncRNA CRNDE高表达、miR-384低表达是AML患者不良预后的危险因素(P=0.003)。结论AML患者血清lncRNA CRNDE相对表达量升高,miR-384相对表达量降低,2项指标与患者病理特征和预后密切相关,或可作为评估AML患者预后的生物标志物。

LINC00342调控miR-384对肺鳞癌细胞增殖侵袭迁移的影响研究

目的:探讨LINC00342通过miR-384对肺鳞癌细胞增殖、侵袭、迁移的影响。方法:将肺鳞癌SK-MES-1细胞分为:ctrl组(正常培养的SK-MES-1细胞)、si-NC组(转染si-NC)、si-LINC00342组(转染si-LINC00342)、si-LINC00342+inhibitor-NC组(si-LINC00342和inhibitor-NC共转染)、si-LINC00342+miR-384 inhibitor组(si-LINC00342和miR-384 inhibitor共转染);RT-qPCR检测细胞中LINC00342、miR-384表达;CCK-8法及Transwell小室法分别检测细胞增殖和侵袭;划痕实验及流式细胞仪分别检测细胞迁移和凋亡;Western blot检测细胞中增殖细胞核抗原(PCNA)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、MMP-9、半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)的表达;双荧光素酶报告基因实验验证LINC00342和miR-384的关系。结果:与ctrl组、si-NC组比较,si-LINC00342组SK-MES-1细胞的OD450值、细胞侵袭数目、划痕愈合率、PCNA、MMP-2和MMP-9表达明显降低,细胞凋亡率、caspase-3表达明显上升(P<0.05);抑制miR-384表达减弱了敲低LINC00342对SK-MES-1细胞增殖、侵袭、迁移的抑制作用,降低了细胞凋亡能力;LINC00342靶向调控miR-384表达。结论:敲低LINC00342可能通过靶向miR-384,进而抑制SK-MES-1细胞增殖、侵袭和迁移。

锌指蛋白384在肿瘤中的研究进展

锌指蛋白384(ZNF384)是一种核细胞穿梭蛋白,可作为转录因子发挥作用,参与调节基质金属蛋白酶的表达等。ZNF384可与其他基因融合,影响其他基因的表达,参与信号转导通路、细胞增殖和分化过程等,从而与恶性肿瘤的发生、发展、治疗和预后密切相关。本文对ZNF384在多种恶性肿瘤中的研究进展进行综述。

ZNF384融合亚型急性白血病的发病机制及预后研究进展

由染色体易位引起的融合基因已成为白血病的主要致病因素。锌指蛋白384(zinc finger protein 384,ZNF384)融合作为急性白血病(acute leukemia,AL)中的非典型融合亚型,在不同的年龄群体中广泛发生。ZNF384具有丰富的融合伴侣,其中E1A结合蛋白p300(E1A binding protein p300,EP300)、转录因子3(transcription factor 3,TCF3)、TATA-box binding protein associated factor 15(TAF15)的融合频率最高。这些融合蛋白均保留了完整的ZNF384结构,但融合伴侣则有不同程度的缺失,说明不同的ZNF384融合亚型之间具有相似的致AL发生发展机制。现有研究主要认为ZNF384融合蛋白通过染色质重塑调控下游蛋白的转录表达,在造血干细胞的分化、癌细胞的增殖凋亡和基因组修复中发挥潜在作用。ZNF384融合患者同时表达淋系和髓系特有的抗原,在疾病的进展中具有谱系转化特性,丰富的免疫表型给治疗方式带来了不确定性,并与融合亚型、发病年龄一起影响患者的临床结局。该文通过对近10年已发表的案例和大型队列研究进行统计归纳分析,进一步确认了ZNF384融合及其各亚型AL在现有研究背景下的发生频率,总结了已有的机制信息,并对不同治疗方式下ZNF384融合患者的预后作了简要分析,以期为后续针对这一独特亚型AL的诊疗和研究提供参考。

血清miR-384、LIN28B在糖尿病视网膜病变中的表达及其诊断价值分析

目的探讨糖尿病视网膜病变(DR)患者血清中microRNA-384(miR-384)、LIN28B的表达水平及其诊断价值。方法选取2020年1月至2021年11月于本院确诊的100例2型糖尿病患者为研究对象,根据是否发生视网膜病变分为非DR组(40例)、DR组(60例);另选取同期本院的健康体检者40例作为对照组。采用qRT-PCR法检测血清miR-384、LIN28B相对表达水平,并分析两者与DR患者临床资料的关系。采用Pearson法分析DR患者血清中miR-384与LIN28B表达的相关性。采用Logistic回归分析DR发生的影响因素。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-384、LIN28B水平对DR患者的诊断价值。结果DR组患者血清中miR-384水平明显低于非DR组和对照组(P<0.05),且非DR组低于对照组(P<0.05);DR组患者血清中LIN28B水平明显高于非DR组和对照组(P<0.05),且非DR组高于对照组(P<0.05)。miR-384、LIN28B表达水平与患者糖尿病病程、血糖有关(P<0.05)。Pearson法分析显示,DR患者血清中miR-384与LIN28B表达呈负相关(r=-0.296,P<0.05)。Logistic回归分析结果显示,miR-384、LIN28B是DR发生的独立影响因素(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,miR-384、LIN28B及二者联合检测诊断DR患者的曲线下面积(AUC)分别为0.625、0.646、0.682,特异度分别为67.50%、85.00%、97.50%。结论DR患者血清中miR-384呈低表达,LIN28B呈高表达,miR-384、LIN28B均是DR发生的影响因素,并且有望成为诊断DR的潜在血清学指标。

lncRNA KCNQ1OT1调控miR-384/CACNA1C轴对心肌细胞增殖、凋亡的影响

目的探讨长链非编码RNA钾电压门控通道亚家族Q成员1反向转录物1(lncRNA KCNQ1OT1)调控miR-384/L型钙离子通道α1C亚基基因(CACNA1C)轴对心肌细胞增殖、凋亡的影响。方法实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、Western blot分别检测正常培养的大鼠心肌H9c2、CP-R073细胞及缺氧/复氧(H/R)诱导的H9c2、CP-R073细胞中的KCNQ1OT1、miR-384、CACNA1C蛋白表达。将H9c2细胞分为Ct组、Model组、si-NC组、si-KCNQ1OT1组、mimic NC组、miR-384 mimic组、si-KCNQ1OT1+inhibitor NC组、si-KCNQ1OT1+miR-384 inhibitor组。除Ct组外,其他组H9c2细胞均需转染对应物质后构建H/R损伤模型。qRT-PCR检测细胞中KCNQ1OT1、miR-384表达;CCK-8法、EdU染色检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;ELISA法检测细胞中肌红蛋白(Mb)、肌钙蛋白-Ⅰ(cTnⅠ)水平;Western blot检测CACNA1C、增殖细胞核抗原(PCNA)、半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3(Caspase-3)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达;双荧光素酶报告基因实验验证KCNQ1OT1与miR-384、miR-384与CACNA1C的关系。结果H/R诱导的H9c2、CP-R073细胞中KCNQ1OT1、CACNA1C蛋白表达升高,miR-384表达降低,且H/R诱导的H9c2细胞中KCNQ1OT1、CACNA1C蛋白表达最高,miR-384表达最低,因此,后续选择H9c2细胞为研究对象。与Ct组比较,Model组细胞中KCNQ1OT1、细胞凋亡率、Mb、cTnⅠ水平、CACNA1C、Caspase-3、Bax蛋白表达升高,miR-384表达、D 450值、EdU阳性率、PCNA蛋白表达降低(P<0.05);沉默KCNQ1OT1或过表达miR-384可促进H/R诱导的H9c2细胞增殖,抑制细胞凋亡;miR-384 inhibitor减弱了沉默KCNQ1OT1对H/R诱导的H9c2细胞增殖的促进作用,以及对细胞凋亡的抑制作用;KCNQ1OT1靶向调控miR-384/CACNA1C轴。结论沉默KCNQ1OT1可能通过上调miR-384来抑制CACNA1C表达,进而促进H/R诱导的H9c2细胞增殖,抑制细胞凋亡。

微波消解ICP-OES法测定K384b铝合金中6种元素的含量

为了研究一种测定K384b铝合金样品中元素含量的新方法,本文旨在探究使用微波消解仪溶解K384b铝合金样品,用电感耦合等离子体原子发射光谱仪测试样品中的元素含量。实验结果各元素的线性相关系数良好,大于0.9999以上,RSD<1.5%,且回收率在90.33~104.01%。通过研究发现,该方法取样量小,试剂用量少,反应时间短,且准确度较高。

hMLH1基因Val384Asp的病因学作用及对大肠癌发病年龄的影响

目的 :探讨hMLH1基因错义突变Val384Asp在大肠癌发病中的作用。方法 :取 10 1例大肠癌患者、10 0例正常对照的血细胞或正常大肠组织样本 ,提取基因组DNA ,PCR -SSCP和DNA测序技术分析hMLH1基因第12外显子 ,检测hMLH1基因错义突变Val384Asp。结果 :<45岁的大肠癌患者中hMLH1基因Val384Asp的检出率明显高于同龄对照组 (P <0 0 5 ) ,其中 35～ 44岁年龄组的大肠癌患者与正常对照比较 ,P <0 0 1。结论 :hMLH1基因Val384Asp将影响大肠癌的发病年龄 ,它的存在可能是中国人大肠癌发病年龄较欧美人群提前的原因之一。

miR-384-5p通过阻断BMP7转录后调控促进肾纤维化

目的研究miR-384-5p是否通过调节肾小管上皮细胞BMP7转录而影响肾纤维化。方法建立小鼠单侧输尿管阻塞模型(unilateral ureteral obstructive,UUO),流式细胞仪荧光激活细胞分选(FACS)分离肾组织获取肾小管上皮细胞进行培养,通过脂质体转染表达miR-384-5p的质粒、表达反义miR-384-5p的质粒及空白质粒;静脉注射空质粒( n =10)或反义-miR-384-5p质粒( n =10),14周后处死UUO模型小鼠,肾组织切片进行Masson三色染色评估肾纤维化程度;Western blot和实时定量PCR检测miRNA靶基因(miR-384-5p、miR-30、miR-92和miR-128)表达。结果 UUO模型14 d时肾脏出现明显纤维化,肾组织BMP7 mRNA明显增加,但BMP7蛋白无明显增加。miR-384-5p没有影响肾小管上皮细胞中BMP7 mRNA表达,但是过表达miR-384-5p的肾小管上皮细胞中BMP7蛋白明显减少,过表达反义miR-384-5p的肾小管上皮细胞中BMP7蛋白明显增加。免疫组化和定量PCR检测结果显示,UUO小鼠14 d肾组织纤维化显著增加,而注射反义miR-384-5p组肾组织纤维化程度明显减轻。虽然反义-miR-384-5p处理后不影响BMP7 mRNA水平,但能明显增加肾脏组织BMP7蛋白表达,提示抑制miR-384-5p能减轻UUO大鼠的肾损伤。结论 miR-384-5p是调节肾损伤后纤维化机制的关键因子,靶向miR-384-5p有希望成为防治肾脏纤维化的新方法。